Resumo: Métodos tradicionais de isolamento e cultivo limitam análises da diversidade microbiana no meio ambiente, pois acredita - se que aproximadamente 10% desses microrganismos possam ser cultivados. A ecologia microbiana molecular teve recentes progressos através da construção de bibliotecas metagenômicas, o que constitui uma poderosa abordagem para explorar a diversidade microbiana de solo fornecendo inclusive dados sobre os microrganismos não cultiváveis desse habitat. Este trabalho teve por objetivo comparar e estimar a diversidade de comunidades bacterianas, em solos de duas áreas, sendo solo de Floresta Nativa (SFN) e a outra sob arboreto com eucaliptos (SAE) de uma mesma região. Utilizando oligonucleotídeos iniciadores específicos, o gene 16S rRNA foi amplificado por PCR, os amplicons foram clonados em pGEMR-T e os clones obtidos seqüenciados parcialmente. No solo SFN foram analisados 231 clones e no solo SRE 248 clones. As seqüências obtidas foram submetidas à análise de similaridade de nucleotídeos com o banco de dados GenBank. Os filos bacterianos que mais se destacaram nos dois tipos de solo foram Acidobacteria e Proteobacteria. No solo SFN destacaram-se também as bactérias pertencentes ao filo Bacteroidetes e no solo SAE observou-se alta freqüência das bactérias Actinobacteria. Análises filogenéticas revelaram diferenças em ambos os solos, verificando através de índice de diversidade bacteriana observou-se que o solo sob eucalipto apresentou maior diversidade quando comparado ao solo sob de Floresta Nativa. / Abstract: Traditional methods of isolation and culture limits the analyses of the microbian diversity in the environment, because it is believed - that approximately 10% of these microrganisms can be cultivated. The molecular microbian ecology have had recent progress through the construction of metagenomics Iibraries, what constitutes a powerful boarding to explore the microbian diversity of soil, also supplying information on the microrganisms that cannot be cultivated on this habitat. This work had the objective of stimate the diversity of bacterial communities, in two areas, an area of Native Forest (SFN) and the another one under eucalypts (SAE) of the same region. Using specific oligonucleotides starters, the gene 16S rRNA was amplified by PCR, amplicons had been cloned in pGEMR-T and the obtained clones were partial/y sequenced. In the soil SFN, 231 clones had been analyzed and 248 clones in the soil SAE. The sequences obtained were submitted to the nucleotides similarity analysis with the GenBank database. The bacterial phylum that was more evident in the two types de soil were Acidobacteria and Proteobacteria. In the soi! SFN the bacteria of the phylum Bacteroidetes were evident and in the soil SRE high frequency of the Actinobacteria bacteria was observed. Phylogenetic analyses reveled an extensive diversity in both soils, verified through diversity index differences in the bacterial communities in both areas, and that the area under eucalypt presented more diversity in relation to the area of Native Forest. / Orientadora: Lúcia Maria Carareto Alves / Coorientadora: Eliana Gertrudes Macedo Lemos / Banca: Janete Apparecida Desiderio Sena / Banca: Uderlei Doniseti Silveira Covissi / Mestre

Orientador: João Aristeu da Rosa / Banca: Marcos Takashi Obara / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Resumo: A subfamília Triatominae conta com 18 gêneros e 151 espécies, sendo duas fósseis. As espécies são divididas em cinco tribos: Alberproseniini, Bolboderini, Cavernicolini, Rhodniini e Triatomini sendo essa última tribo agrupada em oito complexos e oito subcomplexos por suas características morfológicas, citogenéticas e moleculares. Triatoma rubrovaria pertence à tribo Triatomini e ao complexo Triatoma infestans e pode ser encontrada no Estado do Rio Grande do Sul (Brasil), Uruguai e em algumas regiões da Argentina. Triatoma rubrovaria possui hábitos rupestres sendo encontrada em buracos e fendas de locais rochosos, onde predominam rochas graníticas ou areníticas. Essa espécie alimenta-se do sangue de mamíferos, dessa maneira mantém o ciclo silvestre de Trypanosoma cruzi. No Rio Grande do Sul Triatoma carcavalloi, Triatoma pintodiasi, Triatoma circumamculata e T. rubrovaria podem compartilhar os mesmos ecótopos e apresentam coloração e algumas características morfológicas semelhantes, o que dificulta a identificação. Diante dessa constatação e servindo-se de estudos moleculares, geomorfométricos e morfométricos foram feitos estudos de seis populações silvestres e de cinco colônias laboratoriais de T. rubrovaria mantidas no Insetário de Triatominae da Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Para o estudo de seis populações silvestres e de cinco colônias laboratoriais de T. rubrovaria foram utilizadas sequencias de genes mitocondriais Citocromo b e Citocromo Oxidase I. Também fora... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Currently, the members of the subfamily Triatominae are represented by 18 genera and 151 species, including two fossils. These species are divided into five tribes: Alberproseniini, Bolboderini, Cavernicolini, Rhodniinie Triatomini which are grouped into eight complexes and eight subcomplexes by their morphological, cytogenetic and molecular characteristics. Triatoma rubrovaria belongs to the Triatomine tribe and to the complex Triatoma infestans and can be found in the state of Rio Grande do Sul (Brazil), Uruguay and some regions of Argentina. Triatoma rubrovaria has rupestrian habits, being found in holes and crevices of rocky places that are dominated by granite or sandstone rocks. This species feeds on the blood of mammals, maintaining the sylvatic cycle of Trypanosoma cruzi. In Rio Grande do Sul, Triatoma carcavalloi, Triatoma pintodiasi, Triatoma circumamculata and T. rubrovaria can share the same ecotypes, color patterns and some similar morphological characteristics, which often becomes difficult to differentiate these species. For this purpose, geomorphometric and morphometric studies were carried out using two wild populations and five colonies of T. rubrovaria from the laboratory which are kept in the Insectarium of Triatominae from the Faculty of Pharmaceutical Sciences. The six wild populations and five colonies of T. rubrovaria from the laboratory were used to the study of mitochondrial genes Cytochrome b and Cytochrome Oxidase I sequences. Furthermore, morphometric studies were performed by optical microscopy in order to measure six parameters of the head, length of the chest and abdomen of females and adult males. Through geometric morphometric studies were investigated the head parameters using previously determined reference points. The results obtained by classical morphometric and geometric morphometry methods... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Co-orientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Jancarlo Ferreira Gomes / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Resumo: om o objetivo de determinar a ocorrência e caracterizar molecularmente a infecção por Cryptosporidium spp. em bezerros bubalinos do Estado de São Paulo, Brasil, foram colhidas 222 amostras fecais de animais da raça Murrah, com até seis meses de idade. As amostras foram avaliadas pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada e por meio da reação em cadeia da polimerase tipo nested (nPCR) para amplificação de fragmentos de DNA da subunidade 18S do gene do RNA ribossômico e sequenciamento dos fragmentos amplificados. Pela técnica de Ziehl-Neelsen modificada, foi detectada positividade de 8,1% (18/222), e pela nPCR, foi observada amplificação em 48,2% (107/222) das amostras, das quais 63 foram sequenciadas. A análise das sequências obtidas mostrou que a espécie mais frequente nesses animais foi Cryptosporidium ryanae, em bezerros bubalinos a partir de cinco dias de idade. A espécie zoonótica Cryptosporidium parvum foi detectada em apenas um animal e um genótipo incomum, similar a Cryptosporidium sp. W20486, foi encontrado, pela primeira vez em búfalos / Abstract: With the aim of determining the occurrence and molecularly characterizing infection by Cryptosporidium spp. in buffalo calves from São Paulo State, Brazil, 222 fecal samples were collected from Murrah animals aged up to six months. The samples were assessed by means of modified Ziehl-Neelsen technique and nested polymerase chain reaction (nPCR) for amplification of DNA fragments from subunit 18S of the gene of ribosomal RNA and sequencing of the amplified fragments. The modified Ziehl-Neelsen technique indicated 8.1% positivity (18/222), while nPCR revealed amplification for 48.2% (107/222) samples, of which 63 were sequenced. The analysis of the obtained sequences showed that the most frequent species in these animals was Cryptosporidium ryanae, present in buffalo calves from five days of age. The zoonotic specie Cryptosporidium parvum was detected in only one animal, and an uncommon genotype, similar to that of Cryptosporidium sp. W20486, was found for the first time in buffaloes / Mestre

Orientador: Maria Cecília Rui Luvizotto / Co-orientador: Vasco Ariston de Carvalho Azevedo / Banca: Antonio Carlos Paes / Banca: Cáris Maroni Nunes / Resumo: A tuberculose bovina é uma enfermidade infectocontagiosa granulomatosa crônica de carácter zoonótico causada pelo Mycobacterium bovis. Essa bactéria pertence ao complexo Mycobacterium tuberculosis que corresponde a um grupo de micobactérias filogeneticamente relacionadas, que apresentam considerável dificuldade no diagnóstico direto em amostras teciduais. O objetivo do presente trabalho foi avaliar linfonodos por meio de diagnóstico histopatológico e molecular, visando à detecção direta do agente em tecido. Durante a linha de inspeção de abate em frigorífico, foram selecionados 150 linfonodos com lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose. Na análise histológica pela coloração de Hematoxilia-Eosina (HE), 100% das amostras apresentaram lesões microscópicas compatíveis com tuberculose. A coloração de Zielh-Neelsen (ZN) evidenciou a presença de bacilos álcool ácido resistentes (BAAR) em 6 (4%) amostras. O método de extração para a análise molecular apresentou bons resultados, mas a amplificação dos fragmentos de DNA dos genes hsp65 e IS6110 resultaram em baixa sensibilidade. Contudo a reamplificação do gene IS6110, resultou em positividade de 63,3%, indicando que a dificuldade do diagnóstico molecular em amostras teciduais esta relacionada a quantidade reduzida de bactérias presentes nas amostras. Palavras-chave: diagnóstico, histopatologia, Mycobacterium, reação em cadeia da polmerase, tecidos / Abstract: The Bovine tuberculosis is a chronic granulomatous infectious disease of zoonotic nature caused by Mycobacterium bovis. This bacterium belongs to the Mycobacterium tuberculosis complex which corresponds to a group of phylogenetically related mycobacteria, which have considerable difficulty in diagnosing directly in tissue samples. The objective of this study was to evaluate lymph nodes through histopathologic diagnosis and molecular targeting the direct detection of the agent in tissue. During the inspection line slaughter in a fridge, we selected 150 nodes with macroscopic lesions suggestive of tuberculosis. In histological analysis by staining Hematoxilia-eosin (HE), 100% of the samples had microscopic lesions compatible with tuberculosis. The coloring Zielh-Neelsen (ZN) revealed the presence of acid- resistant bacilli (AFB) in 6 (4%) samples. The extraction method for molecular analysis showed good results, but the amplification of DNA fragments of hsp65 genes and IS6110 resulted in low sensitivity. However, the reamplification of IS6110 gene resulted in 63.3% positivity, indicating the difficulty of tissue samples for molecular diagnosis related to this reduced amount of bacteria present in samples / Mestre

Orientador: Raul José Silva Girio / Banca: Luís Antonio Mathias / Banca: José Rafael Modolo / Resumo: Conhecendo-se a predileção das leptospiras pelo aparelho urogenital, e a crescente utilização de técnicas de reprodução assistida na espécie canina, o presente trabalho objetivou pesquisar a presença e a ação da Leptospira no sêmen e testículo de cães. Foram utilizados 32 animais, dos quais 20 foram inoculados com uma cepa patogênica de Leptospira interrogans sorovar Canicola e 12 não receberam inóculo algum, sendo considerados animais-controle. Assim, os 32 animais experimentais foram reunidos em quatro grupos de estudo encerrando cinco cães inoculados e três cães-controle por grupo. Os animais do grupo um foram sacrificados após sete dias da inoculação, os animais do grupo dois sacrificados 15 dias após a inoculação, os animais do grupo três sacrificados após 30 dias de incubação e os animais do grupo quatro foram sacrificados após 45 dias da inoculação da cepa patogênica. Após o sacrifício, colheram-se fragmentos de testículo para pesquisa de Leptospira no parênquima testicular pela técnica de coloração de Levaditi. Nos dias zero (dia da inoculação), três, cinco, sete, dez, e a partir daí de cinco em cinco dias após a inoculação da cepa patogênica de Leptospira, foram colhidas amostras de sangue e sêmen. No sêmen, foram realizados exames andrológicos e PCR, no sangue, além da pesquisa de anticorpos pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM), foram verificados os níveis hormonais de testosterona. Dos 20 cães infectados, apenas um não apresentou título detectável na prova de SAM no período analisado. No grupo dois, foi verificada uma queda significativa nos valores do vigor e da concentração espermática, nos cães infectados, durante grande parte do período de estudo...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Considering the Leptospira predilection for the urogenital system and the increasing of utilization of assisted reproduction in dogs, this work aimed to search the presence and the role of Leptospira in semen and testicles from dogs. From 32 animals, 20 were inoculated with a pathogenic Leptospira interrogans serovar Canicola strain and 12 received no inoculum, acting as control animals. The 32 experimental animals were distributed in four groups with five inoculated and three control dogs per group. Animals from group one were sacrificed seven days after inoculation, animals from group two were sacrificed 15 days after inoculation, animals from group three were sacrificed 30 days after inoculation, and animals from group four were sacrificed 45 days after inoculation. Testicle fragments were collected after dog sacrifices for searching Leptospira in testicle parenchyma using Levaditi stain technique. Blood and semen samples were collected at day zero (inoculation day), three, five, seven, ten and then by each five days after pathogenic Leptospira strain inoculation. Andrologic exams and PCR were performed with semen. Blood samples were used to detect antibodies using microscopic agglutination test (MAT) and verify testosterone levels. Only one of the 20 infected dogs had no detectable titre using MAT. Spermatic vigor and spermatic concentration had a significant decrease in group two during most part of the study. In three of nine days of semen collection, only spermatic concentrations were significantly lower in infected animals from group three. In this study it was possible to detect Leptospira DNA in semen samples from 16 of the 20 dogs inoculated with L. interrogans serovar Canicola strain. Thereby it was not possible to correlate the decrease of testosterone serum levels in infected animals with those detected in control animals...(Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Resumo: presente estudo teve por objetivo pesquisar a ocorrência de infecção por Leishmania spp. em 491 cães domiciliados no município de Florianópolis, Santa Catarina, região até então considerada indene para leishmaniose visceral, mas que apresenta notificação de casos autóctones da doença canina no ano de 2011. A soroprevalência na população avaliada foi de 0,4% (2/491) por ELISA indireto e 4,09% (24/491) por RIFI. A concordância entre as técnicas sorológicas foi fraca (k=0,069). Somente um cão apresentou sororeatividade em ambos os métodos sorológicos. No mesmo animal foi amplificado o DNA de Leishmania sp. no sangue total, por PCR convencional e PCR em Tempo Real. Não foi possível realizar o sequenciamento do material amplificado e, deste modo, determinar a espécie de Leishmania envolvida. Os resultados do presente estudo salientam a necessidade de uma investigação epidemiológica minuciosa no município / Abstract:The aim of the present study was to investigate the occurrence of Leishmania infantum chagasi infection in 491 dogs living in Florianópolis, Santa Catarina, a region considered non-endemic for visceral leishmaniasis, but with notification of autochthonous of canine cases in 2011. The seroprevalence in this population was 0.4% (2/491) by ELISA and 4.09% (24/491) by IFAT. There was a poor agreement between the serological techniques (k = 0.069). Only one dog presented seroreactivity in both serological methods. In the same animal Leishmania sp. DNA was amplified from whole a blood sample by conventional PCR and Real- Time PCR. It was not possible to sequence the amplicons and, thereby, to determine the Leishmania specie involved. The results of this study highlight the necessity of epidemiological investigation in the county / Orientador: Mary Marcondes / Banca: Wagner Luis Ferreira / Banca: Marcia Dalastra Laurenti / Mestre

Orientador: Gilson Pereira de Oliveira / Coorientador: Gisele Braziliano de Andrade / Coorientador: Alvimar Jose da Costa / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Heitor Miraglia Herrera / Resumo: Dentre as doenças emergentes causadas por artrópodes em cães destacam-se as infecções por agentes das espécies Leishmania chagasi, transmitida por flebotomíneos, Ehrlichia canis e Babesia canis transmitidas por carrapatos da espécie Rhipicephalus sanguineus. O presente estudo teve como objetivo realizar o diagnóstico sorológico e molecular de parasitos das espécies Leishmania chagasi, Ehrlichia canis e Babesia canis em amostras de soro e de baço, respectivamente. Foram utilizados 60 cães naturalmente infectados, eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses do Município de Campo Grande, Mato Grosso do Sul. Pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), 60 (100%), 39 (65%) e 49 (81%) dos 60 animais amostrados foram sororeagentes frente aos antígenos de L.chagasi, E.canis e B.canis respectivamente. Também foi realizado o ensaio Imunoenzimático Indireto (ELISA-teste) para detecção de anticorpos da classe IgG anti-L. chagasi, onde sessenta cães (100%) mostraram-se soropositividade. Cinquenta e quatro cães (90%) mostraram-se positivos na reação em cadeia pela polimerase (PCR) para o gênero Leishmania sp e destes cinquenta e três animais, 53 (88%) foram positivos para o complexo L.Donovani. Vinte e sete animais (45%) foram positivos para Ehrlichia e destes animais todos foram positivos para E.canis pelo nested PCR e 2 (3,33%) cães foram PCR positivos para Babesia sp. Os amplicons foram confirmados por seqüenciamento e os DNAs mostraram 99% de similaridade genética para L.chagasi, E.canis e B.canis. Este estudo mostrou que os cães residentes em Campo Grande/MS, podem albergar mais de um hemoparasita, As co-infecções por agentes patogênicos intracelulares de células do sistema monocítico fagocitário, como é o caso da Ehrlichia e Leishmania, associadas ou não a Babesia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among emerging diseases caused by arthropods in dogs stand out infections by agents of the species Leishmania chagasi, transmitted by sandflies, Ehrlichia canis and Babesia canis transmitted by ticks of the species Rhipicephalus sanguineus. The present study aims to perform serological and molecular diagnosis of parasites of the species Leishmania chagasi, Ehrlichia canis and Babesia canis in samples of sera and spleen, respectively. A total of 60 naturally infected dogs were euthanized at the Zoonosis Control Center of the city of Campo Grande, Mato Grosso do Sul Through Immunofluorescence Assay (IFA), sixty (100%), 39 (65%) and 49 (81%) of the 60 animals sampled were reactive serum against the antigens L.chagasi, E.canis and B. canis, respectively. We also performed indirect immunosorbent assay (ELISA test) for detection of IgG antibodies anti-L. chagasi, where sixty dogs (100%) were seropositive. Fifty-four dogs (90%) were positive by PCR for the genus Leishmania, and of these fifty and three animals, 53 (88%) were positive for the complex L.Donovani. Twenty-seven dogs (45%) were positive for Ehrlichia sp and these animals were all positive for E.canis by nested PCR and two dogs (3%) were PCR positive for Babesia sp. The amplicons were confirmed by DNA sequencing and showed 99% genetic similarity to L.chagasi, E.canis and B. canis. This study showed that dogs living in Campo Grande / MS, can accommodate more than one haemoparasite. The co-infections by intracellular pathogens monocytic phagocyte system cells, as is the case with Ehrlichia and Leishmania, associated or not with Babesia (which multiplies in red blood cells), causing serious damage to the health of animals. The decline in physical condition and immune co-infections resulting from increases parasitemia, which in the case of agents transmitted by... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Pablo Schocken-Iturrino / Banca: Alessandra Aparecida Medeiros / Banca: Antonio Carlos Paulillo / Banca: Helio Jose Montassier / Banca: Clovis Wesley Oliveira de Souza / Resumo: As atividades dos estabelecimentos de abate de frangos são conhecidas por utilizarem grandes volumes de água durante seus processos, principalmente no sistema de pré-resfriamento por imersão das carcaças de frangos. Parte deste volume utilizado se faz necessário em cumprimento à legislação, que determina a renovação contínua das águas e o completo esvaziamento, limpeza e sanititização de cada tanque do sistema ao final de cada período de trabalho de oito horas. O objetivo deste estudo foi comparar a carga microbiana das águas do sistema de pré-resfriamento, processos e produtos do abate de frangos ao final de oito, dezesseis e vinte e quatro horas de trabalho do abatedouro para possível redução do número de vezes do completo esvaziamento dos tanques do sistema. Através de métodos convencionais microbiológicos (contagem total, coliformes totais, E. coli, enterobacteriaceae e Salmonella por PCR) e físico-químico, foram avaliadas amostras em superfície de cama aviária (n=69), águas de abastecimento da indústria (n=69), carcaças de frango antes (n=345) e após (n=345) o sistema, águas do último estágio do sistema de pré-resfriamento (n=69), peito (n=69), coxa (n=69) e asa de frango congelada (n=69). Os resultados obtidos demonstraram que não houve diferença significativa na carga microbiana entre as três jornadas de trabalho do estabelecimento. Sendo possível a redução de vezes que se faz o esvaziamento das águas dos tanques de pré-resfriamento, reduzindo assim, o volume de captação das águas, custos com o tratamento dos efluentes e despejo deste nos rios e melhorando o uso racional do tempo de processamento da indústria / Abstract: The chicken slaughterhouses activities are known for the use of large volumes of water, especially when water immersion chilling is used. Part of that amount is applied on continuous water renewal and the changing of the total volume of the tanks at the end of each shift of eight hours, including theirs cleaning and hygiene, which are supported by law in Brazil. The aim of the current study was to assess the microbial load of the chiller water, process and products at the end of eight, sixteen and twenty four hours in order to evaluate the reduction of water changes and chiller sanitization. Through microbiological (Aerobic mesophilic, Total coliforms, E. coli, enterobacteriaceae counts and Salmonella using PCR-RT) and physical-chemical analyzes samples of litter (n=69), water supply (n=69), chicken carcasses pre-chilling (n=345) and post chilling (n=345), chiller water (n= 69), frozen chicken breast (n=69), frozen chicken leg (n=69) and frozen chicken wings (n=69) were evaluated. The results showed no significant difference in microbial load between the three shifts. Reducing the times the chilling tanks must be emptied, the volume of water to be treated and thus the costs with wastewater treatment may be mitigated, including its impact on the environment and rational use o time at processing plants / Doutor

Resumo: O Brasil é o segundo maior produtor de soja no mundo, cuja cultura requer o elemento nitrogênio em quantidades elevadas para manutenção do alto teor protéico dos grãos. A entrada de nitrogênio nos sistemas agrícolas pode ocorrer pela adição de fertilizantes nitrogenados ou por processos naturais como a Fixação Biológica do Nitrogênio, que se constitui como supridor de nitrogênio mais viável para a cultura da soja, tanto economicamente como ecologicamente. Este processo ocorre graças à simbiose que ocorre entre esta leguminosa e as bactérias do gênero Bradyrhizobium, resultando na formação de nódulos radiculares onde se dá a obtenção de todo o nitrogênio que a cultura necessita para alta produtividade. A introdução destas bactérias no solo se dá através da utilização de inoculantes comerciais, que incluem as bactérias Bradyrhizobium elkanii e Bradyrhizobium japonicum em sua composição. Aspectos relacionados à formulação e fabricação dos inoculantes comerciais reúnem os fatores mais importantes para a obtenção de um produto de qualidade, obedecendo à legislação vigente. Tendo em vista a análise de qualidade de inoculantes comerciais para soja em diferentes períodos de armazenamento, um estudo do metabolismo respiratório de bradirrizóbios foi realizado in vitro e em simbiose. Inoculantes comerciais com 12, 27 e 48 meses de idade foram analisados quanto suas características bioquímicas e fisiológicas, assim como testados em casa de vegetação. Adicionalmente, os mesmos testes foram realizados com Bradyrhizobium elkanii sob diferentes condições de oxigênio. Análise da expressão gênica indicou que um processo de expressão de genes relacionados à fixação biológica de nitrogênio (genes sensores a baixas tensões de oxigênio) foram expressos, entretanto não ocorrendo expressão do gene nifH, este só expresso em condições... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Brazil is the second major soybean producer in the world, whose culture requires the element nitrogen in large amounts for the maintenance of the high protein content in grains. The input of nitrogen in agricultural systems can occur by adding nitrogen fertilizer or by natural processes such as biological nitrogen fixation (BNF). BNF is the most feasible way to delivery nitrogen for the soybean crop, both economically and ecologically. This process occurs through the symbiosis between the legume and the bacteria of the genus Bradyrhizobium, resulting in the formation of root nodules where all nitrogen that the crop needs for high productivity is acquired. The introduction of these bacteria in soil is given by use of commercial inoculants, which include the bacteria Bradyrhizobium japonicum and Bradyrhizobium elkanii in its composition. Aspects related to formulation and manufacture of inoculants include the most important factors affecting the product quality, according to law. In order to analysis of the quality of commercial inoculants for soybean in different storage periods, a study of respiratory metabolism of bradyrhizobia was performed in vitro and in symbiosis. Inoculants with 12, 27 and 48 months old were analyzed accessing their biochemical and physiological characteristics, and tested at greenhouse. In addition, the same tests were conducted on cultures of Bradyrhizobium elkanii under different oxygen conditions. Analysis of gene expression have indicated that genes related to biological nitrogen fixation (genes sensors at low oxygen tension) were intensively expressed, but not occurring nifH gene expression which is only expressed under symbiosis. Similar data were found for the expression of these genes when B. elkanii grown at different oxygen tensions. These data indicate that as the oxygen level is reduced some genes related to nitrogen fixation are expressed... (Complete abstract click electronic access below) / Orientadora: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Coorientador: Jackson Antônio Marcondes de Souza / Banca: Jesus Aparecido Ferro / Banca: Emanuel Maltempi de Souza / Mestre

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Elmo Gomes Diniz / Resumo: O presente trabalho teve como objetivos separar os espermatozóides portadores do cromossomo X viáveis, dos portadores do Y, através de gradiente descontínuo de densidade de PercollTM. Utilizar esse sêmen na produção in vitro de embriões bovinos, substituindo o SFB pela BSA no cultivo. Congelar estes embriões pelo método da congelação lenta. Avaliar a criotolerância dos embriões do sexo feminino pela taxa de eclosão e a eficiência do gradiente pela técnica da PCR, que identificou o sexo dos embriões produzidos. Foram produzidos 133 embriões do tratamento sexado (embriões produzidos a partir de sêmen submetido ao gradiente de densidade de PercollTM) e 100 do tratamento controle (embriões produzidos de acordo com o protocolo utilizado no departamento de Reprodução Animal). Após congelação, descongelação e cultivo destes embriões apenas 8 eclodiram do tratamento sexado e também 8 do tratamento controle, a análise estatística deste resultado demonstrou que o sexo não influenciou na taxa de eclosão pós descongelação. Porém a análise estatística dos embriões produzidos com sêmen sexado e submetidos a PCR demonstrou que o gradiente de densidade de PercollTM foi eficaz na separação dos espermatozóides X viáveis em 62%. / Abstract: The present study had as purposes to separe X and Y sperm by PercollTM descontinuous density gradient. Use the semen on in vitro production bovine embryos, replacing the BFS for BSA on the culture. To freezing the embryos by the slow curve method. Evaluate the female embryos cryotolerance by eclosion rate and the gradient eficience by PCR technique that identify the embryos sex. 133 embryos were produced by the sexed treatment and 100 by control treatment. After freezing, unfreezing and culture of the embryos, only 8 ecloded of each treatment, the result statistics analyses showed that the sex had no influence on the eclosion rate after unfreeze. However the statistics analyses of the sexed semen produced embryos and submitted to PCR showed that the PercollTM density gradient was efficient on the viable X separation sperm in 62%. / Mestre