Thesis (Ph. D.)--Illinois State University, 1999. / Title from title page screen, viewed July 31, 2006. Dissertation Committee: Radheshyam K. Jayaswal (chair), Brian J. Wilkinson, Anthony J. Otsuka, David L. Williams, Wade A. Nichols. Includes bibliographical references and abstract Also available in print.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-12-13Bitstream added on 2014-06-13T20:21:07Z : No. of bitstreams: 1 braoios_a_dr_arafcf.pdf: 1217984 bytes, checksum: 5239ef0501af6f189fd2b422aad8dc7d (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Staphylococcus aureus é um dos principais agentes de infecção humana, especialmente em indivíduos hospitalizados. Cepas MRSA (Methicillin Resistant Staphylococcus aureus) constituem um grave problema em hospitais de todo o mundo, aumentando a morbidade e mortalidade de indivíduos infectados. A vancomicina é uma das únicas opções terapêuticas. No entanto, o uso excessivo desse antibiótico pode selecionar cepas resistentes, agravando ainda mais o problema. Trabalhadores hospitalares podem carrear S. aureus nas narinas anteriores e pele e, assim, constituem um importante elo na epidemiologia das infecções nosocomiais. Nesse trabalho foram coletadas amostras das mãos e narinas de 100 trabalhadores do Hospital Universitário Dr. Domingos Leonardo Cerávolo da Universidade do Oeste Paulista - UNOESTE, em Presidente Prudente (SP). Desse total, 68% não eram portadores de S. aureus, 27% carreavam S. aureus sensível a meticilina, 4% carreavam MRSA e 1% carreava BORSA (Borderline Oxacillin Resistant Staphylococcus aureus). No mesmo período (julho a dezembro de 2002), 54,3% das infecções estafilocócicas em pacientes internados nessa Instituição tinham como agente MRSA. A técnica da PCR (Polymerase Chain Reaction) Multiplex para a detecção do gene femA (gene espécie-específico), mecA (resistência à meticilina) e ileS-2 (resistência à mupirocina) foi comparada com o método da difusão com discos e provas convencionais de identificação. Os resultados da PCR Multiplex apresentaram completa concordância com os resultados obtidos com os testes fenotípicos convencionais. Para verificar a relação genética entre as 30 cepas MRSA, 5 isoladas de trabalhadores e 25 de pacientes, foram realizadas a antibiotipagem e tipagem molecular através da técnica RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA). Pela antibiotipagem as cepas MRSA foram... . / Staphylococcus aureus is considered as a major infeccious disease agent in human, especially in hospitalized people. Methicillin-resistant strains (MRSA) constitute a serious problem in hospitals around the world, increasing the morbity and mortality rate of infected people. Usually, vancomycin is the only therapeutic choice for the treatment of MRSA infections. However, excessive use of this antibiotic can select resistant strains, aggravating the problem. Health workers can carry S. aureus in the anterior nares and skin, constituting an important link for the epidemiology of nosocomial infections. In this study, samples of the hands and nares of one hundred workers from the University Hospital Dr. Domingos Leonardo Cerávolo , at Presidente Prudente, SP, Brazil, were assessed. Among the one hundred workers, 68% did not carry S. aureus, methicillin-susceptible S. aureus was found in 27/100 (27%) of those people; MRSA in 4/100 (4%) and BORSA (Borderline Resistant Staphylococcus aureus) was found in 1 (1%) health worker. In the same period (July to December of 2002), 54,3% of the staphylococcal infections in hospitalized patients were caused by MRSA. Multiplex PCR assay for the detection of femA (species-specific gene), mecA (methicillin resistance gene) and ileS-2 (mupirocin resistance gene) was compared to the disk diffusion susceptibility test and conventional identification test methods. The Multiplex PCR technic results were in complete agreement with the results obtained from conventional methods. Genetic relationship among the 30 MRSA strains, five isolated from workers and twenty five from patients, was established by antibiotyping and molecular typing by RAPD. On the basis of the antibiotyping, the 30 strains were grouped into four clusters (A to D), of a which 87% were grouped into antibiotype A. According to the profile of RAPD, eight clusters... (Complete abstract, click electronic address below).

Orientador: Debora de Barros Barbosa / Coorientadora: Andresa Aparecida Berretta e Silva / Banca: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Banca: Denise Pedrini Ostini / Banca: Luiz Fernando Gorup / Banca: Elaine Cristina Guerbach Conti / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de produção de nanopartículas de prata através do extrato da casca de romã, e produzir formulações contendo estas nanopartículas para uso em feridas. Elas foram testadas quanto à ação antimicrobiana, citotóxica e potencial cicatrizante. Para a produção das nanopartículas de prata propôs-se uma síntese utilizando-se como base duas metodologias já estabelecidas na literatura, utilizando-se para reação carboximetilcelulose, propilenoglicol, nitrato de prata, água e extrato da casca de romã como agente redutor. O extrato da casca de romã foi caracterizado em parâmetros como pH, massa seca e quantidade de taninos bioativos (ácido elágico e totais fenólicos expressos em ácido gálico). Os totais fenólicos do extrato foram também dosados após seu aquecimento nas diferentes condições de tempo e temperatura propostos para as sínteses das nanopartículas de prata (12 minutos, 1 hora e 2 horas, à 50ºC e 100ºC). As nanopartículas de prata produzidas foram, então, adicionadas a uma solução contendo compostos para produção de formulações para serem utilizadas no tratamento de feridas. Elas foram caracterizadas através de espectroscopia UV-Visível, microscopia eletrônica de varredura (MEV), potencial zeta e dosagem de íons remanescentes após as reações. A atividade antimicrobiana tanto das nanopartículas como de suas formulações contra Candida albicans SC 5314 e Staphylococcus aureus ATCC 25923 foi avaliada por meio do método da microdiluição. ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to investigate the production of silver nanoparticles through peel extract of pomegranate, and produce formulations containing these particles to be used in wound healings. Its antimicrobial action, cytotoxicity and healing potential were tested. The synthesis of silver nanoparticles were based on two methods proposed in the literature with some modifications, which were used carboxymethylcellulose, propylene glycol, silver nitrate, water and peel extract of pomegranate as reducing agent. The peel extract was characterized by pH, dry mass and bioactive tannins (elagic acid and total phenols expressed as galic acid). The total phenols were also quantified after being heated at 50ºC and 100ºC for 12 minutes, 1 hour and 2 hours. Then, silver nanoparticles were added in a solution containing products to develop a formulation to be tested in wound healing. They were characterized by UV-Vis spectroscopy, scanning electron microscopy (SEM), zeta potential and the quantification of remaining silver ions after the synthesis reaction. The antimicrobial activity of the nanoparticles and formulations were tested against Candida albicans (SC 5314) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923) by microdilution method. After submitting the peel extract to different conditions of temperature and times (50ºC and 100ºC for 12 minutes, 1 hour and 2 hours), it was noted that the values of the minimum inhibitory concentration was not affected and were 391 μg/ml and 781 μg/ml for S. aureus and C. albicans. The formation of silver nanoparticles was confirmed through the formation of characteristic peaks in the UV-Vis spectroscopy and SEM images, and it was observed that the reaction at 50ºC for 12 min produced silver nanoparticles with regular forms and better dispersed in the formulation. The synthesis proposed promoted... / Doutor

As doenças infecciosas estão entre as principais causas de morte no mundo. Nas infecções bacterianas, os componentes das paredes destes organismos são descritos como os principais antígenos. Os macrófagos estão diretamente envolvidos no reconhecimento e ataque de agentes patogênicos, além de atuarem como moduladores da resposta imunológica. Os macrófagos participam do combate às infecções bacterianas através da fagocitose dos agentes patogênicos e da produção de diversos mediadores inflamatórios como citocinas, metaloproteinases (MMP), espécies reativas de oxigênio (ROS) e óxido nítrico(NO). Estes mediadores são importantes na resposta inflamatória, contribuindo para o controle da infecção. Entretanto, a produção exacerbada destas moléculas contribui na patogênese das complicações associadas à inflamação, como a sepse e a falência múltipla de órgão. A maior parte dos estudos tem focado a resposta das células imunes a infecções por bactérias gram-negativas ou ao seu principal antígeno, o lipopolisacarídeo (LPS). No entanto, as infecções por bactérias gram-positivas são freqüentes e resultam em grande taxa de mortalidade. As doenças infecciosas estão entre as principais causas de morte no mundo. Nas infecções bacterianas, os componentes das paredes destes organismos são descritos como os principais antígenos. Os macrófagos estão diretamente envolvidos no reconhecimento e ataque de agentes patogênicos, além de atuarem como moduladores da resposta imunológica. Os macrófagos participam do combate às infecções bacterianas através da fagocitose dos agentes patogênicos e da produção de diversos mediadores inflamatórios como citocinas, metaloproteinases (MMP), espécies reativas de oxigênio (ROS) e óxido nítrico(NO). Estes mediadores são importantes na resposta inflamatória, contribuindo para o controle da infecção. Entretanto, a produção exacerbada destas moléculas contribui na patogênese das complicações associadas à inflamação, como a sepse e a falência múltipla de órgão. A maior parte dos estudos tem focado a resposta das células imunes a infecções por bactérias gram-negativas ou ao seu principal antígeno, o lipopolisacarídeo (LPS). No entanto, as infecções por bactérias gram-positivas são freqüentes e resultam em grande taxa de mortalidade. Os receptores de adenosina, em macrófagos, possuem função antiinflamatória em modelos de infecções por bactérias gram-negativas, no entanto, pouco se investigou a ação destes receptores em infecções por bactérias gram-positivas. O diabetes é uma doença metabólica comum que apresenta diversas complicações secundárias, muitas delas associadas aos níveis elevados de glicose. Os pacientes diabéticos apresentam uma ocorrência aumentada de infecções bacterianas, além de o diabetes tipo 2 estar associado com uma inflamação crônica, caracterizada por níveis plasmáticos aumentados de citocinas pró-inflamatórias. Adicionalmente, estes pacientes possuem maior risco de desenvolver doenças cardiovasculares e aterosclerose, o que tem sido relacionado à hiperglicemia e à inflamação crônica. A regulação, pela glicose, da resposta inflamatória em macrófagos expostos a bactérias gram-negativas ou ao seu antígeno principal, o LPS, é descrita, entretanto, a ação da glicose em modelos de infecções por bactérias gram-positivas não é conhecida. O tratamento dos macrófagos RAW 264.7 com concentrações elevadas de glicose aumentaram a resposta inflamatória ao LTA, com o aumento da produção de NO, TNF-a e MMP-9. Estes resultados mostram que tanto os receptores de adenosina como concentrações elevadas de glicose modulam a resposta inflamatória a S. aureus. Os receptores de adenosina parecem atuar num mecanismo autócrino de modulação da resposta inflamatória, apontando um possível alvo terapêutico. Já a modulação da resposta inflamatória dos macrófagos por concentrações aumentadas de glicose pode contribuir para complicações associadas ao diabetes, como a aterosclerose e a inflamação crônica. / Infectious diseases are among the majors causes of mortality around the world. In bacterial infections, the bacterial cell wall components are described as the main antigens. The macrophages are key mediators of inflammatory response, acting in the attack to the pathogens and in the regulation of immune response. These cells act in the phagocytosis of pathogenic agents and in the production of inflammatory mediators, like cytokines, matrix-metalloproteinases (MMP), reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide (NO). These mediators participate of inflammatory response, acting in infection control, notwithstanding, exacerbated production of these molecules could contribute to inflammatory complications, like sepsis and multiple organ failure. Several studies has addressed the inflammatory response to gram-negative bacterial infections or lipopolysaccharide (LPS), the main antigen of these microorganisms, however grampositive bacterial infections are prevalent and associated to high mortality. The adenosine receptors are described to possess anti-inflammatory properties in macrophages in gram-negative bacterial infections models but the role of these receptors in gram-positive bacterial infections is unknown. Diabetes is a prevalent metabolic disorder which presents several associated complications; much of them associated to increased glucose levels. Diabetic patients shown increased occurrence of bacterial infections and type 2 diabetes is associated to a chronic inflammatory state, with increased circulatory levels of pro-inflammatory cytokines. Type 2 diabetic patients possess increased risk of cardiovascular diseases and atherogenesis, which has been associated to hyperglycemia and chronic inflammation. The regulation of macrophages inflammatory response to gram-negative bacterial infections or to its antigen LPS by increased levels of glucose is described, however, the role of increased glucose in gram-positive bacterial infections is unknown. For this reasons, we studied the role of adenosine receptors and increased glucose in macrophages activation by Staphylococcus aureus antigens, considering that this bacteria is the major organism in hospital infections. The treatment of RAW 264.7 macrophages with S. aureus antigens lipoteichoic acid (LTA) and peptidoglycan (PEG) resulted in the production of proinflammatory mediators. Diabetes is a prevalent metabolic disorder which presents several associated complications; much of them associated to increased glucose levels. Diabetic patients shown increased occurrence of bacterial infections and type 2 diabetes is associated to a chronic inflammatory state, with increased circulatory levels of pro-inflammatory cytokines. Type 2 diabetic patients possess increased risk of cardiovascular diseases and atherogenesis, which has been associated to hyperglycemia and chronic inflammation. The regulation of macrophages inflammatory response to gram-negative bacterial infections or to its antigen LPS by increased levels of glucose is described, however, the role of increased glucose in gram-positive bacterial infections is unknown. For this reasons, we studied the role of adenosine receptors and increased glucose in macrophages activation by Staphylococcus aureus antigens, considering that this bacteria is the major organism in hospital infections. The treatment of RAW 264.7 macrophages with S. aureus antigens lipoteichoic acid (LTA) and peptidoglycan (PEG) resulted in the production of proinflammatory mediators.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:00:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2000 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O Staphylococcus aureus resistente a oxacilina (ORSA) e um dos principais agentes das infeccoes hospitalares em nosso meio. No Hospital São Paulo o ORSA e endemico, representando cerca de 65 por cento das cepas de S. aureus isoladas, ocasionando morbidade, mortalidade e custos consideraveis. O controle da disseminacao dessa bacteria nos hospitais exige a adocao de medidas especificas. Este estudo teve como objetivo medir o custo-efetividade de uma intervencao para prevenir a ocorrencia de infeccoes por ORSA na unidade de terapia intensiva (UTI) da disciplina de anestesiologia do Hospital São Paulo. A intervencao consistiu de um pacote de medidas educativas para os profissionais da UTI, culturas de vigilancia atraves de swab da narina anterior dos pacientes e profissionais, erradicacao do ORSA nasal com mupirocina e precaucao de contato para os pacientes colonizados e infectados. Desenho do estudo: estudo longitudinal com avaliacao pre e pos. Indicadores de infeccao por ORSA e custos foram avaliados no periodo de 01 de junho a 31 outubro de 1996 (periodo controle) e de 01 de novembro de 96 a 31 de outubro de 1997 (periodo intervencao). Apenas os custos diretos da intervencao (culturas de vigilancia de pacientes e profissionais da UTI, tratamento dos pacientes e profissionais colonizados, aulas expositivas) e os custos diretos da internacao dos pacientes (diaria hospitalar, antimicrobianos, nutricao parenteral, procedimentos invasivos, cirurgias, exames bioquimicas, hematologicos, microbiologicos e radiologicos) foram considerados. Foram definidos como parametros de efetividade a incidencia das infeccoes e bacteremias por ORSA, a permanencia n UTI e a letalidade relacionada ao ORSA. Foram incluidos 138 pacientes n periodo controle e 245 pacientes no periodo intervencao. A densidade d incidencia das infeccoes por ORSA caiu de 10,24/1000 para 5,411000 pacientes dia durante a intervencao (p = O,04; Cl95 por cento 1,00-3,55). A densidade de incidencia das bacteremias primarias reduziu de 3,63/1000 para O,9111000 cateter-dia (p O,06; Ci95 por cento O,9-16,0). A permanencia na UTI da populacao estuda foi maior n periodo intervencao em razao do maior numero de pacientes com indicadores d gravidade nesse periodo. A media de permanencia dos pacientes que nao infectaram foi de 6,0 dias, enquanto a permanencia dos pacientes que desenvolveram bacteremia e infeccao por ORSA foram 18,5 e 34,0 dia respectivamente (p < O,001)...(au) / The oxacillin-resistant Staphylococcus aureus (ORSA) is one of the main organisms involved in nosocomial infection. ORSA is endemic at Hospital São Paulo. It represents approximately 65% of the isolated S. aureus and accounts for considerable morbidity, mortality and costs. To control the dissemination of S aureus at hospital setting, specific measures should be undertaken. The objective of this study was to assess the costeffectiveness of an intervention to prevent infection caused by ORSA at intensive care unit (ICU) of the anesthesiology sector of the Hospital São Paulo. The intervention consisted of an educational package offered to ICU medical and paramedical staff, together with surveillance cultures of the secretion of the anterior nares of patients and health care workers (HCW) aiming at identifying ORSA-positive individuals. Eradication of those found colonized were attempted through nasal mupirocin and contact precaution observed to colonized or infected patients. Design of the study: before-and-after study. ORSA indicators and costs were evaluated in the period of June 1st to October 31st 1996 (control period) and compared with the period of November 1st to October 31st 1997 (intervention period). Only direct costs incurred by control measures and costs derived from hospital stays (antibiotics, invasive procedures, surgeries, blood tests, cultures, radiologic tests and hospital fees) were considered. The incidence of infections and bacteremias due to ORSA, length of stay and mortality were used as outcome measures of effectiveness. A total of 138 patients were enrolled in the control period and 245 patients in the intervention period. The incidence of ORSA infections decreased from 10.24/1000 to 5.4/1000 patient-days ( = 0.04; CI95% 1.00-3.55). Primary bloodstream ORSA infections also decreased from 3.63/1000 to 0.91/1000 central line-days ( = 0.06; CI95% 0.9-16). There were significantly more severe cases during the intervention period, which translated in a longer length of stay at the ICU. The mean number of days at the ICU for the patients with no infection was 6.5 days, whereas the mean length of stay of patients who developed ORSA bacteremia and ORSA infection were 18.5 days and 34.0 days, respectively (p < 0.001). Mortality attributed to ORSA in the first 14 days of onset of infection was the same in both periods. Nasal colonization by ORSA was seen in 31% of the patients and 53% of these patients presented with colonization at ICU admission. The length of stay was longer for colonized patients (28.7 days) than for patients who were not colonized (7.6 days) (p < 0.001). In regard to nasal colonization by ORSA of the ICU HCW, 12.2% of them were shown to be colonized during the study of which 94.4% were nurses. Intranasal mupirocin bid for 5 days was used in colonized patients and HCW. Eradication rates in 81.25% of the patients and in 88.2% of the HCW ensued after mupirocin. Despite favorable eradication rates following nasal mupirocin, the estimated transmission rate per day of ORSA at the ICU did not change with the intervention due to the high proportion of patients already colonized at the ICU admission. The estimated extra length of stays at the ICU were 16 days and 12.6 days, respectively due ORSA infection and bacteremia. The mean total cost of a patient with ORSA infection was R$ 20,799.19 considerably higher than the cost of a patient without ORSA infection. The estimated extra cost attributable to an ORSA infection was R$ 11,843.52. The additional cost to prevent an ORSA infection in 1,000 patient-days was R$ 917.13. This amount represents the cost-effectiveness ratio of the proposed intervention. The adoption of specific strategies to prevent and control ORSA infection at the ICU setting seems warranted based on the result of this cost-effectiveness analysis. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Staphylococcus aureus is the leading cause of nosocomial infections in the US and is becoming increasingly difficult to treat due to the limited antibiotics available. Capsular polysaccharides (CP), a virulence factor produced by the bacterium, allows S. aureus to evade the uptake and killing by host neutrophils. It has been shown previously that CP serotype 5 retains more cell-associated CP while type 8 tends to release more CP into the supernatant. This research focused on whether this phenomenon is dependent upon the serotype-specific capHIJK genes that vary between the two serotypes. 6850, a methicillin- sensitive S. aureus (MSSA) serotype 8 strain, is a well characterized clinical isolate that was used in this study. This strain was subjected to two allelic replacement steps: the first step to replace the cap8HIJK genes with an ermB cassette, creating mutant 6850 (CP-); the second step to replace the ermB cassette with the cap5HIJK genes, which resulted in the creation of mutant 6850 (CP5). All 3 strains were characterized genotypically by PCR and phenotypically for growth rate, metabolic profile, and CP production. ELISA inhibition studies revealed that serotype 5 and the serotype 8 variants of S. aureus 6850 produced similar levels of cell-associated CP. These results suggest that cell wall anchoring of S. aureus CP5 and CP8 is not serotype specific, but instead is dependent on the genetic background of the bacterial strain. A better understanding of the anchoring mechanism may allow for development of alternative immunotherapeutics for S. aureus.

Memoria para optar al título de Ingeniero en Alimentos / Existe una gran oferta de productos detergentes y desinfectantes, que aplicados en adecuados programas de sanitización, ayudarían a prevenir y reducir la contaminación microbiológica presente en las plantas elaboradoras de alimentos, sin embargo en muchos casos no se ha realizado una validación experimental adecuada del efecto esperado. Es por ello que se realizó un estudio in vitro de la actividad germicida de un producto compuesto por cloruro de alquildimetil benzilamonio, glutaraldehído, glioxal, formaldehído, isopropanol y excipientes, a distintas concentraciones y tiempos, incluidos los recomendados por el fabricante. Se determinó la cinética de muerte de los microorganismos, calculando el % de eficiencia del desinfectante, la velocidad específica de muerte, el tiempo de reducción decimal y el coeficiente de dilución. Las pruebas se realizaron frente a: Escherichia coli salvaje, Staphylococcus aureus salvaje, Escherichia coli ATCC 25922 y Staphylococcus aureus ATCC 29213. La eficiencia germicida in vitro del desinfectante en el tiempo (5 minutos) y rango de concentración recomendado por el fabricante (0,25% – 0,5%) fue para Escherichia coli ATCC 25922 del 99,999% a la concentración de 0,25%, mientras que para Escherichia coli salvaje, Staphylococcus aureus salvaje y Staphylococcus aureus ATCC 29213 se logró la misma eficiencia a la concentración de 0,5%, por lo que, según los resultados obtenidos cumple el Test de Chambers en cuanto a la eficiencia esperada para un buen desinfectante, pero no cumple con los 30 segundos propuestos, ya que se obtiene en tiempos mayores de acción. Los valores de k (velocidad específica de muerte), permiten concluir que Staphylococcus aureus salvaje resultó ser más resistente que el resto de los microorganismos, luego sigue Staphylococcus aureus ATCC 29213, Escherichia coli salvaje y finalmente Escherichia coli ATCC 25922, quien resultó tener menor resistencia a la acción germicida del desinfectante / There is a great offer of detergent and disinfectant products, that applied under appropriate sanitization programs, would help to prevent and reduce the microbiological contamination from the food industry. However, in the most of cases an experimental and appropriate validation of the effect of the product, has not been carried out. The present in vitro study was developed in order to determine the germicidal activity of a disinfectant containing alquildimetyl benzylamonium chloride, glutaraldehyde, glioxal, formaldehyde, isopropanol and exicipients, assayed at different concentrations and times, included those recommended by the manufacturer. The kinetics of death of the microorganisms, the % of efficiency of the disinfectant, the specific death rate, the time of decimal reduction and the dilution coefficient were determined. The tests were carried out against Escherichia coli and Staphylococcus aureus wild strains, Escherichia coli ATCC 25922 and Staphylococcus aureus ATCC 29213. The germicidal efficiency in vitro of the disinfectant at the time (5 minutes) and concentration range recommended by manufacturer (0,25% - 0,5%) was 99,999% for Escherichia coli ATCC 25922, specifically at a concentration of 0,25%. For Escherichia coli and Staphylococcus aureus wild strains and Staphylococcus aureus ATCC 29213 the same 99,999% of efficiency was achieved when using the product at 0,5%. According to the obtained results, the Chambers test is fulfilled from point of view of the obtained destruction %. Nevertheless, it does not fulfill the 30 seconds proposed, since the efficacy is obtained at other times beyond the 30 seconds. The values of k (specific death rate), allow to conclude that the wild strain of Staphylococcus aureus was more resistant than the other microorganisms. In decreasing order, the resistance of the other microorganisms to the studied disinfectant was Staphylococcus aureus ATCC 29213, Escherichia coli wild type and finally Escherichia coli ATCC 25922

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Ângela Christina (angelchris@bce.unb.br) on 2009-05-05T20:46:16Z No. of bitstreams: 1 2008_GustavoBalduinoLeite_reduzida.pdf: 1263249 bytes, checksum: c55f741f929e8ef09635062edaafb6dc (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-05-06T15:48:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_GustavoBalduinoLeite_reduzida.pdf: 1263249 bytes, checksum: c55f741f929e8ef09635062edaafb6dc (MD5) / Made available in DSpace on 2009-05-06T15:48:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_GustavoBalduinoLeite_reduzida.pdf: 1263249 bytes, checksum: c55f741f929e8ef09635062edaafb6dc (MD5) Previous issue date: 2008-10 / Staphylococcus aureus é um patógeno associado a altas taxas de mortalidade e morbidade, capaz de produzir infecções em diversos tecidos do corpo humano. Sua capacidade em adquirir resistência à antibióticos e de sobreviver em diferentes condições ambientais o torna um perigoso agente infeccioso no ambiente hospitalar. O objetivo deste estudo foi realizar um levantamento da ocorrência de indivíduos portadores assintomáticos de S. aureus suscetíveis (MSSA) ou resistente a meticilina (MRSA) no âmbito do Hospital Universitário de Brasília (HUB) e na comunidade e, o desenvolvimento de procedimentos moleculares para identificação de MSSA e de MRSA. No total foram coletadas 327 amostras nasais e sub-ungueais de profissionais e alunos vinculados ao HUB. Essas amostras foram divididas em três grupos: Alunos (medicina, enfermagem e odontologia), Equipe Médica (enfermeiros, auxiliares e técnicos de enfermagem e médicos) e Técnicos (funcionários que não possuem contato com pacientes). Também foram coletadas 48 amostras de pacientes previamente identificadas como MRSA pelo HUB e 136 amostras de indivíduos sem contato com o ambiente hospitalar (comunidade). Todas as amostras foram submetidas a crescimento em meios de cultura seletivos e diferenciais e testadas quanto a produção de coagulase para a identificação de S. aureus. Os isolados foram então submetidos ao teste de susceptibilidade à oxacilina e vancomicina. Os isolados de comunidade e de pacientes foram submetidos a ensaios de PCR para confirmação dos resultados bioquímicos através de iniciadores específicos para os genes que codificam proteína A, coagulase e nuclease termoestável, específicos de S. aureus, e mecA, presente em MRSA. A porcentagem de portadores de S. aureus encontrada na comunidade foi de 17,64%, e nos grupos relacionados ao ambiente hospitalar de 56,02%, sendo que: Alunos 69,64%; Equipe Médica 47,54% e Técnicos 51,02%. A diferença de portadores de cada grupo e o grupo comunidade foi significativa (P 0,001), o que indica que indivíduos sem contato com o ambiente hospitalar possui menos tendência de estar colonizado por S. aureus. Em relação a MRSA, a porcentagem de portadores na comunidade foi de 1,47%, e entre os indivíduos relacionados ao ambiente hospitalar 37,95%. Nos alunos a freqüência foi de 53,57%, equipe médica 22,95% e técnicos 38,77%. Dentro do grupo técnicos destaca-se os funcionários da lavanderia, onde 52,2% foram caracterizados como portadores de MRSA. A diferença dos grupos associados ao hospital e o grupo comunidade foi significativa (P 0,001). Apenas dois isolados de pacientes não confirmaram a caracterização prévia, sendo considerados Staphylococcus coagulase negativo resistente à oxacilina. Todos os isolados de comunidade e pacientes identificadas como Staphylococcus aureus e como MRSA nos testes bioquímicos também foram positivos nos ensaios de PCR. Os três isolados de pacientes caracterizadas como Staphylococcus coagulase negativo resistente à oxacilina foram positivos apenas na amplificação do gene mecA, confirmando os resultados nos testes bioquímicos. Nenhuma amostra apresentou resistência à vancomicina. Nossos resultados sugerem uma alta freqüência de portadores de MRSA no ambiente hospitalar, contrariamente ao observado na comunidade. O número de portadores de MRSA entre alunos e funcionários da lavanderia levanta a questão do possível papel que estes indivíduos podem estar desempenhando na disseminação dessas cepas resistentes pelo hospital, no entanto essa pergunta só poderá ser respondida através de estudos específicos. Os ensaios moleculares demonstraram o potencial dessa metodologia no diagnóstico rápido de infecções por MRSA, o que possibilita não só um tratamento mais eficiente como uma redução na disseminação dessas cepas. / _________________________________________________________________ ABSTRACT / Staphylococcus aureus is a pathogen associated with high rates of mortality and morbidity, capable of producing infections in various tissues of the human body. His ability to acquire resistance to antibiotics makes it a dangerous infectious agent in the hospital environment. The purpose of this work was to survey the incidence of asymptomatic carriers of S. aureus resistant (MRSA) and susceptive (MSSA) to methicillin in the University Hospital of Brasília (HUB), and the development of procedures for molecular identification of MSSA and MSRA strains. In total 327 samples were collected nasal and sub-nail of individuals related to the HUB. These samples were divided into three groups: students (medicine, nursing and dentistry), medical staff (nurses, nursing assistants and doctors) and the Technical Group (employees who do not have contact with patients). Were also collected 48 samples from patients previously identified as MRSA by HUB and 136 samples from individuals without contact with the hospital environment (community). All samples were inoculated into the culture medium and Baird Parker, and colonies with phenotypic characteristics of S. aureus were tested for fermentation of mannitol and coagulation of rabbit’s plasma to confirm the identification. Samples confirmed as S. aureus were then subjected to the test of susceptibility to oxacillin and vancomycin. Samples from community and patients were also subjected to PCR confirmation of the biochemical results through DNA fragment amplification using specific primers for genes that encodes protein A, coagulase and the thermal-stable nuclease, all specific to S. aureus, and mecA, which is present in MRSA. The rate of S. aureus carriers found in the community was 17.64%, and the total of groups related to the hospital was 56.02%, of which: Students 69.64%; Technicians 51.02% and Medical Staff 47.54%. The difference in carriers of each group and in the community group was significant (P 0001), which indicates that individuals without contact with the hospital have fewer chances to be colonized by S. aureus. For MRSA, the rate of carriers in the community was 1.47%, and among individuals related to the hospital was 37.95%, while in the Students group the rate was 53.57%, in the Medical Staff group was 22.95% and in the Technicians group was 38.77%. Inside the Technicians group, 52,2% of the workers in hospital’s laundry were colonized with MRSA. The difference between the groups associated with the hospital and the community group was significant (P 0001). Only two samples of patients did not confirm the prior characterization made by HUB and was considered Staphylococcus coagulase negative oxacillin resistant. All samples of community and patients identified as Staphylococcus aureus and MRSA in biochemical tests were also positive in the PCR test. The three samples of patients characterized as Staphylococcus coagulase negative oxacillin resistant was positive only for the amplification of the mecA gene, confirming the results in biochemical tests. No sample proved resistant to vancomycin. Our results suggest a high rate of MRSA carriers among hospital workers and students. The number of MRSA carriers among students and worker of the laundry raise the question about the rule of these individuals over the dissemination of MRSA through the hospital wards. Further studies focused on that matter would be necessary to answer this question. The molecular experiments showed the potential of this methodology on a fast diagnosis of MRSA infections, what would not just help the treatment, but should avoid the disseminations of those clones.

Staphylococcus aureus resistente à meticilina (SARM) é um dos principais patógenos responsáveis pela infecção nosocomial e recentemente tem sido isolada fora do ambiente hospitalar, trazendo uma grande preocupação a médicos e pesquisadores. Esta resistência à meticilina é devida à presença do gene mecA, o qual codifica a PLP2a, uma proteína ligadora de penicilina, que tem baixa afinidade pelos antibióticos β-Lactâmicos. A vancomicina, até recentemente, era o tratamento de escolha para pacientes acometidos pela SARM; porém o isolamento de cepas com resistência intermediária e S. aureus totalmente resistentes à vancomicina, gerou uma grande mobilização da comunidade científica na busca de alternativas para o tratamento destas cepas multirresistentes, através do desenvolvimento de vacinas e soroterapia. A vacina de DNA é uma técnica recente que, entre outras vantagens, não necessita da purificação do antígeno protéico para induzir uma resposta imune, diminuindo o custo de produção, quando comparada às vacinas protéicas. Neste trabalho, demonstramos que a utilização de uma vacina de DNA com um fragmento do gene mecA produz uma resposta imune humoral, com a produção de anticorpos específicos anti-PLP2a em eqüinos imunizados com esta vacina, e que estes anticorpos, após sua purificação, permanecem ativos. Como ainda não existe informação suficiente em relação à segurança do uso das vacinas de DNA diretamente em humanos, o uso desta técnica em eqüinos, com o objetivo de gerar um soro hiperimune, para utilizá-lo após sua purificação no tratamento de pacientes acometidos com infecção provocada por SARM, poderia ser uma alternativa viável e segura no combate a esta bactéria resistente a quase todos agentes antimicrobianos. / Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is one of the major pathogens responsible for nosocomial infection and has been recently isolated outside the hospital environment, causing a great concern to physicians and researchers. This methicillinresistance is due to the presence of the mecA gene, which codes for PBP2a, a penicillinbinding protein, which has low affinity for β-Lactamic antibiotics. The treatment of choice for patients afflicted by MRSA was, until recently, vancomicyn; however the isolation of vancomycin-intermediate and resistant S. aureus strains generated a great mobilization of the scientific community for the search of alternatives for the treatment of these multiresistant strains, such as, for example vaccines and soroterapy. The DNA vaccine is a recent method that, among others, does not require the purification of the of the proteic antigen to induce a immune response, reducing production costs as compared to protein vaccines. In the present study we demonstrated that the use of a DNA vaccine with a fragment of the mecA gene produces an humoral immune response, with the production of anti-PBP2a specific antibodies in horses immunized with this vaccine, and these antibodies, once purified, maintain their activity. Since there is not sufficient information about the safety of DNA vaccines used directly to humans, the use of this vaccine in horses, with the intent of generating an hyperimmune serum to be used after its purification in the treatment of patients afflicted with infection caused by MRSA could be a possible and safe alternative to fight this bacteria resistant to almost all antimicrobial agents.

O Staphylococcus aureus está freqüentemente envolvido em surtos de intoxicação alimentar. Geralmente esses surtos têm início abrupto, causando náusea e vômito nos acometidos. Na elucidação deste tipo de surtos é necessário que seja investigada a presença da enterotoxina no alimento e/ou a capacidade enterotoxigênica da bactéria isolada. A partir disso, o objetivo do presente estudo foi implantar uma técnica de detecção de enterotoxinas e avaliar a capacidade enterotoxigênica de linhagens de Staphylococcus aureus isolados de surtos. Trinta linhagens isoladas, no período de 2002 a 2003, de alimentos envolvidos em surtos no Rio Grande do Sul foram identificadas e avaliadas quanto à capacidade de produzir enterotoxinas SEA, SEB, SEC e SED, através da técnica de sensibilidade ótima em placa-OSP.Ao lado disso, os dados epidemiológicos relativos aos surtos de origem foram coletados. Os resultados obtidos demonstraram que todas as linhagens foram positivas no teste da catalase, coagulase em tubo, prova de termonuclease, teste de hemólise e fermentaram a maltose e o manitol, sendo confirmadas como Staphylococcus aureus. Todas as linhagens produziram enterotoxina SEA, 24 produziram SEB, 12 SEC e 6 SED, isoladamente ou em associação.A maioria das linhagens foi isolada de alimentos submetidos à grande manipulação durante seu preparo e apresentaram contagens superiores a 106 UFC/g de Staphylococcus aureus, demonstrando que condições favoráveis à produção de enterotoxinas devem ter ocorrido durante o seu preparo e armazenamento. / Staphylococcus aureus often occurs in food poisoning outbreaks. These outbreaks usually start abruptly, causing nausea and vomit on affected people. In order to investigate these outbreaks, it is necessary to check the presence of enterotoxin in food and/or enterotoxigenic capacity of isolate. So the purpose of this study was to propose a method to the enterotoxin detection and evaluate the enterotoxigenic capacity of coagulase positive Staphylococci strains which were isolated from foods involved with outbreaks. On the period of 2002 to 2003, thirty strains detected in foods poisoning outbreaks in RS were identified and evaluated on their SEA, SEB, SEC and SED enterotoxins production capacity checking their sensitivity on OSP - plates. Moreover, epidemiological information related to the origin outbreaks was collected. The results showed that all the strains were positive according to following tests: catalase, coagulase in vitro/tube, termonuclease and hemolysis. Besides the strains have fermented maltose and manitol as to confirm as being Staphylococcus aureus. All the strains produced SEA enterotoxin; 24 of them produced SEB, 12 SEC and 6 SED, isolated or in association. Most strains were isolated in food that had been under intense manipulation during their preparation and which had presented levels higher than 106 CFU/g to Staphylococcus aureus, indicating that favorable conditions to the production of enterotoxins should have occured during their preparation and storage.