Os mecanismos fisiopatológicos associados aos efeitos benéficos da reanimação guiada pela saturação venosa mista de oxigênio (SvO2) durante a sepse não são claros. Nosso objetivo foi avaliar os efeitos de um algoritmo de reanimação guiado pela SvO2 incluindo fluidos, noradrenalina e dobutamina na hemodinâmica, resposta inflamatória e estresse oxidativo cardiovascular durante um modelo experimental que se assemelha clinicamente ao choque séptico. Dezoito porcos anestesiados e cateterizados (35-45 kg) foram submetidos à peritonite por inoculação fecal (0,75 g/Kg). Depois de permanecerem hipotensos, antibióticos foram administrados e os animais foram randomizados em dois grupos: controle (n=9), com suporte hemodinâmico visando pressão venosa central de 8-12 mmHg, débito urinário de 0,5 ml/kg por hora, e pressão arterial média acima de 65 mmHg; e grupo SvO2 (n=9), com os objetivos acima referidos, além de SvO2 acima de 65%. As intervenções duraram 12 hs e incluíram Ringer Lactato e norepinefrina (ambos os grupos) e dobutamina (grupo SvO2). A resposta inflamatória foi avaliada pela concentração plasmática de citocinas, expressão de CD14 de neutrófilos, geração de espécies reativas de oxigênio e apoptose. O estresse oxidativo foi avaliado pelas concentrações de nitratos no miocárdio e no plasma, a atividade miocárdica e vascular de NAD(P)H oxidase, conteúdo de glutationa do miocárdio e expressão de nitrotirosina. A reanimação guiada por SvO2 foi associada com melhor índice sistólico, oferta de oxigênio e diurese. A sepse induziu em ambos os grupos um aumento significativo na concentração de IL-6, nas concentrações de nitrato de plasma e diminuição persistente na expressão de CD14 em neutrófilos. A apoptose e a geração de espécies reativas de oxigênio por neutrófilos não foram diferentes entre os grupos. As estratégias de tratamento não alteraram significativamente os parâmetros de estresse oxidativo. Assim, uma abordagem destinada a otimizar a SvO2 durante a sepse melhora a hemodinâmica, porém sem qualquer efeito significativo sobre a resposta inflamatória e estresse oxidativo. Os efeitos benéficos associados a esta estratégia podem estar relacionados a outros mecanismos. / The pathogenetic mechanisms associated to the beneficial effects of mixed venous oxygen saturation (SvO2)-guided resuscitation during sepsis are unclear. Our purpose was to evaluate the effects of an algorithm of SvO2-driven resuscitation including fluids, norepinephrine and dobutamine on hemodynamics, inflammatory response and cardiovascular oxidative stress during a clinically resembling experimental model of septic shock. Eighteen anesthetized and catheterized pigs (35-45 Kg) were submitted to peritonitis by fecal inoculation (0.75 g/Kg). After hypotension, antibiotics were administered, and the animals were randomized to two groups: control (n=9), with hemodynamic support aiming central venous pressure 8 to 12 mmHg, urinary output 0.5 ml/Kg per hour, and mean arterial pressure greater than 65 mmHg; and group SvO2 (n =9), with the goals above, plus SvO2 greater than 65%. The interventions lasted 12 h, and lactated Ringer\'s and norepinephrine (both groups) and dobutamine (SvO2 group) were administered. Inflammatory response was evaluated by plasma concentration of cytokines, neutrophil CD14 expression, oxidant generation, and apoptosis. Oxidative stress was evaluated by plasma and myocardial nitrate concentrations, myocardial and vascular NAD(P)H oxidase activity, myocardial glutathione content, and nitrotyrosine expression. Mixed venous oxygen saturation-driven resuscitation was associated with improved systolic index, oxygen delivery, and diuresis. Sepsis induced in both groups a significant increase on IL-6 concentrations and plasma nitrate concentrations and persistent decrease in neutrophil CD14 expression. Apoptosis rate and neutrophil oxidant generation were not different between groups. Treatment strategies did not significantly modify oxidative stress parameters. Thus, an approach aiming SvO2 during sepsis improves hemoynamics, without any significant effect on inflammatory response and oxidative stress. The beneficial effects associated with this strategy may be related to other mechanisms

Sublinhagens de camundongos AIRmax e AIRmin homozigotas para os alelos R ou S do gene Slc11a1 apresentam distinta capacidade regenerativa à perfuração de suas orelhas. Animais AIRmaxSS exibiram regeneração tecidual precoce em comparação aos animais AIRmaxRR, sugerindo que o alelo S favorece a regeneração nestes animais. Camundongos das sublinhagens AIRmin não apresentaram regeneração após perfuração de suas orelhas. Em resposta ao estímulo, animais AIRmaxSS exibiram inflamação local mais intensa e tardia do que animais AIRmaxRR, demonstrando elevados níveis de MPO e edema, e influxo celular predominantemente de neutrófilos. Ensaios de expressão gênica global demonstraram genes diferencialmente expressos entre as sublinhagens, evidenciando genes sobre-representados no tema biológico proliferação celular em ambas sublinhagens, enquanto somente nos animais AIRmaxSS ocorreu sobre-representação para resposta inflamatória nos genes ativados e para contração muscular nos genes reprimidos. Os resultados de microarray foram validados por qPCR. / Homozygous AIRmax and AIRmin sublines for Slc11a1 R and S alleles present distinct regenerative capacity to the ear hole. AIRmaxSS mice exhibited early tissue regeneration compared to AIRmaxRR animals, suggesting that the Slc11a1 S allele promotes regeneration in these animals. AIRmin sublines didnt show regeneration after ear punch. In response to the stimulus, AIRmaxSS animals exhibited more intense and later local inflammation than AIRmaxRR animals, presenting elevated levels of MPO, edema and cellular influx predominantly of neutrophils. Global gene expression analysis showed differentially-expressed genes between the sublines, in which over-represented biological theme is cell proliferation in both sublines. AIRmaxSS animals displayed over-representation of inflammatory response in up-regulated genes and of muscle contraction in down-regulated genes. Microarray results were validated by using quantitative PCR.

Neste trabalho, esclarecemos tópicos da patogenicidade de EIEC que sustentam a sua menor virulência quando comparada à S. flexneri, e mostramos a importância das células dendríticas (CD) nesse processo. Estudou-se o comportamento de EIEC e S. flexneri quando em contato com células Caco-2, avaliando-se uma cinética de expressão dos genes envolvidos na invasão e disseminação bacteriana. Em geral, todos os genes foram menos expressos em EIEC, fato corroborado pelo fenótipo de disseminação bacteriana, onde EIEC foi menos eficiente do que Shigella. Também foi avaliada a modulação da resposta inflamatória de células dendríticas intestinais murinas pela produção de citocinas, expressão de moléculas co-estimulatórias e apresentação de antígenos, após desafio das células com as bactérias. Os resultados sugerem que EIEC induz a uma resposta protetora ao hospedeiro, enquanto que Shigella estaria \"driblando\" o sistema imune, além de provavelmente super-estimular o sistema imune adaptativo, fato que poderia levar a um agravamento da doença. As ações integradas das células Caco-2, células dendríticas e estímulos bacterianos foram estudadas em co-cultura celular. Observou-se que EIEC e suas proteínas secretadas induzem a migração das CDs ao compartimento apical da co-cultura; nada foi observado quando o desafio se deu com Shigella. Também foram avaliadas as concentrações de citocinas inflamatórias no microambiente infeccioso formado. A citocina TNF-α, bem como CCL20 e MCP-1 foram mais proeminentes após estímulo com EIEC, fato que poderia explicar parcialmente a migração das CDs ao lado apical da co-cultura após estímulo com EIEC e suas proteínas secretadas. Nossas evidências experimentais indicam que a doença desencadeada por EIEC é mais restrita a um determinado local da infecção, ou seja, não é capaz de se disseminar a ponto de estender a lesão tecidual de forma mais drástica, como Shigella. Esse fenômeno pode estar associado à menor expressão de seus dos fatores de virulência e à resposta imune inata induzida no sítio de infecção, o que levaria, fatalmente, à resolução da doença. / In this study, we clarify topics of pathogenicity from EIEC that support its lower level of virulence when it is compared to S. flexneri, and we have shown the importance of dendritic cells (DC) in this process. We studied the conduct of EIEC and S. flexneri when they were in contact with Caco-2 cells and we analyzed the kinetics of the genes expression that was involved in the spread and invasion of the bacteria. In general, all genes were expressed less in EIEC, as demonstrated by the phenotype of the bacterial spread, where EIEC was less efficient than Shigella. We also analyzed the modulation of the inflammatory response by the murine intestinal dendritic cells by the production of cytokine, expression of co-stimulators molecules and antigens presentation, after the interaction of the cells with the bacteria. The results showed that EIEC induces a response that protects the host while Shigella manipulate the host intestinal innate and adaptive immune system and it probably over-stimulates the adaptive immune system which could let the disease worse. The integrated actions of Caco-2 cells, dendritic cells and bacterial stimulus, were studied in a co-culture cell. We observed that EIEC and its secreted proteins induce the migration of the DCs to the apical compartment of the co-culture; nothing was observed related to Shigella. We also evaluated the concentrations of the inflammatory cytokines at the infective micro environment that was formed. The cytokine TNF-α, as CCL20 and MCP-1 were more prominent after been stimulated with EIEC, a fact that could partially explain the migration of DCs to the apical side of the co-culture after the stimulus with EIEC and its secreted proteins. Our experimental evidence shows that the disease triggered by the EIEC is more restricted at a definite infection place, which means that it is not capable of disseminating beyond a certain point to extend the tissue\'s injury and let it worsen, as Shigella do. This phenomenon can be associated with the lower level of expression of its virulence factors and to the immune response induced in the infection site, what could finally lead to the eradication of the disease.

Brazil nut (Bertholletia excelsa, Lecythidaceae family) is the richest known food in selenium. Its consumption has demonstrated efficient in improving the lipid profile and the plasmatic selenium levels as well as to increase the activity of glutathione peroxidase (GPx) enzyme in humans. Thus, this study aims at evaluating the metabolic effects of a single portion of Brazil nut intake in healthy humans. It is a cross-over randomized controlled clinical trial with professedly healthy adults. A group of 10 volunteers were part of the study; they were from both sexes, coming from Santa Maria/RS, region. The volunteers who accept to take part in the study have consumed portions with different Brazil nut concentration, they were divided into four groups: 0, 5, 20 or 50 g. Each group collected blood before the nuts consumption and also 1, 3, 6, 9, 24, 48 hours, 5 and 30 after the Brazil nuts consumption. We then evaluated the oxidative stress markers with activity of the GPx and δ-aminolevulinic acid dehydratase enzymes, the selenium plasmatic levels, inflammatory markers such as pro-inflammatory cytokines: the tumor necrosis factor (TNF-α), interferon gamma (INF-γ) and interleukin (IL) 1,6 and 8; and the anti-inflammatory interleukin IL-10. Besides that, it was also evaluated the blood count and the hepatic and renal markers. In the Brazil nut we analyzed the selenium concentration, fatty acids and the presence of flavonoids and phenolic compounds. Volunteers biochemical parameters were normal. The results demonstrated that Brazil nut intake significantly increased selenium plasmatic levels for the volunteers who consumed 20 and 50 g of Brazil nuts in relation to basal levels with the higher peak occurring 6 hours after the Brazil nut consumption. However, the consumption of portions with different selenium concentrations for 30 days was not enough to increase the GPx erythrocyte levels activity. The higher plasmatic selenium peak was observed 6 hours after the nuts consumption. In the same way, it was observed that the volunteers who consumed a portion of 20 or 50g of Brazil nut presented improvement in the lipid profile with reduction of total cholesterol and LDL-c and, an increase of HDL-c also 6 hours after consuming the nuts until the 30th day. And furthermore, the groups that consumed a portion of 20 or 50g of Brazil nut had their serum concentration of IL-1, TNF-α, INF-γ decreased and the anti-inflammatory interleukin IL-10 increased, starting from 9 hours after consuming the nuts until the 30th day. It was possible to observe that the consumption of a 20 or 50g portion of Brazil nut in healthy humans during a 30 days period has improved the lipid profile and the inflammatory parameters for these volunteers. We can also point that the interaction of Brazil nut compounds may have contributed for the achieved results. Nevertheless, although this study demonstrated benefic effects for the consumption of a 20 or 50g of Brazil nut in a 30 days period, it is precipitated to change the recommendation of a daily 5g Brazil nut portion. Further studies are necessary to better clarify these effects. / A castanha do Brasil (Bertholletia excelsa, família Lecythidaceae) é o alimento mais rico em selênio conhecido até hoje. O seu consumo já se mostrou eficiente em melhorar o perfil lipídico e os níveis plasmáticos de selênio, além de aumentar a atividade da enzima glutationa peroxidase (GPx) em humanos. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos metabólicos do consumo de uma única porção de castanha do Brasil ao longo de 30 dias em humanos saudáveis. Tratou-se de um ensaio clínico randomizado controlado, do tipo cross-over realizado com adultos declaradamente saudáveis. Fizeram parte do estudo 10 voluntários, de ambos os sexos, provenientes da região de Santa Maria, RS. Os voluntários que aceitaram participar da pesquisa consumiram uma porção de diferentes concentrações de castanha do Brasil, sendo divididos em quatro grupos: 0, 5, 20 ou 50 g. Foi Cada grupo coletou sangue antes do consumo das castanhas e 1, 3, 6, 9, 24, 48 horas, 5 e 30 dias após o consumo de castanhas. Foram avaliados os marcadores do estresse oxidativo como atividade das enzimas GPx e δ-aminolevulinato desidratase, níveis plasmáticos de selênio, marcadores inflamatórios como citocinas pró-inflamatórias: fator de necrose tumoral (TNF-α), interferon gama (INF-γ), interleucinas (IL) 1, 6 e 8; e a interleucina anti-inflamatória IL-10. Além disso, foram avaliados o hemograma, marcadores hepáticos e renais. Na castanha do Brasil foram analisadas concentrações de selênio, ácidos graxos, presença de compostos fenólicos e flavonoides. Os parâmetros bioquímicos dos voluntários se encontraram dentro da normalidade. Os resultados demonstraram que o consumo de castanha do Brasil aumentou significativamente os níveis plasmáticos de selênio nos voluntários que consumiram 20 e 50 g de castanhas em relação aos níveis basais, tendo o maior pico nas 6 h após o consumo das castanhas. Contudo, o consumo de uma porção de diferentes concentrações de selênio durante 30 dias não foi suficiente para aumentar a atividade dos níveis eritrocitários da GPx. Do mesmo modo, foi observado que os voluntários que consumiram uma porção de 20 ou 50 g de castanha do Brasil apresentaram melhora do perfil lipídico, com diminuição do colesterol total e LDL-c e aumento do HDL-c também a partir de 6 h após o consumo até o 30º dia. Além disso, os grupos que consumiram uma porção de 20 ou 50 g de castanha do Brasil tiveram concentrações séricas da IL-1, TNF-α, INF-γ diminuídas e a interleucina anti-inflamatória IL-10 aumentada, a partir de 9h após o consumo de castanhas até o 30º dia. Pode-se observar que o consumo de uma porção de 20 ou 50 g de castanha do Brasil em humanos saudáveis em um período de 30 dias melhorou o perfil lipídico e os parâmetros inflamatórios desses voluntários. Além disso, pode-se evidenciar que a interação dos compostos da castanha pode ter contribuído para os resultados apresentados. No entanto, apesar do presente estudo mostrar efeitos benéficos do consumo de uma porção de 20 ou 50 g de castanha do Brasil em 30 dias, ainda é muito precipitado modificar a recomendação de uma porção de 5 g de castanha diária. Mais estudos são necessários para esclarecer melhor estes efeitos.

Orientadores: Andrei Carvalho Sposito, Valéria Nasser Figueiredo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T20:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_LuizSergioFernandesde_D.pdf: 19288751 bytes, checksum: ea3c4fda36c00d542fbe2d8c4f4242e8 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Introdução: A resposta de fase aguda (RFA) transforma a lipoproteína de alta densidade (HDL) em uma partícula disfuncional que pode favorecer o estresse oxidativo/inflamatório e disfunção da enzima óxido nítrico sintase endotelial (eNOS). Ao mesmo tempo, a modulação do metabolismo da HDL pela proteína de transferência de colesteril ester (CETP) parece estar associada a um potencial efeito anti-inflamatório durante a RFA relacionada a sepse. Embora esses mecanismos possam estar envolvidos na disfunção endotelial que se segue ao infarto do miocárdio com supra de ST (IMCSST), essas hipóteses nunca foram testadas em humanos. Método: Plasma foi obtido de pacientes consecutivos com IMCSST (n=116 a 180) nas primeiras 24 horas após o início dos sintomas (D1) e no 5o dia (D5), sendo utilizado para medir: proteína C reativa (PCR), nitrato/nitrito (NOx) e atividade de CETP. As lipoproteínas foram isoladas por ultracentrifugação de gradiente. A oxidabilidade de LDL co-incubada com HDL (HDLaoxLDL) e auto-oxidabilidade da HDL (HDLautox) foram medidas após a incubação com CuSO4. A atividade anti-inflamatória da HDL foi estimada pela secreção de VCAM-1 por células endoteliais da veia umbilical humana, após a incubação com TNF-?. Dilatação mediada por fluxo (FMD) foi avaliada no 30o dia (D30). Resultados: Entre os pacientes no 1o tercil de HDL-colesterol no D1 (<33mg/dL), o incremento de NOx entre D1 e D5 e a FMD ajustada para várias co-variáveis foram maiores do que naqueles no 2o (33- 42mg/dL) e 3o (>42mg/dL) tercis. Do D1 ao D5 houve redução no tamanho e no número de partículas de HDL, bem como aumento da HDLaoxLDL e HDLautox. A secreção de VCAM-1 após estímulo com TNF-? foi reduzida após co-incubação com HDL de voluntários saudáveis, de doentes com IM no D1 e D30, mas não para a HDL do D5. A oxidação da HDL foi medida pela concentração de TBARS em partículas de HDL isoladas, sendo observado aumento entre D1 e D5, e permanecendo elevado no D30. O aumento no conteúdo de TBARS na HDL foi associado com a atividade de CETP (r=0,72; p=0,014), FMD (r =-0,61; p=0,046) e HDL-C (r=0,83; p=0,004). Em paralelo, elevada atividade de CETP na admissão foi associado a menor FMD, menor biodisponibilidade de NOx e a maior incidência de morte súbita e infarto recorrente após 30 (OR=12,8; p=0,032) e 180 dias (OR=3,3; p=0,044). Conclusão: O IMCSST induz mudanças na composição química e função do HDL, bem como alterações na atividade enzimática da CETP que paralelamente contribuem para o aumento da oxidação de partículas de HDL, que se traduz em disfunção endotelial / Abstract: Introduction: Acute phase response (APR) turns high-density lipoprotein (HDL) into a dysfunctional particle that may favor oxidative/inflammatory stress and endothelial nitric oxide (NO) synthase (eNOS) dysfunction. Moreover, modulation of HDL intravascular metabolism by cholesteryl ester transfer protein (CETP) action has also been implicated as a potentially anti-inflammatory and thrombotic mechanism during APR. Although these mechanisms may be involved into endothelial dysfunction that follows acute ST-elevation myocardial infarction (STEMI), these assumptions have never been in investigated in humans. Method: Plasma was obtained in the first 24-hours after STEMI symptoms onset (D1) and after 5 days (D5) in consecutive patients (n=116 to 180), and then used to measure C-reactive protein (CRP), nitrate/nitrite (NOx) and CETP activity. Lipoproteins were isolated by gradient ultracentrifugation. The oxidizability of low-density lipoprotein incubated with HDL (HDLaoxLDL) and the HDL self-oxidizability (HDLautox) were measured after CuSO4 co-incubation. Anti-inflammatory activity of HDL was estimated by VCAM-1 secretion by human umbilical vein endothelial cells after incubation with TNF-?. Flowmediated dilation (FMD) was assessed at the 30th day (D30) after STEMI. Results: Among patients in the first tertile of admission HDL-Cholesterol (<33mg/dL), the increment of NOx from D1 to D5 and the FMD adjusted for multiple covariates were higher than in those in the second (33-42mg/dL) or third (>42mg/dL) tertiles, respectively. From D1 to D5, there was a decrease in HDL size and particle number and increase in both HDLaoxLDL and HDLautox. VCAM-1 secretion after TNF-a stimulation was reduced after co-incubation with HDL from healthy volunteers, from MI patients at D1 and D30 but not from D5. Oxidized HDL was measured by TBARS in isolated HDL particles and increased from D1 to D5, and remaining elevated at D30. The change in TBARS content in HDL was associated with CETP activity (r=0.72;p=0.014), FMD (r=-0.61;p=0.046) and HDL-C (r=0,83,p=0,004). High CETP activity at admission was associated lower FMD, lower NOx bioavailability and with the incidence of sudden death and recurrent MI at 30 days (OR 12.8;p=0.032) and 180 days (OR 3.3;p=0.044). Conclusion: STEMI induces changes in the chemical composition and function of HDL as well as changes in the enzymatic activity of CETP that in parallel contribute to increased oxidation of HDL particles, and thus inducing endothelial dysfunction / Doutorado / Patologia Clinica / Doutor em Ciências Médicas

Introdução: Os linfomas não-Hodgkin de células T periféricas (LCTP) são neoplasias raras caracterizadas pela proliferação monoclonal de linfócitos T maduros. Correspondem a 15% das malignidades linfoides e têm distribuição geográfica peculiar. Compreendem 22 entidades clínico-patológicas distintas, heterogêneas do ponto de vista clínico-epidemiológico, morfológico, fenotípico e molecular. O grupo de apresentação predominantemente nodal compreende as variantes histológicas LGCA/ALK+, LGCA/ALK-, LCTA e LCTP/SOE. Sua terapêutica se baseia em poliquimioterápicos à base de antraciclina e consolidação com transplante de células tronco hematopoiéticas autólogas (TCTH). Com exceção do LGCA/ALK+, apresentam sobrevida global em cinco anos de 30% a 40%. Devido aos desfechos desfavoráveis, estudos de perfil de expressão gênica e de metilação de genes supressores tumorais têm emergido nos últimos anos para refinar o diagnóstico destas neoplasias, melhorar o conhecimento fisiopatológico e o prognóstico e estabelecer possíveis alvos terapêuticos. Estudos preliminares com LCTP nodais indicam valor prognóstico favorável da hiperexpressão de genes de padrão inflamatório NFkB1 e IKBkB e desfavorável nos casos de supraregulação de genes de padrão proliferativo como CCNA2, TOP2A e CHEK1 e do fenótipo metilado de p15INK4b e p16INK4a. Objetivo:Avaliar o impacto da expressão relativa dos genes CCNA2, TOP2A, CHEK1, NFkB1, IKBkB e VEGF1 e da metilação dos genes p15 e p16 em população brasileira com LCTP nodais tratados com quimioterapia CHOP-símile para os desfechos de sobrevida global, sobrevida livre de progressão e sobrevida livre de doença. Métodos: A expressão gênica foi avaliada por qtPCR de amostras fixadas em formol e incluídas em parafina de 63 pacientes. A mediana de expressão dos genes foi comparada com variáveis clínicas e desfechos. PCR qualitativa metilação-específico foi usada avaliar a metilação de p15 e p16. Resultados: Com mediana de seguimento de vinte meses, as SG, SLP e SLD foram, respectivamente, 45,6%, 34,3% e 63,0% e a resposta completa de 46,0%. Em análise multivariada, ECOG >= 2 e a hiperexpressão do gene CCNA2 foram associadas à pior SG em cinco anos, nos LCTP nodais (p=0,008 e p=0,002). Em análise univariada os genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 foram associados ao pior prognóstico nos LCTP/SOE e melhor nos LGCA/ALK-. A hiperexpressão do gene VEGF1 se associou ao pior prognóstico no LGCA/ALK- e LCTA. Metilação de p15INK4b não foi encontrada nos LGCA/ALK+ e em análise multivariada foi associada a pior SLP em 5 anos nos LCTP não-ALK+ (HR: 9,88; p=0,03). O painel gênico testado não apresentou poder para discriminar as diferentes variantes histopatólogicas de LCTP nodais, porém demonstrou-se associação direta entre a intensidade de mediana de expressão desses genes e agressividade biológica nesse grupo heterogêneo de neoplasias. O significado prognóstico de imunoexpressão da proteína ALK sofreu influência das variáveis constituintes do IPI nessa coorte. Conclusão: A hiperexpressao dos genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 foram associadas a prognóstico desfavorável nos LCTP/SOE e favorável nos LGCA/ALK-. Fenótipo hipermetilado de p15INK4b não foi evento observado em LGCA/ALK+, porém foi associado a pior prognóstico nos LCTP nodais não-ALK+ / Background: Peripheral T-cell non-Hodgkin\'s lymphomas (PTCL) are rare tumors characterized by monoclonal proliferation of mature T lymphocytes; they correspond to 15% of lymphoid malignancies and have specific geographic distribution. PTCL comprise 22 distinct clinicopathologic entities, heterogeneous from the clinical and epidemiological perspective, as well as morphologic, phenotypic and molecular. The group of presentation predominantly nodal comprises the histological variants ALCL/ALK+, ALCL/ALK-, AITL and PTCL/NOS. Its treatment is based on polychemotherapy with anthracycline and consolidation with autologous hematopoietic stem cell transplantation (ASCT). With the exception of ALCL/ALK+, these tumors show overall survival at 5 years from 30% to 40%. Due to unfavorable outcomes, gene expression profile studies, as well as studies of methylation of tumor suppressor genes, have emerged in recent years in order to refine the pathological diagnosis of these cancers, improve the pathophysiological knowledge and prognosis, and establish possible therapeutic targets. Preliminary studies with nodal PTCLs indicate favorable prognostic value of overexpression of inflammatory pattern genes like NFkB1 e IKBkB, and unfavorable in the case of proliferative genes as CCNA2, TOP2A, CHEK1 and the methylated phenotype of suppressor genes p15INK4b e p16INK4a. Objectives: Assess the impact of relative expression of genes CCNA2, TOP2A, CHEK1, NFkB, IKBkB and VEGF1 and the methylation of the genes p15 and p16 in Brazilian population with nodal PTCLs treated with CHOP-like chemotherapy for the outcomes of overall survival, progression-free survival and disease-free survival. Methods: Gene expression was assessed by qtPCR of paraffin samples of 63 patients. The median gene expression was compared with clinical variables and outcomes. Qualitative methylation-specific PCR was used to assess the methylation of p15 and p16. Results: With a segment median of 20 months, the OS, PFS and DFS were, respectively, 45,6%, 34,3% and 63,0% and the complete response (CR) was 46,0%. In multivariate analysis, ECOG >= 2 and overexpression of the gene CCNA2 were associated with worse OS at 5 years in nodal PTCLs (p = 0,008 and p = 0,002). In univariate analysis, the genes CCNA2, TOP2A and CHEK1 were associated with worse prognosis in PTCL/NOS and better in ALCL/ALK negative. The overexpression of the gene VEGF1 was associated with worse prognosis in the variants AITL and ALCL/ALK negative. Methylation of the gene p15INK4b was not found in ALCL/ALK+ group, and in multivariate analysis was associated with worse 5-years PFS in the group of PTCL non-ALK+ (HR: 9,88 and p = 0,03). The gene panel tested showed no power to discriminate the different histopathology of nodal PTCL, but it showed a direct association between the median intensity of expression of these genes and biological aggressiveness in this heterogeneous group of neoplasms. The prognostic significance of immunostaining of ALK protein was influenced by IPI constituents variables in this cohort. Conclusion: The overexpression of genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 were associated with poor prognosis in PTCL/NOS and favorable in ALCL/ALK negative. Hypermethylated phenotype of gene p15INK4b was not an observed event in ALCL/ALK+, but it was associated with poor prognosis in nodal PTCL non-ALK+

Homeostase do O2 é essencial para a sobrevivência e desenvolvimento fisiológico dos organismos. A falta de O2 nos tecidos é um fator subjacente comum na morbidade e mortalidade de situações clínicas como na Síndrome do Desconforto Respiratório Agudo (ARDS). Na retomada da homeostase as células mielóides exercem suas funções especializadas nas áreas de hipóxia. A adaptação destas células nesta condição depende dos produtos do gene HIF-1<font face=\"Symbol\">&#945, fator de transcrição que responde às mudanças de O2. Neste trabalho caracterizamos os mecanismos celulares e moleculares operantes no estado de hipóxia em resposta à reação inflamatória aguda no pulmão induzida pela I/R ateria mesentérica em duas linhagens de camundongos geneticamente selecionadas para máxima (AIRmax) ou mínima (AIRmin) Resposta Inflamatória Aguda (AIR). Observamos uma alta reação inflamatória aguda em resposta a I/R. Altos níveis de expressão dos genes envolvidos em situações de hipóxia Hif-1<font face=\"Symbol\">&#945, Vhl e das citocinas Il-1<font face=\"Symbol\">&#946 e Il-6 mostraram-se relacionados com a alta AIR nos camundongos AIRmax. / Oxygen homeostasis is essential for survival and physiologic development of organisms. Lack of O2 in tissues is a common underlying factor in morbidity and mortality for numerous serious medical conditions such as the Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS). For homeostasis recovery the myeloid cells exert their functions in specialized areas of hypoxia. The adaptation of myeloid cells in low O2 tissue depends on the HIF-1<font face=\"Symbol\">&#945 gene products. Hif-1<font face=\"Symbol\">&#945 is a transcription factor that responds to O2 levels change. In this study we characterize, in two lines of mice selected for maximal (AIRmax) or minimal (AIRmin) Acute Inflammatory response (AIR), the cellular and molecular mechanisms operating in the hypoxia state during an acute inflammatory reaction in the lung parenchyma produced by mesenteric artery Ischemia. We observed an acute inflammatory reaction with high levels of Hif-1<font face=\"Symbol\">&#945 and Vhl genes expression involved in hypoxia conditions and IL-1<font face=\"Symbol\">&#946 and IL-6 genes showed related to high AIR in AIRmax mice.

Introdução: Os linfomas não-Hodgkin de células T periféricas (LCTP) são neoplasias raras caracterizadas pela proliferação monoclonal de linfócitos T maduros. Correspondem a 15% das malignidades linfoides e têm distribuição geográfica peculiar. Compreendem 22 entidades clínico-patológicas distintas, heterogêneas do ponto de vista clínico-epidemiológico, morfológico, fenotípico e molecular. O grupo de apresentação predominantemente nodal compreende as variantes histológicas LGCA/ALK+, LGCA/ALK-, LCTA e LCTP/SOE. Sua terapêutica se baseia em poliquimioterápicos à base de antraciclina e consolidação com transplante de células tronco hematopoiéticas autólogas (TCTH). Com exceção do LGCA/ALK+, apresentam sobrevida global em cinco anos de 30% a 40%. Devido aos desfechos desfavoráveis, estudos de perfil de expressão gênica e de metilação de genes supressores tumorais têm emergido nos últimos anos para refinar o diagnóstico destas neoplasias, melhorar o conhecimento fisiopatológico e o prognóstico e estabelecer possíveis alvos terapêuticos. Estudos preliminares com LCTP nodais indicam valor prognóstico favorável da hiperexpressão de genes de padrão inflamatório NFkB1 e IKBkB e desfavorável nos casos de supraregulação de genes de padrão proliferativo como CCNA2, TOP2A e CHEK1 e do fenótipo metilado de p15INK4b e p16INK4a. Objetivo:Avaliar o impacto da expressão relativa dos genes CCNA2, TOP2A, CHEK1, NFkB1, IKBkB e VEGF1 e da metilação dos genes p15 e p16 em população brasileira com LCTP nodais tratados com quimioterapia CHOP-símile para os desfechos de sobrevida global, sobrevida livre de progressão e sobrevida livre de doença. Métodos: A expressão gênica foi avaliada por qtPCR de amostras fixadas em formol e incluídas em parafina de 63 pacientes. A mediana de expressão dos genes foi comparada com variáveis clínicas e desfechos. PCR qualitativa metilação-específico foi usada avaliar a metilação de p15 e p16. Resultados: Com mediana de seguimento de vinte meses, as SG, SLP e SLD foram, respectivamente, 45,6%, 34,3% e 63,0% e a resposta completa de 46,0%. Em análise multivariada, ECOG >= 2 e a hiperexpressão do gene CCNA2 foram associadas à pior SG em cinco anos, nos LCTP nodais (p=0,008 e p=0,002). Em análise univariada os genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 foram associados ao pior prognóstico nos LCTP/SOE e melhor nos LGCA/ALK-. A hiperexpressão do gene VEGF1 se associou ao pior prognóstico no LGCA/ALK- e LCTA. Metilação de p15INK4b não foi encontrada nos LGCA/ALK+ e em análise multivariada foi associada a pior SLP em 5 anos nos LCTP não-ALK+ (HR: 9,88; p=0,03). O painel gênico testado não apresentou poder para discriminar as diferentes variantes histopatólogicas de LCTP nodais, porém demonstrou-se associação direta entre a intensidade de mediana de expressão desses genes e agressividade biológica nesse grupo heterogêneo de neoplasias. O significado prognóstico de imunoexpressão da proteína ALK sofreu influência das variáveis constituintes do IPI nessa coorte. Conclusão: A hiperexpressao dos genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 foram associadas a prognóstico desfavorável nos LCTP/SOE e favorável nos LGCA/ALK-. Fenótipo hipermetilado de p15INK4b não foi evento observado em LGCA/ALK+, porém foi associado a pior prognóstico nos LCTP nodais não-ALK+ / Background: Peripheral T-cell non-Hodgkin\'s lymphomas (PTCL) are rare tumors characterized by monoclonal proliferation of mature T lymphocytes; they correspond to 15% of lymphoid malignancies and have specific geographic distribution. PTCL comprise 22 distinct clinicopathologic entities, heterogeneous from the clinical and epidemiological perspective, as well as morphologic, phenotypic and molecular. The group of presentation predominantly nodal comprises the histological variants ALCL/ALK+, ALCL/ALK-, AITL and PTCL/NOS. Its treatment is based on polychemotherapy with anthracycline and consolidation with autologous hematopoietic stem cell transplantation (ASCT). With the exception of ALCL/ALK+, these tumors show overall survival at 5 years from 30% to 40%. Due to unfavorable outcomes, gene expression profile studies, as well as studies of methylation of tumor suppressor genes, have emerged in recent years in order to refine the pathological diagnosis of these cancers, improve the pathophysiological knowledge and prognosis, and establish possible therapeutic targets. Preliminary studies with nodal PTCLs indicate favorable prognostic value of overexpression of inflammatory pattern genes like NFkB1 e IKBkB, and unfavorable in the case of proliferative genes as CCNA2, TOP2A, CHEK1 and the methylated phenotype of suppressor genes p15INK4b e p16INK4a. Objectives: Assess the impact of relative expression of genes CCNA2, TOP2A, CHEK1, NFkB, IKBkB and VEGF1 and the methylation of the genes p15 and p16 in Brazilian population with nodal PTCLs treated with CHOP-like chemotherapy for the outcomes of overall survival, progression-free survival and disease-free survival. Methods: Gene expression was assessed by qtPCR of paraffin samples of 63 patients. The median gene expression was compared with clinical variables and outcomes. Qualitative methylation-specific PCR was used to assess the methylation of p15 and p16. Results: With a segment median of 20 months, the OS, PFS and DFS were, respectively, 45,6%, 34,3% and 63,0% and the complete response (CR) was 46,0%. In multivariate analysis, ECOG >= 2 and overexpression of the gene CCNA2 were associated with worse OS at 5 years in nodal PTCLs (p = 0,008 and p = 0,002). In univariate analysis, the genes CCNA2, TOP2A and CHEK1 were associated with worse prognosis in PTCL/NOS and better in ALCL/ALK negative. The overexpression of the gene VEGF1 was associated with worse prognosis in the variants AITL and ALCL/ALK negative. Methylation of the gene p15INK4b was not found in ALCL/ALK+ group, and in multivariate analysis was associated with worse 5-years PFS in the group of PTCL non-ALK+ (HR: 9,88 and p = 0,03). The gene panel tested showed no power to discriminate the different histopathology of nodal PTCL, but it showed a direct association between the median intensity of expression of these genes and biological aggressiveness in this heterogeneous group of neoplasms. The prognostic significance of immunostaining of ALK protein was influenced by IPI constituents variables in this cohort. Conclusion: The overexpression of genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 were associated with poor prognosis in PTCL/NOS and favorable in ALCL/ALK negative. Hypermethylated phenotype of gene p15INK4b was not an observed event in ALCL/ALK+, but it was associated with poor prognosis in nodal PTCL non-ALK+

Homeostase do O2 é essencial para a sobrevivência e desenvolvimento fisiológico dos organismos. A falta de O2 nos tecidos é um fator subjacente comum na morbidade e mortalidade de situações clínicas como na Síndrome do Desconforto Respiratório Agudo (ARDS). Na retomada da homeostase as células mielóides exercem suas funções especializadas nas áreas de hipóxia. A adaptação destas células nesta condição depende dos produtos do gene HIF-1<font face=\"Symbol\">&#945, fator de transcrição que responde às mudanças de O2. Neste trabalho caracterizamos os mecanismos celulares e moleculares operantes no estado de hipóxia em resposta à reação inflamatória aguda no pulmão induzida pela I/R ateria mesentérica em duas linhagens de camundongos geneticamente selecionadas para máxima (AIRmax) ou mínima (AIRmin) Resposta Inflamatória Aguda (AIR). Observamos uma alta reação inflamatória aguda em resposta a I/R. Altos níveis de expressão dos genes envolvidos em situações de hipóxia Hif-1<font face=\"Symbol\">&#945, Vhl e das citocinas Il-1<font face=\"Symbol\">&#946 e Il-6 mostraram-se relacionados com a alta AIR nos camundongos AIRmax. / Oxygen homeostasis is essential for survival and physiologic development of organisms. Lack of O2 in tissues is a common underlying factor in morbidity and mortality for numerous serious medical conditions such as the Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS). For homeostasis recovery the myeloid cells exert their functions in specialized areas of hypoxia. The adaptation of myeloid cells in low O2 tissue depends on the HIF-1<font face=\"Symbol\">&#945 gene products. Hif-1<font face=\"Symbol\">&#945 is a transcription factor that responds to O2 levels change. In this study we characterize, in two lines of mice selected for maximal (AIRmax) or minimal (AIRmin) Acute Inflammatory response (AIR), the cellular and molecular mechanisms operating in the hypoxia state during an acute inflammatory reaction in the lung parenchyma produced by mesenteric artery Ischemia. We observed an acute inflammatory reaction with high levels of Hif-1<font face=\"Symbol\">&#945 and Vhl genes expression involved in hypoxia conditions and IL-1<font face=\"Symbol\">&#946 and IL-6 genes showed related to high AIR in AIRmax mice.