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Micropropagação e avaliação da potencialidade genotóxica de Petiveria alliacea L. / Micropropagation and evalvation of the genotoxic potential of petiveria alliacea L.

Bianka de Oliveira Soares 28 February 2013 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Petiveria alliacea L. é uma planta pertencente à família Phytolaccaceae, conhecida popularmente no país como guiné, erva-de-alho, erva-tipi ou amansa-senhor. Nativa da Região Amazônica tem sido cultivada em muitas áreas tropicais com propósito medicinal ou ritualístico. O objetivo desse trabalho foi (i) o desenvolvimento e a multiplicação de plantas de P. alliacea L. através de métodos de cultura de tecidos, e monitoramento fitoquímico das culturas, e (ii) avaliação comparativa das potencialidades genotóxica e antigenotóxica entre plantas coletadas no campo e produzidas in vitro. Exemplares de diferentes populações ocorrentes no estado do Rio de Janeiro foram utilizados como matrizes para a cultura. Foi estabelecido um protocolo para multiplicação das plantas em meio MS suplementado com BAP e ANA em diferentes concentrações e combinações, que forneceu como melhor resultado em média 8 plantas por explante na concentração de BAP 4,4 μM + ANA 0,54 μM. A análise fitoquímica foi baseada em métodos cromatográficos de diferentes extratos de plantas de campo e plantas in vitro das populações estudadas resultando em diferentes substâncias identificadas nas amostras analisadas por cromatografia em camada delgada. Os extratos foram também avaliados por cromatografia gasosa acoplada á espectrometria de massas, sendo identificadas diferentes substâncias, entre as quais o dibenzil dissulfeto, um produto de degradação de tiosulfinatos com importantes atividades biológicas na defesa das plantas. Os extratos aquosos das plantas de campo e daquelas estabelecidas in vitro foram submetidos à avaliação da potencialidade genotóxica e antigenotóxica, usando-se como modelo o DNA plasmidial pUC 9.1. Os resultados demonstraram que as concentrações utilizadas do extrato aquoso foram capazes de induzir alterações na conformação estrutural do DNA, indicando a ocorrência de quebras simples e duplas nesta molécula. Observou-se também que as lesões aumentaram, proporcionalmente ao aumento da concentração dos extratos, caracterizando-se, assim, um efeito dose-resposta. Os dados também apontaram para um efeito protetor do extrato aquoso, em relação aos danos oxidativos causados pelo cloreto estanoso, indicando, também, uma potencialidade antigenotóxica do extrato aquoso. / Petiveria alliacea L. popularly known in Brazil as Guiné, Amansa-senhor or Tipi belongs to the Phytolaccaceae family. Native from the Amazon region, it has been cultivated in many tropical areas for medicinal or ritualistic purposes. The aim of this study was: i) the development and multiplication of plants of P. alliacea L. through tissue culture methods as well as monitoring phytochemical cultures; ii) comparative assessment of genotoxic and antigenotoxic potentialities between field collected and in vitro grown plants. Specimens from different populations occurring in the state of Rio de Janeiro were used as matrices for the culture. It was established a protocol for propagation in MS medium supplemented with different BAP + ANA concentrations and combinations whose best result (BAP 4,4 μM + ANA 0,54 μM) provided 8 plants per explant in average. The phytochemical analysis was based on chromatographic methods of different extracts both of field and in vitro plant populations resulting in different substances identified through the Thin-layer chromatography analyzing samples. The extracts were also assayed by cromatografia gasosa acoplada á espectrometria de massas having identified various substances, including the dibenzyl disulfide, a degradation tiosulfinatos product with important function in plant defense and increasing use by the pharmaceutical industry. Field and in vitro plant aqueous extracts were evaluated for genotoxic and antigenotoxic potentialities using PUC 9.1 plasmid DNA. These results showed changes in the DNA structural conformation indicating the occurrence of single and double strand breaks induced by the extracts in a dose-response way. Finally, data also pointed to a protective effect of aqueous extract against stannous chloride oxidative damage, characterizing an antigenotoxic potentiality of aqueous extract.
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Micropropagação e avaliação da potencialidade genotóxica de Petiveria alliacea L. / Micropropagation and evalvation of the genotoxic potential of petiveria alliacea L.

Bianka de Oliveira Soares 28 February 2013 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Petiveria alliacea L. é uma planta pertencente à família Phytolaccaceae, conhecida popularmente no país como guiné, erva-de-alho, erva-tipi ou amansa-senhor. Nativa da Região Amazônica tem sido cultivada em muitas áreas tropicais com propósito medicinal ou ritualístico. O objetivo desse trabalho foi (i) o desenvolvimento e a multiplicação de plantas de P. alliacea L. através de métodos de cultura de tecidos, e monitoramento fitoquímico das culturas, e (ii) avaliação comparativa das potencialidades genotóxica e antigenotóxica entre plantas coletadas no campo e produzidas in vitro. Exemplares de diferentes populações ocorrentes no estado do Rio de Janeiro foram utilizados como matrizes para a cultura. Foi estabelecido um protocolo para multiplicação das plantas em meio MS suplementado com BAP e ANA em diferentes concentrações e combinações, que forneceu como melhor resultado em média 8 plantas por explante na concentração de BAP 4,4 μM + ANA 0,54 μM. A análise fitoquímica foi baseada em métodos cromatográficos de diferentes extratos de plantas de campo e plantas in vitro das populações estudadas resultando em diferentes substâncias identificadas nas amostras analisadas por cromatografia em camada delgada. Os extratos foram também avaliados por cromatografia gasosa acoplada á espectrometria de massas, sendo identificadas diferentes substâncias, entre as quais o dibenzil dissulfeto, um produto de degradação de tiosulfinatos com importantes atividades biológicas na defesa das plantas. Os extratos aquosos das plantas de campo e daquelas estabelecidas in vitro foram submetidos à avaliação da potencialidade genotóxica e antigenotóxica, usando-se como modelo o DNA plasmidial pUC 9.1. Os resultados demonstraram que as concentrações utilizadas do extrato aquoso foram capazes de induzir alterações na conformação estrutural do DNA, indicando a ocorrência de quebras simples e duplas nesta molécula. Observou-se também que as lesões aumentaram, proporcionalmente ao aumento da concentração dos extratos, caracterizando-se, assim, um efeito dose-resposta. Os dados também apontaram para um efeito protetor do extrato aquoso, em relação aos danos oxidativos causados pelo cloreto estanoso, indicando, também, uma potencialidade antigenotóxica do extrato aquoso. / Petiveria alliacea L. popularly known in Brazil as Guiné, Amansa-senhor or Tipi belongs to the Phytolaccaceae family. Native from the Amazon region, it has been cultivated in many tropical areas for medicinal or ritualistic purposes. The aim of this study was: i) the development and multiplication of plants of P. alliacea L. through tissue culture methods as well as monitoring phytochemical cultures; ii) comparative assessment of genotoxic and antigenotoxic potentialities between field collected and in vitro grown plants. Specimens from different populations occurring in the state of Rio de Janeiro were used as matrices for the culture. It was established a protocol for propagation in MS medium supplemented with different BAP + ANA concentrations and combinations whose best result (BAP 4,4 μM + ANA 0,54 μM) provided 8 plants per explant in average. The phytochemical analysis was based on chromatographic methods of different extracts both of field and in vitro plant populations resulting in different substances identified through the Thin-layer chromatography analyzing samples. The extracts were also assayed by cromatografia gasosa acoplada á espectrometria de massas having identified various substances, including the dibenzyl disulfide, a degradation tiosulfinatos product with important function in plant defense and increasing use by the pharmaceutical industry. Field and in vitro plant aqueous extracts were evaluated for genotoxic and antigenotoxic potentialities using PUC 9.1 plasmid DNA. These results showed changes in the DNA structural conformation indicating the occurrence of single and double strand breaks induced by the extracts in a dose-response way. Finally, data also pointed to a protective effect of aqueous extract against stannous chloride oxidative damage, characterizing an antigenotoxic potentiality of aqueous extract.

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