Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2017-10-19T16:57:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Ana Paula Prestes.pdf: 3605204 bytes, checksum: c04bdcd5fbd85e3c01286278cea6ad0c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-19T16:57:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Ana Paula Prestes.pdf: 3605204 bytes, checksum: c04bdcd5fbd85e3c01286278cea6ad0c (MD5) Previous issue date: 2016-03-30 / Processos inflamatórios estão associados ao aumento dos níveis plasmáticos de bradicinina (BK) e de seus metabólitos des-Arg9-bradicinina (DABK) e des-Arg10-Lysbradicinina. A ação das cininas é mediada pela ativação dos receptores B1 e B2. A BK age preferencialmente a partir da estimulação dos receptores B2 constitutivos. Em contrapartida, os metabólitos da BK atuam nos receptores B1 que são expressos somente em tecidos que sofreram trauma prévio ou infecção. Estudos propõem que a ação dos receptores B1 esteja correlacionada a processos inflamatórios crônicos tais como a periodontite. Desta maneira, o propósito deste trabalho foi investigar a participação dos receptores B1 e B2 para cininas na inflamação sistêmica e nas alterações cardiovasculares induzidas pela periodontite em ratos. Quatorze dias após a colocação de ligaduras para a indução da periodontite ou realização do procedimento de falso-operado, os animais foram submetidos ao experimento de edema de pata para diferentes agentes flogísticos – carragenina, BK, DABK, serotonina, histamina e prostaglandina E2. Além da avaliação edematogênica, a migração de células polimorfonucleares e a permeabilidade vascular no tecido da pata foram avaliadas após a indução do edema de pata mediado por carragenina. No mesmo intervalo de tempo realizou-se a avaliação das alterações na pressão arterial média para os agonistas dos receptores B1 e B2. Os níveis plasmáticos e teciduais (tecido da pata) de TNF-α e IL-β foram quantificados após três, sete e quatorze dias da indução da periodontite. A quantificação protéica do receptor B1 para cininas foi realizada 14 dias após a indução da periodontite. Os resultados obtidos para o procedimento de edema de pata mediado por carragenina demonstraram um aumento estatisticamente significativo no edema, na migração de células polimorfonucleares e na permeabilidade vascular nos animais do grupo ligadura. Nenhuma diferença entre os grupos ligadura e falso-operado foram observadas no edema de pata induzido por serotonina, histamina e prostaglandina E2. Nenhuma diferença entre os grupos ligadura e falso-operado foram observadas no edema de pata induzido por BK. Intessantemente, o grupo ligadura apresentou um aumento estatisticamente significativo no edema de pata induzido por DABK. Dessa maneira, o edema induzido por DABK caracterizou a participação dos receptores B1 no edema de pata no grupo ligadura, mas não foi observada uma alteração na quantificação protéica deste receptor entre os grupos experimentais. As alterações na pressão arterial média induzidas pelos agonistas da BK e DABK foram similares. Os níveis plasmáticos de TNF-α foram superiores no grupo ligadura após 3 dias da indução da periodontite. Em contrapartida, os níveis teciduais de IL-1β foram superiores no grupo ligadura. Os dados obtidos sugerem que a periodontite pode promover alterações na resposta inflamatória em tecidos distantes da cavidade oral. Dessa maneira, as alterações nos parâmetros inflamatórios podem alterar a ativação dos receptores B1 e esses receptores contribuírem nas alterações inflamatórias sistêmicas induzidas pela periodontite. / The inflammatory process is associated with increased plasma levels of bradykinin (BK) and its metabolites des-Arg9-bradykinin (DABK) and des-Arg10-lys-bradykinin. The kinins effects are mediated through B1 and B2 receptors activation. BK acts preferentially in the constitutive B2 receptors. In contrast, BK metabolites act in the B1 receptors that are expressed only in tissues that have undergone previous trauma or infection. Studies suggest that the action of the B1 receptor is correlated to chronic inflammatory processes such as periodontitis. Thus, the purpose of this study was to investigate the involvement of B1 and B2 kinin receptors in systemic inflammation and cardiovascular changes induced by periodontitis in rats. Fourteen days after the induction of periodontitis by ligature placement or sham procedure, animals were underwent to the paw edema procedure induced for different phogistic agents – carragenan, BK, DABK, serotonin and prostaglandin E2. In addition to the paw edema procedure the migration of polymorphonuclear cells and vascular permeability changes were evaluated after carrageenan-induced paw edema. In the same period of time the assessment of changes in mean arterial pressure for B1 and B2 receptors agonists were determinate. The plasma and tissue levels (paw tissue) of TNF-α and IL-1β were quantified after three, seven and fourteen days of periodontitis induction. The protein quantification (western-blotting) of B1 receptor was determinate after fourteen days of periodontitis induction. The results obtained for paw edema procedure mediated by carrageenan demonstrated a statistically significant increase in the edema, polymorphonuclear cells migration and vascular permeability in the ligature group. No differences between the ligature and sham group were observed in paw edema induced by serotonin, histamine and prostaglandin E2. No differences between the ligature and sham group were observed in BK-induced paw edema. Interestingly, the DABK-induced paw edema was increased at ligature group. Therefore the increase at edema induced by DABK-indicate the activation of the B1 receptors in the paw edema in ligature group, but changes in protein quantification of B1 receptor were not observed between experimental groups. The changes in blood pressure induced by BK and DABK agonist were similar. The plasma levels of TNF-α were higher in the ligature group after three days of periodontitis induction. In contrast, tissue levels of IL-1β were higher in the ligature group. The data suggest that periodontitis can promote changes in inflammatory response in tissues distant from oral cavity. Thus, alterations in inflammatory parameters can increase the expression of B1 receptors, and these receptors may contribute in the systemic inflammatory changes induced by periodontitis.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-31 / Objetivo: caracterizar farmacológicamente as respostas à bradicinina e outros agonistas no músculo liso não vascular (fundo do estômago) e vascular (aorta abdominal) isolados de animais nocaute B1 e B2 de cininas. Métodos: Foram isolados fundus de estômago e aorta abdominal de animais normais, nocaute B1 e animais nocaute B2; registros de contrações isométricas foram obtidos para determinação da potência e eficácia dos agonistas. Foram aplicadas doses crescentes cumulativas e não-cumulativas dos agonistas peptídicos bradicinina (BK), Des-Arg9 bradicinina, angiotensina II (AII) e endotelina-1 (ET-1). Resultados: O estudo da potência em fundus de estômago isolado de animais nocautes revelou que a afinidade dos agonistas testados, não foi alterada. Quanto ao efeito máximo, verificou-se que a ausência do receptor B1 diminuiu a eficácia da BK, porém não da ET-1 e AII. No tecido vascular, a BK mostrou-se menos eficaz em animais nocaute B1 assim como a ET-1, enquanto a AII teve sua eficácia diminuída, tanto em animais nocaute B1 como B2. As respostas à ET-1 e AII apresentaram o Emax alterado nos animais nocautes o qual foi revertido em nocaute duplo B1 e B2. Conclusão: A verificação de que a afinidade relativa dos agonistas testados, no estômago isolado de camundongos nocautes B1 e B2 não foi alterada significativamente em relação à determinada em animais WT, sugeriu que neste tecido não ocorrem interações entre os receptores que afetariam a ligação dos agonistas ao seu receptor. Entretanto a redução na contração máxima induzida pela BK no animal nocaute B1 poderia estar relacionada com o elevado nível de óxido nítrico (NO) endógeno encontrado no fundus de estômago desse animal. Porém, L-NAME (inibidor da NO sintase) não afetou o Emax da BK, descartando essa hipótese. Considerando-se que heterodimerização entre os receptores B1 e B2 ocorre nas células do estômago, a falta de B1 teria favorecido a homodimerização do B2, que leva à ativação e dessensibilização, induzindo a taquifilaxia mais acentuada para a BK, e a redução do Emax. Para o caso da AII, que mostrou ter a afinidade e a eficácia mantidas nos nocautes, mas a taquifilaxia atenuada no KOB1 e no KOB2 poderia ser atribuída ou a heterodimerização entre os receptores B2 e AT1 no KOB1 ou a homodimerização entre os receptores AT1 no KOB2. Quanto à aorta abdominal, esta se mostrou sensível à BK, mas não a DBK que não induziu resposta no WT e nos nocautes, sugerindo que este receptor não seria expresso. Entretanto aorta isolada de KOB1 teve a sensibilidade drasticamente reduzida à BK que é mediada pelo receptor B2 indicando expressão funcional importante do receptor B1 nesta preparação. Quanto a ET-1, a eficácia diminuída somente no animal KOB1 poderia ser devida à interação cruzada do receptor da ET-1 com o B2, que deixaria de dimerizar com o B1. A AII teve sua eficácia diminuída nos animais KOB1 e KOB2, sugerindo que heterodimerização entre estes receptores e também destes com o AT1 da AII poderia ocorrer, favorecendo a ação da AII. Os resultados obtidos no fundus do estômago e na aorta abdominal sugerem importância na expressão funcional simultânea dos receptores B1 e B2 em ambas as preparações, e interferência nos mecanismos de transdução de sinais, afetando a contração e relaxamento de músculos lisos vascular e não-vascular. / Purpose: to pharmacologically characterize the responses to bradykinin (BK) and other agonists in non-vascular (stomach fundus) and vascular (aorta) smooth muscles isolated from kinin B1 and B2 receptor knockout mice. Methods: stomach fundus and aorta were isolated from normal , B1 knockout and B2 knockout animals; isometric contraction recordings were obtained for potency and efficacy determinations of agonists; cumulatively and non-cumulatively increasing doses of agonists such as BK, desArg9BK (DABK), angiotensin II (AII) and endothelin (ET-1) were applyied. Results: Potency (pD2) values determined in stomach fundus of WT and KO animals revealed that the affinity of agonists was maintained. Concerning the maximal effect induced by agonists, the efficacy of BK, but not AII and ET-1 was reduced in KOB1 animals. In the vascular tissue, BK was shown to be less efficient in KOB1 and KOB2 than in WT. The responses to AII and to ET-1 were reduced in KOB1 animals but it was reverted in KOB2 animals. In addition, stomach from KOB1 was found to be impaired to relax to sodium nitroprusside whereas the relaxant response was inaltered in KOB2, indicating that the deletion of B1 receptor led to important changes in the Ca regulation mechanism. Conclusions: The finding that the relative affinity of the agonists was not affected in stomach from knockout animals suggested that in this tissue there is no cross talking between kinin receptors and other agonist receptors. However the reduction in the maximal response to BK1 receptor might favoured the homodimerization of B2, which lead to activation and dessensitization, inducing an accentuated tachyphylaxis to BK and also the reduced maximal effect. In the case of AII, which showed a high affinity and efficacy, but the tachyphylaxis was attenuated in knockout animals, it can be suggested that there was formation of homodimers of B2 receptors rather than heterodimers between kinin B2 and AII AT1 receptors due to the absence of B1 receptors. Concerning BK- but not DABK induced effect in abdominal aorta in normal and knockout animals, indicated that B1 receptors would not express in this tissue. But the drastic reduction in change in sensitivity of the aorta towards BK-induced contraction suggested that B1 receptor should be mediating kinin mediated effect. The finding that the efficacy of ET-1 was reduced in KOB1 whereas that of AII was affected in aorta of the two knockout animals suggest that there must be cross talk between kinin receptors and of ET-1 and AII or between signal transduction activateed by these agonists. It is concluded that B1 and B2 receptors in stomach fundus and in abdominal aorta both receptors play important role for functional expression of kinins and that they are involved in the mechanisms of cell signaling, affecting the vascular and non-vascular smooth muscle contraction and relaxation. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:41Z : No. of bitstreams: 1 Publico-091.pdf: 651136 bytes, checksum: 35401eae81afb55be34c6f47a332e47e (MD5) / Objetivo: Estudar o efeito da obesidade na regulação do sistema calicreína-cininas por meio da expressão dos receptores B1 e B2 de cininas em humanos e camundongos, e as alterações na síntese e funcionalidade dos receptores em tecidos murinos. Métodos: Foram coletados tecido adiposo branco humano e diferentes tecidos de camundongo. Desses tecidos foi extraído o RNA e analisada a expressão dos receptores de cinina por meio da reação em cadeia da polimerase em tempo real. Tecidos como estômago e aorta de camundongos ob/ob e selvagens foram utilizados para extração de proteínas e estudos fisiológicos. Por Western Blotting estudou-se a quantidade de receptor produzida nos animais. O fundus de estômago e aorta abdominal foram utilizados para se obter registros de contrações isométricas para determinação da potência e eficácia dos agonistas em camundongos obesos e magros. Foram aplicadas doses crescentes cumulativas dos agonistas peptídicos dos receptores B1 e B2, bradicinina e des-Arg9-bradicinina. Resultados: Nos experimentos de PCR em tempo real, a expressão gênica dos receptores B1 e B2 de cininas foi mostrada alterada em alguns tecidos dos animais deficientes na produção do hormônio leptina em relação ao controle. Nos tecidos: adiposo branco, aorta, fígado, hipotálamo e estômago, a expressão do receptor B1 apresentou-se aumentada, porém em tecido cardíaco e tecido adiposo marrom, essa estava diminuída. O receptor B2 teve expressão diminuída em tecido adiposo branco e hipotálamo. Nos demais tecidos estudados não houve alteração da expressão do receptor B2. Em humanos, esses receptores apresentaram-se alterados em indivíduos obesos. O estudo foi realizado em tecido adiposo humano de duas regiões de depósito diferentes, visceral e subcutâneo. Foi observada diferença na expressão do mesmo tecido, porém de regiões distintas. Nos tecidos dos camundongos obesos a resposta aos agonistas dos receptores B1 e B2, bradicinina e des-Arg9-bradicinina, respectivamente, foi mostrada diminuida. Em fundus de estômago foi observada diminuição significativa na resposta ao agonista BK em animais obesos e tratados com dieta hiperlipídica. Tais efeitos podem ser devido às conseqüências do aumento excessivo de peso, como inflamação crônica apresentada nesses animais, ou mesmo devido a diabetes tipo II, a qual consiste em uma patologia diretamente relacionada à obesidade, sugerida neste trabalho como fator capaz de alterar a ação do sistema calicreína-cininas em determinados tecidos. Conclusão: Análises de expressão gênica mostraram que a obesidade afeta os receptores de cinina em diversos tecidos de camundongo, assim como em humanos. Análises fisiológicas funcionais mostraram diminuição na resposta ao agonista de B1 em animais obesos. Os dados deste trabalho sugerem que a obesidade afeta a modulação do sistema calicreína-cininas em modelo murino e humano. Dessa forma, uma possível interação entre obesidade e sistema calicreína-cininas poderia estar envolvida nesta patologia, assim como ser um fator para desenvolvimento a sindrome metabólica. / Objectives: To study the effect of obesity on the kallikrein-kinin system through the expression of receptors B1 and B2 on humans and mice, and alterations in the synthesis and functionality of the receptor in murine tissues. Methods: white human adipose tissue and different kinds of mice tissues were collected. RNA was extracted and the kinin receptors expression analyzed through a real-time polymerase chain reaction. Tissues and organs such as stomach and aorta were used for protein extraction and physiological studies. By Western Blotting, receptor quantitation was studied. Stomach fungus and abdominal aorta were used to register isometric contractions to determine the potency and effectiveness of the agonists on obese and control mice. Increasing accumulating doses of bradykinin and des-Arg9-bradykinin, B2 and B1 receptors agonists respectively, were applied. Results: In the real-time PCR experiments, the gene expression of the B1 and B2 receptors were altered in some tissues of the animals deficient for leptin, when compared to the control. In the white adipose tissue, aorta, liver, hypothalamus and stomach, the B1 receptor expression was increased, but in cardiac tissues and brown adipose tissue, it was decreased. The expression of B2 receptor was decreased in white adipose tissue and hypothalamus. In the other studied tissues, no changes was detected in the B2 receptor expression. In humans, these receptors were altered in obese individuals. The study was performed in human adipose tissue from two different regions of depots, visceral and subcutaneous. There was a tendency of different expression in the same tissue, but from different areas. In tissues from obese mice the response to the B2 and B1 agonists, bradykinin and des-Arg9-bradykinin, respectively, had a decreasing tendency. A significant decrease was observed in stomach fundus in response to the BK agonist. Such effects can be due to the increased weight and its consequences, such as chronic inflammation or diabetes type II, which is a pathology directly related to obesity. Conclusion: expression and functional analysis show that obesity affects kinin receptors in many different mouse tissues as well as in humans. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações