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Studies on the vector ecology of the American dog tick, Dermacentor variabilis, (Say) (Acari: Ixodidae) in Manitoba, Canada

Yunik, Matthew 02 September 2014 (has links)
The American dog tick, Dermacentor variabilis, is an obligate blood feeding ectoparasite. This tick is a known vector of pathogens that affect the health of wildlife, humans, and livestock and is abundant in Manitoba. The etiological agent of bovine anaplasmosis, Anaplasma marginale, along with members of the spotted fever group rickettsiae are bacteria that are transmitted by this tick. I examined the distribution of these bacteria in Manitoba’s tick population using molecular techniques. During the eradication of an outbreak of bovine anaplasmosis in Manitoba, there was no evidence the bacterium had spilled over into the tick population. Rickettsia montanensis was detected with a mean prevalence of infection of 9.8% (range, 0.00 - 21.74% among localities) in 8 of 10 localities within the province. It was also determined that 19.9% (SE ±1.14) of adult questing ticks collected in one vector season overwintered through to the next spring.
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The host-pathogen relationship in Rickettsia epidemiological analysis of RMSF in Ohio and a comparative molecular analysis of four vir genes /

Carmichael, Jennifer Rose. January 2008 (has links)
Thesis (Ph. D.)--Ohio State University, 2008.
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The molecular cloning, sequence, and characterization of the putative protease IV (cjsT) in Rickettsia rickettsii /

Temenak, Joseph John, January 1998 (has links)
Thesis (Ph. D.)--University of Missouri--Columbia, 1998. / "May 1998." Typescript. Vita. Includes bibliographical references (leaves 126-138). Also available on the Internet.
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Mapeamento dos epitopos lineares de células b humanos e caninos da proteina de membrana externa h6pga4 _ricri e desenvolvimento de testes diagnósticos para rickettsia rickettsii

Alcón Chino, Mônica Elizabeth Tatiana January 2015 (has links)
Made available in DSpace on 2016-04-27T12:29:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 monica_chino_ioc_mest_2015.pdf: 4396839 bytes, checksum: 5ab00e786722dcd7034e91ef02840bd9 (MD5) 1_monica_chino_ioc_mest_2015.pdf: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A febre maculosa (Fm) é um grave problema de saúde pública no Brasil e no mundo, apresentando a bactéria Gram- negativa, Rickettsia ricketsii, como seu agente etiológico e transmitida pelo carrapato. Esse patógeno possui em sua superfície um conjunto de proteínas de membranas externas (OMP), sendo a OMP-A, um dos antígenos imunodominantes e exclusiva do grupo da Fm. Portanto, devido a inexistência de testes sorológicos sensíveis e específicos para o diagnóstico da Fm tivemos como objetivo mapear imunologicamente a OMP H6PGA4 usando uma biblioteca de peptídeos e soro de pacientes e cães com a doença e desenvolver testes diagnosticos mais específicos. Uma biblioteca de 84 peptideos com 15 residuos de comprimento cobrindo a extensão de 429 aminoácidos da proteína H6PGA4 e contendo sequências sobrepostas de nove aminoácidos foram sintetizadas pela técnica F-moc. Os peptídeos foram ligados quimicamente a uma membrana celulósica e feitos reagir independentemente com um \201Cpool\201D de soro de pacientes com febre maculosa (SP-Fm) e de soro de cães com febre maculosa (SC-Fm). Oito epitopos IgG foram identificados pelo soro de pacientes e três epitopos IgG pelo SC-Fm Todos os peptídeos foram análisados individualmente por ELISA-peptideo contra um painel de SP-Fm e SC-Fm. A análise realizada através da curva ROC indicou que os peptídeos E4 e E5 foram os mais imunogênicos com SP-Fm (especificidade de 90% e sensibilidade de 94%). Diferentemente os peptídeos E7 e E9 foram os que apresentaram especificidade e sensibilidade (p<0,05) acima de 90% e 94% com SC-Fm, repectivamente. Alternativamente, foi desenvolvido um imunosensor para diagnóstico da doença humana, baseado no peptídeo OMP3 e análise por voltametria cíclica. A acurácia foi demonstrada pela análise de 20 ciclos de varredura e a especificidade contra soros de indivíduos saudáveis. O chip imunosensor-peptideo foi reprodutível com um coeficiente de variação \226410,1% para SP-Fm. A sensibilidade de diluição do soro foi de até 1: 100 / Rocky Mountain spotted fever (Fm) is a serious public health problem in Brazil and in the world, presenting the Gram- negative bacteria, Rickettsia ricketsii, as its etiologic agent and transmitted by the bite of an infected tick. This pathogen has on its surface a set of outer membrane proteins (OMP), being the OMP-A one of the immunodominant and exclusive antigen of the Fm group. Therefore, due to the lack of sensitivity and specificity of the serologic tests for the diagnosis of Fm our objective was to map the immunologically OMP H6PGA4_ RICRI using a peptide library and serum of patients and dogs with the disease and develop more specific diagnostic tests. A library of 84 peptides with 15 residues in length covering the extension of 429 amino acids of the H6PGA4 protein and containing overlapping sequences of nine amino acids were synthesized by F-moc technique. The peptides were chemically bound to a cellulose membrane and reacted independently with serum from patients (n=5) with spotted fever (SP-Fm) and serum from dogs (n=5) with spotted fever (SC-Fm). Eight IgG epitopes were identified by the SP-Fm and three by the SC-Fm. All peptides were individually analyzed by ELISA-peptide using a panel of SP-Fm and SC-Fm The analysis of ROC curve indicated that the E4 and E5 peptides were the most immunogenic with a specificity of 90% and sensitivity of 94% for the SP-Fm. Unlike the E7 and E9 peptides were the most reactive for SC-Fm with a specificity of 90% and sensitivity of 94% (p <0.05). Alternatively, it was developed a cyclic voltametry E3 based immunesensor for the diagnosis of the human disease. The accuracy was demonstrated by the analysis of 20 cycles of scanning and the specificity against sera of healthy individuals. The peptide-imunosensor chip was reproducible with a coefficient of variation \2264 10,1% for SP-Fm. The sensitivity of serum dilution was 1: 100 / 2100-12-31
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Pesquisa de riquétsia do grupo da febre maculosa em cães no Distrito Federal, Brasil

Cruz, Laurício Monteiro 27 September 2016 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós Graduação em Saúde Animal, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-02-06T14:14:16Z No. of bitstreams: 1 2016_LaurícioMonteiroCruz.pdf: 813862 bytes, checksum: eabbec94c0e063a72c6004a7e5e0adf9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-08T21:34:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LaurícioMonteiroCruz.pdf: 813862 bytes, checksum: eabbec94c0e063a72c6004a7e5e0adf9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-08T21:34:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LaurícioMonteiroCruz.pdf: 813862 bytes, checksum: eabbec94c0e063a72c6004a7e5e0adf9 (MD5) / A Febre Maculosa Brasileira (FMB), é uma zoonose reemergente, de notificação compulsória imediata, causada pela Rickettsia rickettsii. A transmissão ocorre por picada de carrapatos da família Ixodidae infectados, principalmente, Amblyomma cajennense, embora outros vetores como as pulgas, artrópodes pertencentes a classe Insecta, ordem Siphonaptera, também possam ser agentes transmissores. O objetivo desse estudo foi pesquisar por técnica de reação de polimerização em cadeia de DNA (PCR) a ocorrência da bactéria do gênero Rickettsia do Grupo Febre Maculosa em cães recebidos na Gerência em Vigilância Ambiental de Zoonoses do Distrito Federal. Foram analisadas 197 amostras de coágulo de sangue de cães no ano de 2015. Os genes amplificados foram específicos para gene OmpA e para o gene gtlA. Os resultados encontrados foram negativos. Nesse estudo não foi possível detectar por PCR a circulação Rickettsia em cães. / The Brazilian Spotted Fever (BSF) is a reemerging zoonosis, immediately notifiable caused by Rickettsia rickettsii. Transmission is by the bite of infected ticks Ixodidae family mainly Amblyomma cajennense, although other vectors such as fleas, arthropods belonging to the class Insecta, order Siphonaptera, can also be transmitting agents. The objective of this study was to search for polymerization reaction technique on DNA chain reaction (PCR) the occurrence of the genus Rickettsia bacteria of the spotted fever group in dogs received in Management in Zoonosis Environmental Surveillance of the Federal District. Were analyzed 197 dog blood clot samples in 2015. The amplified genes were specific for the ompA gene and gtlA gene. The results were negative. In this study, it was not possible to detect by PCR Rickettsia circulation in dogs.
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Detecção sorológica e caracterização moleculares de agentes anaplasmataceae, micoplasmas hemotróficos, piroplasmas e Hepatozoon sp. em carnívoros selvagens mantidos em cativeiro no Brasil /

André, Marcos Rogério. January 2012 (has links)
Orientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Nadia Regina Pereira Almosny / Banca: Natalino Hajime Yoshinari / Banca: Jose Mauricio Barbanti Duarte / Banca: Karin Werther / Resumo: Doenças transmitidas por vetores artrópodes são mundialmente importantes para a saúde humana e animal. Recentemente, diversos estudos têm sido realizados a fim de investigar o possível papel dos animais selvagens na epidemiologia destas enfermidades. A identificação de reservatórios selvagens para estes hemoparasitas ajudaria no entendimento da epi enfermidades por eles causadas, principalmente aquelas de caráter zoonótico. O presente estudo teve como objetivo pesquisar em amostras de sangue de carnívoros selvagens mantidos em cativeiro a presença de infecção ou exposição a agentes Anaplasmataceae (Ehrlichia canis, E. chaffeensis, E. ewingii, Neorickettsia risticii, N. helminthoeca, Anaplasma platys e A. phagocytophilum), Rickettsiaceae (Orientia tsutsugamushi e Rickettsia sp. dos Grupos da Febre Maculosa e do Tifo), Babesia sp., Cytauxzoon sp. (somente para os felídeos), micoplasmas hemotróficos (Mycoplasma haemofelis, Candidatus M. haemominutum, Candidatus M. turicensis, M. haemocanis e Candidatus M. haematoparvum) e Hepatozoon sp., utilizando métodos sorológicos e moleculares. Para tal, foram amostrados 167 felídeos e 100 canídeos selvagens mantidos em cativeiro nos estados de São Paulo, Mato Grosso e Distrito Federal. Doze felídeos (7,2%) e três (3%) canídeos mostraram-se soropositivos frente ao antígeno de E. canis. Apenas um canídeo (1%) mostrou-se soropositivo para A. phagocytophilum. Nenhum animal mostrou-se soropositivo para E. chaffeensis ou N. risticii. A análise filogenética baseada em um fragmento de 350 pb do gene 16S rRNA não foi suficientemente robusta para diferenciar entre as espécies de Ehrlichia spp. Os fragmentos de DNA de Ehrlichia spp. encontrados em quatro felídeos foram posicionados em um ramo distinto daquela de E. canis e E. chaffeensis, com base... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Vector-borne diseases are worldwide important to human and animal health. Recently, several studies have been done aiming to investigate the role of wild animals in the epidemiology of these diseases. The identification of wild reservoirs for these hemoparasites would help in a better understanding of the epidemiology of these diseases, mainly that with zoonotic character. The present work aimed to investigate the presence of infection or exposure to Anaplasmataceae (Ehrlichia canis, E. chaffeensis, E. ewingii, Neorickettsia risticii, N. helminthoeca, Anaplasma platys e A. phagocytophilum) and Rickettsiaceae (Orientia tsutsugamushi and Spotted Fever and Typhus Group Rickettsia sp.), Babesia sp., Cytauxzoon sp., hemotrophic hemoplasmas (Mycoplasma haemofelis, Candidatus M. haemominutum, Candidatus M. turicensis, M. haemocanis e Candidatus M. haematoparvum) and Hepatozoon sp. in captive wild carnivores blood samples by molecular and serological methods. Blood samples were collected from 167 wild felids and 100 wild canids, maintained in captivity in zoos from São Paulo and Mato Grosso states, and Distrito Federal. Twelve felids (7.2%) and three canids (3%) were seropositive to E. canis. Only one canid (1%) was seropositive to A. phagocytophilum. None was seropositive to E. chaffeensis neither N. risticii. The phylogenetic analysis of 350bp of 16S rRNA gene was not sufficiently robust to support the differentiation of Ehrlichia species. The Ehrlichia spp. DNA found in four felids was in a distinct clade from E. chaffeensis and E. canis by omp-1 phylogenetic analysis. The phylogenetic analysis of dsb gene showed the infection by E. canis in one sampled crab-eating fox. Seventeen felids (10%) and ten canids (10%) was positive to Anaplasma spp. PCR, which was in the same clade than A. phagocytophilum and A. platys by... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Comparação entre as técnicas de exame a fresco, histopatologia e PCR, no diagnóstico da hepatopancreatite necrosante (NHP), no camarão Litopenaeus vannamei

GOMES, Giana Bastos 28 February 2008 (has links)
Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-11T14:04:45Z No. of bitstreams: 1 Giana Bastos Gomes.pdf: 379791 bytes, checksum: 0231802a10e92ced4bcef530da7a5afa (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-11T14:04:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Giana Bastos Gomes.pdf: 379791 bytes, checksum: 0231802a10e92ced4bcef530da7a5afa (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / In Brazil, the culture of Pacific white shrimp Litopenaeus vannamei achieves better results in the northeast region due to its tropical climate, suitable water quality and the existence of estuarine areas suitable for penaeid culture. However, Brazilian shrimp farming has developed rapidly and disorderly, favoring the outbreak of epizootics from varied etiologies. The Necrotizing Hepatopancreatitis is a disease caused by an intracellular bacterium from the Rickettsia order (NHPB), which stands out among shrimp bacterial epizootics responsible for high mortalities and economical losses due to its difficult control and diagnosis. In the light of this, the aim of this work is to compare two traditional techniques, the wet-mount and histopathology analyses, with a molecular method, the Polimerase Chain Reaction (PCR), for the diagnosis of NHPB in L. vannamei. One hundred and fifty four intermolt shrimp were collected from grow-out ponds of a farm located in the south of Rio Grande do Norte State/Brazil. The hepatopancreas of each animal was divided into three parts, being one readily wet-mounted and examined under a light microscope and the other two fixed and preserved for later histopathology and PCR analyses. The parameters observed in wet-mount analysis were color, amount of lipids, deformation of tubules, loosen cells and melanization; while parameters observed in histopathology were hemocytic infiltration, edema, granulomatous lesions and atrophy of tubules. PCR positive animals presented mean lower lipid levels, mean higher score for deformation of tubules and a higher percentage of individuals presenting hepatopancreatic lesions (loosen cells, melanization, hemocytic infiltration, granulomatous lesions and tubules atrophy) than PCR negative animals. No significant relation (P≥0,05) was found among PCR results and those parameters observed in wet-mount or histopathology. A significant percentage of PCR negative individuals also presented hepatopancreatic lesions and abnormalities, possibly related to other etiology rather than NHPB. This work concludes that no significant relation among wet-mount, histopathology and PCR techniques to diagnose NHPB can be assumed; therefore, neither wet-mount examination nor histopathology should be used alone as diagnostic techniques for this disease. / No Brasil, o cultivo do camarão branco do Pacífico Litopenaeus vannamei tem melhores resultados na região nordeste devido às condições climáticas, à qualidade da água e a existência de áreas estuarinas favoráveis ao cultivo de peneídeos. No entanto, a carcinicultura brasileira se desenvolveu de forma rápida e desordenada, favorecendo a manifestação de enfermidades de etiologias variadas. A Hepatopancreatite Necrosante é uma doença causada por uma bactéria intracelular da ordem Rickettsia (NHPB), que se destaca entre as enfermidades de origem bacteriana responsáveis por altas mortalidades e prejuízos econômicos por ser uma doença de difícil controle e diagnóstico. Assim sendo, objetivou-se comparar duas técnicas tradicionais, exame a fresco e histopatologia, com um método molecular, a Reação em Cadeia de Polimerase (PCR), no diagnóstico da NHPB em camarões L. vannamei. Foram coletados 154 camarões em intermuda de viveiros de engorda de uma fazenda do litoral sul do estado do Rio Grande do Norte/Brasil. O hepatopâncreas de cada animal foi retirado e dividido em três partes, sendo uma imediatamente examinada a fresco em microscópio óptico e as outras duas fixadas para posteriores análises histopatológicas e de PCR. Os parâmetros observados no exame a fresco foram coloração, quantidade de lipídeos, deformação nos túbulos, desprendimento celular e melanização, enquanto na histopatologia se observou infiltração hemocítica, edema, lesões granulomatosas e atrofia dos túbulos. Os animais PCR positivos tenham apresentado menor média na quantidade de lipídeos, maior média no grau de deformações nos túbulos e maior porcentual de indivíduos apresentando lesões no hepatopâncreas (desprendimento celular, melanização, infiltração hemocítica, lesões granulomatosas e atrofia dos túbulos) quando comparados aos indivíduos PCR negativos. Não houve relação significativa (P≥0,05) entre o resultado da PCR com as variáveis analisadas nos exames a fresco e histopatológico. Um porcentual significativo de indivíduos PCR negativos também apresentou lesões e anormalidades no hepatopâncreas, possivelmente relacionados a outras etiologias que não NHPB. Conclui-se que não há relação significativa entre as técnicas de análise a fresco, histopatologia e PCR no diagnóstico da NHPB e dessa forma, as técnicas de exame a fresco e a histopatologia isoladamente, não devem ser usadas como técnicas de diagnóstico desta doença
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Detecção e caracterização molecular de riquétsias em potenciais vetores procedentes de focos ativos de febre maculosa do Estado do Rio de Janeiro. / Detection and molecular characterization of Rickettsia in potential vectors from active focuses of spotted fever in the State of Rio de Janeiro.

Moura, Nicole Oliveira de 10 February 2012 (has links)
A Febre Maculosa Brasileira causada por riquétsias do Grupo Febre Maculosa (GFM) e transmitida por carrapatos ocorre principalmente na Região Sudeste, onde óbitos humanos são registrados. No estado do Rio de Janeiro, a letalidade devido à riquetsiose é alta, mas só recentemente investigações epidemiológicas foram realizadas, e indicaram a participação de novas espécies de ectoparasitas na circulação das riquétsias. O objetivo geral do projeto é avaliar riquétsias em ectoparasitos coletados em áreas de casos humanos de Febre Maculosa, suspeitos, compatíveis ou confirmados, em municípios do estado com focos recentemente comunicados. A detecção e análise de genes riquetsiais indicam a presença de Rickettsia bellii, Rickettsia felis e Rickettsia rickettsii, nos vetores Amblyomma cajennense, Amblyomma dubitatum, Boophilus microplus, Ctenocephalides felis e Ctenocephalides canis, sugerindo ampla distribuição geográfica de riquétsias GFM, nas regiões Serrana, Noroeste Fluminense e Médio Paraíba do estado. / Brazilian spotted fever caused by spotted fever group (SFG) rickettsiae and mainly transmitted by ticks occurs in the southeast, where human deaths are recorded. In the state of Rio de Janeiro, lethality due to rickettsial infection is high, but only recently epidemiological investigations were conducted, and indicated the participation of new species of ectoparasites in rickettsiae circulation. The project\'s overall objective is to evaluate rickettsiae in ectoparasites collected in areas of human suspected, confirmed or compatible cases of spotted fever, in cities of the State with the recently reported outbreaks. The detection and analysis of rickettsial genes indicate the presence of Rickettsia bellii, Rickettsia felis and Rickettsia rickettsii in the vectors Amblyomma cajennense, Amblyomma dubitatum, Boophilus microplus, Ctenocephalides felis and Ctenocephalides canis, suggesting broad geographic distribution of SFG rickettsiae in the regions Serrana, Noroeste Fluminense and Médio Paraíba of the State.
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Infecção experimental do carrapato Amblyomma cajennense pela bactéria Rickesttsia rickettsii, agente etiológico da febre maculosa brasileira: avaliação das transmissões transovariana e transestadial , efeito na infecção nos parâmetros biológicos do carrapato e capacidade de larvas, ninfas e adultos transmitirem a bactéria para vertebrados / Experimental infection of the tick Amblyomma cajennense with the bacterium Rickettsia rickettsii, the etiological agent of Brazilian spotted fever: evaluation of the transovarial and transstadial transmissions, effect of the infection on the biological parameters of the tick, and the capacity of larvae, nymphs, and adults to transmit the bacterium to vertebrates

Soares, João Fabio 03 February 2011 (has links)
Amblyomma cajennense é a principal espécie de carrapato incriminada na transmissão de Rickettsia rickettsii, agente etiológico da febre maculosa brasileira (FMB), no Brasil e outros países da América do Sul. O presente trabalho foi realizado com a finalidade de avaliar e quantificar a ocorrência das transmissões transovariana e transestadial de R. rickettsii em A. cajennense, verificando o efeito da infecção nos parâmetros biológicos do carrapato, e finalmente, a capacidade de larvas, ninfas e adultos transmitirem a bactéria para vertebrados. Para tal, cobaias (Cavia porcellus) infectadas experimentalmente com R. rickettsii foram infestadas com larvas e ninfas, para alimentação dos adultos de A. cajennense foram utilizados coelhos infectados. A biologia desses carrapatos expostos à R. rickettsii foi acompanhada até a geração seguinte de ninfa. Amostras de cada estágio evolutivo (larva, ninfa, adulto, ovo, larva, ninfa) foram testadas por PCR em tempo real para determinar a freqüência de carrapatos infectados por Rickettsia. Também foram quantificadas as transmissões transovariana e transestadial de R. rickettsii no carrapato A. cajennense. Cobaias e coelhos não infectados, utilizadas para infestação de cada um dos estágios parasitários do carrapato, foram avaliadas clinicamente e por sorologia, a fim de verificar a ocorrência da transmissão de R. rickettsii para esses animais. Em todas as infestações com carrapatos expostos previamente a R. rickettsii dentro de uma mesma geração, os animais adoeceram com febre alta (temperatura retal >40oC), lesão escrotal e alta letalidade, indicando a transmissão transestadial de R. rickettsii nos carrapatos, sendo esta confirmada por PCR e sorologia dos animais. Quanto à transmissão transovariana, esta ocorre em baixa quantidade nos grupos GL (infectado na fase de larva) e GN (infectado na fase de ninfa), pois das 12 cobaias (seis do grupo GL e seis do grupo GN), apenas três apresentaram sinais clínicos, e somente uma veio a óbito. Um total de oito animais foram positivos à RIFI (reação de imunofluorescência indireta), porém destes, seis apresentaram títulos baixos, entre 128 e 512, provavelmente devido a um pequeno desafio imunológico. As cobaias infestadas com larvas oriundas de fêmeas pertencentes ao grupo GA (infectado na fase adulta) não se apresentaram clinicamente alteradas nem sorologicamente reativas. Sugerindo que transmissão transovariana no grupo GA seja algo raro, pois apesar da progênie de uma das fêmeas ter sido positiva à PCR, nenhuma das cobaias infestadas com larvas ou ninfas de segunda geração manifestou quaisquer evidências do contato com R. rickettsii. Paralelamente, carrapatos não expostos a R. rickettsii (grupo controle GC) foram mantidos nas mesmas condições dos carrapatos infectados, para avaliar a existência de um possível efeito deletério da infecção por R. rickettsii na biologia do carrapato, os quais foram evidenciados com a maior mortalidade de larvas infectadas do grupo GL na primeira e na segunda gerações, além de alterações nos parâmetros biológicos das fêmeas ingurgitadas dos grupos expostos a R. rickettsii. Os resultados encontrados comprovam que a R. rickettsii é maléfica ao A. cajennense, bem como a existência de transmissão transestadial e transmissão transovariana, porém esta ultima em baixa quantidade. Isto ressalta a importância de hospedeiros amplificadores e de outros carrapatos na epidemiologia da Febre Maculosa Brasileira. / Amblyomma cajennense is the main tick species incriminated in the transmission of Rickettsia rickettsii, the etiological agent of Brazilian spotted fever, in Brazil and in other South American countries. The present work aimed to evaluate and quantify the transovarial and transstadial of R. rickettsii in A. cajennense, verifying the effect of the infection on biological parameters of the tick, and finally, to evaluate the capacity of larvae, nymphs, and adults to transmit the bacterium to vertebrates. For these purposes, guinea pigs (Cavia porcellus), experimentally infected with R. rickettsii, were artificially infested with uninfected larvae and nymphs, while adult ticks were allowed to infest experimentally-infected rabbits (Oryctolagus cuniculus). The biology of these R. rickettsii-exposed ticks was accomplished until the next generation of nymphs, always having samples of each developmental stage (F1 larva, nymph, and adult, and F2 egg, larva, and nymph) tested by real-time PCR to determine the frequency of infected ticks. In parallel, uninfected control ticks were exposed simultaneous to the same protocols. Infested guinea pigs and rabbits were evaluated clinically and for serology, to verify the occurrence of transmission of R. rickettsii to these animals. In all infestations with ticks previously exposed to R. rickettsii, within the same generation, there were infested animals that presented high fever (rectal temperature >40oC), scrotal lesion, and high lethality, indicating transstadial transmission of R. rickettsii in the ticks, confirmed by PCR on ticks and serology of the animals. Regarding transovarial transmission, it occurred at low levels in females that had been exposed to R. rickettsii during the larval stage (GL) and during the nymphal stage (GN), since only 3 out of 12 guinea pigs (six from GL, and six from GN) infested with F2 larvae presented clinical alterations, with a single lethality. However, eight animals became seropositive by IFA (immunofluorescence assay), from which six had low titers anti-R. rickettsii, between 128 and 512, possibly due to weaker immunological challenges. Guinea pigs exposed to larvae derived from GA females (exposed to R. rickettsii during the adult stage) did not ´present any clinical alteration nor became serologically positive, indication that transovarial transmission is rare in this group. Despite of a single progeny that became PCR-positive, out of others that were all negative, no guinea pig infested with F2 larvae or nymphs from GA females showed evidence that they were in contact with R. rickettsii, similarly to the control group. In relation to a possible effect of R. rickettsii in the tick survival and developmental, there were a higher mortality of infected larvae from the GL group in both first and second laboratory generations, and lower reproductive performance of engorged females from the infected groups. The results show that R. rickettsii has deleterious effects to A. cajennense. There are both trasstadial and transovarial transmissions of R. rickettsii in A. cajennense, however transovarial transmission is at low rates, highlighting the importance that amplifier hosts and other tick species should have in the epidemiology Brazilian spotted fever.
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Ocorrência de infecção por Rickettsia rickettsii em hospedeiros do carrapato-estrela no Campus \"Luiz de Queiroz\" / Ocurrence of Rickettsia rickettsii infection in Amblyomma sculptum hosts on the \"Luiz de Queiroz\" Campus

Ortiz, Felipe Trevisan 20 July 2018 (has links)
A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa causada por Rickettsia rickettsii, transmitida pelo carrapato-estrela Amblyomma sculptum no interior do estado de São Paulo, onde equinos e capivaras são utilizados como sentinelas para FMB por serem considerados hospedeiros primários deste carrapato. Objetivou-se com este trabalho verificar a ocorrência de anticorpos anti-Rickettsia rickettsii em sentinelas clássicos (equinos) e potenciais (ovinos, bovinos e gambás) para FMB que vivem em diferentes ambientes do Campus \"Luiz de Queiroz\", da Universidade de São Paulo, em Piracicaba-SP. De fevereiro de 2017 a janeiro de 2018 foram amostrados 156 hospedeiros, 48 que habitam áreas urbanas, sem a presença ou trânsito de capivaras (15 equinos e 33 gambás), 60 ovinos que frequentam pastagens sem presença de capivaras, mas adjacentes a matas ciliares ocupadas pelos roedores, e 48 que frequentam pastagens por onde transitam capivaras (31 bovinos e seis equinos) ou matas ciliares ocupadas pelos roedores (11 gambás). Quando possível, a amostragem envolveu a coleta de ectoparasitos. O soro obtido após centrifugação do sangue colhido foi analisado em duas etapas, triagem e titulação, pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Na triagem todas as amostras foram testadas contra R. rickettsii, e consideradas positivas se apresentassem título de anticorpos >= 64. As amostras positivas foram diluídas na etapa de titulação e testadas contra R. rickettsii, R. parkeri, R. bellii, R. ambyommatis e R. rhipicephali para determinação do título máximo de anticorpos para cada espécie. Das 156 amostras testadas, 15 estavam soropositivas, 1/60 ovinos, 1/31 bovinos, 7/21 equinos e 6/44 gambás; os títulos finais variaram de 64 a 4.096. Foi possível determinar o possível antígeno envolvido em reação homóloga (PAERH) em seis amostras, um equino (R. bellii) e quatro gambás e um ovino (R. rickettsii). Foram registrados os carrapatos Amblyomma ovale, Amblyomma dubitatum, Amblyomma sculptum, Dermacentor nitens e Rhipicephalus microplus, e as pulgas Ctenocephalides felis e Siphonaptera: Rhopalopsyllidae cf. Rhopalopsyllus nos hospedeiros amostrados. Conclui-se que equinos e gambás podem ser utilizados como sentinelas para FMB no Campus \"Luiz de Queiroz\", mas os ovinos não. Não foi possível concluir se os bovinos podem ser utilizados com esta função. R. bellii, ou um microrganismo muito semelhante, ocorre na área urbana do Campus \"Luiz de Queiroz\" e é capaz de infectar cavalos. R. rickettsii, ou um microrganismo muito semelhante, ocorre no Campus \"Luiz de Queiroz\" em áreas de permanência e trânsito de capivaras / Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease caused by Rickettsia rickettsii, transmitted by the tick Amblyomma sculptum outside the metropolitan region in the State of São Paulo, where horses and capybaras are used as sentinels for BSF as they are considered primary hosts for this tick. This survey aimed to verify the occurrence of antibodies against Rickettsia rickettsii in sentinels (horses) and potential sentinels (sheep, cattle and opossums) for BSF that lives in different environments of the \"Luiz de Queiroz\" Campus, University of São Paulo, in Piracicaba, SP, Brazil. A total of 156 host were sampled between February of 2017 and January of 2018; 48 that live in urban areas, with no presence or transit of capybaras (15 horses and 33 opossums), 60 sheep that regularly graze on capybara-free pastures adjacent to a riparian forest occupied by these rodents, and 48 that occupy, cross or regularly graze on pastures (31 cows and six horses) or riparian forests (11 opossums) that are areas used by capybaras. Whenever possible, host sampling included ectoparasites collection. Sera obtained after centrifugation of the collected blood was analyzed in two steps, screening and titration, by the indirect immunofluorescence assay technique (IFA). All samples were tested against R. rickettsii during the screening, and those that presented antibodies titers >= 64 were considered positive. Positive samples were diluted during titration and tested against R. rickettsii, R. parkeri, R. bellii, R. ambyommatis and R. rhipicephali for determination of maximum antibodies titers for each species. Of the 156 tested samples, 15 were seropositive, 1/60 sheep, 1/31 cows, 7/21 horses and 6/44 opossums; antibodies endpoint titers ranged from 64 to 4.096. Possible antigen involved in a homologous reaction (PAIHR) was determined for six samples, one horse (R. bellii), four opossums and one sheep (R. rickettsii). The ticks Amblyomma ovale, Amblyomma dubitatum, Amblyomma sculptum, Dermacentor nitens and Rhipicephalus microplus, and the fleas Ctenocephalides felis and Siphonaptera: Rhopalopsyllidae cf. Rhopalopsyllus were collected from the sampled hosts. Results showed that horses and opossums may be used as sentinels for BSF in the \"Luiz de Queiroz\" Campus, but the sheep do not. It wasn\'t possible to determine if the cows may be used as sentinels. R. bellii, or a very closely related microorganism, occurs in the urban area of the \"Luiz de Queiroz\" Campus and is capable to infect horses. R. rickettsii, or a very closely related microorganism, occurs in capybara-transit areas of the \"Luiz de Queiroz\" Campus

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