Orientador: Francisco Carlos Groppo / Dissertação (mestrado) Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-12T01:52:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simoes_RobertaPessoa_M.pdf: 1951478 bytes, checksum: fa986a3125f61b41fa59a6ea91b73746 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O presente trabalho teve por objetivo observar o efeito da amoxicilina, do diclofenaco sódico e da associação de ambos sobre a infecção estafilocócica induzida em tecidos granulomatosos, em ratos. Também foram avaliadas as concentrações sérica e teciduais da amoxicilina, observando o efeito da associação do diclofenaco sódico sobre as mesmas. Trinta animais receberam implantes de quatro esponjas de poliuretana subcutâneamente no dorso e, após 14 dias, dois dos tecidos resultantes (posicionados caudalmente) receberam 0,5mL de um inóculo de 108 ufcjmL de S. aureus ATCC 25923. Dois dias após, os animais foram divididos em grupos de seis, os quais receberam uma dose única de amoxicilina 50mgjkgjvo (grupo 1), amoxicilina 25 mg/kg/vo (grup02), diclofenaco sódico 2,5mg/kg/im (grupo 3), diclofenaco sódico 2,5mg/kg/im + amoxicilina 50mg/kg/vo (grupo 4) e soro fisiológico 1mLjanimal/vo (controle). Após 6h, dois tecidos granulomatosos (posicionados em direção à cabeça) e 10 _L de soro sangüíneo foram obtidos de cada animal, os quais foram dispostos em diferentes placas com MHA semeado com 108 ufcjmL de S. aureus ATCC 25923. Após incubação, foram medidos os halos de inibição proporcionados pelos tecidos granulomatosos e pelo soro sangüíneo. Dez microlitros, provenientes dos tecidos infectados após dispersão com auxílio de sonicador em tubos de ensaio contendo 10m L de NaCI foram distribuídos em placas contendo ágar salt manitol; permitiram a contagem do número de microrganismos em cada grupo. Os resultados mostraram concentrações teciduais de amoxicilina de 6,6 I-Ig/g para o grupo 1; 2,8I-1g/g para o grupo 2 e 0,8 I-Ig/g para o grupo 4. As concentrações séricas do antimicrobiano encontradas foram 11,6 I-Ig/mL para o grupo 1; 5,4I-1g/mL para o grupo 2 e 1,3I-1g/mL para o grupo 4. Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre o número de microrganismos dos grupos 1, 2 e 4. Entretanto, estes foram significativamente diferentes do controle e do grupo 3, os quais foram diferentes entre si. Foi concluído que, embora o diclofenaco sódico (grupo 4) tenha diminuído a concentração tecidual da amoxicilina, a concentração resultante foi suficiente para permitir uma redução do número de microrganismos viáveis similar à observada nos grupos 1 e 2 / Abstract: The aim of this work was to observe the effect of the amoxicillin, sodium diclofenac and amoxicillin plus sodium diclofenac against staphylococcal infection in granulomatous tissues. Four polyurethane sponges placed under the back skin of thirty rats induced these tissues. After 14 days two tissues (tall position) received 0.5 mL of 108 ufc of S. aureus ATCC 25923/mL. Two days after, the animais were divided into five groups of six each. Group 1 received an only dose of amoxicillin 50mgjkgjpo, group 2 received amoxicillin 25mgjkgjpo, group 3 received sodium diclofenac 2.5mgjkgjim, group 4 received sodium diclofenac 2.5mg/kg/im plus amoxicillin 50mg/kg/po, and group 5 (control group) received NaCI 1mLjpo. After six hours of drug administration, two tissues of each animal were removed. Blood was collected from cervical plexus and centrifuged. Then, 10j.JL of serum were placed on paper disks. These disks and tissues were placed on dishes with Mueller Hinton agar inoculated with 108 ufc of Staphylococcus aureus/mL The dishes were incubated over 18 hours, and the inhibition zones were measured. The infected granulomatous tissues were placed in 10mL of NaCI, and dispersed by sonic system. Ten microliters of this suspension were spread on salt manitol agar dishes. The resulting microorganisms were counted after the incubation. Results showed tissue concentrations of amoxicillin of 6.6 ug/g for group 1; 2.8ug/g for group 2, and 0.8 ug/g for group 4. Serum concentration of amoxicillin showed 11.6 ug/mL for group 1; 5.4ug/mL for group 2, and 1.3ug/mL for group 4. Statistically significant differences among the number of microorganisms groups 1, 2, and 4 were not observed. However, these previous groups were statistically different from groups 3 and 5, which were statistically different from each other. It was concluded that, although sodium diclofenac (group 4) reduced amoxicillin concentration in the tissue, the resulting concentration was enough to reduce the count of microorganism. Also, the number of microorganisms of group 4 was similar to the one observed in groups 1 and 2 / Mestrado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Mestre em Odontologia

Foi realizado um estudo para verificar a ocorrência de leveduras do gênero Rhodotorula, em hemocultura por um período de 8 anos. Os pacientes identificados foram descritos clinicamente segundo variáveis de interesse incluindo dados sobre terapêutica e desfecho. Determinou-se também as concentrações inibitórias mínimas de 20 cepas frente a diferentes antifúngicos de acordo com NCCLS e EUCAST. Realizou-se tipagem molecular através da cariotipagem eletroforética em campo pulsátil / A study was conducted to verify the frequency of occurrence of Rhodotorula spp. from blood cultures over an 8-year period, clinically and microbiologically characterizing patients affected, including data regarding antifungal treatment and outcome. The minimal inhibitory concentrations of antifungal agents were determined against 20 isolates. Molecular typing of the strains were performed using pulsed field gel electrophoresis method

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-05T11:28:33Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Larissa Gomes Bernardo - 2016.pdf: 1505576 bytes, checksum: d1e4cdc98f9bee2e3b82a6d8cdb3ed5d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-05T11:32:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Larissa Gomes Bernardo - 2016.pdf: 1505576 bytes, checksum: d1e4cdc98f9bee2e3b82a6d8cdb3ed5d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-05T11:32:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Larissa Gomes Bernardo - 2016.pdf: 1505576 bytes, checksum: d1e4cdc98f9bee2e3b82a6d8cdb3ed5d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study aimed to isolate and identify Staphylococcus aureus in fresh sausages that were handmade or industrially produced, and characterize isolates for susceptibility to antimicrobial agents and the presence of virulence genes. We collected 86 samples of fresh sausages, pork and chicken, in butchers of the city of Aparecida de Goiânia, Goiás. The temperature of the sausages was also measured at the time of collection. After microbiological analysis, the isolates were submitted to the antibiogram by disk diffusion technique, to typing by Pulsed Field Gel Electrophoresis and to detection of virulence genes by Polymerase Chain Reaction. Most sausages collected (68.6%) showed temperature above 4 ° C, ranging from 4.98 °C to 9.89 °C. Six samples were contaminated with Staphylococcus sp., with seven isolates, but with scores within the standard set by the Brazilian law (5.0 x 103 colony forming units per gram). Of the seven isolates obtained from different brands, collected in different butchers, three were identified as Staphylococcus aureus by detection of the femA gene, were sensitive to all antibiotics tested and showed 100% similarity by Pulsed Field. The genes encoding the hemolysins A and B, and enterotoxin H were detected in three of S. aureus strains and in one of them were already detected the genes encoding enterotoxins G and I. The survey allowed to detect S. aureus in fresh sausages, and the possibility of expression of enterotoxins genes., The presence of isolates genetically identical identified in samples obtained of distinct brands and from different butchers indicate common source of contamination or spread of particular strains in this type of food. It should be noted therefore the need to observe the product's storage conditions such as temperature when that significant amounts of toxins are not produced and become risk for the occurrence of outbreaks. / Este estudo teve como objetivo isolar e identificar Staphylococcus aureus em linguiças frescais, fabricadas artesanalmente ou de modo industrial, e caracterizar os isolados quanto à suscetibilidade a antimicrobianos e à presença de genes de virulência. Foram coletadas 86 amostras de linguiças frescais, suína e de frango, em açougues do Município de Aparecida de Goiânia, Goiás. A temperatura das linguiças foi aferida no momento da coleta. Após análise microbiológica, realizou-se o antibiograma pela técnica de disco-difusão, tipagem microbiana por eletroforese em gel em campo pulsado e detecção de genes de virulência pela Reação em Cadeia de Polimerase. A maioria das linguiças coletadas (68,6%) apresentaram temperatura superior a 4 ºC, variando de 4,98 ºC a 9,89 ºC. Seis amostras estavam contaminadas por Staphylococcus sp., sendo obtidos sete isolados, porém com contagens conforme o padrão estabelecido pela legislação brasileira em vigor (5,0 x 103 unidades formadoras de colônia por grama). Dos sete isolados, três obtidos de amostras de marcas distintas, coletados em açougues diferentes, foram identificados como Staphylococcus aureus pela detecção do gene femA, apresentaram sensibilidade a todos os antibióticos testados e 100% de similaridade pela técnica de Pulsed Field. Foi detectada a presença de genes que codificam as hemolisinas A e B e a enterotoxina H nos três isolados de S. aureus e em um deles ainda foram detectados os genes que codificam as enterotoxinas G e I. A pesquisa permitiu detectar S. aureus em linguiças frescais e a possibilidade de expressão de genes de enterotoxinas. A presença de isolados semelhantes geneticamente, identificados em amostras oriundas de açougues diferentes e de marcas distintas, indicam origem comum de contaminação ou difusão de linhagens particulares neste tipo de alimento. Ressalta-se portanto, a necessidade de se observar as condições de armazenamento do produto como a temperatura, para que quantidades expressivas de toxinas não sejam produzidas e se tornem risco para a ocorrência de surtos de origem alimentar.

Diss. (sammanfattning) Linköping : Linköpings universitet, 2005. / Härtill 5 uppsatser.

CNPQ; Fundação Araucária / Os enterococos são cocos Gram-positivos que pertencem ao grupo das bactérias ácido láticas (BAL). Podem ser isolados de plantas, solo, água, alimentos e do trato digestório de humanos e outros mamíferos. Alguns isolados são potencialmente patogênicos e resistentes a antimicrobianos, principalmente à vancomicina e demais antimicrobianos clinicamente importantes. Devido a este cenário, alimentos estão sendo sugeridos como reservatórios de enterococos resistentes a antimicrobianos. Contudo, são escassos os estudos que analisam a presença deste microrganismo em vegetais. Portanto, este trabalho teve como objetivo isolar e identificar Enterococcus spp. a partir de amostras de vegetais folhosos, legumes e raízes, e verificar sua suscetibilidade a antimicrobianos e formação de biofilme. Os isolados foram identificados ao nível de gênero/espécie pela reação da polimerase em cadeia (PCR), utilizando os oligonucleotídeos iniciadores das principais espécies. A sensibilidade a antimicrobianos foi determinada pelo método de disco-difusão e a presença dos genes ermB, aac-(6'), tetL, tetM, vanA e vanB pela PCR. A capacidade de formação de biofilme foi determinada, in vitro, por biomassa total. Foram obtidos 85 isolados de Enterococcus distribuídos em 62% das amostras analisadas. As espécies identificadas foram: Enterococcus casseliflavus/flavescens, Enterococcus columbae, Enterococcus faecium, Enterococcus mundtii e Enterococcus avium. Dos isolados 64% apresentaram resistência fenotípica a todos os antimicrobianos testados, principalmente à vancomicina, eritromicina, teicoplanina, ampicilina e penicilina. A maioria das espécies apresentou pelo menos um isolado resistente à vancomicina. Dos isolados resistentes 61% apresentaram multirresistência. Os genes detectados foram: tetM (15%), tetL (8%), vanA (5%), vanB (4%) e aac-(6') (2%). Todos os isolados foram capazes de formar biofilme, onde 27% foram classificados como produtor de biofilme fraco, 60% moderado e 13% forte. Os isolados produtores de biofilme moderado foram os que mais apresentaram resistência à vancomicina, teicoplanina, eritromicina e penilicina. De acordo com estes resultados, os vegetais podem atuar como reservatório de enterococos resistentes a diversos antimicrobianos de importância clínica, principalmente à vancomicina. Isso representa um risco para a saúde pública uma vez que a vancomicina é o último recurso terapêutico para o tratamento de infecções enterocócicas graves. / The e enterococci are Gram-positive cocci that belong to the group of lactic acid bacteria (LAB). They can be isolated from plants, soil, water, food and the digestive tract of humans and other mammals. Some strains are potentially pathogenic and resistant to antibiotics, especially vancomycin and other clinically important antibiotics. Due to this scenario, foods are being suggested as reservoirs enterococci resistant to antimicrobials. However, there are few studies that analyze the presence of this organism in food vegetable. Therefore, this study aimed to isolate and identifyenterococci from samples of leafy vegetables, legumen and roots, and verify their susceptibility to antimicrobial and biofilm formation. Isolates were identified to genus / species by polymerase chain reaction (PCR) using the primers of the main species.The antimicrobial susceptibility was determined by disk diffusion method and thepresence of ermB genes, aac (6 '), tetL, tetM, vanA and vanB by PCR. Biofilm formation ability was determined in vitro by the total biomass. 85 were obtainedEnterococcus distributed in 62% of samples. The species identified were:Enterococcus casseliflavus/flavescens, Enterococcus columbae, Enterococcus faecium, Enterococcus mundtii and Enterococcus avium. From the isolates showed 64% phenotypic resistance to all tested antibiotics, especially vancomycin, erythromycin, teicoplanin, ampicillin and penicillin. Most species had at least one isolate resistant to vancomycin. 61% of resistant isolates showed multidrug resistance. The genes were detected: tet M (15%), tetL (8%), vanA (5%), vanB (4%)and aac-(6 ') (2%). All isolates were able to form biofilm, where 27 % were classifiedas weak biofilm producer, 60 % moderate and 13 % stronger. Isolated producers of moderate biofilm were the ones who were resistant to vancomycin, teicoplanin, erythromycin and penillicin. According to these results, the vegetables can act as a reservoir of enterococci resistant to several antibiotics of clinical importance, especially vancomycin. This represents a risk to public health since vancomycin is the last therapeutic option for the treatment of severe enterococcal infections.

Foi realizado um estudo para verificar a ocorrência de leveduras do gênero Rhodotorula, em hemocultura por um período de 8 anos. Os pacientes identificados foram descritos clinicamente segundo variáveis de interesse incluindo dados sobre terapêutica e desfecho. Determinou-se também as concentrações inibitórias mínimas de 20 cepas frente a diferentes antifúngicos de acordo com NCCLS e EUCAST. Realizou-se tipagem molecular através da cariotipagem eletroforética em campo pulsátil / A study was conducted to verify the frequency of occurrence of Rhodotorula spp. from blood cultures over an 8-year period, clinically and microbiologically characterizing patients affected, including data regarding antifungal treatment and outcome. The minimal inhibitory concentrations of antifungal agents were determined against 20 isolates. Molecular typing of the strains were performed using pulsed field gel electrophoresis method

Abstract Medicinal plants have been for long remedies for human diseases because they contain components of therapeutic value. The growing problem of antibiotic resistance by organisms demands the search for novel compounds from plant based sources. The present study was aimed at evaluating the bioactivity and phytochemical analysis of Hydnora africana on clinical and standard strains of Helicobacter pylori (PE 252C and ATCC 43526), Aeromonas hydrophila ATCC 35654, and Staphylococcus aureus NCT 6571 in an effort to identify potential sources of cheap starting materials for the synthesis of new drugs against these strains. Ethyl acetate, acetone, ethanol, methanol, and water crude extracts of H. africana were screened for activity against the test organisms using the agar well diffusion assay. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC50) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of the most potent extracts were determined by the microdilution method, followed by qualitative phytochemical analysis. Results were analyzed statistically by ANOVA one - way test. Different concentrations (200,100, 50mg/mL) of the methanol, acetone, ethanol and ethyl acetate extracts showed activity against S. aureus and A. hydrophila while for H. pylori, only methanol and ethyl acetate extracts were active; water showed no activity for all studied bacterial pathogens. Mean zone diameter of inhibition which ranged from 0-22mm were observed for all test bacterial pathogens and 14-17mm for ciprofloxacin. The activity of methanol and ethyl acetate extracts were statistically significant (P< 0.05) compared to all the other extracts. MIC50 and MBC ranged from 0.078 – 2.5mg/mL, 0.78-25mg/mL respectively for all tested bacterial pathogens. For ciprofloxacin, the MIC50 and MBC ranged from 0.00976 – 0.078mg/mL and 0.098– 0.78mg/mL respectively. There was no statistically significant difference between extracts (methanol, acetone, ethanol, ethyl acetate) and the control antibiotic (ciprofloxacin) (P> 0.05). Qualitative phytochemical analysis confirmed the presence of alkaloids, saponins, steroids, tannins and flavonoids in the methanol, acetone,ethanol and ethyl acetate extracts. The results demonstrate that H. africana may contain compounds with therapeutic potentials which can be lead molecules for semi-synthesis of new drugs.

Les archaea constituent l'un des quatre domaines connus du vivant. Contrairement à ce que leur nom laisse supposer, elles ont colonisé tous les écosystèmes et les microbiotes de certains hôtes dont l'Homme. Chez l'homme, certaines espèces d'archaea méthanogènes ont été associées aux muqueuses orale, intestinale et vaginale. Ces archaea méthanogènes sont des procaryotes anaérobies stricts et leurs conditions de culture restent fastidieuses et très mal connues. Quatre archaea methanogènes seulement ont été isolées à partir de prélèvements humains y compris dans le microbiote digestif Methanobrevibacter smithii détectée dans 95,7% des individus, Methanosphaera stadtmanae retrouvée chez environ un tiers des individus et plus récemment dans notre laboratoire Methanomassilicoccus luminyensis détectée en moyenne chez 4% des individus avec une prévalence liée à l'âge ; et dans le microbiote orale Methanobrevibacter oralis isolée à partir de la plaque dentaire. / Archaea is one of four known domains of life. Unlike what their name suggests, they some species of methanogenic archaea have been associated with oral, vaginal and intestinal mucosa. These methanogenic archaea are obligate anaerobic prokaryotes and their culture conditions are fastidious and very poorly known. Only four methanogenic archaea have been isolated from human samples including the digestive microbiota; Methanobrevibacter smithii detected in 95.7% of individuals Methanosphaera stadtmanae found in approximately one third of individuals and more recently in our laboratory Methanomassilicoccus luminyensis detected on average in 4% of individuals with a prevalence of age-related, and in the oral microbiota Methanobrevibacter oralis isolated from dental plaque.

Introdução: O Clostridium difficile é um bacilo Gram-positivo, anaeróbio estrito, formador de esporos, que produz toxinas que podem causar diarreia, colite pseudomembranosa, dilatação do cólon, sepse e até morte. Nos últimos anos o quadro clínico e epidemiológico das infecções por Clostridium difficile tem se modificado e as limitações das opções terapêuticas tornaram-se mais evidentes. Objetivo Primário: Comparar as metodologias de disco-difusão e ágar-diluição na detecção de sensibilidade/resistência de isolados de Clostridium difficile. Objetivos Secundários: Avaliar prospectivamente o perfil de sensibilidade/resistência de isolados clínicos hospitalares de Clostridium difficile provenientes de seis hospitais terciários da cidade de São Paulo e fornecer evidências para fundamentar o diagnóstico e o tratamento empírico das diarreias causadas por Clostridium difficile. Métodos: utilizamos os métodos de disco-difusão e ágar-diluição, de acordo com os critérios estabelecidos pelo CLSI e EUCAST. Resultados: Os coeficientes de correlação observados entre os diâmetros dos halos de inibição e Concentração Inibitória Mínima foram abaixo do esperado tornando inviável o método de disco-difusão para determinação de sensibilidade aos antimicrobianos nitazoxanida, teicoplanina e tigeciclina. Todas as 50 cepas deste estudo foram sensíveis ao metronidazol (MIC50 foi de 1 ?g/mL a MIC90 foi de 2 ug/mL). Para o método de disco-difusão, sugerimos que halos de inibição >= 33mm possam ser interpretados como sensíveis. Devido à moderada correlação, significância estatística e distribuição de halos de inibição das amostras próximos aos valores encontrados utilizando a cepa ATTC, sugere-se a utilização do método de disco-difusão para vancomicina, onde halos com diâmetro >= 22mm possam ser considerados como sensíveis pelo método. Para o moxifloxacino houve uma boa correlação entre as duas metodologias: discodifusão e de ágar-diluição (O coeficiente de Pearson foi de -0,84, e o valor de p foi menor que 0,00001), sugerindo que halos de inibição >= 18mm possam ser interpretados como sensíveis pela metodologia de disco-difusão. A nitazoxanida foi à droga que mostrou melhor atividade in vitro (MIC50 foi 0,06 ?g/mL e a MIC90 de 0,12 ug/mL). Por se mostrar uma droga com potente atividade in vitro (MIC50 e a MIC90 foi de 0,12 ug/mL), a tigeciclina poderia ser mais uma opção terapêutica em infecções por Clostridium difficile, dependendo de mais estudos para avaliar sua real eficácia clínica e segurança. Conclusão: Os resultados verificados neste estudo indicam a necessidade de mais estudos in vitro e clínicos para definir os limites de sensibilidade/resistência para a teicoplanina e a nitazoxanida, pois faltam critérios de interpretação tanto para disco-difusão quanto para ágar-diluição. Os resultados deste trabalho in vitro confirmaram a utilidade do metronidazol como uma droga eficaz no tratamento de infecção por Clostridium difficile. A nitazoxanida foi à droga que mostrou melhor atividade in vitro por método dilucional. Sugerimos a utilização do método de disco-difusão para: metronidazol, vancomicina e moxifloxacino. Os resultados desse trabalho sugerem que halos de inibição para metronidazol ( >= 33mm), moxifloxacino ( >= 18mm) e vancomicina ( >= 22mm) poderiam ser considerados como sensíveis pelo método de disco-difusão. O método de ágardiluição é um método de boa acurácia, porém trabalhoso para ser executado na rotina laboratorial / Introduction: Clostridium difficile is a Gram-positive bacillus, strictly anaerobic, spore-forming, which produces toxins that can cause diarrhea, colitis pseudomembranous, colon expansion, sepsis and even death. In recent years the clinical and epidemiological picture of infection by Clostridium difficile has been modified and limitations of therapeutic options have become more evident. Primary Objective: Comparing the methods of disk diffusion and agar dilution in the detection sensitivity/resistance isolates of Clostridium difficile. Secondary Objectives: Prospectively evaluate the profile of sensitivity/resistance of hospital clinical isolates of Clostridium difficile from six tertiary hospitals in São Paulo city and provide evidence to support the diagnosis and empirical treatment of diarrhea caused by Clostridium difficile. Methods: We use the disk diffusion method and agar dilution method, according to the established criteria by CLSI and EUCAST. Results: The observed correlation coefficients between the inhibitions diameter zone of the and Minimum Inhibitory Concentration were under expectations impeding the disk diffusion method for determining sensitivity to nitazoxanide antimicrobial, teicoplanin and tigecycline. All 50 strains of this study were sensitive to metronidazole (MIC50 was 1 Ug/ml to MIC90 was 2 ug/ml). For the method disk diffusion, we suggest that inhibition zones >= 33mm can be interpreted as sensitive. Due to the moderate correlation, statistical significance and distribution of zones of inhibition on samples of the next found values using the strain ATTC, we suggest using the disk diffusion method for vancomycin where halos diameter >= 22mm can be considered as sensitive by the method. There was a good correlation to moxifloxacin between the two methodologies: disk diffusion and agar dilution (Pearson\'s coefficient was -0.84 , and the \"p\" value was less than 0.00001), suggesting that inhibition zones >= 18mm can be interpreted as sensitive by disk diffusion method. Nitazoxanide was the drug that showed a better performance in vitro activity (MIC50 was 0.06 ?g/ml and MIC90 0.12 ug/ml). For a drug that shows potent activity in vitro (MIC50 and MIC90 was 0.12 ug/ml), the tigecycline could be a therapeutic option in infection by Clostridium difficile, depending on further studies to evaluate their real clinical efficacy and security. Conclusion: Obtained results in this study indicate the need for further studies in vitro and clinicians to define the limits of sensitivity/resistance to teicoplanin and nitazoxanide, so there is no interpretation criteria for both disk diffusion and for agar dilution. Results of this work in vitro study confirmed the utility of metronidazole as an effective drug in the treatment of infection by Clostridium difficile. Nitazoxanide was the drug that showed better performance in vitro by dilutional method. We suggest the use of disk diffusion method: metronidazole, vancomycin and moxifloxacin. This work suggest that inhibition zones for metronidazole ( >= 33mm), moxifloxacin ( >= 18mm) and vancomycin ( >= 22mm) could be considered as sensitive by disk diffusion method. The agar dilution method is a method to be accurate, but laborious to run in the laboratory routine

Introdução: O Clostridium difficile é um bacilo Gram-positivo, anaeróbio estrito, formador de esporos, que produz toxinas que podem causar diarreia, colite pseudomembranosa, dilatação do cólon, sepse e até morte. Nos últimos anos o quadro clínico e epidemiológico das infecções por Clostridium difficile tem se modificado e as limitações das opções terapêuticas tornaram-se mais evidentes. Objetivo Primário: Comparar as metodologias de disco-difusão e ágar-diluição na detecção de sensibilidade/resistência de isolados de Clostridium difficile. Objetivos Secundários: Avaliar prospectivamente o perfil de sensibilidade/resistência de isolados clínicos hospitalares de Clostridium difficile provenientes de seis hospitais terciários da cidade de São Paulo e fornecer evidências para fundamentar o diagnóstico e o tratamento empírico das diarreias causadas por Clostridium difficile. Métodos: utilizamos os métodos de disco-difusão e ágar-diluição, de acordo com os critérios estabelecidos pelo CLSI e EUCAST. Resultados: Os coeficientes de correlação observados entre os diâmetros dos halos de inibição e Concentração Inibitória Mínima foram abaixo do esperado tornando inviável o método de disco-difusão para determinação de sensibilidade aos antimicrobianos nitazoxanida, teicoplanina e tigeciclina. Todas as 50 cepas deste estudo foram sensíveis ao metronidazol (MIC50 foi de 1 ?g/mL a MIC90 foi de 2 ug/mL). Para o método de disco-difusão, sugerimos que halos de inibição >= 33mm possam ser interpretados como sensíveis. Devido à moderada correlação, significância estatística e distribuição de halos de inibição das amostras próximos aos valores encontrados utilizando a cepa ATTC, sugere-se a utilização do método de disco-difusão para vancomicina, onde halos com diâmetro >= 22mm possam ser considerados como sensíveis pelo método. Para o moxifloxacino houve uma boa correlação entre as duas metodologias: discodifusão e de ágar-diluição (O coeficiente de Pearson foi de -0,84, e o valor de p foi menor que 0,00001), sugerindo que halos de inibição >= 18mm possam ser interpretados como sensíveis pela metodologia de disco-difusão. A nitazoxanida foi à droga que mostrou melhor atividade in vitro (MIC50 foi 0,06 ?g/mL e a MIC90 de 0,12 ug/mL). Por se mostrar uma droga com potente atividade in vitro (MIC50 e a MIC90 foi de 0,12 ug/mL), a tigeciclina poderia ser mais uma opção terapêutica em infecções por Clostridium difficile, dependendo de mais estudos para avaliar sua real eficácia clínica e segurança. Conclusão: Os resultados verificados neste estudo indicam a necessidade de mais estudos in vitro e clínicos para definir os limites de sensibilidade/resistência para a teicoplanina e a nitazoxanida, pois faltam critérios de interpretação tanto para disco-difusão quanto para ágar-diluição. Os resultados deste trabalho in vitro confirmaram a utilidade do metronidazol como uma droga eficaz no tratamento de infecção por Clostridium difficile. A nitazoxanida foi à droga que mostrou melhor atividade in vitro por método dilucional. Sugerimos a utilização do método de disco-difusão para: metronidazol, vancomicina e moxifloxacino. Os resultados desse trabalho sugerem que halos de inibição para metronidazol ( >= 33mm), moxifloxacino ( >= 18mm) e vancomicina ( >= 22mm) poderiam ser considerados como sensíveis pelo método de disco-difusão. O método de ágardiluição é um método de boa acurácia, porém trabalhoso para ser executado na rotina laboratorial / Introduction: Clostridium difficile is a Gram-positive bacillus, strictly anaerobic, spore-forming, which produces toxins that can cause diarrhea, colitis pseudomembranous, colon expansion, sepsis and even death. In recent years the clinical and epidemiological picture of infection by Clostridium difficile has been modified and limitations of therapeutic options have become more evident. Primary Objective: Comparing the methods of disk diffusion and agar dilution in the detection sensitivity/resistance isolates of Clostridium difficile. Secondary Objectives: Prospectively evaluate the profile of sensitivity/resistance of hospital clinical isolates of Clostridium difficile from six tertiary hospitals in São Paulo city and provide evidence to support the diagnosis and empirical treatment of diarrhea caused by Clostridium difficile. Methods: We use the disk diffusion method and agar dilution method, according to the established criteria by CLSI and EUCAST. Results: The observed correlation coefficients between the inhibitions diameter zone of the and Minimum Inhibitory Concentration were under expectations impeding the disk diffusion method for determining sensitivity to nitazoxanide antimicrobial, teicoplanin and tigecycline. All 50 strains of this study were sensitive to metronidazole (MIC50 was 1 Ug/ml to MIC90 was 2 ug/ml). For the method disk diffusion, we suggest that inhibition zones >= 33mm can be interpreted as sensitive. Due to the moderate correlation, statistical significance and distribution of zones of inhibition on samples of the next found values using the strain ATTC, we suggest using the disk diffusion method for vancomycin where halos diameter >= 22mm can be considered as sensitive by the method. There was a good correlation to moxifloxacin between the two methodologies: disk diffusion and agar dilution (Pearson\'s coefficient was -0.84 , and the \"p\" value was less than 0.00001), suggesting that inhibition zones >= 18mm can be interpreted as sensitive by disk diffusion method. Nitazoxanide was the drug that showed a better performance in vitro activity (MIC50 was 0.06 ?g/ml and MIC90 0.12 ug/ml). For a drug that shows potent activity in vitro (MIC50 and MIC90 was 0.12 ug/ml), the tigecycline could be a therapeutic option in infection by Clostridium difficile, depending on further studies to evaluate their real clinical efficacy and security. Conclusion: Obtained results in this study indicate the need for further studies in vitro and clinicians to define the limits of sensitivity/resistance to teicoplanin and nitazoxanide, so there is no interpretation criteria for both disk diffusion and for agar dilution. Results of this work in vitro study confirmed the utility of metronidazole as an effective drug in the treatment of infection by Clostridium difficile. Nitazoxanide was the drug that showed better performance in vitro by dilutional method. We suggest the use of disk diffusion method: metronidazole, vancomycin and moxifloxacin. This work suggest that inhibition zones for metronidazole ( >= 33mm), moxifloxacin ( >= 18mm) and vancomycin ( >= 22mm) could be considered as sensitive by disk diffusion method. The agar dilution method is a method to be accurate, but laborious to run in the laboratory routine