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Make inferences about bacterial gene functions with the concept of neighborhood in silico / Faire des inférences sur les fonctions des gènes bactériens avec le concept de voisinage in silicoWang, Tingzhang 15 December 2010 (has links)
Avec l'accroissement du nombre de génomes séquencés, l'organisation de ces données brutes et des données dérivées, l'extraction de l'information et des connaissances associées défie l'imagination. La notion de voisinage a été d'abord été introduite pour l'organisation des données dans des bases de données relationnelles. Pour extraire des informations pertinentes à partir de données massives, différents types de voisinages ont été étudiés ici. Tout d'abord, avec l'analysedes correspondances (CA) et en utilisant le regroupement supervisé ("model clustering" MBC), la proximité mutuelle des éléments formant deux entités biologiques centrales, les gènes (codant les protéines) et les acides aminés a été analysée. Nous montrons par exemple que les protéines de Psychromonas ingrahamii, bactérie psychrophile extrêmes, sont regroupées en six classes, et qu'il y a une forte opposition entre le comportement de l'asparagine (N) et des acides aminés sensibles à l'oxygène, ce que nous expliquons en terms de résistance au froid. Ensuite, nous avons analysé la répartition entre les îlots génomiques (GI) et le squelette du génome de base à partir d'une nouvelle méthode combinant composition en bases et en gènes, caractéristiques GI et de briser les synténies. L'application de cette approche à E. coli et B. subtilis a révélé que cette nouvelle méthode permet d'extraire certaines régions significative, non publiées auparavant.Enfin, pour illustrer un voisinage fin, la régulation de l'expression d'un gène et son évolution, nous avons étudié la relation entre les régions en amont du gène et la zone codante du gène thrS de façon approfondie. Nous avons constaté que ces deux régions associées à un gène, se sont comportés différemment dans l'histoire évolutive. Certaines des régions en amont porteuses de la fonction non-essentielle de régulation (qui contrôle l'expression de gène) ont évoluédifféremment de la région codante. / With more and more genomes being sequenced, the organization of those raw data and the derived data, the extraction of information and knowledge from these data has become a challenge. A key concept in this field is that of the neighborhood, especially with respect to the organization of data in relational databases. To extract information from bulk data, different kinds of neighborhoods were studied and each show interesting results in current study. .Firstly, through the Correspondence Analysis (CA) and later Model Based Clustering (MBC), two kinds of neighbors i.e. the genes (proteins) and amino acids were analyzed respectively, and it was found that proteins from Psychromonas ingrahamii are clustered into six classes, and there is strong opposition between asparagine (N) and the oxygen-sensitive amino acids. Secondly, the relationship between genomic islands and core genome (i.e. two closely linked neighbors withlarge range on the chromosome) was studied by a new method combining composition, GI features and synteny break. On applying to E. coli and B. subtilis it was revealed that this new method can extract some meaningful regions not published before. Thirdly, the relationship between upstream and coding regions of thrS gene (i.e. a case for two closely linked neighbors with small range on the chromosome) was studied extensively. It was found that these two regions associated to one gene, behaved differently in the evolutionary history.. Some of the upstream regions bearing non-essential function (i.e. regulation of gene expression) evolved more slowly than the coding region.
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Analyse du transcriptome de Buchnera aphidicola, la bactérie symbiotique du puceron Acyrthosiphon pisumCharles, Hubert 12 April 2006 (has links) (PDF)
Les progrès fulgurants de ces dix dernières années réalisés dans les domaines de la microinformatique et de la microfluidique associés au génie génétique (PCR et séquençage) ont permis un changement d'échelle dans la quantité des données acquises au cours d'une même expérience. La transcriptomique est directement issue de ces avancées technologiques. Ce mémoire présenté pour l'obtention d'une Habilitation à Diriger des Recherdes porte sur l'analyse du transcriptome de la bactérie intracellulaire obligatoire des pucerons, Buchnera aphidicola. Dans la première partie, les principales méthodes d'analyses statistiques différentielles et d'intégration des données transcriptomiques sont présentées sous la forme d'une analyse bibliographique. La deuxième partie est consacrée au développement d'outils bioinformatiques : ROSO, un logiciel d'optimisation des sondes oligonucléotidiques, la puce Buchnera et SITRANS, un système d'information pour la gestion et la publication des données d'expression. Enfin, la dernière partie est consacrée à la caractérisation du transcriptome de Buchnera en condition de stress trophique de son hôte, le puceron du pois Acyrthosiphon pisum. La régulation transcriptionnelle chez les bactéries symbiotiques intracellulaires à génome réduit est encore actuellement très mal connue. Cette question sera abordée chez Buchnera tout d'abord au niveau évolutif par l'étude de la relation entre l'expression des gènes et leur organisation dans le génome, puis au niveau fonctionnel, par la caractérisation de la réponse de la bactérie à une diminution de la quantité d'acides aminés essentiels dans le substrat nutritif du puceron, combinée à un stress osmotique.
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Conception de microARNs pour attenuer l'expression de genesCaron, Maxime 09 1900 (has links)
Les microARNs appartiennent à la famille des petits ARNs non-codants et agissent
comme inhibiteurs des ARN messagers et/ou de leurs produits protéiques. Les mi-
croARNs sont différents des petits ARNs interférants (siARN) car ils atténuent l’ex-
pression au lieu de l’éliminer. Dans les dernières années, de nombreux microARNs
et leurs cibles ont été découverts chez les mammifères et les plantes. La bioinforma-
tique joue un rôle important dans ce domaine, et des programmes informatiques de
découvertes de cibles ont été mis à la disposition de la communauté scientifique. Les
microARNs peuvent réguler chacun des centaines de gènes, et les profils d’expression de
ces derniers peuvent servir comme classificateurs de certains cancers. La modélisation
des microARNs artificiels est donc justifiable, où l’un pourrait cibler des oncogènes
surexprimés et promouvoir une prolifération de cellules en santé. Un outil pour créer
des microARNs artificiels, nommé MultiTar V1.0, a été créé et est disponible comme
application web. L’outil se base sur des propriétés structurelles et biochimiques des
microARNs et utilise la recherche tabou, une métaheuristique. Il est démontré que
des microARNs conçus in-silico peuvent avoir des effets lorsque testés in-vitro. Les sé-
quences 3’UTR des gènes E2F1, E2F2 et E2F3 ont été soumises en entrée au programme
MultiTar, et les microARNs prédits ont ensuite été testés avec des essais luciférases, des
western blots et des courbes de croissance cellulaire. Au moins un microARN artificiel
est capable de réguler les trois gènes par essais luciférases, et chacun des microARNs a
pu réguler l’expression de E2F1 et E2F2 dans les western blots. Les courbes de crois-
sance démontrent que chacun des microARNs interfère avec la croissance cellulaire.
Ces résultats ouvrent de nouvelles portes vers des possibilités thérapeutiques. / MicroRNAs belong to the family of small non-coding RNAs and act as down regula-
tors of messenger RNAs and/or their protein products. microRNAs differ from siRNAs
by downregulating instead of shutting down. In recent years, numerous microRNAs and
their targets have been found in mammals and plants. Bioinformatics plays a big role
in this field, as software has emerged to find new microRNA targets. Each individual
microRNA can regulate hundreds of genes, and it has been shown that microRNA
expression profiles can classify human cancers. The need for artificially created mi-
croRNAs is then justified, as one could target overexpressed oncogenes and promote
healthy cell proliferation. MultiTar V1.0, a tool for creating artificial microRNAs, has
been implemented and is available as a web application. The tool relies on structural
and biological properties of microRNAs and uses a Tabusearch metaheuristic. A typical
biological problem is presented and it is shown that an in-silico microRNA has in-vitro
effects. The 3’UTR sequences of E2F1, E2F2 and E2F3 were given as input to the
tool, and predicted microRNAs were then tested using luciferase essays, western blots
and growth curves. At least one microRNA is able to regulate the three genes with
luciferase essays and all of the created microRNAs were able to regulate the expres-
sion of E2F1 and E2F2 with western blots. Growth curves were also studied in order
to investigate overall biological effects, and reduction in growth was observed for all
solutions. Results obtained with the predicted microRNAs and the target genes open
a new door into therapeutic possibilities.
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Étude de l'expression des gènes nucléaires codant pour les sous-unités du complexe I mitochondrial humainLescuyer, Pierre 25 October 2002 (has links) (PDF)
La NADH:ubiquinone oxydoréductase (complexe I) est le plus gros complexe enzymatique du système mitochondrial d'oxydation phosphorylante (43 sous-unités chez l'homme). Très peu de données sont disponibles concernant les mécanismes régulant l'expression de ces protéines. <br />Cette étude a été initiée par l'étude des promoteurs de deux gènes du complexe I mitochondrial humain. Les résultats montrent que le gène NDUFS8 qui code pour la sous-unité 23 kDa (TYKY) est transcrit sous le contrôle des facteurs de transcription YY1 et Sp1 tandis que gène NDUFS7 codant pour la sous-unité 20 kDa (PSST) est régulé par NRF-1 et Sp1. <br />Dans la deuxième partie de ce travail, une méthode d'analyse du protéome mitochondrial humain par électrophorèse bidimensionnelle a été développée. Le but est d'aborder de manière globale et sans a priori l'expression des protéines du complexe I : déterminer qui est régulé et comment en réponse à un stimulus déterminé? <br />Des cartes de référence ont été développées à partir de mitochondries extraites de placenta humain en utilisant deux types de gradient de pH : l'un est adapté aux protéines acides et neutres, l'autre aux protéines basiques. Sur ces cartes, 85 protéines mitochondriales ont été identifiées par spectrométrie de masse dont 17 sous-unités du complexe I. Cette technique d'analyse protéomique a ensuite été utilisée pour étudier la régulation de l'expression des protéines mitochondriales par le fer. Sur le plan technique, les premiers résultats sont encourageants : les gels d'électrophorèse bidimensionnelle préparés avec des mitochondries extraites de cellules en culture sont de bonne qualité et des variations reproductibles de l'expression de sous-unités du complexe I et d'autres protéines mitochondriales ont pu être détectées. Sur le plan fondamental, les données obtenues sont préliminaires. Il sera nécessaire de réaliser de nouvelles expériences pour confirmer les premières observations et analyser la cinétique des variations détectées.
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Conception de microARNs pour attenuer l'expression de genesCaron, Maxime 09 1900 (has links)
Les microARNs appartiennent à la famille des petits ARNs non-codants et agissent
comme inhibiteurs des ARN messagers et/ou de leurs produits protéiques. Les mi-
croARNs sont différents des petits ARNs interférants (siARN) car ils atténuent l’ex-
pression au lieu de l’éliminer. Dans les dernières années, de nombreux microARNs
et leurs cibles ont été découverts chez les mammifères et les plantes. La bioinforma-
tique joue un rôle important dans ce domaine, et des programmes informatiques de
découvertes de cibles ont été mis à la disposition de la communauté scientifique. Les
microARNs peuvent réguler chacun des centaines de gènes, et les profils d’expression de
ces derniers peuvent servir comme classificateurs de certains cancers. La modélisation
des microARNs artificiels est donc justifiable, où l’un pourrait cibler des oncogènes
surexprimés et promouvoir une prolifération de cellules en santé. Un outil pour créer
des microARNs artificiels, nommé MultiTar V1.0, a été créé et est disponible comme
application web. L’outil se base sur des propriétés structurelles et biochimiques des
microARNs et utilise la recherche tabou, une métaheuristique. Il est démontré que
des microARNs conçus in-silico peuvent avoir des effets lorsque testés in-vitro. Les sé-
quences 3’UTR des gènes E2F1, E2F2 et E2F3 ont été soumises en entrée au programme
MultiTar, et les microARNs prédits ont ensuite été testés avec des essais luciférases, des
western blots et des courbes de croissance cellulaire. Au moins un microARN artificiel
est capable de réguler les trois gènes par essais luciférases, et chacun des microARNs a
pu réguler l’expression de E2F1 et E2F2 dans les western blots. Les courbes de crois-
sance démontrent que chacun des microARNs interfère avec la croissance cellulaire.
Ces résultats ouvrent de nouvelles portes vers des possibilités thérapeutiques. / MicroRNAs belong to the family of small non-coding RNAs and act as down regula-
tors of messenger RNAs and/or their protein products. microRNAs differ from siRNAs
by downregulating instead of shutting down. In recent years, numerous microRNAs and
their targets have been found in mammals and plants. Bioinformatics plays a big role
in this field, as software has emerged to find new microRNA targets. Each individual
microRNA can regulate hundreds of genes, and it has been shown that microRNA
expression profiles can classify human cancers. The need for artificially created mi-
croRNAs is then justified, as one could target overexpressed oncogenes and promote
healthy cell proliferation. MultiTar V1.0, a tool for creating artificial microRNAs, has
been implemented and is available as a web application. The tool relies on structural
and biological properties of microRNAs and uses a Tabusearch metaheuristic. A typical
biological problem is presented and it is shown that an in-silico microRNA has in-vitro
effects. The 3’UTR sequences of E2F1, E2F2 and E2F3 were given as input to the
tool, and predicted microRNAs were then tested using luciferase essays, western blots
and growth curves. At least one microRNA is able to regulate the three genes with
luciferase essays and all of the created microRNAs were able to regulate the expres-
sion of E2F1 and E2F2 with western blots. Growth curves were also studied in order
to investigate overall biological effects, and reduction in growth was observed for all
solutions. Results obtained with the predicted microRNAs and the target genes open
a new door into therapeutic possibilities.
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Expression des allèles spécifiques chez l'hybride clonal Phoxinus eos-neogaeus (Pisces : Cyprinidae)Castonguay, Emilie January 2008 (has links)
Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal.
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Identification de transcrits modulés par ETV6 : un gène candidat suppresseur de tumeurBoily, Gino January 2005 (has links)
Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.
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Rôle des miARN et des ARE-BP dans la mucoviscidose / Role of miRNA and ARE-BP in Cystic FibrosisPommier, Alexandra 23 November 2018 (has links)
La mucoviscidose (CF, Cystic Fibrosis), maladie autosomique récessive la plus fréquente dans la population caucasienne, se manifeste par l’atteinte de plusieurs organes due à l’absence ou au dysfonctionnement du canal CFTR. Au niveau des poumons, la perte de l’activité du canal se traduit par une déshydration du mucus, des cycles d’infections et d’inflammation aboutissant à terme à la destruction du parenchyme pulmonaire. Les thérapeutiques proposées à l’heure actuelle, sont principalement symptomatiques et l’exploration de nouvelles pistes reste nécessaire. De récents travaux émanant de notre équipe ont révélé qu’une intervention au niveau de la stabilisation des transcrits pourrait être bénéfique pour améliorer la quantité de protéines nécessaires pour restaurer une activité suffisante du canal CFTR. Une autre piste qui pourrait être explorée serait de cibler, en plus de l’expression du gène CFTR, des régulateurs clés qui participent aux processus de réparation cellulaire ou à la réponse inflammatoire. Dans cet objectif, nous nous sommes focalisés sur des régulateurs clés comme les miARN et les ARE-BP (protéines de liaison à l’ARN) qui sont dérégulés dans les tissus CF et qui peuvent agir ensemble dans le contrôle de l’expression de nombreux gènes.Les travaux que nous avons réalisés nous ont permis d’une part, de montrer la dérégulation de miARN dans des échantillons CF ainsi que des isoformes de certains miARN. Deux miARN ont retenu notre attention, le miR-101 dont la distribution de ses séquences isomiR varient dans des cultures CF et le miR-181a-5p qui présente une dérégulation de son expression dans trois modèles ex-vivo CF que nous avons utilisés. Ces miARN ont la particularité de moduler l’expression de gènes clés dans les voies de signalisation PI3K-Akt/MAPK-Erk et Wnt. D’autre part, nos travaux ont révélé la dérégulation de la protéine ARE-BP TTP (Tristétraproline ou ZFP36) en contexte CF. Cette protéine est d’autant plus intéressante qu’elle est connue pour être un régulateur clé de l’inflammation. La suite de ce travail a donc été d’étudier sa régulation et son impact sur ses ARNm cibles. L’activité de cette ARE-BP a été principalement décrite pour être contrôlée par la voie p38-MAPK. Nous montrons l’implication de la voie p42/p44-MAPK (Erk1/2) dans la régulation de la phosphorylation de TTP dans des cultures bronchiques. La recherche des interactions entre TTP et ses cibles a également révélé que cette protéine agissait sur ses propres régulateurs ainsi que sur l’ARNm CFTR. Nous montrons ainsi pour la première fois que TTP se fixe au niveau de la région 3’UTR du transcrit CFTR et joue un rôle de stabilisateur sur ce transcrit.Identifier de nouveaux acteurs de la régulation du gène CFTR mais également des régulateurs centraux des processus altérés en contexte CF offre de nouvelles opportunités pour concevoir des outils ciblés pour combattre cette maladie. / Cystic fibrosis (CF), the most common life-shortening genetic disorder in Caucasians, affects many organs but chronic lung disease is the main cause of morbidity and mortality. This disease, characterized by CFTR gene alterations, results in ions transport dysfunctions that contribute to impair mucociliary clearance, favoring bacterial colonization and inflammation, and ultimately leading to lung destruction. Nowadays, therapeutic drugs have limited benefit, so development of new alternatives or complementary molecules remains essential. Recently, our team demonstrated that the intervention on CFTR mRNA stability leads to an increase in CFTR protein level and an improvement of the CFTR channel activity. An alternative way would be to target key actors such as miRNA and ARE-BP (RNA binding protein), deregulated in CF tissues, that display a pleiotropic activity and act together to control expression of several genes.Our findings led to the identification of dysregulated miRNA in CF samples and revealed multiple isoforms relative to miRNA of reference (i.e. isomiRs). We focused on two miRNA, miR-101, that displays a modification in isomiR distribution and miR-181a-5p that is highly deregulated, in three CF airways models. These miRNA modulate expression of key genes or related genes in PI3K-Akt/MAPK-Erk and Wnt signaling pathways.Our work also revealed the deregulation of an ARE-BP protein, TTP (Tristetraprolin, ZFP36), in CF context. This protein is a master regulator in inflammatory resolution. We next investigated the mechanism whereby this ARE-BP is regulated in bronchial cells and showed that TTP phosphorylation is regulated by MK2 through ERK activation. We also determined for the first time that TTP binds to the 3’UTR of CFTR mRNA where TTP binding stabilizes CFTR mRNA level.These data bring new insights into CF physiopathology and open new research opportunities in CF.
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Implication de la sous-unité °4 des canaux calciques voltage dépendants dans la régulation de l'expression génique / Canaux calciques voltage-dépendants,sous-unité beta4,régulation de l'expression génique,récepteur aux hormones thyroïdiennes alpha,Fablet, Katell 11 October 2011 (has links)
Les canaux calciques dépendants du voltage (CCVD) sont impliqués dans de nombreux processus cellulaires tels que la libération de neurotransmetteurs, la contraction musculaire ou encore la régulation de l'expression génique. Les CCVD sont constitués d'une sous-unité canalaire (alpha1 ou Cav) par laquelle les ions Ca2+ entrent dans le milieu intracellulaire, associée à différentes sous-unités auxiliaires, alpha2delta, beta et gammaqui régulent leur fonction. Ma thèse a contribué à la mise en évidence d'une nouvelle voie de régulation du couplage excitation-transcription impliquant la sous-unité beta4 des CCVD. Dans ce cadre, nous nous sommes intéressés à la compréhension des déterminants de l'entrée de beta4 dans le noyau et aux mécanismes de régulation de l'expression génique par cette sous-unité des CCVD. Un modèle animal nous a été particulièrement utile, la souris léthargique (lh), déficiente pour la sous-unité beta4 et considérée comme un modèle d'étude de l'épilepsie-absences. Une translocation de beta4 du cytoplasme vers le noyau est observée au cours de la différenciation neuronale. Cette translocation est dépendante de l'intégrité structurale de beta4 et plus précisément de l'interaction de ses domaines SH3 (Src Homology 3) et GK (Guanylate Kinase). La translocation de beta4 au noyau nécessite son association avec un partenaire : la sous-unité régulatrice de la protéine phosphatase 2A (PP2A), B56delta. La dépolarisation membranaire permet un décrochage de beta4 du canal et son association à B56delta. beta4 migre donc vers le noyau sous forme de complexe avec B56delta/PP2A. Une étude transcriptomique réalisée pour comparer le profil d'expression dans le cervelet de souris lh par rapport aux souris wild-type a montré l'implication de beta4 dans la répression et l'activation d'un certain nombre de gènes. Particulièrement beta4 réprime fortement l'expression du gène qui code pour la tyrosine hydroxylase (TH). Dans le noyau, beta4 interagit avec un facteur de transcription, le récepteur aux hormones thyroïdiennes alpha(TRalpha). Cette association permet au complexe beta4/B56delta/PP2A de cibler la région promotrice du gène TH comme cela a été montré par des expériences d'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP). Le complexe beta4/B56delta/PP2A est capable de s'associer aux histones et de déphosphoryler spécifiquement les histones H3 en Ser10 au niveau de la région promotrice du gène TH. Cette modification de la chromatine est corrélée avec le recrutement de Heterochromatin Protein 1 gamma (HP1gamma au niveau du promoteur du gène TH. HP1gamma est impliquée dans la formation d'hétérochromatine et pourrait expliquer la répression de l'expression du gène TH. Ainsi dans le cervelet de souris lh, l'absence de beta4 déclenche un dérèglement de cette voie de signalisation qui entraîne la sur-expression du géne TH. La mutation humaine R482X à l'origine de la délétion d'une partie du domaine C-terminal de beta4 et responsable d'une forme d'épilepsie juvénile myoclonique, perturbe la localisation nucléaire de beta4. En effet, le mutant beta1-481 incapable de s'associer à B56delta/PP2A et de migrer au noyau n'interagit pas avec les histones. La voie de signalisation permettant la régulation de l'expression génique par beta4 n'est donc plus assurée par le mutant. Ainsi, la fonction debeta4 ne se limite pas à son action cytoplasmique en tant que sous-unité auxiliaire des CCVD. En effet, ce travail montre combien dans le noyau,beta4, joue un rôle important dans la régulation de l'expression génique. / Voltage dependent calcium channels (VDCC) participate to various cellular processes such as neurotransmitters release, muscular contraction or gene expression regulation. VDCC are composed of a pore-forming subunit (alpha1 or Cav), that allows Ca2+ to enter the cells associated with auxiliary subunits, alpha2delta, beta and gamma. My thesis studies on a new signaling pathway in which the beta4 subunit of VDCC couples neuronal excitability to transcription. In particular it focuses on the understanding of the beta4 nuclear translocation determinants and the mechanisms of gene expression regulation by this VDCC subunit. beta4 translocation from the cytoplasm to the nucleus is observed during neuronal differentiation. This translocation depends on beta4 structural integrity and more precisely on interaction between the beta4 SH3 (Src Homology 3) and GK (Guanylate Kinase) domains. beta4 nuclear translocation is conditioned by its association with a partner: the regulatory subunit of phosphatase protein 2A (PP2A), B56delta. Membrane depolarization induces beta4 channel uncoupling and association with B56delta. Thus, beta4 migrates to the nucleus in complex with B56delta/PP2A. A study on gene expression generated by microarray was carried on to compare profiles of gene expression in lethargic (lh) mice, considered as spontaneous beta4 KO with wild-type (WT) mice cerebellum. This study proved the influence ofbeta4 on the repression and the activation of certain genes. Particularly, beta4 strongly represses tyrosine hydroxylase (TH) gene expression. In the nucleus, beta4 interacts with a transcription factor: the thyroid hormone receptor alpha (TR alpha). This association allows beta4/B56delta/PP2A complex to target the TH gene promoter as shown by chromatin immunoprecipitation (ChIP) experiments. This complex is also able to associate itself with histones and dephosphorylate Ser10 histone H3 in the TH gene promoter. This chromatin modification is correlated with HP1 gamma (Heterochromatin Protein 1 gamma) recruitment in the TH gene promoter. HP1 gamma is known to promote heterochromatin formation that could explain the TH gene repression by beta4. Thus, in lh mice cerebellum, the absence of beta4 triggers a complete disorganization of this signaling pathway that results in the up-regulation of the TH gene. R482X, the human mutation inducing the C-terminus domain deletion of beta4 and responsible for a form of juvenile myoclonic epilepsy prevents beta4 nuclear localization. In fact, the mutant beta1-481 unable to associate with B56delta/PP2A and to migrate to the nucleus does not interact with HP1gamma and histones. The signaling pathway allowing gene regulation by beta4 is prevented by the mutant. Thus, beta4 does not play a confined role in the cytoplasm as CCVD auxiliary subunit but also functions in the nucleus as a gene expression regulator.
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Transfert de gène in vivo:<br />étude, régulation et application de l'électrotransfertTrollet, Capucine 26 September 2005 (has links) (PDF)
L'électrotransfert est une technique de transfert de gène in vivo, permettant une expression<br />élevée du transgène dans un grand nombre de tissus. Dans ce contexte, nous avons utilisé l'imagerie<br />optique pour optimiser différents protocoles d'électrotransfert dans le muscle et la peau.<br />Nous avons développé un système de régulation de l'expression des gènes combinant le système<br />de régulation répressible à la tétracycline Tet-Off et une stratégie antisens. Nous avons examiné<br />le potentiel de l'électrotransfert d'ADN plasmidique pour l'obtention d'anticorps neutralisants à<br />haut titre contre les toxines botuliques A, B et E. Les animaux immunisés avec des plasmides<br />codant les fragments immunogènes des toxines expriment de façon endogène ces fragments de<br />toxines, qui servent d'antigènes et déclenchent une réponse immune. Nous avons finalement étudié<br />l'état de méthylation de l'ADN plasmidique après injection et électrotransfert dans le muscle<br />squelettique et sa possible intégration dans le génome.
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