XIXA doença do refluxo gastroesofágico (DRGE) comumente afeta o esôfago e provavelmente é a condição mais prevalente no segmento alto do trato gastrointestinal, acometendo entre 5 e 45% da população ocidental. A terapêutica atual para essa doença além de medidas gerais e dietéticas, inclui tratamento farmacológico e/ou cirurgia. Ambos podem ser eficazes, mas apresentam elevado custo financeiro. O tratamento com fármacos pode apresentar baixa aderência medicamentosa e a cirurgia tem baixa, mas não desprezível, morbidade e mortalidade. Idealmente o tratamento da DRGE deveria ser eficaz, com baixo risco e com baixo custo. Objetivos: 1. Desenvolver um modelo experimental em suínos para o estudo do Refluxo Gastroesofágico através da Pressão e do Volume de Vazão Gástricos; 2. Avaliar a eficácia do implante endoscópico de PMMA ao nível do Esfíncter Esofágico Inferior (EEI) para aumentar a Pressão de Vazão Gástrica, o Volume de Vazão Gástrico e a Pressão Basal do EEI; 3. Descrever as reações histológicas associadas ao implante de PMMA. Material e Métodos: Suínos da raça Large White, do sexo feminino com 8 semanas de vida foram estudados no experimento. Foi realizada manometria do esfíncter esofágico inferior com registro da pressão basal com cateter de perfusão com água e técnica de retirada lenta. Calculou-se, também, a extensão do EEI. Após, gastrostomia era realizada com colocação intragástrica da extremidade distal de uma sonda de Foley com três vias e um cateter de pHmetria esofágica introduzido via oral com o sensor distal posicionado 5 cm acima do bordo superior de esfíncter esofágico inferior. Iniciava-se, XXentão, a infusão contínua no estômago de uma solução de HCl a 0,02N com medida e registro simultâneos da Pressão e do Volume de Vazão Gástricos e do pH esofágico. Definiu-se a Pressão de Vazão Gástrica (PVG) e o Volume de Vazão Gástrico quando houve brusca e sustentada acidificação do esôfago distal (pH<3). Após, introduzia-se um tubo metálico (Tubo Introdutor ou TI) via oral e, em seguida, o endoscópio, seguindo ambos até o esôfago distal. Cateter de nylon com agulha calibre 16 era introduzido pelo tubo introdutor e o PMMA implantado na área correspondente ao EEI com uma pistola dosadora volumétrica que permitia a injeção de volumes prédeterminados em 3 ou 4 pontos da submucosa (total por ponto = 0,73 ml de PMMA). As medidas de PVG, VVG e pressão basal do EEI foram repetidas após 28 dias, sacrificando-se os animais e removendo-se esôfago médio e distal, junção esofagogástrica, fundo e corpo gástricos para estudo histológico. Previamente ao experimento, três projetos pilotos foram desenvolvidos. O primeiro designado como “Projeto Piloto: Refluxo Gastroesofágico por pHmetria de 24H” (RGE 24H) buscou a via de acesso transnasal para registro de pHmetria por 24 horas. No segundo, designado “Projeto Piloto: Esofagostomia”, para confirmação de refluxo gastroesofágico espontâneo em suínos da raça Large White, utilizou-se anestesia com associação de tiletamina 125 mg e zolazepam 125 mg em combinação com um sedativo, a xilazina a 2% . A pHmetria foi mantida por 24 horas. Os dados descritos por Kadirkamanathan et al. não foram reproduzidos no nosso laboratório. Optou-se então pela realização de um terceiro projeto, “Projeto Piloto: Gastrostomia” para induzir refluxo gastroesofágico através de um modelo experimental e testar a reprodutibilidade da Pressão de Vazão Gástrica. Obteve-se sucesso. Resultados: Trinta e sete animais foram estudados em 60 intervenções no Laboratório de motilidade experimental. O projeto piloto “RGE:24h” foi abandonado após perda de 5 animais pela anestesia com halotano e, solucionada esta questão, a sistemática infecção do tecido celular subcutâneo nasal, dificultando a manutenção do cateter de phmetria em outros 5 animais. No “Projeto Piloto: Esofagostomia”, em cinco animais estudados (cada animal em duas ocasiões diferentes) não se reproduziram os achados de refluxo espontâneo. No terceiro projeto “Projeto Piloto: Gastrostomia” quatro animais foram estudados em dois momentos diferentes obtendo-se sucesso e reprodutibilidade XXIdos dados. Criado o modelo experimental, quatorze suínos foram submetidos ao experimento com implante endoscópico de PMMA com os seguintes resultados: A média dos pesos com 8 semanas de idade foi 14,98 ± 2,43 e 28 dias após o implante, 20,26 ± 3,68. O ganho ponderal foi considerado normal para a espécie. A Pressão de Vazão Gástrica média no dia 1 foi 8,08 mmHg e no dia 28, 10,69mmHg (Teste t de Student: t = 2,72 gl = 13 p = 0,017). Os Volumes de Vazão Gástricos médios foram: 392,86 ml para o dia 1 e 996,71 ml no dia 28 (teste t de Student: t = 11,66 gl = 13 p< 0,001). A Pressão Basal do EEI e o comprimento do esfíncter, não apresentaram diferenças estatisticamente significativas. PMMA foi identificado como depósitos de grandes vacúolos no tecido intersticial ao exame histológico da junção esofagogástrica associado a histiócitos, plasmócitos e presença de células gigantes tipo Langhans indicando reação tecidual de corpo estranho em todos os animais. Fibrose e macrófagos com vacúolos intracelulares estiveram presentes em menor freqüência. Conclusões: 1. O modelo experimental, em suínos, desenvolvido viabilizou o estudo do Refluxo Gastroesofágico através da Pressão de Vazão Gástrica e Volume de Vazão Gástrico; 2. O implante de PMMA, no presente estudo, aumentou a Pressão de Vazão e o Volume de Vazão Gástricos, mas não a Pressão Basal do EEI, nem tampouco aumentou o seu comprimento; 3. Depósito de PMMA implantado e evidência de processo inflamatório crônico e reação tecidual de corpo estranho foi encontrada no local do implante de PMMA. Macrófagos com vacúolos intracelulares e fibrose foram encontrados com menos freqüência. / XXIIIGastroesophageal Reflux Diseases (GERD) has the highest prevalence at the upper gastrointestinal tract and affects between 5 and 45%of the Western populations. Treatment includes diet, behaviors modifications and drugs or surgery. Both are efficient but have high financial costs. Treatment with drugs may not have high patient adherence and surgery presents low but still considerable morbidity and mortality. The ideal GERD treatment should be efficient with low cost. Objectives: 1. To develop an experimental model in swines to study GERD through the Gastric Yield Pressure (GYP) and Volume (GYV); 2. To estimate the efficacy of endoscopic implant of polymetilmetacrilate (PMMA) at the lower esophageal sphincter (LES) to raise the LES basal pressure, the GYP and the GYV; 3. Report the histological findings associated to PMMA implant. Material and Methods: Large White swine breed, females, 8 weeks old were studied under anesthesia. LES manometry with water perfusion catheter in “pull through” technique and LES basal pressure were obtained. Also, LES length was calculated. Immediately after, a percutaneous gastrostomy was performed and the distal end of a three way Foley catheter located in the stomach. A pHmetry catheter was, also, located by mouth with its distal sensor 5 cm above the LES. Continuous infusion of a HCl solution (0,02 N) into the stomach was started and measurement of intragastric pressure and volume as well as esophageal pHmetry obtained. GYP and GYV were defined when a brisk and sustained distal esophageal pH felt below 3. Following a metallic tube (Introduction Tube or IT) was introduced by mouth and after, the endoscope was introduced, and both reach the distal esophagus. A large catheter nylon with needle (16G) was advanced through the IT and PMMA implanted in the submucosa corresponding to the LES, with dosing pistol that delivered fixed volume at 3 or 4 sites (0,73 ml at each site). A new gastrostomy, GYP, GYV and Basal LES were obtained 28 days after. The animals were sacrificed and their esophagi and stomachs removed and studied by microscopic. Previously to the experiment, three pilot projects were developed. The first, called “Pilot Project: Gastroesophageal Reflux by 24H pHmetry” registered esophageal 24 h phmetry transnasally. The second, called “Pilot Project: Esophagostomy” used IM/IV anesthesia with tiletamine 125mg and zolazepam 125mg associated to the sedative xylazine 2% and registering a 24H pHmetry to reproduce spontaneous gastroesophageal reflux at our laboratory as described (Kadirkamanathan et al.) but we did not reach success. Therefore, a third project called “Pilot Project: Gastrostomy” was launched to develop an experimental model to study gastroesophageal reflux through a percutaneous gastrostomy and measurement of GYP but short duration of esophageal pHmetry by mouth. Success and reproducibility of findings was reached Results: Thirty seven animals were studied by sixty interventions at the Experimental Motility Laboratory. The Pilot Project “GERD:24H” was given up after death of five animals during the anesthesia and infection of subcutaneous cellular tissues nasal in other 5 animals. The “Project Pilot: Esophagostomy” in five animals (Two studies per animal in two different occasion) did not reproduce spontaneous reflux findings published previously. At the third project “Pilot Project: Gastrostomy”, four animals were studied at two different days each and induction of reflux with reproducibility of findings. Once the experimental model was attained fourteen swines were submitted to the experiment with PMMA endoscopic implant and the following results: Mean body weight = 14,98 Kg ± 2,43 ( day 1or, before implant) and 20,26 ± 3,68 Kg (day 28 , after implant). The mean GYP was 8,08 mmHg (day 1) and 10,69 mmHg (day 28)with p = 0,017 by Student’s t test with t = 2,72 and d.f. = 13. The mean GYV was 392,86 ml (day 1) and 996,71 ml (day 28) with p < 0,001 by Student’s t test with t = 11,66 and d.f.=13. The LES basal pressure and length did not present statistic difference between day 1 and 28. XXVPMMA was identified at the microscopic examination of the gastroesophageal junction with presence of histiocyties, plasma cells associated to Langhans giant cells (suggesting foreign body reaction) in all animals. Fibrosis and macrophages with intracellular implant vacuoles had lower frequencies. Conclusions: 1. The experimental model developed permitted the GERD study trough GYP, GYV and LES basal pressure; 2. PMMA implant, at the present study, raised the GYP and GYV but neither the LES Basal Pressure nor its length; 3. PMMA deposits were identified in the interstitial space and chronic inflammation with foreign reaction was founding in all animals. Fibrosis and macrophages with intracellular implant vacuoles had lower frequencies.

Introdução: O tratamento da doença do refluxo gastroesofágico por diferentes modalidades de endoterapia é promissor, mas resultados clínicos a longo prazo são inexistentes. Recentemente, a segurança de um dos métodos difundidos (injeção profunda de Enteryx®, no esfíncter esofágico inferior), previamente aprovado para uso clínico a nível internacional, foi associada a complicações fatais como abscesso esofágico e fístula aorto-esofágica, atribuídas à má técnica endoscópica. Moratória temporária foi proposta, suspendendo o seu uso clínico na doença do refluxo gastroesofágico fora de protocolos aprovados. Estudo preliminar em seres humanos, publicado previamente à liberação do implante de polímero no esôfago, já descrevia depósitos subserosos e/ou perfurações esofágicas em 12% das tentativas.Nosso laboratório desenvolveu modelo experimental suíno e obteve sucesso no reforço da barreira anti-refluxo, 28 dias após implante do polímero polimetilmetacrilato (PMMA), na parede da junção esofagogástrica. Entretanto, importante processo inflamatório crônico e reação do tipo corpo estranho sugeriu não-compatibilidade do material implantado. Adicionalmente, perfuração esofágica seguida por morte foi observada. Objetivos: Em modelo experimental suíno: 1. Desenvolver técnica de implante “superficial” (mucosa e/ou submucosa) de polimetilmetacrilato na parede da junção esofagogástrica evitando o depósito subseroso e/ou perfuração esofágica; 2. Identificar e determinar a localização das microesferas do PMMA nas diferentes camadas da parede da junção esofagogástrica; 3. Identificar achados histológicos indicativos de nãocompatibilidade (granuloma do tipo corpo estranho) ao implante após seis meses; 4. Aferir o impacto na barreira anti-refluxo através do aumento da pressão de vazão gástrica (PVG) e do volume de vazão gástrica (VVG) seis meses após o implante endoscópico de PMMA. Métodos: Para o desenvolvimento da técnica de implante “superficial”, preliminarmente, testaram-se no laboratório, diferentes catéteres de Teflon® com vários diâmetros, conectados a agulhas 16 ou 18-gauge para a injeção “superficial” de PMMA em peças anatômicas de esôfago de suínos, utilizando-se vídeo-gastroscópio (canal de instrumentação de 2,8mm de diâmetro) ou fibro-sigmoidoscópio (canal de instrumentação de 3,2mm de diâmetro). Foram avaliados a ocorrência de perfuração esofágica e o desempenho do sistema injetor ao implante do polímero com alta viscosidade. A seguir, um estudo piloto foi realizado em dois suínos para padronização da técnica de implante “superficial” in vivo e otimização dos demais procedimentos programados para o experimento. Após essas fases, iniciou-se o experimento, sendo os animais anestesiados e submetidos seqüencialmente à manometria do esfíncter esofágico inferior (EEI), medindo-se pressão e comprimento, laparotomia com gastrostomia e clampeamento duodenal, aferição da PVG e do VVG e implante endoscópico de PMMA em quatro quadrantes ao nível do EEI. Definiu-se implante “superficial” quando, imediatamente após e durante a injeção do polímero observou-se abaulamento da mucosa esofágica e “profundo” na ausência do mesmo, por dois observadores. Após acompanhamento por seis meses, repetiu-se a manometria do EEI e a aferição da PVG e do VVG. À necropsia, avaliou-se a presença de implante extramural do PMMA ou aderências ao nível da junção esofagogástrica (JEG). À análise microscópica, em múltiplos cortes longitudinais da JEG, descreveu-se a reação histológica ao implante. Após a identificação do polímero, a localização em cada corte foi classificada em “maior” contendo o maior volume de PMMA ou “menor” nas seguintes camadas: mucosa, submucosa, muscular própria e subserosa. Os dados de PVG e VVG, transformados em logaritmo natural e ajustados para a pressão do EEI epara o peso do animal, foram comparados pré e pós-implante entre amostras emparelhadas. Resultados: A melhor combinação para implante do polímero e a escolhida pela equipe consistiu de um catéter medindo 95 cm de comprimento e composto por tubo de Teflon® (2.8 mm de diâmetro externo) com agulha 18-gauge (5 mm de extensão), facilmente introduzido pelo canal de instrumentação com 3,2 mm de diâmetro do fibrosigmoidoscópio (Olympus OSF), permitindo a injeção intramural do PMMA altamente viscoso, sem perfuração esofágica em peças de esôfago e no estudo piloto. No experimento com nove animais, durante 36 implantes endoscópicos (um implante por quadrante para cada animal), a técnica foi considerada “superficial” em 33 (91,67%) e “profunda” em três (8,33%). À necropsia, não se observou nem aderências nem implante extramural de polímero.Entre 186 cortes histológicos obtidos da junção esofagogástrica, 105 (12 por animal, variando de 9 a 16) continham depósito “maior” de PMMA assim distribuído: “mucosa” em 10 (9,53%), “submucosa” em 60 (57,13%), “muscular própria” em 25 (23,81%) e subserosa em 10 (9,53%). O implante de PMMA, quando “maior”, foi encontrado na subserosa, em pelo menos um corte histológico, em 4 animais (44,44%) sendo 1 após implante “profundo” e em 3, após implante “superficial”. Adicionalmente, PMMA foi observado no interior de um linfonodo visualizado em dois cortes histológicos de um mesmo animal e em vaso linfático intramural em outro suíno. Inflamação crônica inata e depósito fibroso foram uniformemente observados em todos os cortes, envolvendo as microesferas. Granuloma do tipo corpo estranho não foi encontrado. Verificou-se aumento significativo no VVG, de 1053 ± 664 ml para 1407 ± 475 ml (P=0,04). A PVG apresentou aumento após o implante, de 7,81 ± 5,06 mmHg para 8,21 ± 2,24 mmHg, sem atingir significância estatística (P=0,27). O comprimento e a pressão basal do EEI mantiveram-se 18 inalterados. Houve incremento no peso dos animais, de 37,55 ± 6,72 kg para 42,88 ± 4,37 kg (P=0,01). Nenhuma complicação clínica ocorreu durante os seis meses de monitoramento. Conclusões: 1. A técnica de implante “superficial” na parede da junção esofagogástrica foi atingida na maioria das tentativas, não se observando perfuração esofágica. Entretanto, depósito significativo na subserosa foi encontrado freqüentemente; 2. O PMMA foi identificado em todos os animais sugerindo durabilidade do implante. Entretanto, a sua localização na parede da junção esofagogástrica foi errática, sendo encontrado distribuído, na maioria das vezes, na mucosa, submucosa e muscular própria. Implante “maior” de PMMA na subserosa foi observado, em pelo menos um corte histológico, em quatro animais; 3. A reação histológica sugere compatibilidade do PMMA ao nível da junção esofagogástrica nesse modelo experimental; 4. Houve aumento significativo na barreira anti-refluxo quando aferida pelo volume de vazão gástrica, mas não pela pressão de vazão gástrica após seis meses. / Introduction: Endotherapy with different modalities for the treatment of gastroesophageal reflux disease are promising, however long term clinical results are unknown. Recently, the safety of a widespread method (Enteryx®, a biocompatible polymer deeply injected in the lower esophageal sphincter) previously approved for clinical use at international level has been associated to fatal complications as esophageal abscess and aorto-esophageal fistula, attributed to faulty endoscopic technique. A temporary moratorium, suspending clinical use of all endotherapy methods for GERD outside approved protocols has been proposed. Polymer endoscopic implants in human esophagus, as endotherapy for GERD already described subserosal polymer deposits and/or esophageal perforations in 12% of attempts. Our laboratory developed an experimental swine model and was successful in increasing the anti-reflux barrier 28 days after esophagogastric junction implant of polymethilpolyacrilate (PMMA), a biocompatible polymer. However, important local chronic inflammation and foreign body reaction suggested non-compatibility of the implanted material. Additionally, esophageal perforation and death were seen.Objectives: In an experimental swine model: 1. Develop a technique for “superficial” (mucosa and/or submucosa) PMMA implants in the esophagogastric junction, avoiding subserosal deposits and/or esophageal perforation. 2. Identify and determine the localization of PMMA microespheres at the layers of the esophagogastric junction wall; 3. Identify histological findings suggestive of non-compatibility (foreign body granuloma) to the implant after 6 months; 4. Measure the effect on the anti-reflux barrier through the gastric yield pressure (GYP) and yield volume (GYV) six months after PMMA endoscopic implant. Methods: For the development of a “superficial” implant technique, Teflon® catheters with different diameters and needles 16 or 18-gauge were tested for the PMMA injection in anatomical samples of swine esophagus, with video-gastroscope (instrumentation channel 2.8mm in diameter) or fiber-sigmoidoscope (instrumentation channel 3.2mm in diameter). Esophageal perforation and performance of the injection system were evaluated with this high viscosity polymer implant. Then, a pilot study was obtained in two animals to acquire skills and to standardize procedures with the “superficial” implant in the esophagogastric junction. After that, the experiment was started. Animals were anesthetized and underwent sequentially lower esophageal sphincter (LES) manometry with pressure and length evaluation, laparotomy with gastrostomy and duodenal clamping with measurement of GYP and GYV and PMMA was endoscopically implanted in four quadrants at the LES level.“Superficial” implant was defined when two observers agreed that a mucosal protrusion was seen immediately after and during polymer injection. Otherwise the implant was considered “deep”. After 6 months the animals were studied again and LES pressure and length, GYP and GYV were evaluated. At necropsy PMMA identification and adherences between the esophagus wall and surrounding tissues was searched at and near the esophagogastric junction. Histological analysis after several longitudinal slices of the esophagogastric junction was obtained. Histological findings were identified and localization of PMMA microespheres were classified in “major” or “minor” in each slice as follow: “mucosa”, “submucosa”, “muscularis propria” and “subserosa”. GYP and GYV values, log-transformed and adjusted by body weight and LES pressure, were compared using Student’s paired t test pre and post-implant. Results: The best combination and the one chosen was a 95 cm long Teflon® catheter with external diameter of 2,8mm, connected to an 18-gauge 5mm long needle, which easily entered the simgmoidoscope instrumentation channel with 3.2mm in diameter (Olympus OSF) that allowed PMMA intramural injection, with no perforation both in anatomical samples of the esophagus and at the pilot study. At the experiment nine animals received 36 endoscopic implants (one implant per quadrant for each animal) and 33 (91.6%) were considered “superficial” and 3 (8.4%) “deep”. At necropsy neither adherence between the distal esophagus serosa and surrounding tissues nor PMMA deposits were identified. Among 186 histological slices obtained, 105 (12 per animal, range 9 – 16) contained “major” deposits of PMMA in the following layers: “mucosa” in 10 (9.53%), “submucosa” in 60 (57.13%), “muscularis propria” in 25 (23.81%) and “subserosa” in 10 (9.53%). PMMA classified as “major” deposit in the subserosa was found at least in one histological slice in four animals (44.44%), being one after a “deep” implant and in three after “superficial” implant. Additionally, PMMA was found inside a lymph node visualized in two slices of one single animal and in one intramural lymphatic vessel of another animal. Innate chronic inflammation and fiber deposits were uniformly identified in all fields surrounding microespheres in a capsule fashion presentation. No foreign-body granuloma was seen. There was significant increase in GYV from 1053 ± 664 ml to 1407 ± 475 ml (P=0.04). GYP raised after implant from 7.81 ± 5.06 mm Hg to 8.21 ± 2.24 mm Hg, (P=0.27). LES length and basal pressure did not change. Body weight raised from 37.55 ± 6.72 kg to 42.88 ± 4.37 kg (P=0.01). Neither immediate nor late complications were observed. Conclusions: 1. PMMA was implanted in a superficial way in most attempts and no esophageal perforation was seen. Nonetheless, significant subserosal deposits were identified frequently; 2. Localization of the implanted PMMA in the esophageal wall was identified in all animals suggesting implant durability. However, its localization in the esophagogastric junction was erratic and distributed in the mucosa, submucosa andmuscularis propria. “Major” implants in the subserosa were observed at least in one slice in four animals; 3. Histological reaction suggests PMMA biocompatibility at the esophagogastric junction level in this experimental model; 4. There was a significant increase in the anti-reflux barrier evaluated by gastric yield volume while gastric yield pressure did not change 6 months after PMMA.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-19Bitstream added on 2014-06-13T20:58:45Z : No. of bitstreams: 1 costa_cc_me_arafo.pdf: 3083928 bytes, checksum: 2605dd91339dbf0d4e3c26e02afc6696 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi determinar a citotoxicidade in vitro de duas resinas reembasadoras experimentais autopolimerizáveis contendo alta concentração de agentes de ligação cruzada, etilenoglicol dimetacrilato (EGDMA) e 1,4-butanodiol dimetacrilato (BDMA) comparadas com uma resina reembasadora comercial (Tokuyama Rebase Fast II). Foram confeccionados corpos-de-prova em forma de discos das três resinas acrílicas reembasadoras rígidas sob condições assépticas. Os fibroblastos (L929) foram cultivados em placas com 96 compartimentos e incubadas por 24 h em meio de cultura Eagle. Os extratos foram preparados, colocando-se três amostras de cada resina em frascos de vidro estéreis com 9 mL de meio de Eagle e incubadas a 37º C por 24 h. O efeito citotóxico dos extratos foram avaliados utilizando os testes de incorporação do 3H-timidina e MTT, que refletem os níveis de síntese de DNA e metabolismo celular, respectivamente. Os dados foram analisados estatisticamente, utilizando análise de variância (P<0.05). Para o teste de incorporação do 3H-timidina, não foram observadas diferenças significativas (P>0.05) entre os materiais. A média da quantidade do isótopo incorporado no DNA celular para todas as resinas acrílicas foi estatisticamente menor do que para o controle. Todas as resinas acrílicas foram classificadas pelo teste de incorporação do 3Htimidina como moderadamente citotóxicas. Da mesma forma, para o teste do MTT, não foi encontrada diferença significativa para a citotoxicidade entre os materiais (P>0.05). Quando a citotoxidade foi comparado com o grupo controle, todas as resinas foram classificadas entre não citotóxicas e discretamente citotóxicas pelo teste do MTT. Assim, conclui-se que a incorporação dos agentes de ligação cruzada, EGDMA e BDMA não influenciaram significativamente sobre a citotoxicidade observada. Não houve diferença... / The aim of this study was to determine the cytotoxicity in vitro of two trials autopolymerizing reline systems made with higher concentration of cross-linking agents, EGDMA and BDMA compared to a commercial reline resin. Sample disks of the three hard reline acrylic resins were fabricated under aseptic conditions. The Fibroblast L929 cells were cultured in 96-well plates and incubated for 24 h in Eagle's medium. Eluates were prepared by placing three samples into a sterile glass vial with 9 mL of Eagle's medium and incubating at 37ºC for 24 h. The cytotoxic effect from the eluates was evaluated using the 3H-thymidine incorporation and MTT assays, which reflect DNA synthesis levels and cell metabolism, respectively. The data were statistically analyzed by using the one-way analysis of variance (P<.05). With the 3H-thymidine incorporation assay, no significant differences (P > .05) were found between the materials. The mean quantity of isotope incorporated into cellular DNA for all acrylic resins was statistically smaller than for the control. All acrylic resins were graded by the 3Hthymidine incorporation assay as moderate cytotoxic. Similarly, with the MTT assay, no significant difference in cytotoxicity was found between the materials (P > .05). When the cytotoxicity was compared with control group, all resins assay were between non cytotoxic and slight cytotoxic by the MTT. The incorporation of cross-linking agents, EGDMA and BDMA had no significant influence on the cytotoxicity observed. There was no cell viability difference between all materials in both assays.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-08Bitstream added on 2014-06-13T19:37:36Z : No. of bitstreams: 1 takamiya_as_me_araca.pdf: 2744019 bytes, checksum: 436939ec1fb2e59f419b688a517c064c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi verificar a atividade antimicrobiana de uma resina acrílica à base de poli (metil metacrilato) (PMMA) contendo nanopartículas de prata frente ao microorganismo Candida albicans. Utilizou-se a resina acrílica termopolimerizável Lucitone 550 e as nanopartículas de prata foram sintetizadas por meio da redução dos íons prata do nitrato de prata pelo citrato de sódio. A forma e o tamanho das partículas foram confirmados por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e de transmissão (MET), tendo-se obtido partículas na forma esférica e com tamanhos médios de 5 e 10 nm. A resina acrílica foi proporcionada de acordo com as instruções do fabricante e a solução coloidal de nanopartículas de prata foi adicionada ao componente líquido da resina acrílica nas concentrações de 0,05%, 0,5% e 5% baseadas na massa do polímero. Após o processamento, os espécimes foram esterilizados por radiação de Co-60. Foram analisados a adesão de microorganismos à superfície do poli (metil metacrilato)/prata (PMMA/Ag) e a formação de biofilme por Candida albicans sobre a superfície polimérica através de microscopia de luz e de MEV. Os resultados mostraram redução estatisticamente significante (P < 0,05) da adesão de microorganismos à superfície do nanocompósito para os grupos com 0,05 e 0,5% de nanopartículas de prata com tamanho de 5nm quando comparados ao grupo controle. A microscopia de luz nãomostrou diferença na formação de biofilme entre os grupos dos nanocompósitos e o grupo controle. A MEV sugeriu uma redução na quantidade de células na superfície dos grupos contendo nanopartículas de prata, especialmente até 12 horas de crescimento fúngico. Os resultados sugerem ação inibitória sobre a adesão e formação de biofilme por Candida albicans quando da adição de nanopartículas de prata de tamanho 5 nm à resina acrílica nas concentrações de 0,05% e 0,5% / The aim of this study was to verify the antimicrobial activity of a poly (methyl methacrylate) acrylic resin containing silver nanoparticles against Candida albicans microorganism. The heat-polymerized acrylic resin Lucitone 550 was used and the silver nanoparticles were synthesized through the reduction of silver ions of silver nitrate by sodium citrate. The shape and size of the particles were confirmed by scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM), and showed spherical particles with medium size of 5 and 10 nm. The acrylic resin was proportioned according to the manufacturer’s instructions and the silver nanoparticles colloid solution was added to the liquid of the acrylic resin in 0.05%, 0.5% and 5% of concentration based on the polymer mass. After being processing, the specimens were sterilized by Co-60 radiation. The adhesion of cells of Candida albicans and the biofilm formation on the surface of the polymer were evaluated by light microscopy and SEM. The results demonstrated significantly reduction (P < .05) of the microorganisms adhesion on the surface of the nanocomposites for the groups containing 0.05 and 0.5% of silver nanoparticles with size of 5nm when compared to the control group. The light microscopy did not show difference in the biofilm formation among the groups evaluated. The SEM images suggested reduction of growth of Candida albicans cells for the nanocomposite groups, mainly up to the period of 12 hours. It was concluded that the addition of silver nanoparticles with size of 5 nm to the PMMA in 0.05% and 0.5% concentrations showed antimicrobial effect against Candida albicans

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:07:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339944.pdf: 8083092 bytes, checksum: 179ca86a029cb1e154eaf60fa8219ec9 (MD5) Previous issue date: 2016 / Abstract: Polymeric nanoparticles (NPs) with superparamagnetic properties and surface modified with folic acid (FA) can targeted drug delivery to tumors, which increase their cellular uptake (endocytosis) and therapeutic efficacy. Furthermore, NPs with superparamagnetic properties can induce cell death by hyperthermia (increasing cell temperature), and the combination of hyperthermia (HPT) with other methods like chemotherapy and radiotherapy turns these treatments much more effective. Having regard to the advantages and disadvantages of different therapeutic strategies, the idea of combining various treatments can be attractive for the next generation of cancer treatment. Thus the aim of this work was to synthesize by miniemulsion polymerization poly(methyl methacrylate) (PMMA) NPs with superparamagnetic properties for biomedical applications. In order to verify the effectiveness of NPs as drugs carrier systems, two antitumor compounds were used: zinc phthalocyanine (ZnPc), a second generation photosensitizer used in the treatment of cancer via photodynamic therapy (PDT) and lauryl gallate (G12), a derivative of gallic acid. With the aim to improve the drug delivery, the FA was used as a surface modifier of NPs. Finally, cytotoxicity and cellular uptake assay were performed in cells that express folate receptors (HeLa) to evaluate the entered mechanism of the prepared systems. The NPs obtained by minimeulsion polymerization presented a nanometric size, negative zeta potential and biocompatibility in tumor and non-tumor cells. From these excellent results of biocompatibility, ZnPc was encapsulated in PMMA NPs (PMMAZnPc). Cytotoxicity assays on leukemic cells (Jurkat and K562) showed a higher cytotoxic effect of PMMAZnPc than free ZnPc, suggesting that the death leukemic cells were by apoptosis. In another study, NPs with superparamagnetic properties (MNPs-PMMA) were obtained by miniemulsion polymerization. MNPs-PMMA NPs presented biocompatibility in tumor and non-tumor cells inducing the death of U87MG cells (~50%) by HPT. Simultaneous treatment by PDT and HPT in U87MG cells, with the simultaneous encapsulation of ZnPc and NPMs in PMMA NPs (PMMA-MNPsZnPc), showed a synergic effect when the treatments were combined. The in vitro results showed that the application of PDT and HPT together can be more effective than each of the two treatments applied separately. Finally, aiming toimprove the drug delivery efficacy, the surface of NPs were modified with folic acid (FA). The adsorption of the FA on PMMA NPs with superparamagnetic properties (FA-MNPsPMMA) increased internalization of NPs on cells that express folate receptors of type ß (K562). In another study, the G12 was encapsulated in superparamagnetic PMMA NPs (MNPsG12PMMA-FA). The simultaneous encapsulation presented a higher cytotoxic effect of FA-MNPsG12PMMA than NPs without FA, when incubated in HeLa cells. Cellular uptake assays and flow cytometry demonstrated a higher cellular uptake of FA-MNPsG12PMMA than NPs without FA, suggesting that these are internalized by folate receptor-mediated endocytosis mechanism. Furthermore, the encapsulation of G12 in PMMA NPs decreases possible cytotoxic effects of G12, in non-tumor cells and blood cells.<br> / O câncer é o nome dado a um conjunto de mais de 100 doenças que tem em comum, o crescimento desordenado de células (maligno), que invadem os tecidos e órgãos podendo espalhar-se (metástase) para outras regiões do corpo e o câncer benigno, que significa simplesmente uma massa localizada de células que se multiplicam vagarosamente e se assemelham ao seu tecido original e raramente constitui risco de vida, dependendo do tempo de diagnóstico. Dados da Organização Mundial de Saúde (OMS) mostram que o câncer é a segunda principal causa de mortes em todo o mundo. Estima se que no ano de 2030, o câncer poderá matar 17 milhões de pessoas contra os 7,6 milhões de óbitos que provocou em 2007. Um grande esforço na busca de novos tratamentos para o câncer, como um tratamento mais seletivo das células cancerígenas vem ganhando destaque na literatura. A busca de novas formulações farmacêutica utilizando como ferramenta a nanotecnologia pode melhorar a eficácia terapêutica de fármacos já existente no mercado e consequentemente diminuir seus inúmeros efeitos adversos. Nanopartículas poliméricas (NPs) com propriedades superparamagneticas e superfície modificada com ácido fólico (FA) podem direcionar o fármaco encapsulado a uma célula tumoral alvo, no qual, melhora sua internalização celular (endocitose) e eficácia terapêutica, diminuindo assim seus efeitos tóxicos. Outra vantagem destes sistemas com propriedades superparamagnéticas, é que estas podem induzir a morte das células por hipertermia (HPT) (aumento da temperatura), sendo este tratamento muito mais eficaz quando associado a terapias convencionais, como a quimioterapia e a radioterapia. Tendo em conta as vantagens e desvantagens de diferentes estratégias terapêuticas, a ideia de combinar vários tratamentos, pode ser um atrativo para a próxima geração do tratamento do câncer. Com isso, o objetivo deste trabalho foi a síntese, caracterização e estudos in vitro das NPs de poli (metacrilato de metila) (PMMA) com propriedades superparamagnéticas, obtidas via polimerização em miniemulsão. A fim de verificar a eficácia das NPs como sistemas carreadores de fármacos, dois compostos antitumorais foram utilizados: a ftalocianina de zinco (ZnPc), um fotossensibilizante de segunda geração utilizado no tratamento do câncer via Terapia Fotodinâmica (PDT) e o lauril galato (G12), um derivado do ácido gálico. Com o intuito de melhorar a vetorização das NPs de PMMA, o AF foi usado como modificador desuperfície. Por fim, ensaios de citotoxicidade e internalização celular foram realizados em células que expressam receptores folatos, com o objetivo de avaliar o mecanismo de entrada dos sistemas preparados. As NPs de PMMA obtidas via polimerização em miniemulsão apresentaram um tamanho nanométrico, com potencial zeta negativo e biocompatibilidade em células tumorais e não tumorais. A partir destes excelentes resultados de biocompatibilidade, a ZnPc foi incorporada nas NPs de PMMA (PMMAZnPc). Ensaios de citotoxicidade em células leucêmicas (K562 e Jurkat) mostraram um maior efeito citotóxico da ZnPc encapsulada em NPs que ZnPc livre, sugerindo que a morte das células leucêumicas foi mediada por apoptose. Em outro estudo, NPs de PMMA com propriedades superparamagnéticas (MNPs-PMMA) foram obtidas via polimerização em miniemulsão. MNPs-PMMA NPs apresentaram biocompatibilidade em células tumorais e não tumorais, e induziram a morte das células U87MG (~50%) por HPT. O tratamento simultâneo (PDT e HPT) sobre as mesmas células (U87MG) com o encapsulamento simultâneo da ZnPc e NPMs em NPs de PMMA (MNPsZnPc-PMMA), apresentaram um efeito sinérgico. Os resultados in vitro mostraram que a aplicação da PDT e HPT simultaneamente podem ser mais eficazes quando aplicados simultaneamente. Por fim, visando uma melhor vetorização das NPs de PMMA quando o FA foi usado como agente ligante (FA-MNPsPMMA). A adsorção do FA nas NPs de PMMA com propriedades superparamagnéticas aumentou a internalização das NPs nas células que expressam receptores folatos (células K562). Em outro estudo o G12 foi incorporado nas NPs de PMMA. O encapsulamento simultâneo do G12 e NPMs em NPs de PMMA com superfície modificada, apresentou um maior efeito citotóxico sobre as células HeLa, quando comparado com as NPs sem FA. Ensaios de captação celular e citometria de fluxo demostraram uma maior internalização das NPs de PMMA com superfície modificada, sugerindo que estas são internalizadas via receptor folato mediado pelo mecanismo de endocitose. Além disso, o encapsulamento do G12 em NPs de PMMA diminui possíveis efeitos citotóxicos do G12, em células não tumorais e células do sangue.

Orientadores: Ulf Friedrich Schuchardt, Wanda de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-05T22:38:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fabri_Fabio_M.pdf: 968913 bytes, checksum: b5ce9f5a7ed13272f76412a97e10bcc5 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O complexo de samário(III), CpSm(DIPPh)Br, foi sintetizado a partir do brometo de samário(III) utilizando como ligantes o ânion ciclopentadienil (Cp) e o ânion b- dicetimínico 2-(2,6-diisopropilfenil)aminopent-2-en-4-(2,6-diisopropilfenil)imino, (DIPPh). O complexo foi caracterizado através de espectroscopia na região do visível, espectroscopia de emissão atômica por plasma indutivamente acoplado (ICP-AES) para determinação do metal e argentimetria para determinação do brometo. O complexo foi testado na polimerização de metacrilato de metila, a partir do sistema catalítico gerado com a adição de butil-lítio na razão molar butil-lítio/complexo = 2. Foram realizados ensaios para estudar a influência da razão monômero/catalisador, temperatura, bem como um estudo da dependência do tempo na polimerização. As condições ótimas de polimerização encontradas foram: temperatura de reação = 0°C; razão monômero/iniciador = 100 e tempo de reação de 1 h. Os polímeros foram caracterizados por ressonância magnética nuclear de H e C (RMN), espectroscopia na região do infravermelho (FT-IR), Cromatografia de permeação em gel (GPC), análise termogravimétrica (TGA) e calorimetria diferencial de varredura (DSC). Foram obtidas conversões de até 96 % e polímeros com massa molar (Mn) da ordem de 25000 g.mol, polidispersividade < 1,4. Finalmente, foi observado que um aumento da razão molar monômero:catalisador promove um aumento da estereosseletividade, produzindo polímeros com até 66 % de isotaticidade / Abstract: The samarium(III) complex, CpSm(DIPPh)Br, was synthesized from samarium(III) bromide using cyclopentadienyl (Cp) and 2-(2,6- diisopropylphenyl)aminopent-2-en-4-(2,6-diisopropylphenyl)imine, (DIPPh), as ligands. The complex was characterized by UV-vis spectroscopy, atomic emission spectroscopy by induced coupled plasma to determine the metal content and argentimetry to determine de bromide content. The complex was tested in the polymerization of methyl methacrylate using the catalytic system generated by addition of butyl lithium at a butyl lithium/complex molar ratio of two. Essays were carried out to investigate the influence of monomer/catalyst molar ratio, temperature, and time dependence of the polymerization. The best conditions found for the polymerization of methyl methacrylate were: temperature of reaction: 0°C; monomer/catalyst molar ratio: 100 and time of polymerization: 1 h. The polymers were characterized by H and C nuclear magnetic resonance (NMR), Fourier transformed infrared spectroscopy (FTIR), gel permeation chromatography (GPC), thermogravimetric analysis (TGA) and differential scanning calorimetry (DSC). Conversions of up to 96 % and molar masses (Mn) in order of 25,000 g.mol were obtained, with molar mass distributions lower than 1.4. An increase of the monomer/catalyst molar ratio was observed to promote an increase of the stereoselectivity, producing polymers with isotacticity of 66 % / Mestrado / Quimica Inorganica / Mestre em Química

Orientadores: Ulf Friedrich Schuchardt, Wanda de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-06T03:56:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Muterle_RobertoBineli_M.pdf: 1714020 bytes, checksum: 34cf02b750a6c26868dd7eecf4a508e8 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Estudou-se a síntese do complexo de samário (III) com 2 ligantes 2-(2,6- diisopropilfenil)aminopent-2-en-4-(2,6-diisopropilfenil)imina [(2,6DIPPh)2nacnac]. A síntese do complexo foi conduzida em atmosfera inerte e THF como solvente através da adição de 2 equivalentes do ligante ionizado sobre o brometo de samário e subseqüente adição de 2 equivalentes de butil-lítio. O complexo foi caracterizado por ressonância magnética nuclear de H e C, espectroscopia na região do visível e espectroscopia de emissão atômica com plasma indutivamente acoplada, para determinar a quantidade de Sm e Li presentes no complexo e argentometria para determinação do Br. A atividade catalítica do complexo foi testada na polimerização do metacrilato de metila. Os testes catalíticos foram conduzidos em atmosfera inerte utilizando tolueno como solvente e variando condições reacionais como tempo, temperatura e razão catalisador/monômero. Observou-se que a ordem de adição dos reagentes durante a síntese do complexo é um fator decisivo para a atividade do catalisador e que as melhores condições de polimerização ocorreram à 0 °C, com uma razão monômero/catalisador de 90 durante 30 minutos de reação, gerando 90 % de rendimento em polímeros. Os produtos obtidos foram caracterizados por cromatografia de permeação em gel, análise termogravimétrica, espectroscopia na região do infravermelho, ressonância magnética nuclear de H e C e calorimetria diferencial de varredura. Os polímeros apresentaram massa molar (Mw) da ordem de 25 000 g mol com um baixa polidispersão (1,30), sendo pred) eominantemente isotático (55 %) e uma temperatura de transição vítrea (Tg) em torno de 60°C. / Abstract: The synthesis of the samarium complex with 2 ligands 2-(2,6- diisopropylphenil)aminopent-2-en-4(2,6-diisopropylphenil)imine [(2,6DIPPh)2nacnac] was studied. The synthesis was carried out under inert atmosphere, by the addition of 2 equivalents of the ionized ligand under the samarium bromide and then were added 2 equivalents of butil-lithium. The complex was characterized by nuclear magnetic resonance of H and C, visible spectroscopy, atomic emission spectroscopy with induced coupled plasma to determine the amount of Sm, Li present in the complex and Br was determinatéd by argentometry. The catalytic activity of the complex was studied through the polymerization of methyl methacrylaté. The catalytic tests were carried out under inert atmosphere using toluene as solvent and changing reaction conditions such as monomer : catalyst molar ratio, temperature and time dependence. It was observed that the order of addition is a important factor to determine the catalyst activity and that the best conditions to the polymerization reaction are monomer/catalyst molar ratio: 90, 30 minutes of reaction at 0 °C, giving polymers with 90 % of yield. The polymers were characterized by H and C nuclear magnetic resonance, Fourier transform infrared spectroscopy, gel permeation chromatography, thermogravimetric analysis and differential scanning calorimetry (DSC). The polymers showed molar masses (MW) around 25 Kg mol with low polydispersivity (1.30), 55% isotactic with glass transition temperature around 60°C. / Mestrado / Quimica Inorganica / Mestre em Química

Orientador: Marcelo Ferraz Mesquita / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-09T19:25:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_LucianaValadares_D.pdf: 36824583 bytes, checksum: 7a4d2a0d063c3cd9180327ea1a830f60 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: As distorções oriundas das técnicas de aplicação dos revestimentos estéticos sobre infraestruturas metálicas de próteses fixas podem resultar em margens cervicais desadaptadas. Este trabalho avaliou o efeito do tipo de revestimento estético, da simulação dos ciclos de cocção da porcelana e da eletroerosão sobre o desajuste de infra-estruturas implantossuportadas. Foi utilizada uma matriz metálica simulando um arco mandibular, contendo 5 pilares intermediários do tipo Microunit (Conexão Sistema de Próteses, Brasil). Sobre essa matriz, foram enceradas 40 infra-estruturas, fundidas em liga de CoCr (Remanium 2000, Alemanha). Para cada infra-estrutura, foi confeccionado um index, parafusando-se 5 réplicas em cada uma das infra-estruturas. Esse conjunto foi posicionado em gesso pedra especial com auxílio de delineador, antes da aplicação dos revestimentos estéticos, para avaliar o desajuste provocado apenas pela fase de aplicação dos revestimentos estéticos e ciclo de cocção da porcelana. As infra-estruturas foram separadas aleatoriamente: G1: resina acrílica termopolimerizável (Clássico, Clássico, Brasil); G2: resina fotopolimerizável (Versyo.com, Heraeus Kulzer, Brasil); G3: porcelana (Carmen, Dentaurum, Alemanha); G4: simulação dos ciclos de cocção da porcelana. Antes da aplicação dos revestimentos estéticos, foi realizada a avaliação do desajuste marginal sobre o index, após aperto de 10 Ncm em um único parafuso, correspondente ao implante A. Através desse procedimento, verificou-se a adaptação dos componentes C e E. O procedimento foi repetido no outro implante mais distal (E), para mensuração nos implantes A e C. As leituras foram realizadas utilizando microscópio mensurador (STN ¿ Olympus Optical, Japão). Procedeu-se o processo de eletroerosão (Tel Med Technologies, EUA), e novamente avaliação do desajuste marginal. Os resultados obtidos foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey (p<0,05). Os valores de desajuste marginal das infra-estruturas antes da aplicação dos revestimentos estéticos não apresentaram diferença estatística significante entre si: G1: 56,97 µm (± 16,86); G2: 43,27 µm (± 16,49); G3: 49,26 µm (± 17,11); G4: 40,66 µm (+ 10,85). A aplicação dos revestimentos estéticos e simulação dos ciclos de cocção da porcelana aumentaram significantemente os valores médios de desajuste marginal para todos os grupos: G1: 170,01 µm (±53,98); G2: 72,32 µm (±27,49); G3: 164,84 µm (±27,67); e G4: 86,28 µm (±20,01). Os grupos G1 e G3 não apresentaram diferença estatisticamente significante entre si, mas apresentaram diferença quando comparados aos G2 e G4. Após eletroerosão, as médias de desajuste marginal apresentaram valores significamente menores para os grupos: Gl: 108, 54 µm (±40,75); G3: 109,61 µm (±24,42); e G4: 59,63 µm (±22,13). A média de desajuste marginal para o grupo de resina fotopolimerizável não apresentou diferença estatística significante: G2: 49,70 µm (±16,65). Como observado anteriormente, os grupos G1 e G3 não apresentaram diferença estatística significante, mas ambos apresentaram diferença dos grupos G2 e G4. Conclui-se que os revestimentos estéticos em resina acrílica e porcelana produzem os maiores valores de desajuste marginal para próteses implantossuportadas, enquanto a resina fotopolimerizável, os menores. A aplicação de porcelana resultou em maiores valores de desajuste marginal que apenas a simulação dos ciclos de cocção. A eletroerosão foi eficaz na redução dos desajustes marginais até os limites considerados clinicamente aceitáveis / Abstract: The demand for a passive fit of frameworks for osseointegrated endousseous implants abutments is well known, because the tightening of an inaccurate framework to the abutments can transmit stress to the bone-metal interface. The purpose of the present study was to evaluate the influence of the veneering application and porcelain firing cycle on the misfit level of implant-supported frameworks. Forty Co-Cr (Remanium 2000, Dentaurum, Germany) alloy frameworks were fabricated from a metallic index containing 5 Branemark type multi unit abutments. Analogs of the abutments were positioned to the framework, to construct an index for each framework. This index allowed the observation of the marginal gaps caused by the application of the veneering material. The frameworks were grouped (n=10): 1) heat acrylic resin (Clássico, Clássico, São Paulo, Brazil); 2) light polymerized resin (Versyo.com, Heraeus Kulzer, Brazil); 3) porcelain application (Carmen, Dentaurum, Germany); 4) simulation of porcelain firing cycle. Marginal refinement with spark erosion was conducted on specific equipment (Tel Med Technologies, U.S.A.). The marginal gap was obtained before and after the veneering materials and the spark erosion procedure, following the single screw test protocol (using a tightening force of 10 Ncm). A traveling microscope (STN ¿ Olympus Optical Co. Ltd Japan (120X) was used, tightening 10N in the titanium screw of the extremity distal implant, measuring the gaps at the central and distal implants. Data were subject Analysis of Variance followed by Tukey test (5%). Marginal gap mean values of the frameworks before the veneering application were not significantly different: G1: 56.97(± 16.86); G2: 43.27(± 16.49); G3: 49.26(± 17.11); G4: 40.66(± 10.85). The application veneering materials and the simulation of porcelain firing cycle increased significantly the misfit mean values of all groups: G1: 170.01 µm (±53.98); G2: 72.32 µm (+±27.49); G3: 164.84 µm (±27.67); e G4: 86.28 µm (±20.01). There were no significant differences between G1 and G3, but they were significantly different from both G2 and G3. After the spark erosion process, marginal gap mean values decreased significantly for the following groups: G1: 108. 54 µm (±40.75); G3: 109.61 µm (±24.42); and G4: 59.63 µm (±22.13). The light curing group decreased the marginal gap mean values, but not significantly after the spark erosion procedure: G2: 49.70 µm (±16.65). As occurred after the application of veneering materials, G1 and G3 groups did not show significant difference, but they both were significantly different from G2 and G4 groups. It can be concluded that heat cured acrylic resin and porcelain produced the highest mean values of marginal gaps, while light cured acrylic resin, the lowest. The application of porcelain produced higher misfit values than the simulation of porcelain firing cycles only. The spark erosion procedure was efficacious in reducing the frameworks marginal gaps to the levels clinically accepted for all groups evaluated. / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

Orientadores: Altair Antoninha Del Bel Cury, Alfredo Julio Fernandes Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T07:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Straioto_FabianaGouveia_D.pdf: 1136819 bytes, checksum: 94255ae316940aec09bc64b1ad3b35c2 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Resinas acrílicas são materiais amplamente empregados na Odontologia, especialmente os polímeros a base de polimetilmetacrilato (PMMA) para confecção de próteses. Dentre as vantagens deste material estão à estabilidade de cor, propriedades ópticas, estética satisfatória, estabilidade dimensional, fácil manipulação e propriedades físicas adequadas para aplicações odontológicas. Entretanto, como desvantagem deste material, está à susceptibilidade à aderência e desenvolvimento de biofilme por microrganismos presentes na cavidade bucal, como fungos e bactérias. A aderência de microrganismo é o primeiro evento para o desenvolvimento do biofilme o qual está relacionado ao estabelecimento de quadros clínicos patológicos como estomatite protética. Recentemente, a adição de modificadores na composição da resina acrílica tem sido proposta com o objetivo de melhorar as características de superfície, e conseqüentemente controlar a aderência de microrganismos. Entretanto, a mudança na composição da resina acrílica não deverá comprometer as propriedades físicas. Politetrafluoretileno (PTFE) tem sido usado como modificador para confecção de stents e cateteres devido a biocompatibilidade, alta resistência a agentes químicos e baixa energia de superfície. Assim, o objetivo neste estudo foi avaliar as propriedades físicas, características de superfície, aderência de microrganismos e formação de biofilme de suas resinas acrílicas, uma polimerizada em água quente com ciclo longo e a outra polimerizada pelo ciclo curto, contendo 2% de PTFE em sua composição e comparar com as mesmas resinas sem adição de PTFE. Para isto, três estudos foram realizados: 1- Propriedades físicas da resina acrílica - espécimes das resinas foram confeccionados de acordo com a norma ISO 1567:1999 (n=10) para cada teste mecânico: dureza de superfície, resistência ao impacto, resistência a flexão e o módulo de elasticidade e carga máxima foram calculados; 2 - Características de superfície da resina acrílica e aderência de Candida albicans: espécimes retangulares (n=10) para cada resina foram confeccionados e avaliados quanto à rugosidade, ângulo de contato, energia livre de superfície e aderência de Candida albicans. As células aderidas foram expressas por unidade formadora de colônia por área da superfície; 3- Biofilme formado na resina acrílica e sua composição: discos de resina acrílica (n=6) foram usados para formação de biofilme de Streptococcus mutans UA159, Streptococcus sanguinis ATCC 10556 e Actinomyces naeslundii ATCC 12104. A composição de polissacarídeos e unidades formadoras de colônia foram comparadas. Em todos os estudos, os resultados foram submetidos à análise variância a dois fatores e comparados pelo teste de Tukey (p=0,05). Os resultados não mostraram diferença estatisticamente significante para os valores de dureza de superfície (p>0,05). Entretanto, para os valores de resistência ao impacto e flexão para os grupos experimentais, contendo PTFE, apresentaram resultados significantemente menores (p<0,05) quando comparados aos grupos não adicionados de PTFE. Os valores de módulo de elasticidade da resina acrílica adicionada com 2% de PTFE polimerizada com o ciclo longo apresentaram os maiores valores comparados aos demais grupos (p<0,05). Não houve diferenças significativas para rugosidade, ângulo de contato e energia livre de superfície (p>0,05); houve uma tendência de redução de células de C. albicans no grupo com PTFE, mas não foi estatisticamente significante. Em relação, a formação e composição de polissacarídeo os resultados não apresentaram diferenças entre os grupos de resina acrílica (p>0,05). Os resultados sugerem que 2% de PTFE adicionada à resina acrílica não foi suficiente para promover mudanças nas propriedades mecânicas, aderência e composição do biofilme. / Abstract: Acrylic resins have been widely used in Dentistry, especially polymers of poly (methyl methacrylate) for fabricating dentures. This material has as advantages stable color and optical properties, satisfactory esthetic and dimensional stability, it is easy to be processed, and its physical properties have been proven adequate for dental applications. However, as disadvantage acrylic resins surface is susceptible to adherence and biofilm development of oral microorganism, such as fungi and bacteria. Microorganism's adherence is the first step to biofilm development, and it is related to pathogenic condition, leading to denture stomatitis. Recently, it had been proposed addition of modifiers to acrylic resin composition that could be able to improve its surface properties, and consequently controlling microorganisms' adherence. However, this change in composition of acrylic resin should not compromise its physical properties. Polytetrafluorethylene has been used as modifiers to fabricate medical devices such as stents and catheters because it is a biocompatible material, high resistance to chemical reagents and low surface energy. Thus, the aim of this study was to evaluate the physical properties, surface characteristics, adherence of microorganisms and biofilm formation of two acrylic resins, one polymerized by long and other polymerized by short cycle, with 2% (w/w) of PTFE added and to compare with the same resins with no PTFE added. For this, three studies were conducted: 1 - Physical properties of acrylic resins - specimens were prepared for each acrylic resin according to the ISO standard 1567:1999 (n=10) for each mechanical test: surface hardness, impact strength, flexural strength and flexural modulus and peak load were calculated; 2 - Characteristics of acrylic resin surface and adherence of Candida albicans: rectangular specimens (n=10) of each resin were prepared and evaluated for surface roughness, contact angle, surface free energy and C.albicans adherence. Adhered cells were expressed in colony forming units per surface area; 3- Biofilm formed on acrylic resins and its composition: acrylic resin discs (n=6) were used to Streptococcus mutans UA 159, Streptococcus sanguinis ATCC 10556 and Actinomyces naeslundii ATCC 12104 biofilm formation. Polysaccharide composition and colony forming units were compared. For both three studies the results of were analyzed by Two-Way ANOVA and Tukey test (P<.05). The results showed no statistical significant differences for surface hardness (P>0.05). However, impact and flexural strengths values for experimental groups, with PTFE added were significantly lower (P<.05) when compared to the groups with no PTFE added. The flexural modulus values of acrylic resin containing 2% PTFE polymerized by long cycle was higher than other resins (P<0.05). No statistical differences were found for roughness, contact angle, surface free energy (P>.05); there was a reduction trend in C. albicans adherence in acrylic resin with PTFE added, but it was not statistically significant. Regarding, the formation and composition of polysaccharide matrix the results showed no differences among the acrylic resin groups (P>0.05). The results showed that the 2% of PTFEE incorporated to acrylic resins was not enough to affect the mechanical properties, adherence and composition of biofilm. / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Wander José da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-23T13:26:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_LeticiaMachado_D.pdf: 3139804 bytes, checksum: 4f3ad00e23ae5ec0336267a151dbe2e0 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O fluconazol (FLZ) é um antifúngico amplamente utilizado no tratamento da candidose associada ao uso de prótese dental. No entanto, o sucesso desta terapia pode ser dificultado pela presença da matriz extracelular dos biofilmes de Candida albicans. Estudos já foram conduzidos avaliando o efeito do FLZ em biofilmes de C. albicans, no entanto, estudos que simulem uma condição na qual os biofilmes são desenvolvidos na presença do FLZ são escassos. Ainda, na tentativa de avaliar a organização tridimensional destes biofilmes, várias técnicas de microscopia já foram descritas, apesar de pouca atenção ser dada na análise da matriz extracelular. Frente ao exposto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a matriz extracelular de biofilmes de C. albicans na presença de concentração salivar de FLZ. Dois estudos foram conduzidos e, em ambos, discos (10 mm x 2 mm) de resina acrílica à base de poli (metil metacrilato) foram confeccionados e cobertos com uma película de saliva sobre a qual biofilmes de C. albicans foram desenvolvidos. O primeiro estudo foi conduzido com o objetivo de definir uma metodologia para análise da matriz extracelular. Biofilmes de C. albicans ATCC 90028 foram desenvolvidos em meio de cultura sem suplementação (controle) ou suplementado com glicose ou sacarose, por 72 horas. Durante o desenvolvimento dos biofilmes foi adicionado o corante Concanavalina A (ConA) para a marcação da matriz extracelular. Após o desenvolvimento, os biofilmes foram corados com SYTO 9 para a marcação das células. As imagens obtidas por microscopia confocal foram analisadas pelo software COMSTAT. Para confirmação dos resultados, os biofilmes foram coletados e analisados bioquimicamente para determinação da composição da matriz de polissacarídeos pelo método fenol-sulfúrico. Os dados foram analisados por ANOVA seguido do teste de Tukey com nível de significância de 5%. Para o segundo estudo, biofilmes de C. albicans (ATCC 90028) e de dois isolados clínicos (P01 e P34) foram desenvolvidos em meio de cultura contendo FLZ na concentração biodisponível na saliva (2,56 ?g/mL), durante 48h. O grupo controle foi desenvolvido sem a presença de fluconazol. O número de células viáveis foi quantificado por diluição seriada, e a matriz extracelular analisada bioquimicamente, além da avaliação por microscopia confocal. Os dados foram analisados pelo teste t de Student com nível de significância de 5%. No primeiro estudo, observou-se que o uso de ConA permitiu uma marcação eficaz da matriz extracelular, confirmada pela análise bioquímica (p < 0,05). No segundo estudo, houve uma redução de 80% no número de células viáveis dos biofilmes desenvolvidos na presença de FLZ (p < 0,001). Considerando-se a proporção de polissacarídeos produzidos pelo número de células viáveis, observou-se que nos grupos experimentais, C. albicans foi capaz de produzir mais matriz extracelular do que os grupos controle (p < 0,05). Este resultado foi confirmado pelas imagens obtidas por microscopia confocal. Conclui-se que a microscopia confocal é uma ferramenta efetiva na análise da matriz extracelular de biofilmes de C. albicans, e que os biofilmes de C. albicans desenvolvidos na presença de FLZ apresentaram maior produção de matriz extracelular / Abstract: Fluconazole (FLZ) is a commonly used antifungal agent to treat patients with Candida-associated denture stomatitis. However, the success of this therapy may be compromised by the presence of extracellular matrix of C. albicans biofilms. Although studies have been conducting evaluating the effect of FLZ on C. albicans biofilms, studies that simulate the condition in which biofilms were allowed to grow in the presence of FLZ are limited. Additionally, in order to evaluate the three-dimensional organization of these biofilms, several microscopic techniques have been described, although little attempt has been paid to assess the extracellular matrix. The objective of this study was to investigate the extracellular matrix of C. albicans biofilms in the presence of salivary concentration of FLZ. For this, two studies were conducted. For both studies, discs (10 mm x 2 mm) were fabricated using poly (methyl methacrylate). Salivary pellicle was formed on disc surface and C. albicans biofilms were developed. In the first study a methodology for analyzing the extracellular matrix was defined. C. albicans ATCC 90028 biofilms were developed in culture media without (control) or with supplementation by glucose or sucrose for 72 hours. During development, biofilms were stained with Concanavalin A (ConA) in order to label the extracellular matrix. After, cells were also labeled with SYTO-9. Images obtained by confocal microscopy were analyzed by COMSTAT software. In order to confirm the results, biofilms were subjected by the biochemical phenol-sulfuric method. Data were analyzed by ANOVA followed by Tukey's test at a significance level set at 5%. For the second study, biofilms of an ATCC 90028 and two clinical isolates (, P01 and P34) were developed for 48 hours. FLZ at 2.56 ?g/mL, concentration bioavailable in saliva, was added to culture media of experimental groups. Biofilms were investigated for the number of viable cells by serial dilution and extracellular matrix production was analyzed by phenol-sulfuric method and confocal microscopy. Data were analyzed by Student's t-test, with significance level set at 5%. In the first study, the use of ConA provided an effective labeling of extracellular matrix, which was confirmed by phenol-sulfuric method (p < 0.05). In the second study, a reduction of 80% was observed in the number of viable cells for C. albicans biofilms developed in the presence of FLZ (p < 0.001). Considering the proportion of polysaccharides produced by the number of viable cells, it was observed that in the experimental groups, C. albicans was able to produce more extracellular matrix than the control groups (p < 0.05). This result was confirmed by confocal images. It was concluded that confocal microscopy is an effective tool to investigate the extracellular matrix of C. albicans biofilms; and C. albicans biofilms developed in the presence of FLZ present increased extracellular matrix production / Doutorado / Protese Dental / Doutora em Clínica Odontológica