Em janeiro de 2005, foram coletados 31 carrapatos adultos da espécie Amblyomma triste em uma propriedade rural da CESP, localizada no município de Paulicéia, Estado de São Paulo. Três carrapatos foram positivos para o teste de hemolinfa, demonstrando estruturas compatíveis com riquétsias no interior de hemócitos. Dois desses carrapatos foram submetidos à tentativa de isolamento de riquétsias em células Vero, através da técnica de Shell vial. Um isolado foi obtido com sucesso, estando já estabelecido em cultivo celular, com várias passagens e partidas congeladas. Do restante do carrapato utilizado para este isolamento, foi extraído o DNA e este foi submetido a PCR para um fragmento do gene ompA de Rickettsia spp. Foi realizada a caracterização molecular do isolado, através do sequenciamento genético de quatro genes de Rickettsia spp: gltA, htrA, ompA e ompB e os genes apresentaram 99,8 a 100% de identidade com as seqüências correspondentes de Rickettsia parkeri no GenBank. Todos os 31 carrapatos tiveram o DNA extraído, sendo processados pela PCR para um fragmento do gene gltA e para um fragmento do gene ompA. Três (9,7%) foram positivos a PCR para o gene gltA e os mesmos 3 carrapatos foram positivos para o ompA, sendo exatamente os 3 carrapatos previamente positivos ao teste de hemolinfa). O material amplificado destes 3 carrapatos para o fragmento de gene ompA foi processado para o sequenciamento automático de nucleotídeos resultando em 100% de identidade com a seqüência correspondente de Rickettsia parkeri no GenBank. Este trabalho relata pela primeira vez a bactéria R. parkeri no Brasil, o que foi confirmado pelo isolamento do agente em cultivo de células / In January 2005, 31 adult free-living ticks of the species Amblyomma triste were collected in the CESP rural farm located in the city of Paulicéia, state of São Paulo, Brazil. In the laboratory, 3 of these ticks were positive by the hemolymph test, showing structures compatible with Rickettsia within the hemocytes. Attempts to isolate Rickettsia were performed in two hemolymph-positive ticks by the Shell-vial technique. One isolate was successful obtained, being established in Vero cell culture, with several passages performed. DNA extracted from infected cells was submitted to PCR targeting fragments of four Rickettsia genes: gltA, htrA, ompA and ompB. DNA sequences obtained from PCR products of these four genes showed 99.8 to 100% of similarity with corresponding sequences of Rickettsia parkeri in the Genbank. DNA was extracted from all 31 ticks and processed by PCR targeting a fragment of the rickettsial gltA gene and a fragment of ompA gene. Three (9.7%) ticks were positive for both genes, being the same ticks previously positive by the hemolymph test. PCR products of these ticks were sequenced, being 100% identical to the corresponding sequence of Rickettsia parkeri in GenBanK. This study perfoms the first report of R. parkeri in Brazil, confirmed by the isolation of the agent in cell culture

Considered the most abundant carnivore in the world, the domestic dog can cause negative impacts when he is present in forested areas. Dogs can develop different roles in the environment in which they live as hunter, shepherd, guardian, companion and even more affective relationships in which the dog is seen like a family member. These roles are closely linked to the way of life of their owners. In Caraguatatuba City, dogs that live in the vicinity of Serra do Mar, an important Atlantic Rainforest Conservation Unit, are commonly parasitized by Amblyomma ovale. From data obtained through three years of monitoring in three different areas around the Serra do Mar State Park Caraguatatuba City, it has been possible to generate results that help in understanding the causes and consequences of the dog presence in the surroundings of the forest as well as its participation in the epidemiology of riquetsiosis and rangeliosis. Comparing the lifestyle of the owners and the role of their dogs in the environment in which they are inserted, it has been possible to estimate the risk of transmission of Rickettsia parkeri to these dogs. In addition, through the molecular analysis of the A. ovale individuals collected on dogs and also in free life, it has been possible to infer about the population structure and genetics of this parasite in Serra do Mar, which is an important ecological corridor for the Atlantic Rainforest wild fauna. / Considerado o carnívoro mais abundante do mundo, o cão doméstico pode causar impactos negativos quando presente em áreas florestadas. Cães podem desenvolver diferentes papéis no ambiente em que vivem desde caçador, pastor, guardião, companheiro e até mesmo relações mais afetivas em que o cão é visto como um membro da família. Estes papéis estão intimamente ligados ao modo de vida de seus proprietários. Em Caraguatatuba, cães que vivem no entorno da Serra do Mar, uma importante Unidade de Conservação da Mata Atlântica, são comumente parasitados por Amblyomma ovale. A partir de dados obtidos através de três anos de monitoramento em três diferentes áreas do entorno do Parque Estadual Serra do Mar Núcleo Caraguatatuba, foi possível gerar resultados que auxiliam no entendimento das causas e consequências da presença do cão no entorno da floresta e sua participação na epidemiologia da riquetsiose e rangeliose. Comparando o estilo de vida dos proprietários e o papel do cão no ambiente em que ele está inserido, foi possível estimar o risco de transmição de Rickettsia parkeri para estes cães. Além disso, através da análise molecular dos indivíduos de A. ovale coletados em cães e também coletados em vida livre, foi possível inferir sobre a estrutura e genética populacional deste parasita na Serra do Mar em Caraguatatuba, importante corredor ecológico para a fauna silvestre da Mata Atlântica.

No início de 2010, uma nova riquetsiose foi descrita em um paciente humano, que foi infestado por carrapato em Barra do Una, no litoral sul do Estado de São Paulo. Técnicas moleculares indicaram que esta nova doença foi causada por uma nova cepa de riquétsia, que foi denominada de Rickettsia parkeri cepa Mata Atlântica. Estudos mais recentes demonstraram que 10 a 15% dos carrapatos Amblyomma ovale, coletados em áreas de Mata Atlântica nos estados de São Paulo (incluindo a área do caso índice da infecção humana em Barra do Una) e Santa Catarina estavam infectados com R. parkeri cepa Mata Atlântica. Desta forma, o presente estudo iniciou-se a partir de fêmeas ingurgitadas de A. ovale, coletadas de cães naturalmente infestados em Barra do Una. No laboratório, foi constatado por PCR que parte dessas fêmeas (6,25%) estavam naturalmente infectadas por R. parkeri cepa Mata Atlântica; os ovos dessas fêmeas foram utilizados para formar uma colônia de A. ovale naturalmente infectada por R. parkeri. Ovos de fêmeas não infectadas, foram utilizados para formar uma colônia não infectada. As duas colônias foram estudadas de forma paralela no laboratório, visando analisar e quantificar a transmissão transestadial e transovariana de R. parkeri cepa Mata Atlântica e a competência vetorial do A. ovale. As infestações por larvas foram realizadas em roedores (Calomys callosus), enquanto ninfas e adultos foram alimentados em Oryctolagus cunicullus (coelho doméstico). Amostras de 10 indivíduos de cada uma das fases (larvas, ninfas e adultos F1, ovos, larvas e ninfas F2) foram testadas individualmente por um sistema de taqman real-time PCR, para presença de Rickettsia spp. Os soros sanguíneos de todos animais infestados foram testados por imunofluorescência indireta com antígeno de R. parkeri, no dia zero e 21 dias após a infestação por carrapatos, a fim de verificar soroconversão para antígenos de Rickettsia. Os resultados obtidos demonstraram 100% de transmissões transestadial (larva para ninfas e ninfas para adultos) e transovariana de R. parkeri em A. ovale, uma vez que todas as amostras de ovos, larvas, ninfas e adultos do grupo infectado foram positivas na PCR. Larvas e ninfas de A. ovale demonstraram alta competência vetorial, pois todos animais infestados por esses estágios infectados soroconverteram para R. parkeri. Por outro lado, adultos foram parcialmente competentes, pois apenas metade dos coelhos soroconverteu após ser infestada com carrapatos adultos infectados. Nenhum carrapato do grupo controle foi positivo na PCR, assim como nenhum animal deste grupo soroconverteu para R. parkeri. Fêmeas infectadas por R. parkeri cepa Mata Atlântica tiveram parâmetros reprodutivos inferiores aos das fêmeas não infectadas, indicando algum efeito deletério da infecção por este agente sobre os carrapatos. Os resultados sugerem a importância do carrapato A. ovale na epidemiologia desta nova riquetsiose brasileira, assim como sugerem uma capacidade vetorial de A. ovale para R. parkeri cepa Mata Atlântica, uma vez que este carrapato é frequentemente encontrado infestando humanos no bioma de Mata Atlântica. / In early 2010, a novel rickettsiosis was described in a human patient that had been infested by a tick in Barra do Una, southern coast of the state of São Paulo, Brazil. Molecular tests indicated that the disease was caused by a new rickettsial strain, named Rickettsia parkeri strain Atlantic rainforest. More recent studies demonstrated that 10 to 15% of Amblyomma ovale ticks, collected in Atlantic rainforest areas in the states of São Paulo (including the human index case area in Barra do Una) and Santa Catarina were infected with R. parkeri strain Atlantic rainforest. Within this context, the present study started with A. ovale engorged females collected from naturally infested dogs in Barra do Una. In the laboratory, it was shown by PCR that part of these females (6.25%) were naturally infected with R. parkeri strain Atlantic rainforest; the eggs of these females were used to form a lab colony of A. ovale, naturally infected by R. parkeri. Eggs laid by uninfected females were used to form an uninfected tick colony. Both colonies were evaluated in parallel in the lab, aiming to verify and quantify the transstadial and transovarian transmissions of R. parkeri strain Atlantic rainforest in A. ovale ticks, and the vector competence of the different parasitic stages of this tick. Larval infestations were done on rodents (Calomys callosus), while nymphal and adult infestations were done on rabbits (Oryctolagus cunicullus). Samples of 10 individuals of each tick stage (F1 larvae, nymphs and adults; F2, eggs, larvae, and nymphs) were tested individually by a taqman real-time PCR targeting the genus Rickettsia. Blood serum samples from all infested animals were tested through immunofluorescence assay employing R. parkeri antigens, on zero and 21 days post tick infestation, in order to verify seroconversion to rickettsial antigens. The results demonstrated 100% of transstadial (larvae to nynphs; nymphs to adults) and transovarian transmissions of R. parkeri in A. ovale ticks, since all egg, larval, nymphal, and adult samples from the infected colony were PCR-positive. A. ovale larvae and nymphs demonstrated high vector competence because all animals infested by these tick infected stages seroconverted to R. parkeri. On the other hand, adult ticks were partially competent since only half of the animals seroconverted after being infested by infected adult ticks. None tick of the uninfected control colony was PCR positive, as well as no animal from this group seroconverted to R. parkeri. Tick females infected by R. parkeri strain Atlantic rainforest had lower reproductive parameters than uninfected females, indicating some deleterious effect of the infection on these ticks. The results suggest an important role of A. ovale ticks in the epidemiology of this novel Brazilian rickettsiosis, and also suggest that A. ovale are capable to transmit R. parkeri strain Atlantic rainforest under natural conditions, since this tick is frequently found infesting humans on the Atlantic rainforest biome.

Com o objetivo de obtermos isolados de Rickettsia spp. para confirmar as evidências sobre o papel do A. dubitatum e do A. triste na transmissão de riquétsia do GFM no Brasil e Uruguai, respectivamente, realizou-se em áreas endêmicas para febre maculosa nesses dois países, a avaliação da presença de riquétsia em carrapatos da espécie A. dubitatum no município de Pedreira, estado de São Paulo e em carrapatos da espécie A. triste, em uma área suburbana no sudeste do Uruguai, além da tentativa de isolamento em cultivo de células Vero e posterior caracterização molecular de isolados provenientes dessas duas espécies de carrapatos. Foram coletados um total de 841 (367 machos e 474 fêmeas) carrapatos adultos da espécie A. dubitatum e 78 (25 machos e 53 fêmeas) amostras de A. triste, os quais foram submetidos ao teste de hemolinfa. Todas as amostras foram submetidas à extração de DNA e testadas pela técnica da PCR para o gene gltA, presente em todas as espécies de riquétsias. Dos 841 A. dubitatum colhidos, em 153 (18,18%) amostras de hemolinfa foram observados organismos morfologicamente compatíveis com riquétsias, 452 foram negativas (53,74%) e 236 (28,06%) amostras de carrapatos foram inconclusivas. Todas as 78 amostras de carrapatos da espécie A. triste provenientes do Uruguai foram negativas no teste de hemolinfa. Dos 841 A. dubitatum, um total de 378 (44,94%) amostras foram positivas para o gene gltA e, posteriormente, foram testadas para o gene ompA, sendo que nenhuma das amostras foi positiva. Dos 378 A. dubitatum positivos na PCR, o produto amplificado de 93 foi seqüenciado, sendo todos identificados como Rickettsia bellii de acordo com seqüências disponíveis no GenBank. Das 78 amostras de carrapatos da espécie A. triste, provenientes do Uruguai, duas amostras, denominadas de carrapatos #5 e #35, foram positivas na PCR e, submetidas à tentativa de isolamento em células Vero, pela técnica de \"shell vial\". O estabelecimento do isolado de riquétsia somente foi obtido com sucesso do carrapato #5, sendo este isolado designado de At#5-URG, o qual foi depositado como amostra de referência em nosso laboratório. Amostras de DNA do isolado At#5-URG foram testadas para uma bateria de oligonucleotídeos iniciadores objetivando a amplificação de fragmentos de mais três genes de riquétsias: gltA, ompB e omp, os quais foram, posteriormente seqüenciados e os fragmentos de 1.084, 775 e 491 nucleotídeos dos genes gltA, ompB e ompA, respectivamente, foram obtidos e mostraram 100% de identidade com as seqüências correspondentes disponíveis no GenBank para a cepa Maculatum de Rickettsia parkeri dos EUA. / Owing to the potential role of the tick Amblyomma dubitatum and Amblyomma triste in the transmission of the Spotted Fever Group (SFG) Rickettsia, this study evaluated infection by Rickettsia in ticks collected in Brazil and Uruguay, where rickettsial infection is endemic. A total of 841 (367 males e 474 females) A. dubitatum adult ticks were collected in Pedreira, an area of Brazilian Spotted Fever (BSF) endemicity in the state of São Paulo, and 78 adult ticks (25 males, 53 females) identified as A. triste were collected from vegetation in the suburban area of Toledo Chico, southern Uruguay. At the laboratory, all samples were individually processed by the hemolymph test with Gimenez staining and PCR targeting a fragment of the rickettsial gene gltA, present in all Rickettsia species. From 841 A. dubitatum ticks tested by the hemolymph test, 153 (18.18%) samples were positive, 452 (53.74%) were negative, and 236 (28.06%) were inconclusive. All 78 samples of A. triste ticks from Uruguay were negative by the hemolymph test. All 841 samples of A. dubitatum were submitted to PCR, being 378 (44.94%) positive and afterwards tested by PCR targeting a 150-bp fragment of the ompA (a major outer membrane protein A present only in SFG Rickettsia), being all samples negative. From the 378 PCR-positive samples of A. dubitatum, DNA sequence was determined for 93 samples, being all identified as Rickettsia bellii according to GenBank available sequences. For the A. triste samples, only 2 ticks (1 male, 1 female) yielded expected amplicons by PCR. Rickettsia isolation in cell culture was attempted by using the shell vial technique from these two PCR-positive ticks. Rickettsiae were successfully isolated and established in Vero cell culture from the female tick. This isolate, designated as At#5-URG, has been deposited as a reference strain in the Rickettsial Collection of Faculty of Veterinary Medicine in the University of São Paulo. DNA extracted from infected cells of the third passage was tested by a battery of PCRs that used primer pairs targeting fragments of 3 rickettsial genes: gltA, ompB (a major outer membrane protein B), and ompA. PCR products of expected size were obtained in all reactions and subjected to DNA sequencing. Fragments of 1,084, 775, and 491 bp of the gltA, ompB, and ompA genes, respectively, were obtained and showed 100% identity to the corresponding sequences available in GenBank for the Maculatum strain of Rickettsia parkeri from United States.

Ehrlichiose Monocítica Humana, Anaplasmose Granulocítica Humana, Babesiose, Febre Maculosa das Montanhas Rochosas e Doença de Lyme são doenças transmitidas por carrapatos encontradas no Hemisfério Norte. No Brasil, a DL-símile chamada de Síndrome Baggio-Yoshinari (SBY) é descrita, mas as características epidemiológicas, clínicas e laboratoriais são diferentes da DL original. Nos Brasileiros, as outras doenças transmitidas por carrapatos são pouco estudadas. O objetivo desta pesquisa é estudar a possibilidade de co-infecção entre a SBY e outras doenças transmitidas por carrapatos, através de ensaios laboratoriais para Ehrlichia spp, Babesia spp and Rickettsia spp em um grupo de 70 pacientes com SBY. Dez pacientes estavam na fase inicial da doença e 60 no estágio latente. Eritema Migratório (EM) esteve presente em 27 (38,6%), artrite em 26 (37,1%), febre em 13 (18,5%), cefaléia em 29 (41,4%), artralgia em 36 (51,4%), mialgia em 51 (72,8%), fadiga em 38 (54,3%), meningite em 4 ((5,7%), neurite craniana em 8 (11,4%), radiculopatia periférica em 9 (12,8%), encefalomielite em 4 (5,7%), cardiopatia em 7 (10%), lesão de pele atípica em 10 (14,3%) e anemia em 10 (14,3%). O ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) para Borrelia burgdorferi foi positivo em 21 (30%) pacientes do grupo da SBY e apenas em 3 dos 50 (6%) indivíduos do grupo controle (p = 0.01). Usando o método de Western blotting (WB) modificado para antígenos da B. burgdorferi, trinta e cinco (50%) dos pacientes com SBY foram positivos, e 2 (4%) indivíduos do grupo controle. (p0,001). A Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) (IgG) apresentou resultados significativos para três das cinco espécies de Rickettsia spp analisadas: R. parkeri (8,6%) (p = 0,032), R. amblyommii (22.8%) ( p = 0,031) e para R. bellii (8.6%) ( p = 0,032). O Teste do Qui-quadrado foi usado para análise estatística. . Poucos pacientes apresentaram positividade para antígenos de B. bovis (RIFI e ELISA) e B. equi (RIFI). A RIFI para antígenos da Ehrlichia canis foi positiva apenas para um (1.4%) paciente com SBY. Isto nos leva a concluir que pacientes com SBY apresentaram co-infecção com R. parkeri, R.. amblyommi e R. belli, sugerindo que a SBY possa ser transmitida pelos mesmos carrapatos responsáveis pela transmissão destas Rickettsias. / Human Monocytic Ehrlichiosis, Human Granulocytic Anaplasmosis, Babesiosis, Rocky Mountain Spotted Fever and Lyme Disease (LD) are tick-borne diseases commonly found in the North hemisphere. In Brazil, a LD-like illness called Baggio- Yoshinari Syndrome (BYS) is described, but epidemiological, clinical and laboratorial features are different from the original LD. In Brazilian humans, the other tick-borne diseases are less frequently studied. The aim of this survey was to verify the possibility of co-infections between BYS and other tick-borne diseases, using laboratorial assays to Ehrlichia spp, Babesia spp and Rickettsia spp in a group of 70 patients with BYS. Ten patients were at initial stage of the disease and 60 patients were in a latent stage. Erythema migrans (EM) was present in 27 patients (38.6%), arthritis in 26 (37,1%), fever in 13 (18.5%), headache in 29 (41.4%) arthralgia in 36 (51.4%), myalgia in 51 (72,8%), fatigue in 38 (54,3%), meningitis in 4 (5.7%), cranial neuritis in 8 (11.4%), peripheral radiculopathy in 9 (12.8%), encephalomyelitis in 4 (5.7%), cardiopathy in 7 (10%), atypical skin eruptions in 10 (14.3%) and anemia in 10 patients (14.3%). ELISA (Enzyme Linked Immunossorbent Assay) for Borrelia burgdorferi antigens was positive in 21 patients (30%) of BYS group, while only 3 (6%) from 50 normal individuals had positive reactions (p = 0.01). Using the modified Western Blotting (WB) method for B. burgdorferi antigens, 35 (50%) of the BYS patients were positive, and 2 normal individuals (4%) from the control group (p 0,001). Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) (IgG) presented positive results for three of five species of Rickettsia tested: R. parkeri (8, 6%) (p = 0,032), R. amblyommii (22.8%) (p = 0,031) and for R. bellii (8.6%) (p = 0,032). Chi-square test was used for the statistic analysis. A few patients developed a positive reaction to B. bovis (IFA and ELISA) and B. equi antigens (IFA). IFA for Ehrlichia canis antigens was positive in only one patient (1.4%) with BYS. It was possible to conclude that BYS patients presented a coinfection with R. parkeri, R. amblyommi and R. bellii, suggesting that BYS can be vectored by the same ticks responsible for the transmission of Rickettsial agents.

As riquétsias são pesquisadas por muitos grupos em diversas regiões do mundo, pois podem infectar os humanos e animais. No período de julho de 2008 a junho de 2009 no Núcleo Itutinga Pilões, localizado no Parque Estadual da Serra do Mar, foram realizadas coletas mensais de carrapatos (455 adultos, 1939 ninfas e 46 bolos de larvas) distribuídas por seis trilhas distintas. No presente estudo constatou-se a existência de cerca de treze espécies de carrapatos no local (A. aureolatum, A. brasiliense, A. dubitatum, A. fuscum, A. incisum, A. longirostre, A. naponense, A. nodosum, A. ovale, Ixodes aragaoi, Ixodes loricatus. Haemaphysalis juxtakochi e Riphicephalus sanguineus) As espécies de maior expressão foram: A. incisum, frequentemente presente em antas, seguido por H. juxtakochi e A. ovale. Encontramos R. parkeri , R. belliie R. amblyommii. Em A. ovale infectados com a R. parkeri, tivemos uma prevalência de 11,7% para o ambiente e 15,3% para os carrapatos coletados em hospedeiros cães. O R. sanguineus que se coalimentou com A. ovale em cães também estava infectado com R. parkeri. Podemos concluir que indivíduos que freqüentem a região onde encontramos o A. ovale infectado pode adquirir bactérias do Grupo Febre Maculosa. / Rickettsia has been receiving attention from several researcher groups around the world, once these bacteria can infect animals and human being. In this study, monthly, during the period of July, 2008 and June, 2009, was carried out at Núcleo Itutinga Pilões, localized in the Parque Estadual da Serra do Mar, a field research when ticks were collected from vegetation in six specific trials into the forest, overall were collected 455 adults, 1,939 nymphs and 46 larval agglomerates ticks. This study found out 13 different tick species (A. aureolatum, A. brasiliense, A. dubitatum, A. fuscum, A. incisum, A. longirostre, A. naponense, A. nodosum, A. ovale, Ixodes aragaoi, Ixodes loricatus. Haemaphysalis juxtakochi e Riphicephalus sanguineus). The majority found species were: A. incisum, H. juxtakochi and A. ovale. Three Rickettsia species were found naturaly infecting ticks in the park: R. parkeri, R. bellii e R. amblyommii. A. ovale ticks showed a R. parkeri infection prevalence of 11.7% for free-living ticks and 15.3% for ticks collected upon dogs. Ticks R. sanguineus collected feeding upon the same dogs as A. ovale were also found infected with R. parkeri. Since A. ovale ticks can attach onto human being, we predict that visitors of this park might be exposed to Spotted Fever Group Rickettsia infected ticks.

Ehrlichiose Monocítica Humana, Anaplasmose Granulocítica Humana, Babesiose, Febre Maculosa das Montanhas Rochosas e Doença de Lyme são doenças transmitidas por carrapatos encontradas no Hemisfério Norte. No Brasil, a DL-símile chamada de Síndrome Baggio-Yoshinari (SBY) é descrita, mas as características epidemiológicas, clínicas e laboratoriais são diferentes da DL original. Nos Brasileiros, as outras doenças transmitidas por carrapatos são pouco estudadas. O objetivo desta pesquisa é estudar a possibilidade de co-infecção entre a SBY e outras doenças transmitidas por carrapatos, através de ensaios laboratoriais para Ehrlichia spp, Babesia spp and Rickettsia spp em um grupo de 70 pacientes com SBY. Dez pacientes estavam na fase inicial da doença e 60 no estágio latente. Eritema Migratório (EM) esteve presente em 27 (38,6%), artrite em 26 (37,1%), febre em 13 (18,5%), cefaléia em 29 (41,4%), artralgia em 36 (51,4%), mialgia em 51 (72,8%), fadiga em 38 (54,3%), meningite em 4 ((5,7%), neurite craniana em 8 (11,4%), radiculopatia periférica em 9 (12,8%), encefalomielite em 4 (5,7%), cardiopatia em 7 (10%), lesão de pele atípica em 10 (14,3%) e anemia em 10 (14,3%). O ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) para Borrelia burgdorferi foi positivo em 21 (30%) pacientes do grupo da SBY e apenas em 3 dos 50 (6%) indivíduos do grupo controle (p = 0.01). Usando o método de Western blotting (WB) modificado para antígenos da B. burgdorferi, trinta e cinco (50%) dos pacientes com SBY foram positivos, e 2 (4%) indivíduos do grupo controle. (p0,001). A Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) (IgG) apresentou resultados significativos para três das cinco espécies de Rickettsia spp analisadas: R. parkeri (8,6%) (p = 0,032), R. amblyommii (22.8%) ( p = 0,031) e para R. bellii (8.6%) ( p = 0,032). O Teste do Qui-quadrado foi usado para análise estatística. . Poucos pacientes apresentaram positividade para antígenos de B. bovis (RIFI e ELISA) e B. equi (RIFI). A RIFI para antígenos da Ehrlichia canis foi positiva apenas para um (1.4%) paciente com SBY. Isto nos leva a concluir que pacientes com SBY apresentaram co-infecção com R. parkeri, R.. amblyommi e R. belli, sugerindo que a SBY possa ser transmitida pelos mesmos carrapatos responsáveis pela transmissão destas Rickettsias. / Human Monocytic Ehrlichiosis, Human Granulocytic Anaplasmosis, Babesiosis, Rocky Mountain Spotted Fever and Lyme Disease (LD) are tick-borne diseases commonly found in the North hemisphere. In Brazil, a LD-like illness called Baggio- Yoshinari Syndrome (BYS) is described, but epidemiological, clinical and laboratorial features are different from the original LD. In Brazilian humans, the other tick-borne diseases are less frequently studied. The aim of this survey was to verify the possibility of co-infections between BYS and other tick-borne diseases, using laboratorial assays to Ehrlichia spp, Babesia spp and Rickettsia spp in a group of 70 patients with BYS. Ten patients were at initial stage of the disease and 60 patients were in a latent stage. Erythema migrans (EM) was present in 27 patients (38.6%), arthritis in 26 (37,1%), fever in 13 (18.5%), headache in 29 (41.4%) arthralgia in 36 (51.4%), myalgia in 51 (72,8%), fatigue in 38 (54,3%), meningitis in 4 (5.7%), cranial neuritis in 8 (11.4%), peripheral radiculopathy in 9 (12.8%), encephalomyelitis in 4 (5.7%), cardiopathy in 7 (10%), atypical skin eruptions in 10 (14.3%) and anemia in 10 patients (14.3%). ELISA (Enzyme Linked Immunossorbent Assay) for Borrelia burgdorferi antigens was positive in 21 patients (30%) of BYS group, while only 3 (6%) from 50 normal individuals had positive reactions (p = 0.01). Using the modified Western Blotting (WB) method for B. burgdorferi antigens, 35 (50%) of the BYS patients were positive, and 2 normal individuals (4%) from the control group (p 0,001). Indirect Immunofluorescence Assay (IFA) (IgG) presented positive results for three of five species of Rickettsia tested: R. parkeri (8, 6%) (p = 0,032), R. amblyommii (22.8%) (p = 0,031) and for R. bellii (8.6%) (p = 0,032). Chi-square test was used for the statistic analysis. A few patients developed a positive reaction to B. bovis (IFA and ELISA) and B. equi antigens (IFA). IFA for Ehrlichia canis antigens was positive in only one patient (1.4%) with BYS. It was possible to conclude that BYS patients presented a coinfection with R. parkeri, R. amblyommi and R. bellii, suggesting that BYS can be vectored by the same ticks responsible for the transmission of Rickettsial agents.

As riquétsias são pesquisadas por muitos grupos em diversas regiões do mundo, pois podem infectar os humanos e animais. No período de julho de 2008 a junho de 2009 no Núcleo Itutinga Pilões, localizado no Parque Estadual da Serra do Mar, foram realizadas coletas mensais de carrapatos (455 adultos, 1939 ninfas e 46 bolos de larvas) distribuídas por seis trilhas distintas. No presente estudo constatou-se a existência de cerca de treze espécies de carrapatos no local (A. aureolatum, A. brasiliense, A. dubitatum, A. fuscum, A. incisum, A. longirostre, A. naponense, A. nodosum, A. ovale, Ixodes aragaoi, Ixodes loricatus. Haemaphysalis juxtakochi e Riphicephalus sanguineus) As espécies de maior expressão foram: A. incisum, frequentemente presente em antas, seguido por H. juxtakochi e A. ovale. Encontramos R. parkeri , R. belliie R. amblyommii. Em A. ovale infectados com a R. parkeri, tivemos uma prevalência de 11,7% para o ambiente e 15,3% para os carrapatos coletados em hospedeiros cães. O R. sanguineus que se coalimentou com A. ovale em cães também estava infectado com R. parkeri. Podemos concluir que indivíduos que freqüentem a região onde encontramos o A. ovale infectado pode adquirir bactérias do Grupo Febre Maculosa. / Rickettsia has been receiving attention from several researcher groups around the world, once these bacteria can infect animals and human being. In this study, monthly, during the period of July, 2008 and June, 2009, was carried out at Núcleo Itutinga Pilões, localized in the Parque Estadual da Serra do Mar, a field research when ticks were collected from vegetation in six specific trials into the forest, overall were collected 455 adults, 1,939 nymphs and 46 larval agglomerates ticks. This study found out 13 different tick species (A. aureolatum, A. brasiliense, A. dubitatum, A. fuscum, A. incisum, A. longirostre, A. naponense, A. nodosum, A. ovale, Ixodes aragaoi, Ixodes loricatus. Haemaphysalis juxtakochi e Riphicephalus sanguineus). The majority found species were: A. incisum, H. juxtakochi and A. ovale. Three Rickettsia species were found naturaly infecting ticks in the park: R. parkeri, R. bellii e R. amblyommii. A. ovale ticks showed a R. parkeri infection prevalence of 11.7% for free-living ticks and 15.3% for ticks collected upon dogs. Ticks R. sanguineus collected feeding upon the same dogs as A. ovale were also found infected with R. parkeri. Since A. ovale ticks can attach onto human being, we predict that visitors of this park might be exposed to Spotted Fever Group Rickettsia infected ticks.

Amblyomma maculatum (the Gulf Coast tick), an aggressive, human-biting, Nearctic and Neotropical tick, is the principal vector of Rickettsia parkeri in the United States. This pathogenic spotted fever group Rickettsia species has been identified in 8-52% of questing adult Gulf Coast ticks in the southeastern United States. To our knowledge, R. parkeri has not been reported previously from adult specimens of A. maculatum collected in Kansas or Oklahoma. A total of 216 adult A. maculatum ticks were collected from 18 counties in Kansas and Oklahoma during 2011-2014 and evaluated by molecular methods for evidence of infection with R. parkeri. No infections with this agent were identified; however, 47% of 94 ticks collected from Kansas and 73% of 122 ticks from Oklahoma were infected with ". Candidatus Rickettsia andeanae" a spotted fever group Rickettsia species of undetermined pathogenicity. These preliminary data suggest that " Ca. R. andeanae" is well-adapted to survival in populations of A. maculatum in Kansas and Oklahoma, and that its ubiquity in Gulf Coast ticks in these states may effectively exclude R. parkeri from their shared arthropod host, which could diminish markedly or preclude entirely the occurrence of R. parkeri rickettsiosis in this region of the United States.

The recent discovery of Amblyomma maculatum sensu lato (s. l.) ticks in southern Arizona has renewed discussions around species designations for members of the Amblyomma maculatum tick group. Amblyomma maculatum s. l. from Arizona appear to be morphologically intermediate between A. maculatum sensu stricto (s. s.) and A. triste s. s. At present there is no conclusive species designation for the ticks from Arizona. My research focused on analyzing the systematics of both A. maculatum s. l. and Rickettsia parkeri, a common bacterial pathogen transmitted by these ticks. In the laboratory, A. maculatum s. l. from Arizona and A. maculatum s. s. from Georgia readily mated on experimental animals to produce F1 hybrid ticks; there was no difference in fertility with these two populations when compared with homologous populations. However, the F1 hybrids produced during these experiments exhibited diminished fitness and did not produce a viable F2 generation. These results suggest that A. maculatum s. l. and A. maculatum s. s. represent separate biological species. Results of the crossbreeding experiment conflict with recent genetic analyses of A. maculatum s. l. and A. maculatum s. s. suggesting they are a single species. Thus, I developed and optimized 14 microsatellite loci that amplify both A. maculatum s. s. and A. maculatum s. l. These novel microsatellite markers can be used in future analyses of A. maculatum s. l. and A. maculatum s. s. to further test for conspecificity between the two. I also investigated the genetic relationships within geographically distinct R. parkeri strains through development and implementation of a multi-locus sequence typing analysis. I showed that while there is no consistent genetic delineation of strains isolated from A. maculatum s. l. versus A. maculatum s. s., there is a subset of R. parkeri strains from A. maculatum s. l. that appear to represent an intermediate genotype between the North and South American strains. While the biological causes for these results are not immediately clear, coevolution of R. parkeri and A. maculatum s. l. may account for the detection of the intermediate genotype only found in association with A. maculatum s. l.