Endodontic retreatments are time-consuming and difficult to perform. Removing the root canal filling material of the original treatment with maximum efficiency and safety is a complex task that requires a good technique, patience and perseverance. This filling material is often contaminated and prevents access to areas of the canal harboring bacteria and remnants of necrotic tissue, especially in the isthmus region and in dentinal tubules. The aim of this study was to use micro-computed tomography to evaluate two protocols for the removal of root canal filling material from curved root canals of the mesial roots of mandibular molars using a reciprocating instrument followed by two different rotary instruments manufactured with different nickel-titanium alloys. The reduction in the volume of the filling material inside the root canals was evaluated. Assessments were also made of the influence of the glide path extension on root canal obturation, the extrusion of filling material after the use of the reciprocating instrument, the volume of filling material after retreatment and its presence in isthmus areas. In addition, the use of a solvent and the agitation of a 2% sodium hypochlorite solution using either passive ultrasonic irrigation (PUI) or a plastic instrument in reciprocating motion were evaluated. A total of 40 mesial roots of mandibular molars with a mean curvature of 25 degrees were selected. The teeth were radiographed digitally in the buccolingual and mesiodistal directions, with a digital Xray system (Schick CDR; Schick Technologies, Long Island, NY), using an exposure time of 0.16 s. This was done in order to select the teeth and then compose two groups with similar characteristics to ensure their anatomic homogeneity. Group homogeneity in terms of anatomy, root canal length, curvature angle, and Vertucci classification type II and IV were confirmed and showed that the study groups were well balanced. Two groups were defined according to the retreatment protocol adopted, namely RHPui (Reciproc + Hyflex + PUI) and RMEasy (Reciproc + Mtwo + EasyClean). The teeth were instrumented with the Reciproc R25 instrument and filled using the single-cone technique and AHPlus cement. Prior to the use of this instrument, canal patency was achieved by creating a glide path with PathFile instruments, throughout the entire extension of the canal in Group RHPui, and up to 1 mm short of the total canal length in Group RMEasy. In both groups, the original filling material was removed with the Reciproc R25 instrument. Xylene was used as a solvent in Group RHPui up to the middle third, but not in the apical area, in the later steps of instrumentation with Reciproc R25. In Group RHPui, the Hyflex 40.04 instrument, made with a CM nickeltitanium alloy, was used. After that, xylene solvent was applied for one minute in the pulp chamber, followed by passive ultrasonic irrigation (PUI) with 2% sodium hypochlorite using an irrisonic instrument, applied up to 2 mm short of the working length. In Group RMEasy, the Mtwo 40.04 instrument, made with a conventional nickeltitanium alloy, was used. Xylene solvent was also used in the pulp chamber for one minute, followed by application of a 2% sodium hypochlorite solution agitated mechanically with an EasyClean plastic instrument in reciprocating motion up to the full working length. The two groups were re-obturated using the warm vertical condensation technique, with a gutta-percha cone corresponding to the final instrument, and with AHPus cement. Micro-CT scans were performed after each procedure to evaluate the volume of the remaining material, the extrusion after the use of the reciprocating instruments, the final volume of the obturation at the end of the retreatment and the filling material volume in the isthmus area, both after the original obturation and after re-obturation. The results showed that the initial filling was significantly closer to the apical foramen in Group RHPui than in Group RMEasy, after the initial treatment. After performing the retreatment protocols, the complete removal of filling material from inside the root canals was not achieved in either study group, with no statistically significant difference (P > 0.05) between groups regarding this variable. In the intra-group evaluation, a statistically significant difference (P < 0.05) was found between the procedural steps regarding the reduction in filling material volume, both in the total canal length and at its different levels, except for the middle third after HyFlex, the cervical third after Mtwo, and the middle third after EasyClean. The volume of the final filling material was significantly higher (P < 0.05) than the volume of the original filling material in both study groups. The volume of filling material in the isthmus region was significantly higher after re-obturation in both groups (P < 0.05), and this increase was greater in the RMEasy Group. There was no statistically significant difference (P > 0.05) between groups regarding the total amount of time expended in the removal of filling material (P > 0.05), namely 209.40 s for the RHPui Group and 227.40 s for the RMEasy Group. There was also no statistically significant difference (P > 0.05) between groups regarding the volume of extruded filling material, namely 0.0258 mm3 (0 0.954) in the RHPui Group and 0.0037 mm3 (0 0.565) in the RMEasy Group. The Shapiro-Wilks, Mann-Whitney, Wilcoxon, Friedman and Dunn tests were used in the data analysis. / Os retratamentos endodônticos demandam tempo e são difíceis de serem executados. Remover o material de obturação do tratamento original com a máxima eficiência e segurança é uma tarefa complexa que necessita de técnica, paciência e perseverança. Esse material de obturação muitas vezes está contaminado, e impede o acesso às áreas do canal onde permaneceram restos de tecido necrótico e microrganismos, especialmente na região do istmo e nos túbulos dentinários. O objetivo deste trabalho foi avaliar, por meio da microtomografia computadorizada, dois protocolos de desobturação de canais radiculares curvos de raízes mesiais de molares inferiores utilizando um instrumento reciprocante seguido de dois diferentes instrumentos rotatórios fabricados com diferentes ligas metálicas de níquel-titânio. Além da redução dos volumes de material obturador no interior dos canais, foram avaliados a influência do comprimento da patência do canal radicular (glide path) na obturação, extrusão de material obturador após o uso do instrumento reciprocante Reciproc R25, o volume do material de obturação após o retratamento e a presença deste em áreas de istmo. Também foi avaliado o uso de um solvente seguido da agitação do hipoclorito de sódio a 2% com ultrassom (PUI) e com um instrumento plástico acionado em movimento reciprocante. Foram selecionadas 40 raízes mesiais de molares inferiores com curvatura média de 25 graus que foram divididos em dois grupos de forma homogênea quanto ao comprimento, à curvatura e à anatomia (classes II e IV de acordo com a classificação de Vertucci) dos canais radiculares. Os dentes foram instrumentados com o instrumento Reciproc R25 e obturados com a técnica do cone único e com cimento AHPlus. Previamente ao uso do instrumento Reciproc R25, obteve-se a patência inicial do canal, ou seja, criou-se um glide path, com os instrumentos PathFile em toda a extensão do canal no Grupo RHPui e 1 mm aquém do comprimento total do canal no Grupo RMEasy. Os dois grupos foram definidos de acordo com o protocolo de retratamento adotado, a saber, RHPui (Reciproc + Hyflex + PUI) e RMEasy (Reciproc + Mtwo + EasyClean). Nos dois grupos, a remoção do material obturador original foi realizada com o instrumento Reciproc R25, sendo que no grupo RHPui foi utilizado o solvente xilol até a proximidade do terço médio, não sendo utilizado solvente no terço apical. No Grupo RHPui, utilizouse, então, o instrumento Hyflex 40.04 feito com liga de niquel-titânio CM (control memory ou de memória controlada) e, por último, utilizou-se o solvente xilol por um minuto na câmara pulpar, seguido de irrigação ultrassônica passiva (PUI) com solução de hipoclorito de sódio a 2% utilizando o instrumento Irrisonic, até o limite de 2 mm aquém do comprimento de trabalho. No Grupo RMEasy, foi utilizado o instrumento Mtwo 40.04 fabricado com liga de níquel-titânio convencional e, a seguir, também se utilizou o solvente xilol por um minuto na câmara pulpar seguido de uma agitação mecânica do hipoclorito de sódio a 2% com o instrumento plástico EasyClean em movimento reciprocante até o limite do comprimento total de trabalho. Os dois grupos foram re-obturados com a técnica de condensação vertical aquecida com cone de guta-percha correspondente ao instrumento final e com cimento AHPus. Foram realizadas microtomografias após cada procedimento para avaliar o volume de material remanescente, a extrusão após o uso dos instrumentos reciprocantes, o volume final da obturação ao final do retratamento e o volume na área de istmo, tanto após a obturação original quanto após a re-obturação. Os resultados obtidos mostraram que, no tratamento inicial, a patência do canal (ou glidepath) realizado com instrumentos Pathfile previamente ao uso dos instrumentos Reciproc R25 possibilitou que a obturação dos canais atingisse um limite significativamente (P < 0,05) mais próximo ao forame apical no grupo RHPui, onde o glidepath foi realizado em toda a extensão do canal. Em relação aos diferentes protocolos de retratamento, não houve remoção completa do material obturador do interior dos canais nos dois grupos estudados em todos os níveis avaliados, sem diferença estatisticamente significativa (P > 0,05) entre os grupos com relação a essa variável. Na avaliação intragrupo, houve uma diferença estatisticamente significativa (P < 0,05) entre os passos do procedimento em relação à redução do volume de material obturador, tanto na extensão total do canal, quanto nos seus diferentes níveis, com exceção do terço médio após o Hyflex, no terço cervical após o Mtwo e no terço médio após o EasyClean. O volume do material obturador final foi significativamente maior (P < 0,05) do que o volume do material obturador original, nos dois grupos estudados. O volume de material obturador na região do istmo foi significativamente maior (P < 0,05) após a re-obturação nos dois grupos, sendo significativamente maior (P < 0,05) no grupo RMEasy do que no grupo RHPui. Não houve diferença estatística (P > 0,05) entre os grupos com relação ao tempo total despendido na remoção do material obturador (P > 0,05), sendo 209,40 s para o Grupo RHPui e 227,40 s para o Grupo RMEasy. Não houve diferença estatística (P > 0,05) entre os grupos com relação ao volume da extrusão de material obturador, sendo 0,0258 mm3 (0 0,954) no Grupo RHPui e 0,0037 mm3 (0 0,565) no Grupo RMEasy. Os testes de Shapiro-Wilks, Mann- Whitney, Wilcoxon, Friedman e Dunn foram utilizados na análise dos dados.

Considerando-se a localização intra-óssea das lesões periapicais, o diagnostico clinico e dificultado e a avaliação radiográfica não fornece informações suficientes para o diagnostico de um periodonto apical sadio pós-tratamento. Dessa maneira, o objetivo deste estudo foi comparar os achados radiográficos e por tomografia computadorizada de feixe cônico com a avaliação microscópica após tratamento de canais radiculares em dentes de cães e avaliar a participação das metaloproteinases da matriz (MMPs) na lesão periapical e nos tecidos em processo de reparação, assim como em cistos e granulomas periapicais obtidos de humanos. A seguir, os mecanismos envolvidos na cementogênese apical foram investigados utilizando células do ligamento periodontal de humanos. Foram induzidas lesões periapicais em dentes de cães e o tratamento endodôntico foi realizado em sessão única ou apos utilização de um curativo de demora a base de hidróxido de cálcio [Ca(OH)2]. Avaliações radiográficas e tomográficas foram realizadas previamente, após a indução das lesões periapicais e 180 dias apos o tratamento endodôntico. Os tecidos periapicais foram avaliados por meio de microscopia de luz, imunofluorescência, imunoistoquímica e RT-PCR em tempo real. In vitro, células do ligamento periodontal foram utilizadas para avaliar os efeitos da estimulação com Ca(OH)2 nos processos de migração, proliferação, diferenciação celular e mineralização. As vias de sinalização envolvidas na diferenciação cementoblastica foram investigadas por meio de inibidores bioquímicos da via das proteínas quinases ativadoras de mitose (MAPK), bloqueadores de canais de cálcio e silenciadores de RNA para proteínas quinases reguladas por sinal extracelular (ERK-1 / ERK-2). De acordo com os resultados obtidos, a tomografia computadorizada permitiu a detecção de lesões periapicais com maior sensibilidade e acuracia que a radiografia periapical convencional, utilizando-se a avaliação microscópica como padrão-ouro. Histologicamente, as lesões periapicais experimentalmente induzidas apresentaram bactérias distribuídas pelo sistema de canais radiculares e lacunas de reabsorção do cemento e estavam associadas a desorganização das fibras colágenas e alta expressão de MMPs. A presença das MMPs em processos inflamatórios periapicais de humanos (cistos e granulomas) foi confirmada. Nos dentes com lesão periapical submetidos ao tratamento endodôntico em sessão única o desfecho do tratamento endodôntico foi caracterizado pela manutenção ou progressão da lesão periapical e alta expressão de MMPs. Por outro lado, nos dentes submetidos ao tratamento endodôntico utilizando o Ca(OH)2 como curativo de demora, maior numero de espécimes apresentaram regressão da lesão periapical e houve modulação da expressão de MMPs pelo tratamento. Neste grupo foi evidenciada neoformação de cemento no forame apical. Células do ligamento periodontal estimuladas com Ca(OH)2 expressaram proteínas especificas de cementoblastos (CEMP-1, CAP) e foram capazes de sintetizar nódulos de mineralização, mediados via ERK MAPK. A ação do Ca(OH)2 ocorreu via canais de cálcio, uma vez que o bloqueio destes canais inibiu a fosforização de ERK-1 e ERK-2 e, portanto, a expressão de CEMP-1 e CAP. CEMP-1 estimulou a migração, proliferação e mineralização mediada por células, exercendo um papel central na cementogenese, uma vez que o bloqueio de CEMP-1 inibiu a migração celular e mineralização. Juntos, estes resultados permitem concluir que a tomografia computadorizada e superior a radiografia periapical convencional para detecção de lesões periapicais refratarias ao tratamento de canais radiculares. Ainda, o tratamento endodôntico realizado utilizando o hidróxido de cálcio como curativo de demora propiciou um reparo apical e periapical mais favorável do que o tratamento endodôntico em sessão única, possivelmente devido a capacidade do Ca(OH)2 induzir a diferenciação de células do ligamento em células com um fenótipo cementoblastico e posterior mineralização. / Clinical diagnosis of apical periodontitis is difficult due to the intraosseous nature of the disease and radiographic evaluation does not provide sufficient information to determine a healthy apical periodontium following root canal therapy. Therefore, the aim of this study was to compare the radiographic and cone beam computed tomographic findings with microscopic evaluation following root canal treatment in dogs teeth. Then, the presence of matrix metalloproteinases (MMPs) in apical periodontitis and during the healing phase following treatment was evaluated and compared to the expression of MMPs in periapical cysts and granulomas obtained from human. Finally, the mechanisms involved in apical cementogenesis were investigated using human periodontal ligament cells. Apical periodontitis was induced in dogs teeth and then root canal treatment was performed in a single visit or using calcium hydroxide [Ca(OH)2] as the root canal dressing. Tomographic and radiographic evaluations were performed prior to and following induction of apical periodontitis, and 180 days following root canal therapy. Periapical tissues were evaluated by conventional light microscopy, immunofluorescence, immunohistochemistry, and real time RT-PCR. In vitro, periodontal ligament cells were used to evaluate the effects of Ca(OH)2 treatment on cell migration, proliferation, differentiation, and mineralization. The signaling pathways triggered by treatment with Ca(OH)2 were investigated using mitogen activated protein kinase (MAPK) biochemical inhibitors, calcium channel blockers, and extracellular regulated protein kinase (ERK-1 / ERK-2) silencing RNAs. Based on the results obtained, apical periodontitis was detected with higher sensitivity and accuracy by means of cone beam computed tomography compared to conventional periapical radiographs, using microscopic evaluation as the gold standard. Histological evaluation revealed that teeth with apical periodontitis presented microorganisms throughout the root canal system and in areas with resorption of cementum. Apical periodontitis was characterized by collagen fiber disorganization and high expression of MMPs. The presence and activity of MMPs was confirmed in periapical inflammatory diseases (cysts and granulomas) obtained from humans. Root canal treatment outcome was characterized by maintenance or progression of apical periodontitis and high expression of MMPs in teeth submitted to root canal treatment in a single visit, whereas root canal treatment outcome in teeth submitted to root canal treatment using Ca(OH)2 as the root canal dressing, higher number of teeth presented reduced apical periodontitis and lower expression of MMPs. In this group, cementum neogenesis was evident in the apical foramina. Periodontal ligament cells stimulated with Ca(OH)2 expressed cementoblastic specific proteins (CEMP-1, CAP) and were able to synthesize mineralized nodules via ERK MAPK. The effects of Ca(OH)2 occurred via calcium channels, since their blockade prevented ERK-1 and ERK-2 phosphorylation and therefore expression of CEMP-1 and CAP. CEMP-1 stimulated cell migration, proliferation, and mineralization and it was central to cementogenesis because blockade of activity of CEMP-1 prevented cell migration and mineralization. Taken together, these findings demonstrate that cone beam computed tomography is superior to conventional periapical radiography for detection of refractory apical periodontitis. Furthermore, the root canal treatment using Ca(OH)2 as the root canal dressing permitted a more favorable outcome than the root canal treatment performed in a single visit, probably due to the ability of Ca(OH)2 induce cementoblastic differentiation of periodontal ligament cells and mineralization.