Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-06Bitstream added on 2014-06-13T20:46:14Z : No. of bitstreams: 1 chirinea_vh_dr_botfmvz.pdf: 377109 bytes, checksum: 14a2afeb1c35186ec50ee38a1a81ba09 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A inseminação artificial (IA) utilizando sêmen congelado é uma ferramenta importante na reprodução de cães, visa o melhoramento genético e melhor aproveitamento do reprodutor. Além disso, a melhor metodologia para avaliar o potencial fecundante de uma amostra de sêmen é o teste in vivo. Por isso, os objetivos deste trabalho foram determinar a taxa de gestação de cadelas, utilizando sêmen congelado em meio diluente TRIS/OEP/Frutose/8%Glicerol, e comparar duas técnicas de IA: intra-uterina, por laparotomia e intravaginal. O sêmen foi colhido de um único macho, por manipulação digital do pênis e analisado, imediatamente, após a colheita e após a descongelação a 70°C, por 8 segundos. A cinética do movimento foi verificada pelo CASA (Computer Assisted Semen Analyzer), e a integridade das membranas por: sondas fluorescentes (iodeto de propídio e carboxifluoresceína), pelo teste supra vital com a coloração de eosina, e pela associação de sondas (iodeto de propídio, JC-1 e FITC-PSA). A morfologia espermática foi avaliada por meio de esfregaços corados com Karras. A congelação do sêmen foi realizada pelo método descrito por Chirinéa et al. (2006). As fêmeas foram monitoradas desde o início da fase do proestro utilizando a citologia vaginal seriada e a dosagem de progesterona sérica, a cada 48 horas. Para as inseminações, as cadelas foram divididas em dois grupos: Grupo 1 (n=6) inseminadas uma única vez, via intra-uterina, por laparotomia, com uma dose inseminante de 160 x 106 espermatozóides/2mL; e Grupo 2 (n=6) inseminadas duas vezes, via intravaginal com uma dose inseminante de 160 x 106 espermatozóides/2 mL por inseminação. Os resultados das análises do sêmen pré e pós-descongelação não apresentaram diferenças significativas, com exceção da morfologia espermática e da associação de sondas fluorescentes... / Artificial insemination (AI) using frozen semen is an important tool on dog’s reproduction, aiming to genetic improvement and better use of a stud. Besides, the better way to evaluate the fecundate potential of a semen sample is an in vivo test. That way, the aim of this work was to determine the pregnancy rate in bitches, using TRIS/OEP/Fructose/8%Glycerol as the diluent medium, and to compare two AI techniques: intrauterine and intravaginal. Semen was collected from one male only, by digital manipulation. Semen was analyzed immediately after collection and after thawed at 70°C for 8 seconds. Movement kinetics were analyzed by CASA (Computer Assisted Semen Analyzer), membrane integrity using fluorescents probes (propidium iodide and carboxyfluorescein), supravital test, eosin staining, integrity of plasmatic, nuclear and mitochondrial membranes using the association of fluorescent probes (FITC-PSA, propidium iodide and JC-1) and sperm morphology. Semen was frozen using the method described by Chirinéa, 2006. Females were monitored since the beginning of proestrus, using vaginal smear and progesterone measurement, each 48hours. To inseminations, bitches were divided into two groups: Group 1, composed by 6 females, which were inseminated just once via intrauterine, with an insemination dose of 160 x 106 spermatozoids/2mL and Group 2 constituted by 6 females, which were inseminated twice, via intravaginal, using an insemination dose of 160 x 106 spermatozoids/2 mL/insemination. Results from semen analyses made before and after freezing did not show any difference, except for sperm morphology and association of fluorescents probes. Pregnancy rate was 66,6% (4/6) on Group 1 and 16,6% (1/6) on Group 2. In conclusion, the success of artificial insemination depends not only on semen quality after thawed, but also on the AI technique used. In our work, intrauterine technique by laparotomy was better than intravaginal.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-15Bitstream added on 2014-06-13T18:47:01Z : No. of bitstreams: 1 daroz_ga_dr_botfm.pdf: 261098 bytes, checksum: 1432adb40abd0ca44678c8dc255e3af4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / University Of Tromso / Noruega / O objetivo do presente trabalho foi o de avaliar parâmetros seminais e hormonais de homens usuários de drogas ilícitas e compará-los a indivíduos comprovadamente férteis, não usuários destas drogas. No período de outubro de 2006 a dezembro de 2007, 20 homens usuários de drogas ilícitas (maconha e/ou cocaína e/ou crack) e 20 indivíduos férteis não usuários destas drogas foram comparados por meio de análises seminais de acordo com critérios da Organização Mundial de Saúde (1999), e morfologia de Kruger (1986). Foram realizadas dosagens de estradiol, hormônio folículo estimulante, hormônio luteinizante, prolactina, globulina carreadora dos hormônios sexuais (SHBG) e testosterona total por quimioluminescência e calculados os valores do índice androgênico livre (IAL). Os testes t de Student e Mann-Whitney foram utilizados na análise estatística (p<0,05). A média da idade dos usuários de drogas ilícitas foi semelhante ao grupo controle (29 ± 7,78 versus 30 ± 6,2 anos) (p>0,05). A mediana do tempo de uso da drogas foi de 11 anos variando de um a 24 anos. Os usuários de drogas ilícitas comparados aos indivíduos férteis apresentaram uma redução significativa (p<0,05) na concentração/ml: 34,35 ± 29,36 x 106 versus 115,57 ± 90,35 x 106 espermatozóides/ml, na motilidade A+B: 44,85 ± 21,65% versus 64,20 ± 19,30%, na morfologia da OMS: 11,75 ± 8,22% versus 23,10 ± 11,91%, na morfologia de Kruger: 5,30 ± 3,67% versus 9,1 ± 5,88% e um aumento de espermatozóides imóveis: 44,15 ± 21,73% versus 23,35 ± 18,32%. Entre os usuários e não usuários de drogas ilícitas verificamos que houve uma redução significativa no IAL: 77,99 ± 28,21 versus 98,64 ± 32,11; e aumento nos valores de testosterona total: 694,95 ± 181,83 versus 546,15 ± 145,00 ng/dl e SHBG: 32,29 ± 6,16 versus 22,89 ± 14,76 nmol/l. Nos demais parâmetros hormonais... / The objective of this study was to evaluate the seminal and hormonal parameters of male users of illicit drugs and compare them to another group, proved fertile and nonusers of those drugs. From October, 2006 to December, 2007, 20 male users of illicit drugs (cannabis and/or cocaine and/or crack) and 20 fertile men nonusers of those drugs were compared using seminal analysis, according to the World Health Organization (WHO) standards (1999) and the Kruger morphology (1986). The doses of estradiol, luteinizing hormone, prolactin, sex hormone-binding globulin (SHBG) and total testosterone were measured by quimioluminescence and the free androgen index (FAI) levels were calculated. The Student’s t-test and Mann Whitney were used in the statistics analysis (p<0.05). The average age of illicit drugs users was similar to the control group [29 ± 7.78 versus 30 ± 6.2 years old (p<0.05)]. The time of drug utilization ranged from 11 to 24 years (median value). The illicit drug users compared to the nonusers showed a significant decrease (p<0.05) in concentration/ml: 34.35 ± 29.36 versus 115.57 ± 90.35 x 106 spermatozoids/ml, motility A+B: 44.85 ± 21.65 versus 64.20 ± 19.30%, WHO morphology: 11.75 ± 8.22 versus 23.10 ± 11.91%, Kruger’s morphology: 5.30 ± 3.367 versus 9.1 ± 5.88% and an increase in mobile spermatozoids: 44.14 ± 21.73% versus 23.32 ± 18.32%. In both groups it was possible to verify a significant reduction of the FAI: 77.99 ± 28.21 versus 98.64 ± 32.11 and an increase in total testosterone values: 694.95 ± 181.83 versus 546.15 ± 145.00 ng/dl and SHBG: 32.29 ± 6.16 versus 22.89 ± 14.76nmol/l. Significant statistic differences were not observed in further hormonal parameters such as LH, folliclestimulating hormone (FSH), prolactin and estradiol in both groups. The study shows that the use of illicit drugs (cannabis and/or cocaine and/or crack) ...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-18Bitstream added on 2015-04-09T12:47:45Z : No. of bitstreams: 1 000815233.pdf: 1654214 bytes, checksum: d5e117f5790352e4f036419f4f64ce17 (MD5) / O objetivo geral deste estudo foi descrever as respostas inflamatórias de jumentas Pêga ao sêmen fresco (MN), sêmen extendido (SE) e sêmen congelado (SC) de jumento, tendo como objetivo específico correlacionar esses achados com os baixos índices de gestações de jumentas Pêga por inseminação artificial (IA) com SC. Foram avaliadas diariamente 25 jumentas, através de rufiações, palpações transretais e exames ultrassonográficos durante maio de 2012 a março de 2013. Foram observados 234 estros, sendo 33 (14,22%) estros anovulatórios e 11 (4,74%) duplas ovulações; o comprimento do ciclo estral foi de 28,88±0,95 dias, com sinais externos de estro de 4,50±0,35 dias e o tempo de ovulação em relação ao término do estro de 8,0±2,45 horas entre as 25 jumentas. Diante dos resultados obtidos, as jumentas não apresentaram sazonalidade reprodutiva. Selecionaram-se 12 jumentas ao acaso, as quais foram biopsiadas em diestro para avaliação reprodutiva e nos ciclos estrais subsequentes, as mesmas foram submetidas à uma das técnicas: monta natural (MN), IA-SE e IA-SC próximo à ovulação, realizando-se biópsia endometrial 10 horas após cada evento. Os fragmentos foram conservados em formalina a 10%, solução de Bouin e solução de glutaraldeído tamponado a 10% para análise em microscopia de luz (ML), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). As amostras endometriais das jumentas em diestro apresentaram pregas e sulcos do endométrio, células microvilosas e ciliadas, livre de processos patológicos incompatíveis com a reprodução; em estro apresentaram epitélio colunar simples, evidenciando células microvilosas e células ciliadas, com núcleos ovalados, cromatina condensada e, no citoplasma, presença de mitocôndrias, vacúolos e corpúsculos elétron-densos. Formações semelhantes a bolhas estavam presentes nas superfícies das células microvilosas. As glândulas ... / The general objective of this study was to describe the inflammatory responses in Pêga Jennies from fresh (NM), extended (ES) and frozen (CS) semen from Jackass. The specific objective was to correlate these responses with low pregnancy rates in Jennies after artificial inseminations (AI) with frozen semen. Twenty five Jennies were daily evaluated by teasing, rectal examination and ultrasound from May 2002 to March 2013. Estrous cycles (n=234) were followed, with 33 (14.22%) non- ovulatory estrous and 11 (4.74%) double ovulations. The estrous cycle length was 32.68±0.76 days, with external heat signs of 4.49±0.23 days and time of ovulation in relationship to end of estrous of 5.68±7.18 hours for Jennies during the observed period. The estrous cycle was 28.88±0.95 days; with external heat signs of 4.50±0.35 days and time to ovulation in relation to end of estrous of 8.0±2.45 hours among 25 Jennies. Thus, considering the obtained results there was no reproductive seasonality. Twelve Jennies were casually selected for biopsy during diestrous being reproductively evaluated and subsequently submitted to one of those: natural mount (NM), AI- ES and AI-CS near the time of ovulations; and then submitted to endometrial biopsy 10 hours latter. Each fragment was maintained in formalin 10%, Bouin solution and Buffer glutaraldehyde 10% for Ligh Microscopy (LM), Scanning Electron Microscopy (SEM) and Transmission Electron Microscopy (TEM). The endometrial samples from Jennies in diestrous presented folds and endometrial grooves, microvillus cells and ciliated cells, free of process that could compromise reproduction. The estrous samples presented simple columnar epithelium, circled nuclei, condensed chromatin and at the cytoplasm, mitochondrial vacuoles and electro- dense corpuscles. Similar structures to blebs were present at the microvilli cell surface. The endometrial glands were completed by secretions that were shown with major evidence ...

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-18Bitstream added on 2015-01-26T13:30:36Z : No. of bitstreams: 1 000793038.pdf: 311432 bytes, checksum: 05eabed55effbe08dbab4cd9131bfedb (MD5) / A biotécnica mais utilizada em equinos no Brasil é a inseminação artificial com sêmen refrigerado. Apesar dos avanços, ainda há uma grande variação nos resultados de fertilidade em programas reprodutivos. A carnitina é um composto vitamínico que desempenha um papel importante no metabolismo energético, já que ela garante a produção de energia pelo espermatozoide através do estímulo de vias metabólicas. Além disso, ascarnitinas apresentam potente poder antioxidante, conferindo maior proteção durante o armazenamento.No entanto, sua utilização pós-ejaculação é pouco estudada, já que existem poucos relatos deste tipo de aplicação, sendo nenhum deles em equinos. Devido a isso, este trabalho foi dividido em dois experimentos. O objetivo do experimento 1 foi determinar a concentração ideal l-carnitina (LC) e acetil-l-carnitina (AC) na refrigeração de sêmen equino a 5ºC. No experimento 2, o objetivo foi avaliar os efeitos da melhor dose de LC e AC e sua associação sobre a viabilidade espermática através da citometria de fluxo. No experimento 1 foram utilizados dois ejaculados de 12 garanhões. Após a diluição com Botu-Sêmen® na concentração de 50 x 106 espermatozoides/mL, os ejaculados foram divididos em sete grupos: controle (C), tratado com 5 mmol/L (LC-1), 10 mmol/L (LC-2), 15 mmol/L (LC-3)de LC, tratado com 5 mmol/L (AC-1), 10 mmol/L (AC-2) e 15 mmol/L (AC-3) de AC e após foram refrigerados a 5ºC por 48 horas. Para o experimento 2 foram utilizados os mesmos animais e manipulação dos experimentos anteriores, entretanto, os grupos testados foram: Controle (C), tratado com 10 mmol/L de LC (LC), tratado com 10 mmol/L de AC (AC) e 10 mmol/L de LC + 10 mmol/L AC (LC+AC). A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada do movimento espermático e a integridade de membrana plasmática (IMP) por microscopia de epifluorescência no experimento 1 e 2, entretanto, ... / Over the years, technology for cooling semen has developed. However, despite progress, pregnancy rates are still variable between reproductive programs.Carnitine is a vitamin compound which plays an important role in energy metabolism, since it guarantees the sperm energy production by stimulating metabolic pathways. Furthermore, carnitine has a powerful antioxidant effect, providing greater protection to plasma membrane during storage.However, post-ejaculation use is poorly studied, being none in horses. The aim of experiment 1 was determine optimal concentration of lcarnitine (LC) and acetyl-l-carnitine (AC) in equine semen cooled at 5°C. In experiment 2, the objective was evaluate dose effects between LC, AC and their association on sperm viability by flow citometry. Two ejaculates from 12 stallions were used in both experiments. After dilution with Botu-Semen®to 50 x 106 spermatozoa/ml, each ejaculate was split into seven groups: control (C), treated with 5 mmol/L (LC-1), 10 mmol/L (LC -2), 15 mmol/L (LC-3) of LC, treated with 5 mmol /L (AC-1), 10 mmol/L (AC-2) and 15 mmol/L (AC-3) of ACand then cooled at 5°C for 48 hours. In second experiment, groups were divided in: control (C), treated with 10 mmol /l of LC (LC), treated with 10 mmol /L of AC (AC) and 10 mmol/L of LC + 10 mmol/L of AC (LC+AC).In both experiments,sperm kinetics was evaluated by computerized analysis (CASA) and plasma membrane integrity (IMP) by epifluorescence microscopy.Moreover, in experiment 2 were assessed DNA, ROS and Lipid Peroxidation (PEROX) by flow cytometry.All analysis were performed before cooling (T0), 24 (T24) and 48 hours (T48) after. According to the results of first experiment, LC groups had higher IMP and better values of kinetic than control. Groups treated with AC showed higher results of sperm kinetics after 24 hours of refrigeration and IMP in all analysed times. In second experiment, treated groups were ...

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-02Bitstream added on 2015-03-03T12:06:28Z : No. of bitstreams: 1 000806927.pdf: 1884256 bytes, checksum: 34e30cf4b909e11722195260f1d006ce (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A produção de embrião in vitro (PIV) tem sido uma grande alternativa para os programas de preservação de felídeos selvagens ameaçados de extinção. No entanto, a PIV necessariamente depende de outras técnicas de reprodução assistida como a maturação in vitro (MIV), fertilização in vitro (FIV), transferência de embrião (TE), e criopreservação de gametas. Essas técnicas de reprodução assistida já foram transferidas com sucesso do gato doméstico para seus parentes selvagens. Já o uso de sêmen liofilizado também resultou em filhotes vivos de diversas espécies de produção, mas em gatos domésticos isso ainda não ocorreu. O objetivo do presente estudo foi verificar a fragmentação do DNA do sêmen liofilizado e a viabilidade de seu uso através da utilização da ICSI para a PIV de embriões de gatos domésticos. Foram colhidas amostras de 3 gatos normospérmicos que foram utilizadas a fresco, congeladas/descongeladas e liofilizadas. Foram realizados testes para avaliação de integridade de DNA (Laranja de Acridina Convencional, Ensaio do Cometa Alcalino, Laranja de Acridina na citometria de fluxo, e TUNEL). O método de TUNEL mostrou ter maior sonsibilidade para detecção de fragmentação de DNA e detectou grau elevado de lesão de DNA do sêmen liofilizado em comparação com o sêmen fresco e congelado/descongelado dos mesmos doadores. Não foi possível produzir embrião de gato através da técnica de ICSI utilizando sêmen que foi liofilizado em meio SOF / The in vitro production of embryos (IVP) has been a good alternative for conservational programmes of wild felids threatened by extinction. However, IVP depends upon several other assisted reproduction techniques such as in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF), embryo transfer (ET), gamete cryopreservation. These techniques were already successfully employed in wild felines. Freeze-dried sperm has also been used to produce live offspring of several species, but in domestic cat this has not been reported yet. Hence, the objective of the present study was to verify the sperm DNA fragmentation after the freeze-drying process as well as the feasibility of using freeze-dried sperm together with ICSI to produce cat IVP embryos. Fresh, frozen/thawed, freeze-dried sperm samples of 3 normospermic cats were used in this experiment. Sperm DNA integrity assessments were performed (Conventional Acridine Orange, Alkaline Comet Assay, Acridine Orange using flow cytometry, and TUNEL). TUNEL assessment showed higher sensitivity to detect DNA fragmentation and it detected higher DNA fragmentation in freeze-dried sperm when compared to frozen/thawes and fresh semen from the same donors. It was not possible to produce IVP embryos making use of freezedried sperm that used SOF as medium and ICSI

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-02. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:22Z : No. of bitstreams: 1 000866940.pdf: 700747 bytes, checksum: 6db0bad383acb05686e302f4f09fb4d7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição do plasma seminal autólogo ao sêmen criopreservado de jumentos, aliado a lavagem uterina pós-inseminação artificial influencia nos índices de fertilidade em jumentas. Para isso, dois experimentos foram realizados: No experimento I foram analisados os parâmetros de cinética espermática pelo método computer assisted sperm analysis (CASA), análise da integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI), peroxidação lipídica (PERO) e teor de espécie reativa de oxigênio intracelular (EROS) pela técnica de citometria de fluxo, de 15 ejaculados de 3 jumentos, diluídos em INRA-96®(IC - INRA, IMV Technologies, France) - Rota et al., (2012) ou em BotuCrio® (BC - Botupharma, Botucatu, Brasil), com e sem adição de plasma seminal (PS) após a descongelação. Os resultados do CASA foram semelhantes para os 2 diluentes (P>0,05), no entanto o BC proporcionou uma maior integridade de MPAI além da PERO menor que o IC, resultando em menor EROS (P<0,05). A adição do PS reduziu os parâmetros do CASA (p<0,05), porém sem ação na MPAI e PERO (p>0,05). No experimento II, avaliou-se a influência da adição do PS autólogo na pós-descongelação e sua associação à lavagem uterina (L) pós-inseminação artificial (IA), na fertilidade de jumentas. Foram utilizados 86 ciclos de 33 jumentas, divididas em 8 grupos: G1) BC + PS + L e G2) IC + PS + L foram testados mediante inseminações em 14 ciclos cada; G3) BC + L e G4) IC + L foram testadas em 11 ciclos cada, todas as L foram feitas 10 horas após a IA; G5) BC + PS e G6) IC + PS foram empregados em 8 ciclos cada, e o G7) BC e G8) IC foram avaliados em 10 ciclos cada. Verificou-se que o PS não influiu na fertilidade de jumentas (p = 0,6582) contudo a L,10 h pós-IA, interferiu positivamente na taxa de prenhez (p = 0,0097) elevando de 0% (G7 e G8) para 42,9% (G1 e G2) / The aim of this study was to evaluate whether the addition of autologous seminal plasma to frozen donkey semen, coupled uterine flushing after artificial insemination influence on fertility rates in jennies. Two experiments were conducted: experiment I, the parameters of sperm kinetics were analyzed by using computer assisted sperm analysis (CASA), analysis of plasma membrane integrity and acrosome (MPAI), lipid peroxidation (PERO) and reactive species content intracellular oxygen (ROS) by the technique of flow cytometry, 15 ejaculated 3 donkeys, diluted in INRA-96® (IC - INRA, IMV Technologies, France) -. Rota et al, (2012) or BotuCrio® (BC - Botupharma, Botucatu, Brazil), with and without addition of seminal plasma (SP) after thawing. The results were similar for CASA to 2 extenders (P> 0.05), however BC provided greater MPAI integrity beyond smaller PERO than the IC, resulting in lower EROS (P <0.05). The addition of PS reduced the parameters of CASA (P <0.05), but no action on the MPAI and Pero (P> 0.05). Experiment II, evaluated the influence of the addition of autologous SP in post-thaw and its association with uterine lavage (L) pos-IA, in the fertility jennies. 86 cycles of 33 jennies were used, divided into 8 groups: G1) BC + SP + Land G2) IC + SP + L, were tested by 14 cycles each; G3) BC+L and G4) IC+ L, were tested on each 11 cycles, all L were made 10 hours after AI; G5) BC + SP and G6) IC + SP were used in 8 cycles each, and the G7) BC and G8) IC were evaluated in 10 cycles each. It was found that the SP, had no effect on fertility jennies (p = 0.6582) however L 10 h post-IA, increased pregnancy rate (p = 0.0097) increasing from 0% (G7 and G8) to 42.9% (G1 and G2)

Orientador: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Janaina Torres Carreira / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Maricy Apparicio Ferreira / Resumo: O estudo teve por objetivo avaliar o sêmen criopreservado de touros da raça Nelore de diferentes idades e verificar se a qualidade espermática declina com o avanço da idade e se geração espontânea intracelular de superóxido, peroxidação lipídica e danos no DNA estão envolvidos neste processo em decorrência da susceptibilidade ao estresse oxidativo durante o envelhecimento. Para isso, foram utilizados três ejaculados de 40 touros, subdivididos em três faixas etárias: Jovens de 1,8 a 2 anos (n= 27 partidas), Adultos de 3,5 a 7,0 anos (n= 52 partidas) e Senis de 8,0 a 14,3 anos (n= 34). Os touros jovens apresentaram altos valores de motilidade, integridade da membrana e acrossoma e de alto potencial mitocondrial comparado com touros adultos e senis (p<0,05). Houve correlação positiva entre a idade e os parâmetros considerados indesejáveis tais como baixo potencial mitocondrial, membrana lesada, acrossoma lesado e danos oxidativos no DNA (p<0,05) e negativa com alto potencial mitocondrial, membrana íntegra e acrossoma íntegro (p<0,05), indicando redução da qualidade espermática com o envelhecimento. A geração de superóxido, peroxidação lipídica (BodipyC11581/591) não apresentou diferença significativa entre a idade e os parâmetros referentes à qualidade espermática (p>0,05). A concentração de TBARS foi menor em touros jovens quando comparado aos adultos, mas diferenças não foram observadas em touros senis (p>0,05). Danos oxidativos no DNA correlacionaram negativamente com a variável membrana e acrossoma íntegro (r= 0,33, p<0,03) e positivamente com os valores de baixo potencial mitocondrial (r= 0,38, p<0,01). A qualidade espermática declina com o avanço da idade e não está relacionada com a geração de superóxido e peroxidação lipídica (TBARS e BodipyC11581/591) no sêmen criopreservado. No entanto, alta porcentagem de danos oxidativos no DNA no sêmen ... / Abstract: The aim of this study was to evaluate sperm quality of frozen-thawed semen samples of Nelore Bulls of different ages and verify if the quality declines with age and if it is associated with the spontaneous generation of intracellular superoxide, lipid peroxidation and DNA damage. 40 bulls were divided into three age groups: Young 1,8 to 2 years (n = 27 samples), Adults 3.5 to 7.0 years (n = 52 samples) and Senile , from 8 to 14.3 years (n = 34 samples). Young bulls showed higher values of motility, membrane integrity and acrosome and high mitochondrial potential compared to adults and senile bulls (P <0.05). There was a positive correlation between age and undesirable parameters such as low mitochondrial potential , damaged membrane, damaged acrosome and oxidative DNA damage (P<0.05). There was also a negative correlation with high potential mitochondrial, membrane integrity and acrosome integrity (P<0.05). These results indicate a reduction in sperm quality with aging. The generation of superoxide and lipid peroxidation (BodipyC11581/591) showed no significant differences between age and parameters related to sperm quality (P>0.05). The TBARS concentration was lower in young bulls compared to adults, but no differences were observed in senile bulls (P>0.05). Oxidative DNA damage correlated negatively with membrane and acrosome integrity (r = 0.33, P<0.03) and positively with low mitochondrial potential (r = 0.38, P<.01). The sperm quality declines with aging and is not related to superoxide generation and lipid peroxidation (TBARS and BodipyC11581/591) in frozen semen. However, high percentage of oxidative DNA damage indicates the involvement of other ROS (reactive oxygen species) which reduces sperm quality and increases susceptibility to oxidative stress during aging / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-29Bitstream added on 2014-06-13T20:08:22Z : No. of bitstreams: 1 costa_lf_me_botfmvz.pdf: 594547 bytes, checksum: 7d609573704d70bd41e6633e86629767 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O diagnóstico da infecção por Brucella ovis em ovinos usualmente é realizado por meio de exame clínico, testes sorológicos e bacteriologia. Devido às limitações apresentadas pelas técnicas, o diagnóstico é geralmente obtido mediante aplicação de duas ou mais técnicas para obtenção de um resultado conclusivo. A Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) tem sido utilizada como ferramenta diagnóstica aplicável, pois é sensível, pouco dispendiosa, rápida, simples de ser realizada e permite o diagnóstico específico do agente infectante. Neste trabalho foram realizados dois experimentos. No primeiro compararam-se os percentuais de positividade em duas técnicas de PCR padronizadas, sendo a primeira gênero-específica e a seguinte espécie-específica, em 191 amostras de sêmen e 214 de urina provenientes de ovinos inoculados experimentalmente com a cepa de B. ovis REO 198. Posteriormente, desenvolveu-se a nested PCR a partir do produto amplificado da reação espécie-específica, e o percentual de positividade obtido pela nested PCR foi comparado aos obtidos pelas PCRs gênero-específica e espécie-específica. Foi observada diferença significativa no percentual de positividade (P<0,05) entre PCR gênero-específica e PCR espécie-específica (24,08% e 15,18%, respectivamente) para amostras de sêmen de ovinos e concordância moderada entre os resultados destas técnicas (kappa de 0,623); para amostras de urina, não houve diferença significativa entre as positividades obtidas pela PCR gênero-específica e a espécie-específica (10,28% e 7,011%, respectivamente), e a concordância entre os resultados foi moderada (kappa de 0,6167). A nested PCR espécie-específica apresentou percentual de positividade significativamente maior (P<0,001) quando comparada às PCRs gênero-específica e espécie-específica em amostras de sêmen (53,93%) e de urina (49,07%)... / Diagnosis of Brucella ovis infection in rams is routinely performed by clinical examination, serology and bacteriology. Due to limitations presented by each technique, the diagnosis is usually made by two or more techniques to obtain a conclusive result. The Polymerase Chain Reaction (PCR) has been used as a diagnostic tool applicable because it is sensitive, inexpensive, rapid, simple to perform and allows the specific diagnosis of infectious agents. In this study, the positivity percentages of two techniques of PCR previous described, one genus-specific and other species-specific, were measured in 191 semen and 214 urine samples from sheep experimentally infected with strain of B. ovis REO 198. Then, a species-specific nested PCR was developed from amplified products of the species-specific PCR, and the percentage of positivity obtained by nested PCR was compared to those obtained by genus and species-specific PCRs. Significant difference was observed when comparing the percentage of positivity (P <0.05) between genus-specific and species-specific PCR (24.08% and 15.18%, respectively) in semen samples from sheep, and there was moderate agreement between the results of these techniques ( kappa 0.623). In urine, no significant difference between the percentages of positives samples obtained by genus and species-specific PCR was observed (10.28% and 7.011% respectively) and the concordance between the results was moderate (kappa 0.6167). The species-specific nested PCR showed significantly higher percentage of positivity (P <0.001) when compared to genus-specific and species-specific PCRs in semen (53.93%) and urine (49.07%). Thus, according to the results obtained in this experiment, the species-specific PCR showed the lower percentage of positivity when compared to genus-specific PCR, but the implementation of the species-specific nested PCR showed highly significant increase... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-17Bitstream added on 2014-06-13T19:56:23Z : No. of bitstreams: 1 putarov_tc_me_botfmvz.pdf: 721403 bytes, checksum: db6f049facb392575d608e413f06d369 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo do trabalho foi comparar a biodisponibilidade e os efeitos antioxidantes de fontes de selênio na forma orgânica e inorgânica em dietas para cães. Foram utilizados 24 cães machos da raça Beagle distribuídos em três tratamentos: controle (TC-0,11 ppm de Se), inorgânico (TI-0,30 ppm de Se na forma de selenito de sódio) e orgânico (TO-0,30 ppm de Se na forma de seleno levedura). O experimento seguiu um delineamento em blocos casualizados com medidas repetidas no tempo, os animais foram blocados por idade. Os animais foram mantidos por 10 dias em gaiolas metabólicas e submetidos à coleta total de fezes e urina, e mais 70 dias em baias para demais análises. Nas amostras de ração, fezes, urina e pêlos foram feitas análises de selênio. No sangue total foi determinada a atividade da GSH-Px e no 11º dia do experimento foi realizada a curva pós-prandial de absorção de selênio, até doze horas após a ingestão das dietas. O status oxidativo e a capacidade antioxidante foram avaliados no soro sanguíneo através da metodologia de TBARS (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico) e a capacidade antioxidante total (TAC), respectivamente. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey (P≤0,05). Para as varáveis ingestão de Se, excreção de Se nas fezes e retenção de Se o os animais do TC apresentaram menores valores quando comparados aos animais do TI e TO (P≤0,05). Não houve diferença para a excreção urinária e biodisponibilidade. Houve efeito de período para a concentração de selênio no plasma sanguíneo ocorrendo aumento para todos os animais. As concentrações de Se no pêlo dos animais dos grupos TI e TO foram maiores que as do TC ao final do experimento (P≤0,05). A área abaixo da curva do Se plasmático dos animais TO foi maior do que as dos demais, mostrando uma maior absorção... / The aim of this study was to compare the bioavailability of organic and inorganic selenium sources and their antioxidants functions in diets to dogs. Twentyfour male dogs were used and distributed in three treatments: control (TC-0,11 ppm of Se), inorganic (TI-0,30 ppm of sodium selenito) and organic (TO-0,30 ppm of Sel- Plex®). The experimental design was in a randomized blocks, the blocking factor was age. The experimental period was 80 days, the selenium balance trial was conducted at the first 10 days then the animals were transferred to kennels and the experiment lasted more 70 days. Feces, hair, urine, blood plasma and food were analyzed for selenium concentrations. The GSH-Px was determined in whole blood and at the 11th day a curve of selenium plasmatic absorption was conducted, the samples of blood plasma were obtained each 2 hours after feeding per 12 hours. The methodologies to access oxidative stress and antioxidant capacity were TBARS and total antioxidant capacity, respectively. The results were performed by analysis of variance and the means were compared by Tukey test (P≤0.05). For Se intake, fecal excretion of Se and Se retention, dogs from TC group showed lower values then TI and TO animals. There were no difference for urinary excretion of Se and Se bioavailability. For Se concentration in blood plasma the animals showed a higher value within 80 days even for animals from TC group. The concentration of selenium in hair increased within 80 days for animals from the TI and TO group. TO group had the major area under the curve differing statistically from the others groups showing a better absorption. The supplemented groups had the better values for GSH-Px activity. However, there were no significant differences among treatments for TBARS. For TAC there were no differences among the treatments, but during the experimental time the TAC values increased... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by LUIS FERNANDO MERCES CHAVES SILVA null (luisfernando.mchaves@gmail.com) on 2016-06-02T00:52:25Z No. of bitstreams: 1 TESE MESTRADO VERSÃO FINAL (LUIS FERNANDO M. C. SILVA).pdf: 2997186 bytes, checksum: 711036d97c3d4d1e8cce675ab6ad1477 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-06-06T14:47:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_lfmc_me_bot.pdf: 2997186 bytes, checksum: 711036d97c3d4d1e8cce675ab6ad1477 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T14:47:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_lfmc_me_bot.pdf: 2997186 bytes, checksum: 711036d97c3d4d1e8cce675ab6ad1477 (MD5) Previous issue date: 2016-04-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O surgimento das biotecnologias aplicadas ao sêmen equino, como a refrigeração e congelação, representaram um grande avanço para equinocultura, principalmente por permitir um melhor aproveitamento do ejaculado, otimizando a utilização de animais considerados geneticamente superiores. Entretanto a aplicação dessas técnicas imprime estresse térmico às células espermáticas, resultando em injúrias físicas e químicas, dentre elas uma elevação significativa na produção de espécies reativas do oxigênio (EROs). Quando em excesso, estes agentes instáveis são capazes de reagir e promover lesão às enzimas, lipídeos de membrana e ácidos nucleicos, reduzindo a viabilidade dos espermatozoides criopreservados. Desta maneira surge a necessidade de se introduzir elementos que desempenhem função antioxidante nos meios de refrigeração e congelação. A quercertina, um polifenol do grupo dos flavonoides, é considerada um poderoso antioxidante por reduzir o surgimento das principais EROs, quelar íons metálicos formadores de radicais livres e estabilizar a peroxidação lipídica. Apesar disto, a eficiência da aplicação deste antioxidante sobre o ejaculado equino durante o processo de criopreservação ainda é controversa e pouco referenciada, sendo necessário mais estudos para que se determine a influência de sua utilização no ejaculado de garanhões durante a refrigeração e congelação. / The emergence of biotechnologies applied to the equine semen as cooling and freezing process represented a major breakthrough for Equine, especially for allowing a better use of the ejaculate, optimizing the use of genetically superior animals. However the application of these techniques induces thermal stress on sperm cells, resulting in physical and chemical injuries, among them a significant rise in the production of reactive oxygen species (ROS). These unstable agents when in excess, are able to react and promote damage to enzymes, lipid membrane and nucleic acids, thereby reducing the viability of cryopreserved sperm. Thus is required to introduce elements that perform antioxidant function in cooling and freezing extenders. The quercertina, a polyphenol of the flavonoids group, is considered a potent antioxidant by reducing the emergence of the main ROS, chelate metal ions producers of free radicals and stabilize the lipid peroxidation. Despite this, the efficiency of application of this antioxidant on the equine ejaculate during the process of cryopreservation is still controversial and poorly referenced, requiring further studies in order to determine if there is influence of their use in the ejaculate of stallions during cooling and freezing. / FAPESP: 2014/01681-4