A retina é composta por células neuronais especializadas, que quando danificadas são incapazes de se regenerar. CTIPD são uma promissória fonte para substituir o tecido lesado pois são capazes de se diferenciar em quase todos os tipos celulares. O objetivo do estudo é avaliar o potencial de diferenciação das CTIPD em neurônios retinais. As CTIPD foram submetidas a formação de neuroesfera, a qual foi avaliada pela expressão de nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin e Pax-6. A partir da neuroesfera foi realizada a indução da diferenciação em neurônios retinais, a qual foi avaliada pela expressão dos marcadores específicos da diferenciação retinal. Observou-se a reação positiva com nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin e Pax-6 na esfera, sugerindo um comprometimento com a linhagem neural/retinal. Nas células diferenciadas observamos uma maior expressão de Chx-10 e Crx e menor de Nrl, Calbindin, Recoverin e Rhodopsin. Este estudo sugere que CTIPD apresentam potencial de desenvolvimento em neurônios retinais. Entretanto, estudos adicionais são necessários para elucidar a formação da retina neural. / Retina is composed of specialized neuronal cells, which in case of damage are unable to regenerate. CTIPD is a promissory source to replace the injured tissue because they can differentiate into almost all cell types. The aim of the study was to evaluate the differentiation potential of CTIPD in retinal neurons. CTIPD were submitted to neurosphere formation and evaluated by the expression of nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin and Pax-6. From the neurosphere was performed the induction of differentiation into retinal neurons, which was assessed by the expression of specific markers of retinal differentiation. We observed a positive reaction with nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin and Pax-6 in the sphere, suggesting a commitment to the neural/retinal lineage. In differentiated cells we found a higher expression of Chx-10 and Crx and a lower expression of Nrl, Calbindin, Recoverin and Rhodopsin. This study suggests that CTIPD show potential development into retinal neurons. However, additional studies are needed to elucidate the formation of the neural retina.

A evolução da vida na terra foi possível graças ao desenvolvimento de mecanismos temporais precisos capazes de ajustar processos fisiológicos que ocorriam no interior do organismo com os ciclos ambientais, promovendo assim, ganhos na capacidade adaptativa e comportamental desses indivíduos. A retina exerce função de suma importância nesse processo através da percepção da informação fótica que possibilita o ajuste dos ritmos circadianos. Nesse tecido, o glutamato apresenta um importante papel tanto na transmissão da informação fótica direcionada ao processo de formação de imagem quanto nos ajustes dos relógios biológicos. O objetivo desse trabalho foi avaliar como o glutamato, aplicado por períodos diferentes (6 e 12h), é capaz de modular a expressão dos genes de relógio na retina de Gallus gallus. Através de diferentes protocolos que envolveram a administração de glutamato na concentração de 100&mu;M por 6 e 12 horas e em diferentes repetições (1 e 3 pulsos) avaliou-se através de PCR quantitativo a expressão dos genes Clock, Per2 e Bmal1. Os diferentes genes de relógio na retina de Gallus gallus apresentam diferentes respostas frente às trocas de meio e frente ao tratamento com o glutamato. O gene Clock responde com ativação da transcrição para ambos os tratamentos, de forma dependente da repetição dos estímulos. Já para o gene Per2 o tratamento com glutamato impõe uma oscilação de expressão com um ritmo ultradiano, enquanto que as trocas de meio não determinam alterações na transcrição. A expressão do gene Bmal1 não é afetada nem por trocas de meio, nem por glutamato. Novos estudos devem ser fomentados no sentido de se elucidar as vias pelas quais o glutamato leva ao perfil de oscilação observado e qual o mecanismo pelo qual a repetição de trocas de meio atua como sinalizador para o estabelecimento da sincronização celular / The evolution of life on earth was possible thanks to the development of precise temporal mechanisms to adjust physiological processes to environmental cycles, thus promoting gains in the individual adaptive and behavioral ability. The retina plays a very important role of paramount importance in this process through the perception of photic information that allows the adjustment of circadian rhythms. In this tissue, glutamate functions in the transmission of photic information directed to both image formation and biological clock entrainment. The aim of this study was to evaluate how glutamate, applied for different periods (6 and 12h), is able to modulate the expression of the clock genes in the retina of Gallus gallus. Using different protocols involving the administration of 100&mu;M glutamate for 6 and 12 hours and with different repetitions (1 and 3 pulses) the expression of Clock, Per2 and Bmal1 genes was evaluated by quantitative PCR. Clock gene responds with activation of transcription to both treatments depending on the repetition of the stimulus. As for Per2 gene, glutamate treatment imposes an oscillation with an ultradian expression rhythm, whereas medium changes do not affect its transcription. The expression of Bmal1 gene is not affected by either medium changes or glutamate. Further studies should be encouraged in order to elucidate the pathways by which glutamate leads to observed oscillation profile, and which mechanism triggered by the repetition of medium changes acts as signal to establish cell synchronization

A neuroproteção é um dos tópicos mais relevantes aplicados à neurociência. As junções comunicantes (JC), formadas pelas conexinas (Cx) estão envolvidas na neurodegeneração após lesão. Estudos com animais KO apresentam resultados contraditórios sobre papel das JCs. O objetivo deste trabalho foi analisar o papel das Cxs a partir do trauma mecânico na retina, modelo que permite a visualização do foco, penumbra, e áreas adjacentes à lesão. Observamos regulação distinta das Cx36 e Cx43 durante a neurodegeneração. A Cx36 não se alterou e a Cx43 apresentou desorganização e aumento da imunorreatividade após 7 dias, concomitantemente com GFAP. Células amácrinas apoptóticas encontram-se acopladas a células vizinhas por Cx36. O papel funcional das JCs foi avaliado, utilizando bloqueadores, para verificar a viabilidade/morte de células. Carbenoxolone (CBX), reduziu o espalhamento da apoptose, após 4h, enquanto a quinina, teve o mesmo efeito após 1h. A distribuição de núcleos apoptóticos confirmou que a utilização de bloqueadores de JCs reduz a propagação da apoptose. A quinina, mas não o CBX, diminuiu a expressão de caspases iniciais e efetoras. O controle da permeabilidade de canais de JCs pode participar de estratégias de neuroproteção. / The neuroprotection stands out as one of the most pursued hot topics in applied neurosciences. The gap junctions (GJ), formed by connexin (Cx) are involved in neurodegeneration injury. Studies using KO animal models endowed apparently contradictory results in relation to the role of coupling in neuroprotection. The aim of this study was to analyze the role of Cx-mediated communication in focal lesion induced by mechanical trauma in the retina, a model that alow the visualization of the focus, penumbra and adjacent areas. We observed distinct regulation of Cx36 and Cx43 during neurodegeneration. The Cx36 did not change during the lesion progression and Cx43 showed disorganized pattern and upregulated after 7 days, the same as GFAP. Apoptotic amacrine cells are coupled with health neighborhood cells by Cx36. The functional role of GJ was evaluated using blockers to verify the viability/cell death. Carbenoxolone (CBX) reduced the spread of apoptosis after 4h while quinine had the same effect after 1h. The distribution of apoptotic nuclei confirmed that the use of GJ blockers reduced the propagation of apoptosis. Quinine, but not CBX, decreases initial and effector caspases expression. The control of GJ channels permeability can participate in neuroprotection strategies.

A sinalização no sistema nervoso pode ocorrer pelo acoplamento direto entre células, via canais de junção comunicantes (JCs). Estes canais permitem a passagem de moléculas de até 1 kDa, e são formados por subunidades proteicas denominadas conexinas (Cxs). A comunicação celular via JCs desempenha um importante papel durante o desenvolvimento e a sinalização visual. Além disso, o acoplamento celular provido pelas JCs tem sido relacionado a processos de sobrevivência/morte celular. Do mesmo modo, ciclinas e cinases dependentes de ciclinas (CDKs), além de seu papel clássico na regulação do ciclo e diferenciação celular, estão envolvidas em processos neurodegenerativos. Estudos recentes têm observado a reentrada no ciclo celular de células neuronais pós-mitóticas em apoptose. Neste contexto, analisamos a expressão gênica e proteica das Cxs e ciclinas em resposta às lesões no sistema visual, especificamente na retina. Estas análises foram realizadas após a indução de trauma mecânico, modelo experimental que permite a visualização do foco, penumbra e áreas adjacentes à lesão. Utilizando técnicas combinadas, como a reação em cadeia da polimerase em tempo real (PCR Real-Time), Western Blot e imuno-histoquímica, avaliamos a expressão espaço-temporal destes genes e as proteínas por eles codificadas, em diferentes tempos pós-lesão. Os resultados da PCR Real-Time revelaram uma ausência de modulação da expressão gênica de Cx36 para os diferentes tempos pós-lesão analisados. A Cx43 mostrou aumento dos transcritos, após três e sete dias pós-lesão. A ciclina D1 e B1 apresentaram modulação significativa após um, três e sete dias pós-lesão. As análises de imuno-histoquímica revelaram uma redistribuição da Cx36 em resposta à lesão em diferentes tempos pós-lesão. A Cx43, por sua vez, apresentou um aumento aparente de sua expressão no foco e zona de penumbra da lesão, nos período de um, três e sete dias pós-lesão. Em retinas, após um e três dias de lesão, a ciclina D1 encontrou-se presente em células próximas ao foco da lesão. Observamos a presença de ciclina B1 no foco da lesão após um dia de lesão. Por meio de análises de Western Blot não foi possível detectar alterações das diferentes proteínas estudadas nas retinas, em períodos variados de exposição à lesão. Os dados deste estudo sugerem que i) possivelmente, as células afetadas pela lesão se encontram acopladas; ii) expressam proteínas reguladoras do ciclo celular. Levando em consideração o conjunto de resultados, sugerimos que é possível induzir ou prevenir a reentrada do ciclo celular em células pós-mitóticas da retina, controlando o acoplamento mediado pelas proteínas formadoras das JC. / Communication in the nervous system can occur directly between the cells through structures known as gap junction (GJ) channels. These channels allow the passage of small molecules up to 1 kDa and are composed of protein subunits named connexins (Cxs). Cell communication through GJ plays an important role during the development and visual signaling. Furthermore, cell coupling provided by the GJs has been related to processes of survival/cell death. Similarly, in addition to the classic role of cyclins and cyclins dependent kinases (CDKs) in the cell cycle regulation and differentiation, they are also involved in neurodegenerative processes. Recent studies have demonstrated the reentry of apoptotic post mitotic neurons in the cell cycle. In this context, we analyzed the gene and protein expression of Cxs and cyclins after lesions in the visual system, specifically in the retina. For this purpose, a mechanic trauma was induced in the retina, which represents a model that allows us to visualize the lesion focus, penumbra and adjacent areas. Using combined techniques, such as the real time polymerase chain reaction (real-time PCR), Western blot and immunohistochemistry, we evaluated the spatio-temporal expression of these genes and their encoded proteins at different times post-lesion. The real-time PCR revealed no modulation of the Cx36 gene expression for all the times post-lesion analyzed. Our results showed increase in the Cx43 transcripts one, three and seven days post-lesion. The immunohistochemistry analysis indicated redistribution of Cx36 in response to the lesion in different times. On the other hand, Cx43 presented evident increased expression in the focus and penumbra areas of the lesion one, three and seven days post-lesion. In our experiments we could observe that cyclin D1 is expressed in cells located close to the lesion focus one and three days post-lesion, while cyclin B1 is expressed in these cells only one day post-lesion. The Western blot analysis did not show changes on the protein levels evaluated in this study in any of the post-lesion times analyzed. Data obtained from this study suggest i) the cells affected by the lesion are possibly coupled by GJ; ii) these cells express protein regulators of cell cycle. Altogether, the results indicate that it is possible to induce or prevent the reentry of post mitotic cells of the retina in the cell cycle, by controlling cell coupling provided by GJ.

Nas últimas décadas uma série de experimentos realizados em vertebrados tem demonstrado a capacidade que alguns destes possuem de discriminar a luz ultravioleta, ao contrário do acreditado anteriormente. O peixe dourado (Carassius auratus), um bom modelo experimental para pesquisas sobre visão, apresentou em experimentos comportamentais altos níveis de discriminação de cor nas regiões espectrais do azul e do violeta, o que só seria possível com a existência de um receptor adicional para o ultravioleta (Neumeyer, 1985; Hawryshyn & Beauchamp, 1985; Neumeyer & Arnold, 1989; Neumeyer, 1992; Fratzer, Dörr & Neumeyer, 1994). Estes resultados foram confirmados pela determinação microespectrofotométrica (Bowmaker, Thorpe & Douglas, 1991) e eletrofisiológica (Palacios et al., 1998) da existência de cones com pigmentos específicos para luz ultravioleta, sem haver entretanto um estudo da codificação dessa entrada em neurônios de segunda ordem até o momento. Além disso, permanece ainda em discussão na literatura o papel das células horizontais retinianas no processamento cromático. O presente projeto teve por objetivo investigar qual a contribuição da entrada do receptor UV para os perfis de resposta eletrofisiológica das células horizontais e quais tipos celulares da retina externa do Carassius auratus são subjacentes à discriminação observada comportamentalmente. Para tanto, registros intracelulares de células horizontais e bipolares foram obtidos sob estimulaçãomonocromática de diferentes intensidades, ) diâmetros e comprimentos de onda, com o intuito de determinar suas respostas espectrais, bem como o campo receptivo e as possíveis interações entre estas e os cones. As células horizontais mono-, bi- e trifásica apenas hiperpolarizam na região do UV, não havendo oponência cromática entre as regiões do UV e do azul em nenhum destes tipos celulares; tampouco encontramos uma célula horizontal tetrafásica. Através de adaptações cromáticas, observamos serem as respostas eletrofisiológicas à luz das células horizontais mono- e bifásicas resultado de interações entre os sistemas de cones vermelho,verde e azul, não tendo sido identificada nenhuma entrada UV significativa nessas células. Por fim, encontramos uma célula bipolar oponente entre as regiões espectrais do UV e do azul, o que constitui uma base neural compatível com a discriminação comportamentalmente observada. Uma vez que canais oponentes são necessários para a discriminação de cor, e essa oponência não foi encontrada nas células horizontais, mais sim nas bipolares, acreditamos ser esse um indício de que as células horizontais não participam diretamente da codificação da informação UV na retina do Carassius auratus. Essa idéia está de acordo com dados recentes da literatura, que atribuem às células horizontais papel relacionado aos mecanismos de constância e contraste simultâneo de cor, deixando para as células bipolares a função de codificar cores para os neurôniossubseqüentes (Kamermans, Kraaij & Spekreijse, 1998) / In the last decades a number of experiments in vertebrates has demonstrated the ability of some of these animals to discriminate ultraviolet light. Among them, the goldfish (Carassius auratus), considered a good model in vision research, presented in behavioural experiments high discrimination rates in the violet and blue spectral regions, which could only be accomplished through an additional UV receptor (Neumeyer, 1985; Hawryshyn & Beauchamp, 1985; Neumeyer & Arnold, 1989; Neumeyer, 1992; Fratzer, Dörr & Neumeyer, 1994). These results were confirmed by microspectrophotometrical (Bowmaker, Thorpe & Douglas, 1991) and electrophysiological (Palacios et al., 1998) determinations of the existence of cones with specific photopigments with a maximum in the UV region of the light spectrum. However, to date there are no data concerning the spectral coding of this input in second order neurons. Furthermore, the role of the retinal horizontal cells in chromatic processing remains under debate. The present study aimed at investigating the contribution of the UV input to the electrophysiological response profiles of the cone-driven horizontal cells, as well as determining which neurons in the outer retina of the goldfish could subserve vision in the UV range, as observed behaviourally. For that purpose, intracellular recordings of horizontal and bipolar cells under monochromatic stimuli of different intensities, diameters and wavelengths were obtained in order to determinetheir action spectra, receptive field sizes and characteristics as well as the possible interactions between them and the different cone systems. Mono-, bi- and triphasic horizontal cells always hyperpolarised in the UV spectral range: there was no chromatic opponency between the UV and the blue zones in any of these cell types. We have also failed to find a tetraphasic horizontal cell. We observed through chromatic adaptation experiments that the electrophysiological responses recorded from mono- and biphasic horizontal cells are the result of interactions between the red, green and blue cone systems. No relevant UV input to these cells could be found. Finally, we found a bipolar cell type with spectral opponency between the UV and blue regions, which could be the neural basis of the discrimination observed behaviourally. Colour-opponent channels are thought to be necessary for colour discrimination, and the absence of a horizontal cell type with opponency between the UV and blue spectral regions provides further evidence that this cell type might not play a major role in the chromatic processing in the goldfish retina. Since this opponency pattern was found in a bipolar cell, we think that this cell type, and not the horizontal cells, might underlie the coding of the UV information in this animal. This idea is in good agreement with some recent literature data that ascribe the horizontal cells a role in colour constancy and simultaneous colour contrast phenomena,leaving the function of colour codification to the bipolar cells (Kamermans, Kraaij & Spekreijse, 1998)

Em exposições especificamente relacionadas ao metilmercúrio (MeHg), o principal órgão alvo é o Sistema Nervoso Central (SNC). Os efeitos morfológicos do metilmercúrio nos fotorreceptores da retina de Hoplias malabaricus, traíra, foram investigados através de técnicas histopatológicas. Os exemplares de traíra foram distribuídos em três grupos: um grupo controle e dois grupos expostos ao MeHg. A contaminação trófica e subcrônica foi realizada através de exemplares vivos de Astyanax sp os quais receberam intraperitonealmente um volume de solução aquosa de MeHg correspondente a (0,075µg/g de traíra) ou (0,75µg/g de traíra). Quinze peixes por condição experimental foram sacrificados após 70 dias de exposição e os olhos foram coletados para as análises de microscopia de luz, microscopia eletrônica de transmissão e microscopia eletrônica de varredura. Através de análises químicas quantificamos o mercúrio em músculo e observamos em ambas as doses um acúmulo do metal. Para a maior dose do metal (0,75µg/g), as análises histopatológicas revelaram alterações nas membranas que unem os dois elementos de um cone pareado, degeneração da camada dos fotorreceptores e alterações morfológicas no segmento interno e segmento externo dos bastonetes. As análises também demonstraram alterações estruturais na membrana plasmática do segmento externo e alterações no processo de eliminação dos discos membranosos dos fotorreceptores. No momento da eliminação dos discos antigos foi observada a formação de vacúolos e também uma anormal eliminação dos discos membranosos pelas partes laterais do segmento externo. Para a menor dose do metal (0,075µg/g) além da alteração observada nas membranas que unem os cones pareados e da degeneração celular na camada dos fotorreceptores, observamos uma descontinuidade estrutural dos discos membranosos do segmento externo dos fotorreceptores. Todas estas alterações histopatológicas nos levam a concluir que o metilmercúrio induz alterações histopatológicas nas células da camada dos fotorreceptores podendo consequentemente trazer danos fisiológicos para toda a retina. / In exposures specifically related to methylmercury (MeHg), the main target organ is the Central Nervous System (CNS). In this study, morphological effects of methylmercury in retinal photoreceptors of Hoplias malabaricus, trahira, through histopathological techniques were investigated. Some mature fish were divided in three groups - one control group and the other two which were exposed to MeHg. The trophic and subchronic contamination was performed by live specimen of Astyanax sp which received a volume of aqueous solution of MeHg corresponding to (0,075µg /g trahira) or (0,75µg /g trahira). In an experimental condition, fifteen fish were sacrificed after 70 days of exposure and their eyes were collected for analysis of light microscopy, electron transmission microscopy and scanning electron microscopy. Through chemical analysis the amount of mercury found in muscle was quantified. In both doses an accumulation of the metal in the muscle of these animals was observed. For the highest dose of metal (0,75µg /g), the histopathological analysis revealed changes in the membrane that connects the two elements of a paired cone, cellular degeneration in the layer of photoreceptors and morphological changes in the internal and outer rod segments. The analysis also showed structural changes in the plasma membrane of the outer segment and changes in the process of removal of membranous discs in the apical region of a photoreceptor. At the time of disposal of old discs, the formation of vacuoles and also an abnormal membranous discs removal through the sides of the outer segment were observed. For the smallest dose of the metal (0,075µg/g) besides the morphological changes observed in the membrane which unites the paired cones and cellular degeneration throughout the layer of photoreceptors, a structural discontinuity of the membranous discs of the outer segment were observed in radial sections of rods. All these histopathological changes lead us to conclude that methylmercury induces morphological changes in cells of the layer of photoreceptors, and therefore causing physiological damage to the smooth functioning of the retina.

A retina é formada por camadas de células que a estrutura, os contatos sinápticos e as características fisiológicas são específicas para cada tipo de célula. O processamento da informação visual, após a ativação dos fotorreceptores pela luz, ocorre em mecanismos pós-receptorais que formam diferentes circuitos de processamento, entre eles as vias ON, OFF, de luminância e de oponência cromática. As doenças que afetam a retina podem estar relacionadas com alterações específicas de um determinado circuito, como acontece com a distrofia muscular de Duchenne (DMD) que na alteração do gene dmd da retina afeta a comunicação entre os fotorreceptores e as células bipolares, e na diabetes Mellitus (DM) o dano celular ocorre principalmente na camada mais interna da retina. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da DMD e da diabetes Mellitus Tipo 1 (DM1) em diferentes mecanismos visuais. A amostra deste trabalho contou com três grupos: controle com 18 participantes (13,5, ±7,6), DMD com 9 participantes (16, ±5,9) e DM1 com 12 partcipantes (13,8, ±2,5). Os testes eletrorretinográficos foram aplicados nas condições mesópica, fotópica com estímulos que enfatizam respostas ON ou OFF, e flicker heterocromático (verde-vermelho) em 12Hz (para enfatizar a atividade da via de oponência cromática) e 36Hz (para enfatizar a atividade da via de luminância), e testes psicofísicos com estímulos que enfatizam os mecanismos ON e OFF com contraste de luminância e a via de oponência cromática por um estímulo com contraste cromático (isoluminante) verde-vermelho. O grupo DMD apresentou alteração no tempo de resposta e redução na amplitude da onda-a e onda-b nas condições mesópicas ON e OFF, redução da amplitude da onda-b na condição fotópica ON e alteração da via cromática. Enquanto o grupo DM1 apresentou aumento na amplitude e tempo da ond-a e onda-b das via ON e OFF na condição mesópica, mudança na fase da resposta na via cromática e na via de luminância. Os resultados estão de acordo com diversos estudos anteriores que mostram que as duas doenças causam alterações funcionais na retina, mas cada doença com características específicas. O presente estudo demonstrou que as duas doenças afetam as vias visuais ON e OFF independente do prejuízo neural ocorrer principalmente nas camadas mais externas ou nas camadas mais internas da retina. A possibilidade de identificar prejuízos funcionais em pacientes sem alteração clínica é uma valiosa ferramenta para o acompanhamento de doenças e para avaliar a eficácia de tratamentos. O presente estudo poderá contribuir para o estabelecimento de novos protocolos mais sensíveis e capazes de identificar alterações assimétricas no caso da DMD ou alterações que precedem o diagnóstico clínico no caso da DM1 / The retina is formed by layers of cells that the structure, synaptic contact and physiology characters are specific for each type of this cells. The processing of visual information, after the photoreceptor activation by light is separate by post-receptor mechanisms that constitute the ON, OFF, luminance and chromatic pathways. The retina diseases have specific alteration in this tissue, thus it happens with the Duchenne muscular dystrophy (DMD), that have communication problems among photoreceptors and bipolar cells because of damage in dmd gene, and the Diabetes Mellitus (DM) that has cells damage mainly in the inner layer of retina. The purpose of this study was to evaluate the effects of DMD and Type 1 diabetes Mellitus (DM1) on different visual mechanisms. The sample had three grups: control with 18 subjects (13.5, ±7.6), DMD with 9 subjects (16, ±5.9) and DM1 with 12 subjects (13,8, ±2,5). The ERG recordings were applied in of the mesopic and photopic conditions with stimuli that laid emphasis on ON and OFF responses and heterochromatic (red-green) flicker modulation in 12Hz (laid emphasis on chromatic pathway) and 36Hz (laid emphasis on luminance pathway), and psychophysical tests laid emphasis on ON and OFF mechanisms with luminance contrast and the chromatic opponent pathway by stimulus with red-green chromatic contrast (isoluminance). As a result the DMD group presented alteration in the response time and reduction in the amplitude of the a- and b-wave in ON and OFF mesopic conditions, reduction of the amplitude of the a- and b-wave in ON photopic condition and alteration of the chromatic pathway. While the DM1 group showed an increase in the amplitude and time of the a- and b-wave in ON and OFF pathways of the mesopic condition, change in phase of the chromatic pathway and luminance pathway. These results were in agreement with previous studies that showed the two diseases present functional changes in the retina, but each disease with specific characteristics. The present study showed that two diseases affect the ON and OFF pathways regardless of the neural damage occur mainly in outer layer or inner layer of the retina. The possibility identify functional damage in patients without clinic injuries is the valuable tool for the following the dieses and evaluated treatment efficiency. The present study may contribute to establishment of the new sensitive and able protocols to identify asymmetric changes in DMD or changes that precede the clinical diagnosis in DM1

A expressão do receptor de potencial receptor transiente, vanilóide 1 (TRPV1) começa desde estágios pré-sinaptogênicos da retina. O bloqueio farmacológico desse receptor nesse período diminui a apoptose fisiológica, havendo possível envolvimento da sinalização de MAP quinases. Na retina do animal adulto, observamos que a expressão de TRPV1 é amplamente difundida, albergando neurônios, células endoteliais e células da microglia. A ativação dos receptores TRPV1 é potencialmente citotóxica, e os mecanismos que podem estar envolvidos incluem a liberação de glutamato, a excitotoxicidade e o estresse nitrosativo. Evidenciamos que a lesão prévia de células ganglionares sensibiliza o tecido retiniano à citotoxicidade mediada pela estimulação de TRPV1. Porém, o bloqueio de TRPV1, tanto in vivo quanto in vitro, não inibiu a morte de células ganglionares axotomizadas. Esses dados sugerem que o receptor TRPV1 participa da modulação de diversos processos fisiopatológicos na retina. / TRPV1 expression in the developing retina begins before retinal sinaptogenesis. TRPV1 blockade reduced the normal apoptosis in this period, and MAPK signaling seems to be involved in this process. In the adult retina, TRPV1 are expressed in neuronal, endothelial and microglial cells. The activation of those receptors is potentially cytotoxic, and glutamate release and further excitotoxicity and nitrosative stress might be also involved. Axotomized retinal ganglion cells were sensitized to TRPV1 citotoxicity, but TRPV1 antagonism, both in vitro and in vivo, did not reduce the loss of ganglion cell after axotomy. Our results suggest that TRPV1 receptors are involved in synaptic function and homeostatic control in the retina. Moreover, TRPV1 seems to be indirectly involved in cellular degeneration that follows the section of retinal ganglion cell axons.

Os processos que regem o desenvolvimento dos olhos compostos em insetos têm sido amplamente estudados em Drosophila melanogaster onde estes se originam a partir de discos imaginais. Pouco se sabe, porém, sobre o desenvolvimento do lóbulo óptico e da retina em outros insetos que, na sua grande maioria, não possuem discos imaginais de olhos separados do sistema nervoso central. Neste sentido, a análise comparada do desenvolvimento dos olhos de Apis mellifera pode contribuir não somente para aspectos evo-devo entre as grandes famílias dos insetos holometábolos, quanto pode elucidar questões de plasticidade de desenvolvimento pois os olhos compostos apresentam fortes características sexo e casta-específicas. Com o objetivo primário de elucidar os padrões de divisão e diferenciação celular durante o desenvolvimento do olho em A. mellifera realizamos análises histológicas e de imunomarcação durante o desenvolvimento pós-embrionário, juntamente com análise de expressão do gene roughest em tempo real. Para imunomarcação utilizamos o anticorpo anti-fosfo-histona H3 fosforilada que marca células em fase M do ciclo celular. Foram analisadas larvas operárias entre o terceiro instar larval (L3) até pupas de olho branco, rosa e marrom, com foco sobre o quinto instar larval que fica subdividida em fase de alimentação e crescimento (L5F), fases de tecelagem de casulo (L5S) e prepupa (PP). O desenvolvimento do lóbulo óptico em Apis mellifera ocorre por dobramento neuroepitelial, a partir de um centro de diferenciação, seqüencialmente gerando as camadas neurais do lóbulo óptico (lóbula, medula e lâmina). A lâmina (última a surgir) 6 apresentou-se com desenvolvimento mais lento e em duas fases antes da metamorfose: a primeira fase é o seu surgimento no começo do quinto instar larval acompanhando o primeiro pico de expressão de roughest e a segunda fase ocorre durante a tecelagem de casulo com o desenvolvimento do córtex acompanhando o segundo pico de expressão de roughest. Ainda durante o segundo pico de expressão de roughest os rabdômeros da retina começam a ficar visíveis, assim como os feixes axonais. Estes porém estarão completamente formados somente após a metamorfose.. O desenvolvimento completo da lâmina, lóbula e medula e da retina ocorre somente após a metamorfose. Durante a fase pupal as estruturas do lóbulo óptico estão prontas, porém na retina observa-se ainda gradual pigmentação, encurtamento dos feixes axonais e alongamento dos rabdômeros até atingirem o seu comprimento final logo antes da emergência. / The processes that drive compound eye development in insects have been broadly studied in Drosophila melanogaster in which they arise from imaginal discs. Little is known about optic lobe and retina development in other insects, most of which do not have imaginal eye discs attached to the nervous system. For this reason, a comparative analysis of eye development in the honey bee, Apis mellifera, not only contributes to evo-devo aspects comparing the major families of holometabolous insects, but also may elucidate questions about developmental plasticity because the compound eyes of the honeybee show strong sex and caste-specific differences. Since our primary objective was to elucidate the pattern of cellular differentiation and division during eye development we performed histological and immunolabelling analyses during the postembrionic stages of development, concomitant with a realtime analysis of roughest gene expression. For the immunolabelling experiments we used an anti-phospho-histone H3 antibody that labels cells in M phase. We analyzed eye development in worker larvae starting with the third instar until white, pink and browneyed pupae, paying special attention to the fifth instar which was subdivided into feeding phase (L5F), cocoon spinning phase (L5S) and prepupae (PP). Optic Lobe development in Apis mellifera occurs by neuroepithelial folding initiating from a differentiation center, in the larval brain. This center sequentially produces the neural layers of the optic lobe (medulla, lobula and lamina). Development of the lamina, which is the last layer to be formed, takes more time and happens in two steps before metamorphosis. The first step is emergence at the beginning of the fifth larval instar coinciding with the first peak of roughest gene expression. The second step 8 occurs during the cocoon spinning phase and is marked by its inner differentiation, again accompanied by a second peak of roughest expression. During this second peak of roughest expression the rabdomers in the retina become visible. These, however, cplete thir development only during the pupal stage. The development of the lamina, lobula and medulla is not complete until after metamorphosis, even though these optic lobe structures are structurally defined already at the beginning of the pupal phase. Retinal development in this phase is marked by gradual pigmentation, axonal bundle shortening and rabdomer elongation, which reach their final size just prior to emergence of the bees from their brood cells.

O presente trabalho trata-se do desenvolvimento de uma cavidade Laser de estado sólido e geração de segundo harmônico, para fins oftalmológicos. A cavidade faz parte de um projeto maior que se refere a um fotocoagulador portátil, utilizado em diversos protocolos clínicos relacionados às doenças da retina e câmara anterior, como retinopatia diabética, retinopatia da prematuridade, glaucoma, edema macular e descolamento de retina. A cavidade proposta é composta por três espelhos dispostos em uma arquitetura em V. Um laser de diodo bombeia um cristal de Nd:YAG para a geração de laser em 1064nm que passa por um cristal de KTP para a geração de segundo harmônico em 532nm (laser verde). O sistema de acoplamento indexado à cavidade acopla até 90% da potência de saída em uma fibra óptica com núcleo de 100\'mü\'m. A cavidade projetada e implementada, produz um feixe com comprimento de onda de 532nm (laser verde), largura de banda de 0,5nm, potência máxima em torno de 2,5W na saída da fibra óptica e pulsos com duração máxima de 3s, que são requisitos para os tratamentos oftalmológicos associados a este tipo de equipamento. É importante destacar que a cavidade foi projetada e desenvolvida inteiramente com tecnologia nacional, sendo o primeiro trabalho desenvolvido no Brasil, que se tornou efetivamente um equipamento final para uso clínico. Além do projeto da cavidade laser, são descritos neste trabalho os sistemas mecânico e eletrônico, que possibilitaram seu funcionamento na integração do fotocoagulador. O fotocoagulador foi testado em pacientes voluntários da Escola Paulista de Medicina da UNIFESP, apresentando resultados comparáveis aos sistemas importados. / This work presents the research and the development of a solid state laser cavity with second harmonic generation for ophthalmological purpose. The laser cavity is part of a major project intended to produce a handle photocoagulator. This medical equipment is applied in several clinical protocols related to retinal and anterior chamber pathologies, such as diabetic retinopathy, retinopathy of prematurity, glaucoma, macular edema and retinal detachment. The present cavity is composed by three mirrors disposed in a V shape architecture. One laser diode pumps the Nd:YAG crystal to generate the 1064nm laser that is converted by second harmonic generation in 532nm through the KTP crystal (green laser). The coupling system attached in the cavity is able to collimate until 90% of the laser beam inside a optical fiber with 100 \'mü\'m core. The developed cavity produces a beam with wavelength of 532nm, spectral width of 0.5nm, maximum power around 2.5W in the end of the optical fiber and maximum pulse duration of 3s. Those parameters are requirements for ophthalmological treatments related to this kind of equipment. It is important to declare that the cavity was projected and developed in Brazil. This is the first work in this country that becomes effectively a device to clinical application. Besides the cavity design project, in this work also describes the mechanical and electronic sub systems that was responsible to the laser control and photocoagulator assembler. This product was tested in patients eyes from UNIFESP (Escola Paulista de Medicina), and showed similar results compared to the systems on the market.