Objetivos: Padronizar uma técnica molecular, Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para detectar os genes blaSPM-1 , blaVIM-2 e blaIMP-1 que conferem a Pseudomonas aeruginosa resistência a carbapenêmicos (imipenem e meropenem) através da produção das metalo-β-lactamases (MBL) SPM-1, VIM-2 e IMP-1. Comparar os resultados obtidos com a técnica de PCR com os obtidos através de uma técnica fenotípica para detecção desse mecanismo enzimático de resistência. Descrever a prevalência dos genes de MBL. Metodologia: Utilizando 48 amostras clínicas de P. aeruginosa resistentes a ceftazidima e/ou imipenem sendo 37 caracterizadas como produtoras de MBL através de uma técnica fenotípica (aproximação de disco) e 11 como não produtoras pela mesma técnica. Esses isolados foram testados com três primers específicos para os seguintes genes: blaSPM-1 , blaVIM-2 e blaIMP-1 Resultados e Discussão: Dos 37 isolados produtores de metalo-β-lactamase, 29 tiveram resultado positivo na PCR sendo 27 positivos para o gene blaSPM-1 e 2 positivos para o gene blaIMP-1 . Em nenhum isolado foi detectado o gene blaVIM-2 .Oito isolados caracterizados como produtores de MBL não tiveram nenhum produto amplificado com os três pares de primers. Os 11 isolados caracterizados como não produtores de MBL não tiveram produto amplificado. Assim, a sensibilidade da técnica molecular foi de 78,40% e a especificidade 100,0% considerando a técnica fenotípica de aproximação de disco como padrão ouro Conclusões: Foi possível a padronização da técnica de PCR para a detecção dos genes blaSPM-1 , blaVIM-2 e blaIMP-1 bem como foi possível a comparação entre a técnica de PCR e a técnica fenotípica, sendo que a metodologia molecular apresentou 100% de especificidade e 78,40% de sensibilidade. O gene de MBL mais prevalente foi blaSPM-1 encontrado em 27/29 amostras de P. aeruginosa resistentes ao imipenem. O gene blaIMP-1 foi detectado em apenas 2/29 amostras de P. aeruginosa resistentes ao imipenem. O gene blaVIM-2 e não foi detectado nas amostras de P.aeruginosa analisadas neste estudo.

Orientador: Ida Maria Foschiani Dias Baptista / Banca: Cleverson Teixeira Soares / Banca: Fernanda Saloum de Neves Manta / Resumo: O acesso às informações sobre a hanseníase, seu diagnóstico e tratamento com a Poliquimioterapia (PQT) se constituem como elementos chave da estratégia para seu controle. Resultado da infecção pelo Mycobacterium leprae (M. leprae), a hanseníase é uma doença crônica que acomete pele e nervos e a impossibilidade de cultivo do M. leprae em meio de cultura axênico, tem dificultado os estudos in vitro e o desenvolvimento de ensaios clínicos mostram-se complicados pela lenta progressão do bacilo. Assim, um método sensível e específico para a detecção da viabilidade do M. leprae adicionaria um critério imparcial aos meios já disponíveis, possibilitando ainda o diagnóstico em estágio mais precoce da doença. O presente estudo teve por finalidade a avaliação da viabilidade bacilar por meio da detecção de RNAr 16S específico para o M. leprae com a normalização das quantidades totais de micobactérias a partir da quantificação do DNA total de M. leprae. Foi utilizada como padrão a inoculação em coxim plantar de camundongos (Técnica de Shepard). Foram avaliados pacientes antes do tratamento, suspeitos de recidivas e pacientes em fim de tratamento. A inoculação foi altamente positiva nos pacientes não tratados quando comparados com os dos grupos recidiva e fim de tratamento. Os resultados sugerem que existe uma boa correlação entre os dados obtidos com a inoculação e o ensaio molecular, uma vez que também foi possível detectar níveis de RLEP e 16S rRNA nestas amostras. Esta metodologia poderá, futuramente, ajudar no monitoramento da eficácia do tratamento e na busca de novas possibilidades para o estudo da interação parasito-hospedeiro / Abstract: Access to information about the disease, its diagnosis and treatment with multidrug therapy (MDT) are constituted as key elements of the strategy for its control. Result of infection by Mycobacterium leprae (M. leprae), leprosy is a chronic disease that affects the skin and nerves and the impossibility of cultivating M. leprae in axenic culture medium, has hampered in vitro studies and the development of clinical trials show is complicated by the slow progression of the bacillus. Thus, a sensitive and specific method for detection of viable M. leprae add a fair criterion to the means already available, allowing diagnosis even in early stage disease. This study aimed at evaluating the bacterial viability by specific 16S rRNA detection for M. leprae with the normalization of the total quantities of mycobacteria from the quantification of total DNA of M. leprae. It was used as a standard inoculation into the footpads of mice (Shepard Technique). Patients were evaluated prior to treatment and relapses in patients suspected to treatment. The inoculation was highly positive in untreated patients compared to the relapse groups and end of treatment. The results suggest that there is a good correlation between the data obtained from inoculation and molecular assay, since it was also possible to detect levels of 16S rRNA and RLEP these samples. This methodology may in the future help monitor the effectiveness of treatment and the search for new possibilities for the study of host-parasite interaction / Mestre

Orientador: Silvio Aparecido Lopes / Banca: Nelson Arno Wulff / Banca: Rita de Cássia Panizzi / Resumo: Huanglongbing (HLB) ou greening é uma doença que, no Brasil, está associada às bactérias Candidatus Liberibacter asiaticus e a Ca. L. americanus, ambas transmitidas pelo inseto Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). O HLB uma doença altamente destrutiva e de difícil controle, sendo atualmente Ca. L. asiaticus a mais frequentemente encontrada nos pomares. Nenhuma variedade explorada comercialmente é resistente ao patógeno ou ao inseto vetor. Visando suprir as necessidades dos produtores por porta-enxertos mais produtivos e que promovam redução no volume da copa, diversos híbridos têm sido testados para uso comercial nos últimos anos. Sobre esses novos híbridos nada se sabe sobre seu potencial em limitar o desenvolvimento da bactéria do HLB ou do inseto vetor, características que poderiam ser úteis no manejo da doença. Em vista disso, o objetivo do presente trabalho foi avaliar taxas de multiplicação de Ca. L. asiaticus e de D. citri em cinco novos híbridos indicados para uso como porta-enxertos. Para fins de comparação foram também incluídos no estudo os porta-enxertos comerciais limoeiro 'Cravo', o citrumeleiro 'Swingle', Poncirus trifoliata, a tangerineira 'Sunki', variedade de laranja doce 'Valência', e a planta ornamental murta (Murraya exotica). A multiplicação de D. citri foi determinada em brotos jovens sadios pela contagem diária do número de ovos, ninfas e adultos gerados do acasalamento de dois casais confinados por 72 horas ou até que ovos fossem visualizados. A multiplicação de Ca. L. asiaticus foi avaliada por meio de PCR quantitativo em raízes e na parte aérea das plantas seis meses após a inoculação do caule por enxertia de ramos doentes, Influência dos genótipos foi detectada tanto na multiplicação do inseto como na multiplicação da bactéria. Maior número de ovos foi encontrado no híbrido 81G513 e na laranjeira 'Valência', e menor número em... / Abstract: Huanglongbing (HLB), or greening, is a disease that in Brazil is associated to the Candidatus Liberibacter asiaticus and Ca. Liberibacter americanus, both transmitted by the insect Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). HLB is a disease highly destructive and of difficult control. Nowadays Ca. L. asiaticus ismost frequently found in citrus orchards. No commercial variety is resistant to the pathogen or insect vector. In order to satisfy grower necessity for more productive rootstocks and that promote smaller canopies to facilitate harvesting, several new hybrids have been tested for planting in the last years, For these hibrids no information exist on their potential in limiting the multiplication of the HLB bacteria or the vector, which could be used in disease management. In view of this, the objective of the present work was to evaluate multiplication rates of Ca. L. asiaticus and D. citri on five new hybrids suitable for use as rootstocks. For comparison purposes, the commercial rootstocks 'Cravo' Rangpur lime, 'Swingle' citrumelo, Poncirus trifoliata, and 'Sunki' mandarin, the sweet orange variety 'Valencia', and the ornamental orange jasmine Murraya exotica also were included in the study. D. citri multiplication was determined in healthy young shoots by daily counting of the number of eggs, nymphs and adults generated from two adult mating pairs, after confining them for 72 hours on the shoots or until eggs were observed. Ca. L. asiaticus multiplication was evaluated by quantitative PCR on the aerial part and roots of the plants, six months after stem graft inoculation. Influence of genotypes was observed on the multiplication of the insect as well as on the multiplication of the bacteria. The higher number of eggs was found on the hybrid 81G513 and on the orange 'Valencia', and the lower number of eggs on P. trifoliata. Nymph viability was higher on orange jasmine and P. trifoliata and lower on the ... / Mestre

Orientador: Helio Langoni / Banca: Italmar Teodorico Navarro / Banca: Vírginia Bodelão Richini / Banca: Simone Bandini Lucheis / Banca: Rodrigo Costa da Silva / Resumo: A toxoplasmose se destaca pela elevada importância médica, veterinária e zootécnica, e seu controle tornou-se um desafio para a saúde pública em todo o mundo, sinalizando a prioridade em buscar na vacinação uma estratégia para conter a infecção. Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a proteção conferida pela pré-imunização, com vacina constituída de taquizoítos irradiados a 255 Gy, com raios γ, em ratas Wistar, contra desafios orais por diferentes estágios infectantes do Toxoplasma gondii. Nos experimentos foi investigada a proteção vacinal contra formação de cistos cerebrais, cistos na musculatura esquelética, transmissão congênita e eliminação do agente pelo leite. A vacina foi administrada por via oral, com uso de adjuvante, em três doses com intervalos de 15 dias, antes do acasalamento das ratas. Constatada a gestação, realizou-se o desafio oral das ratas com bradizoítos, oocistos e taquizoítos de T. gondii. Foram utilizadas ratas Wistar em idade reprodutiva, que foram distribuídas em dois experimentos, composto por oito grupos cada. No experimento I cada grupo foi formado por seis ratas e, no experimento II, por cinco ratas. Os animais em cada experimento foram distribuídos da seguinte forma: Grupo 1: imunizado e desafiado com bradizoítos (ME-49) de T. gondii; Grupo 2: desafiado com bradizoítos (ME-49) de T. gondii; Grupo 3: imunizado e desafiado com oocistos (ME-49) de T. gondii; Grupo 4: desafiado com oocistos (ME-49) de T. gondii; Grupo 5: imunizado e desafiado com taquizoítos (RH) de T. gondii; Grupo 6: desafiado com taquizoítos (RH) de T. gondii; Grupo 7: apenas imunizado, Grupo 8: não imunizado e não desafiado. Semanalmente, desde a imunização, foram realizadas análises sorológicas e hematológicas. Após a parição (experimento I), as ratas e neonatos foram eutanasiados para determinação da carga parasitária no cérebro e na musculatura esquelética ... / Abstract: Toxoplasmosis has high medical and veterinary importance, their control has become a challenge to public health worldwide, signaling the priority in seeking vaccination strategy to contain the infection.The objective of the present study was to evaluate the efficacy of Toxoplasma gondii (T. gondii) tachyzoites irradiated vaccine, administered in experimentally inoculated Wistar female rats by oral challenges against different infectious stage of Toxoplasma gondii for blocking the production of T. gondii cysts in brain and muscle tissues, congenital transmission and also the elimination of the parasite in milk. Vaccine was administered orally, plus aluminium hidroxy as adjuvant, with three doses of 15 days interval. One week after pregnancy confirmation, challenge was done by gavage with T. gondii cysts, oocysts and tachizoites. Wistar rats in reproductive stage were distributed in two studies, composed by eight groups of six animals each (experiment I) an five animals each (experiment II), as follows: Group 1: immunized and challenge with bradizoites of ME-49 T. gondii strain; Group 2: non- immunized and challenged bradizoites of ME-49 T. gondii strain; Group 3: immunized and challenged with oocysts of ME-49 T. gondii strain; Group 4: non- immunized and challenged with oocysts of ME-49 T. gondii strain; Group 5: immunized and challenged with tachizoites of RH T. gondii strain; Group 6: non- immunized and challenged with tachizoites of RH T. gondii strain; Group 7: only immunized, Group 8: non- immunized and non-challenged. Weekly, after vaccination serological and hematological were performed. After parturition (Experiment I), the rats and newborns were euthanized, tissues and organs were collected for parasite load evaluation by Real Time PCR, intestinal tissue was collected for subsequent histological examinations, immunological involved in immune response against T. gondii. During lactation ... / Doutor

Orientador: Everlon Cid Rigobelo / Banca: Hélio José Montassier / Banca: José Carlos Rende / Resumo: O presente estudo foi realizado no período de janeiro de 2012 a janeiro de 2013 em fazendas leiteiras da região de Dracena, São Paulo. Durante o período, foram coletadas 800 amostras de fezes com suabes retais em vacas leiteiras. Essas amostras foram levadas para o Laboratório de Microbiologia do Campus Experimental de Dracena, onde foram isoladas e identificadas 561 amostras para Escherichia coli. Após o isolamento foram extraídos os DNAs de todas as amostras pelo método da fervura e por PCR o DNA foi amplificado para se detectar a presença dos genes de virulência de E. coli pertencentes ao grupo STEC, produtora de toxina tipo shiga em 446 amostras. De todas as cepas isoladas 90 eram portadoras do gene stx1, 97 do gene stx2, 45 do gene eae, 37 dos genes stx1 e stx2, 110 dos genes stx1 e eae e 67 dos genes stx2 e eae. Foram isoladas também 115 cepas que não eram portadoras de nenhum dos genes de virulência de STECs do estudo. Todos os isolados de E. coli portadores de cada gene de virulência foram avaliados quanto a resistência frente a 10 antimicrobianos. Os percentuais de resistências aos antimicrobianos foram maiores para a lincomicina, penicilina e novobiocina e menores para ampicilina, neomicina e tetraciclina. Foram identificados os sorogrupos, dos quais os mais frequentes entre os isolados portadores do gene de virulência stx1 foram o O119 e O114; do gene de virulência stx2 foram os sorogrupos O9 e O8; e do gene de virulência eae foram os sorogrupos O9, O8 e O127. Todos os isolados de E. coli apresentaram multirresistência e a maioria apresentou maior percentagem de multirresistência contra 2 a 3 e contra 10 antimicrobianos. Não foi verificado estatisticamente relação entre os padrões de virulência e os padrões de resistência aos antimicrobianos entre as amostras / Abstract: The present study was conducted between january 2012 to january 2013 on dairy farms of Dracena city region, São Paulo. During the period, 800 samples of faeces were collected with rectal suabs from dairy cattle cows. Those samples were taken to the laboratory of microbiology of Dracena Experimental Campus, where 561 samples were isolated and identified for Escherichia coli. After the DNA from the samples were extracted by the boiling method and with PCR the genetic material was amplified to detect the presence of virulence genes from STEC, shiga-like toxin producer E. coli, on 446 samples. Of those samples, 90 were carriers of the stx1 gene, 97 of the gene stx2, 45 of the gene eae, 37 of the genes stx1 and stx2, 110 of the genes stx1 and eae, 67 of the genes stx2 and eae. Also were isolated 115 samples that did not carry none of the virulence genes from STECs of the study. All the E. coli isolates of each virulence gene were evaluated for resistence to 10 antibiotics. The percentual of resistence were higher for lincomycin, penicillin and novobiocin and lower for ampicillin, neomycin and tetracycline. A serogroup test was made, of which the most frequent among isolates carrying the virulence gene stx1 were O119 and O114; of the gene stx2 were serogroups O8 and O9; and of the gene eae were the serogroups O9, O8 and O127. All the E. coli isolates presented multirresistence and most isolates presented more percentage of multirresistence against 2 to 3 and against 10 antibiotics. Was not verified statistically relationship between virulence patterns and patterns of antimicrobial resistance among the samples / Mestre

Orientador: Silvio Aparecido Lopes / Coorientador: Antonio de Goes / Banca: Luis Otávio Saggion Beriam / Banca: Viviani Vieira Marques / Resumo: Huanglongbing (HLB) ou greening é uma doença de difícil controle e altamente destrutiva que, no Brasil, está associada as bactérias Candidatus Liberibacter asiaticus e Ca. L. americanus, transmitidas pelo inseto Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae). Ca. L. asiaticus é atualmente a mais frequentemente encontrada no campo. Este trabalho objetivou o aprimoramento de metodologia que envolve o uso de folhas jovens destacadas de laranja doce (Citrus sinensis L.) para estudos sobre a transmissão de Ca. L. asiaticus por D. citri. Os experimentos envolveram diferentes números de insetos adultos (1, 4 ou 8 indivíduos), diferentes períodos de acesso à inoculação (PAI) da bactéria (1, 24, 48 ou 72 horas) e diferentes períodos de incubação (PI) da bactéria nas folhas (1, 7, e 15 dias) após o PAI e comparação com a inoculação em mudas. Insetos e folhas foram avaliados por qPCR para detecção e quantificação de Ca. L. asiaticus. Com PAI de 1 dia Ca. L. asiaticus foi detectada, no total dos 3 PIs, em 19, 29 e 36% das folhas expostas, respectivamente, a 1, 4 ou 8 insetos. Este aparente efeito de dose (aumento da taxa de inoculação bem sucedida com o aumento no número de indivíduos) foi ainda maior quanto maiores foram os PAIs e PIs. O método se mostrou útil para estudos da transmissão de Ca. L. asiaticus por D. citri com as seguintes vantagens em relação ao uso de plantas inteiras: menor tempo necessário para obtenção dos resultados, maior economia de material, drástica redução da área necessária para a condução dos experimentos / Abstract: Huanglongbing (HLB) or greening disease is difficult-to-control citrus disease that, in Brazil, is associated bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus and Ca. L. americanus, transmitted by insect Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae). Ca L. asiaticus is currently the most frequently encountered in the field. This study aimed to the upgrading of methodology that involves the use of detached young leaves of sweet orange (Citrus sinensis L.) for studies on the transmission of Ca. L. asiaticus by D. citri. The experiments involved different numbers of adult insects (1, 4 or 8 individuals), different inoculation access periods (IAP) of bacteria (1, 24, 48 or 72 hours) and different incubation periods (IP) of the bacteria on leaves (1, 7, and 15 days) after PAI and comparison with inoculation seedlings. Insects and leaves were assessed by qPCR for the detection and quantification of Ca L. asiaticus. With PAI 1 day Ca. L. asiaticus was detected in all of the three IPs, 19, 29 and 36% of the exposed leaves, respectively, at 1, 4 or 8 insects. This apparent dose effect (increased rate of successful inoculation with the increase in the number of individuals) was greater the higher were the PAIs and PIs. The method proved useful for studies of transmission of Ca L. asiaticus by D. citri with the following advantages over the use of whole plants: less time needed to obtain the results, the largest economy of material, drastically reducing the area required for conducting experiments / Mestre

Orientador: Renate Krause Sakate / Coorientadora: Kelly Cristina Gonçalves Rocha / Banca: Marcelo Agenor Pavan / Banca: Nobuyoshi Narita / Banca: Jorge Alberto Marques Rezende / Banca: Tatiana Mituti / Resumo: A melancia (Citrullus lanatus) é considerada uma das cucurbitáceas mais importantes no mundo e o Brasil é o quarto maior produtor, com área total cultivada de 90.000 ha e produção média de cerca de dois milhões de toneladas. No Brasil, há várias espécies de vírus descritas em melancia pertencentes ao gênero Potyvirus, Cucumovirus, sendo Zucchini lethal chlorosis virus a única espécie até então relatada no gênero Tospovirus. Considerando a alta incidência de plantas de melancia exibindo sintomas causados por vírus durante as safras 2012/2013 e a presença de tripes no campo, este trabalho teve como objetivo a identificação e caracterização do vírus e do vetor associado a sua transmissão. No primeiro capítulo intitulado "Citrullus lanatus is a new natural host of Groundnut ringspot virus in Brazil", foi relatada a ocorrência de Groundnut ringspot virus (GRSV) em melancia ocasionando mosaico, deformações e lesões necróticas em folhas e manchas necróticas nos frutos. O GRSV foi coletado durante os anos de 2012 e 2013 nas regiões produtoras dos municípios de Presidente Prudente e Marília. O isolado de GRSV de melancia apresentou um círculo de hospedeiros semelhante aos isolados de GRSV provenientes de solanáceas, com a excessão de não infectar tomateiro cv. Santa Clara e Mariana. Espécimes de tripes coletados no campo foram capazes de transmitir o GRSV para melancia, pimentão e espécies de Nicotiana. Este foi o primeiro relato de infecção natural de melancia por GRSV. No segundo capítulo intitulado "A Taqman real-time RT - PCR assay for detection of Groundnut ringspot virus" foi possível detectar o GRSV por PCR quantitativo (qPCR) em amostras de melancia e em tripes individuais coletados no campo. A detecção do GRSV por qPCR poderá servir como uma ferramenta útil nos ... / Abstract: Watermelon (Citrullus lanatus) is considered one of the most important cucurbits in the world and Brazil is the fourth largest producer, with a total cultivated area of 90.000 ha and average production of about two million tons. In Brazil, viruses described in watermelon belong to the genus Potyvirus and Cucumovirus and Zucchini lethal chlorosis virus is the only species of Tospovirus genre described on this culture. Considering the high incidence of watermelon plants showing symptoms caused by virus during the 2012/2013 seasons and the presence of thrips in the field, the virus and the vector associated with the disease was identified and characterized. In the first chapter entitled "Citrullus lanatus is a new natural host of Groundnut ringspot virus in Brazil", the species of tospovirus Groundnut ringspot virus(GRSV) was reported causing mosaic, deformation and necrotic lesions on leaves and fruits of watermelon. The GRSV was collected during the years 2012 and 2013 in producing areas of Presidente Prudente and Marília. GRSV from watermelon, differently from GRSV strains found on solanaceas, didn't infected tomato plants cv. Santa Clara and Mariana. Thrips specimens collected in the field were able to transmit GRSV to watermelon, peppers and Nicotiana species. This was the first report of natural infection of watermelon by GRSV. In the second chapter entitled "A Taqman real-time RT - PCR assay for detection of Groundnut ringspot virus" a quantitative PCR test was developed to efficiently detect GRSV from watermelon and from individual thrips. The test might be useful to detect GRSV and for further studies with this virus. The third chapter " Efficient detection of Frankliniella schultzei (Thripidae: Thysanoptera) by real-time PCR" reports the efficient detection of Frankliniella schultzei by the analysis of the mitochondrial gene cytochrome oxidase I (mtCOI). Thrips samples were ... / Doutor

Orientador: Virgínia Bodelão Richini-Pereira / Resumo: A emergência e reemergência de doenças infecciosas é impulsionada por vários fatores e a busca de patógenos em amostras animais podem oferecer oportunidades para estudos eco-epidemiológicos e também dados sobre a evolução dos patógenos. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de fungos patogênicos importantes em saúde pública, em exemplares de animais silvestres mortos por atropelamento no estado de Santa Catarina e identificar e mapear áreas de risco para a infecção humana. Grande parte destes fungos apresenta em comum dimorfismo, distribuição geográfica restrita e produção de conídios infectantes que são aspirados pelo hospedeiro por meio das vias respiratórias. Cães e tatus são apontados como transmissores de Paracoccidioides brasiliensis, os morcegos ao Histoplasma spp., assim como as fezes de pombos ao Cryptococcus spp.. No presente trabalho foram analisadas 1063 amostras de pulmão, fígado, baço, pele e coração de 297 animais silvestres, para detecção de Paracoccidioides brasiliensis, Histoplasma capsulatum e Cryptococcus spp. pela técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Utilizou-se primers universais para detecção de fungos em geral e obteve-se positividade em 102 amostras de 59 animais. Para a análise de P. brasiliensis, utilizou-se os primers específicos, obtendo oito amostras positivas em cinco animais (quatro Oxymycterus spp. e um Euryoryzomys russatus). Não houve a detecção molecular para Histoplasma spp.. Foi possível a identificação de três amos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Alvimar José da Costa / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Welber Daniel Zanetti Lopes / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Resumo: A toxoplasmose é uma zoonose cosmopolita, importante em medicina veterinária e humana por ocasionar abortos e doenças congênitas em diversas espécies. A viabilidade da transmissão sexual do Toxoplasma gondii em vacas, sorologicamente negativas para a infecção por T. gondii, submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (IATF) com sêmen criopreservado e contaminado com taquizoítos de T. gondii, por meio das técnicas (RIFI, bioprova e nested PCR). Inicialmente, utilizou-se a bioprova (em inoculação camundongos) objetivando avaliar a sobrevivência de taquizoítos de T. gondii em sêmen, criopreservado em DMSO (2,5%, 5,0%, 7,5%, 8,0% e 10,0%) e congelado em nitrogênio líquido (-196°C). Foram selecionadas 10 vacas em idade reprodutiva, soronegativas: Brucella abortus, Neospora caninum, Toxoplasma gondii. Os animais foram submetidos ao protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e tratados com dose única de estreptomicina (25mg/Kg) contra leptospirose. Das 10 vacas, cinco foram inseminadas com sêmen convencional (Glicerol 3%) e mantidas como grupo controle. As outras cinco foram inseminadas com sêmen criopreservado com DMSO (8%), contendo 1x106 taquizoítos de T. gondii. Nas datas experimentais 1, 3, 5, 7, 12, 14, 21, 28, 35, 42, 50, 56, 63, 70, 77 e 100 dias pós-inoculação (IATF), exames clínicos, hematológicos e sorológicos e moleculares (nested PCR) foram realizados. A soroconversão ocorreu em quatro fêmeas bovinas, pertencentes ao grupo que receberam sêmen infecta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Toxoplasmosis is a cosmopolitan zoonosis, highly relevant in human and veterinary medicine for causing abortion and congenital diseases in several animal species. This study evaluated, using different techniques (indirect immunofluorescence assay, bioassay and nested PCR), the viability of sexual transmission of Toxoplasma gondii in cows, serologically negative for the T. gondii infeccion, submitted to fixed time artificial insemination (FTAI) with cryopreserved semen, infected with tachyzoites of T .gondii. Initially, bioassays (inoculation in mice) were performed, seeking to analyze the survival of T. gondii tachyzoites in semen, cryopreserved in DMSO (2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% and 10.0%) and frozen in liquid nitrogen (-196 °C). Ten cows at reproductive age were selected, all serologically negative: Brucella abortus, Neospora caninum, Toxoplasma gondii. Animals underwent the protocol for fixed time artificial insemination (FTAI) and were treated with a single dose of streptomycin (25 mg/Kg) against leptospirosis. From these ten cows, five were inseminated with conventional semen (3% Glycerol) and kept as a control group. The five remaining animals were inseminated with semen cryopreserved with DMSO (8%), containing 1x106 T. gondii tachyzoites. On experimental days 1, 3, 5, 7, 12, 14, 21, 28, 35, 42, 50, 56, 63, 70, 77 and 100 after inoculation (FTAI), clinical, hematological and serological exams and molecular tests (nested PCR) were conducted. Seroconversion occurred in four bovine females which belonged to the group which received semen infected with T. gondii tachyzoites (RH strain). 21 days post artificial insemination (DPAI), it was possible to diagnose, in one animal (number 1008) from the same group, mutual increasing of serological titles, varying from 64 to 256 (28th, 35th, and 42nd DPAI). Starting on the 49th, up un... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca:Sandra Valéria Inácio / Banca:Jancarlo ferreira Gomes / Resumo: Cryptosporidium spp. é um protozoário que completa seu ciclo biológico na superfície de células epiteliais do trato gastrintestinal, respiratório e urinário de mamíferos, aves, répteis, anfíbios e peixes. Foi incluído na Iniciativa das Doenças Negligenciadas da Organização Mundial da Saúde (OMS) por sua estreita relação à população com baixo poder aquisitivo e precárias condições de saneamento básico. Esse gênero de parasito causa doença clínica e subclínica em Psitaciformes, com detecção de Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium baileyi, Cryptosporidium galli e dos genótipos I, II, III, IV e V. A calopsita é um dos psitacídeos mais vendidos atualmente, sendo frequentemente encontrada em residências. O contato próximo com humanos é motivo de preocupação, uma vez que pode ser reservatório desse coccídio intestinal, sendo imprescindível atentar para medidas de prevenção, controle e diagnóstico dessa enfermidade parasitária. Os métodos baseados na microscopia são mais utilizados para o diagnóstico de Cryptosporidium spp., por serem menos onerosos. No entanto, apenas a caracterização molecular é capaz de identificar a espécie de Cryptosporidium spp. Em relação ao tratamento dessa enfermidade em aves, é importante ressaltar que ainda não há quimioterapia efetiva disponível. Boas condições de higiene e saneamento básico são essenciais, a fim de prevenir e controlar surtos dessa enfermidade em humanos e animais. / Abstract: Cryptosporidium spp. is protozoa that complete their biological cycle on the surface of epithelial cells of the gastrointestinal, respiratory and urinary tract of mammals, birds, reptiles, amphibians and fish. This parasite was included in the World Health Organization's Neglected Diseases Initiative because of its close relationship to the population with low purchasing power and poor basic sanitation conditions. This infection causes clinical and subclinical disease in Psitaciformes with detection of Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium baileyi, Cryptosporidium galli and genotypes I, II, III, IV and V. The cockatiel is one of the best selling psittacines currently found in homes. Close contact with humans is cause for concern, since they may be reservoirs of this coccidia, being essential to watch for measures of prevention, control and diagnosis of this parasitic disease. The methods based on the microscopy are more used for the diagnosis of cryptosporidiosis, because they are less expensive. However, only molecular characterization is able to identify the species of Cryptosporidium spp. in relation to the treatment of this disease in poultry, it is important to emphasize that there is still no effective chemotherapy available. Good hygiene and basic sanitation conditions are essential, in order to prevent and control disease in animals and animals. / Mestre