Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-11-20Bitstream added on 2014-11-10T11:57:35Z : No. of bitstreams: 1 000146313.pdf: 1854979 bytes, checksum: 814de9269a8a7a7c941e1e67320db911 (MD5) / Neste estudo, objetivou-se avaliar as correlações existentes entre experiência decárie, acúmulo de placa bacteriana e nível de IgAanti - Streptococcus mutansna saliva de crianças de 8 a 12 anos de idade, com dentição mista. Foram examinadas 110 crianças, divididas em três grupos: sem experiência de cárie (SC), com lesões de cárie tratadas (CT) e com lesões de cárie não tratadas (CA), utilizando-se os índices lHOS, ceod, ceos. CPOD e CPOS. Foram também coletadas amostras desaliva não estimulada. A concentração de IgA específica foi quantificada, por ELISA para células inteiras de S. mutans. Não houve correlação significante entreo acúmulo de placa bacteriana e a concentração de IgA salivar específica. Houve correlação negativa entre o nível de IgA salivar específica e a experiência de cáriena dentição decídua das crianças com lesões de cárie não tratadas, indicando papel protetor. Houve porém, correlação positiva entre o nível de IgA e a experiência de cárie na dentição permanente das crianças com lesões de cárie tratadas. A IgAsalivar específica anti-mutans não impede o acúmulo de placa bacteriana, tendo papel protetor sobre a dentição decídua e não sobre a dentição permanente / This study aimed to evaluate the correlation between caries experience, plaque buildupandlevel ofIgAanti-Streptococcus mutansin salivaof children8-12years ofage,with mixed dentition. Withoutcaries(SC) lesions treated caries (CT) and untreated caries(CA), using the lHOSindex, ceod, ceos: 110 children, divided into three groups were examined.DMFT and DMFS.Samples were collected fromun stimulated saliva. The concentration of specific IgA was quantitated by ELISA to whole cell sof S. mutans. There was no significant correlation between the accumulation of plaque and salivary Ig Aspecific. There was a negative correlation between the level of specific salivary IgA and caries in the primary dentition of children with untreated caries lesions, indicating protective role. There was however,a positive correlation between the level of IgA and caries experiencein the permanent dentition of children with caries lesions treated. The salivary IgA specificanti-mutans does not prevent the buildup of plaque, with protective paperon the deciduous dentition and noton the permanent dentition

Orientador: Eunice Teresinha Giampaolo / Banca: Ana Paula Dias Ribeiro / Banca: Dalva Cruz Laganá / Banca: Janaína Habib Jorge / Banca: João Neudenir Arioli Filho / Resumo: Este estudo avaliou dois vernizes experimentais (M e P) em três diferentes concentrações (25, 30 e 35%) na prevenção da adesão e formação de biofilme multiespécies (Candida albicans, Candida glabrata e Streptococcus mutans) e sua associação com a escovação na remoção do biofilme e sua recolonização. Corpos-de-prova lisos e rugosos de uma resina acrílica foram confeccionados e divididos em grupos experimentais, de acordo com o verniz e concentração, além de grupos controle (sem verniz). Metade das amostras foi exposta em saliva (30 minutos). Posteriormente, realizou-se a adesão (90 minutos) ou a formação do biofilme multiespécies (48 horas). Para a avaliação da capacidade de remoção do biofilme aderido, corpos-de-prova contaminados foram escovados (30 segundos) e para a recolonização, além da escovação, as amostras foram incubadas por período adicional de 48 horas. Os micro-organismos remanescentes foram mensurados pelos ensaios de XTT e UFC. Para os testes de adesão e formação do biofilme, os grupos experimentais apresentaram, em geral, menor absorbância comparados com o controle, porém esta diferença não foi significante para a contagem de colônias, exceto para o S. mutans na formação do biofilme. A rugosidade, em geral, não promoveu alteração em qualquer dos testes realizados. A saliva não promoveu alterações na adesão dos micro-organismos, mas alterou a quantidade de biofilme formado. Houve remoção efetiva do biofilme com a escovação e com a recolonização. Conclui-se que os vernizes fotopolimerizáveis experimentais reduziram discretamente a adesão e formação do biofilme. Além disso, a escovação foi efetiva na remoção e recolonização do biofilme multiespécies. / Abstract: This study evaluated the ability of two experimental coatings (M and P) at 25, 30 and 35% concentrations to modify the surface characteristics of a denture base resin and prevent the adhesion and biofilm formation of multi-species, as well as the effectiveness of brushing on biofilm removal and their recolonization. Specimens with smooth and rough surfaces were prepared and divided into experimental groups, according to the coating and concentration, and controls group (without coating). A half of specimens were exposed to saliva (30 minutes). The microorganisms adhesion (Candida albicans, Candida glabrata and Streptococcus mutans) was performed for 90 minutes and the biofilm formation was performed for 48 hours. For effectiveness of toothbrushing in biofilm elimination test, contaminated specimens with biofilm were exposed to toothbrushing in a brushing machine (30 seconds) and for recolonization, after brushing, the specimens were incubated again for 48 hours. Microorganisms quantification was measured by XTT and UFC tests. The adhesion and biofilm development showed that the experimental groups were, in general, lower absorbance compared with the control, but this difference was not significant for colony counting, except for S. mutans in biofilm formation. The roughness, in general, did not cause any change in all tests performed. Saliva did not change the adhesion of microorganisms, but reduce the biofilm formation. There was effective biofilm removal with brushing and recolonization tests. It was concluded that the experimental photopolymerised coatings slightly reduced adhesion and biofilm formation. Furthermore, toothbrushing was effective in multi-species biofilm removal and their recolonization. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-25Bitstream added on 2014-06-13T19:15:16Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_fg_me_ararafo.pdf: 2242133 bytes, checksum: 8b913a63b61cf88bd8cc0476d909d6d7 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O presente estudo teve o objetivo de investigar o número (UFC) e a prevalência de Streptococcus grupo mutans e Candida spp. e das respectivas espécies no biofilme dental supragengival de crianças sem cárie, com cárie e cárie de mamadeira, e na dentina cariada de crianças com cárie e cárie de mamadeira, comparando a freqüência destes microrganismos nos sítios coletados. Foram coletadas amostras de biofilme dental e dentina cariada de 56 crianças de 1 a 5 anos de idade, as quais foram divididas em 3 grupos: 1- cárie de mamadeira (n=24); 2- cárie (n= 11) e 3- livres de cárie (n=21). As amostras foram semeadas em SB20 e SA, para S. mutans e Candida spp., respectivamente, e após 48h foram contadas. As espécies de S. mutans foram identificadas bioquimicamente, enquanto que as espécies de Candida foram identificadas pelo CHROMagar® Candida. Os testes estatísticos de Kruskall-Wallis e Mann-Whitney foram aplicados aos valores de unidades formadoras de colônias (UFC) e para as freqüências de cultura das espécies de S. mutans e Candida spp. foram aplicados testes estatísticos de Fisher. Os resultados mostraram que na contagem de UFC para S. mutans houve apenas diferença estatística entre os grupos 1 e 3 e entre os grupos 2 e 3 no biofilme, não existindo diferença na dentina. Com relação à contagem de UFC para Candida ssp. houve apenas diferença entre os grupos 1 e 3 no biofilme, não existindo diferença na dentina. A espécie mais prevalente foi S. mutans c, f e Candida albicans estando presentes com maior freqüência na cárie de mamadeira (85,4% e 60,4%, respectivamente), independente do local da coleta. Apenas para S. mutans c, f houve associação significante para dentes cariados, seja cárie de mamadeira ou não. Porém, a freqüência de Candida albicans no grupo cárie de mamadeira foi destacadamente maior quando comparada a dos grupos sem cárie e cárie... / The present study aimed to determine count (CFU) and the prevalence of Streptococcus mutans and Candida spp., and respectives species, in the dental supragengival biofilm of children caries-free, with early childhood caries and caries. Carious dentin was collected in the children with caries and early childhood caries to compare the frequency of these microorganisms in the collected sites. Pooled samples of dental biofilm and carious dentin were collected from 56 children aged 1 to 5 years, which were divided in 3 groups: 1 - early childhood caries (n=24); 2 - caries (n = 11) and 3 - caries-free (n=21). The samples were inoculated in SB20 medium and SA medium, for S. mutans and Candida spp., respectively, and incubated by 48 hours/37°C. Colonies growth were counted and identification was performed by biochemical tests. The statistical tests of Kruskall-Wallis and Mann-Whitney were applied to the total count of microorganisms (CFU). Fisher's tests were applied with the objective to evaluated the independence between the species and the caries type. The results showed that the count of CFU for S. mutans was statisticaly different between groups 1 and 3 and groups 2 and 3 in the biofilm, but not in dentin. The count of CFU for Candida ssp. was statisticaly different between groups 1 and 3 in the biofilm, but not in dentine. The more prevalent species was S. mutans c, f and Candida albicans, present more frequently in early childhood caries (85.4% and 60.4%, respectively), independent of the sampling site. Just S. mutans c, f had significant association for carious teeth, wether early childhood caries or not. However, the frequency of Candida albicans in the group early childhood caries was higher when compared to the groups caries-free and caries. There is a significant association between the presence of C. albicans and early childhood caries.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3533.pdf: 12329125 bytes, checksum: 19d4177c70f080851ba4d97e52f0f0b7 (MD5) Previous issue date: 2011-03-25 / Financiadora de Estudos e Projetos / The bacterium Streptococcus mutans is one of the main initiators species of biofilm and is related to the etiology of caries. Currently there have been many studies investigating ways to reduce bacterial adhesion and biofilm formation on biomaterials, in order to prevent diseases and infections, such as the use of silver nanoparticles embedded in the materials. However, few studies have investigated the benefits of these particles in materials that are utilized within the oral cavity. The main objective of this research was to compare biofilm formation of this specie on the composite resin in its commercial form today and an experimental composite resin, which were added silver nanoparticles, which are bactericidal, using a method of counting viable cells recovered from the biofilms. Were produced cylindrical specimens of 4 mm in height and circular base of 4 mm in diameter, resin and resin with nanoparticles at three different concentrations, 0.1, 0.3 and 0.6% by mass. They were incubated in liquid medium with sucrose, containing about 108 CFU/ml, to cause bacterial adhesion and biofilm formation in vitro. The count of viable cells from the samples was made after the disintegration of biofilms on them adhered in ultrasonic tank, and was performed after 1 day, 4 days and 7 days of incubation. Considering the mean and standard deviation values, the results showed that on the experimental resins with concentrations of 0.3% and 0.6% of silver nanoparticles, the number of adhered bacterial cells was lower than in resin in its commercial form today, no silver, and also smaller than the resin to 0.1% in the three incubation periods studied. The scanning electron micrograph of a biofilm of S. mutans adhered to the surface of each specimen was also performed after the same time intervals, and allowed morphological analysis of the structure of cells and cell clusters attached to surfaces. A compression test was also performed to verify if the inclusion of antibacterial nanoparticles in the resin does not affect the mechanical performance of the same. The results of this trial showed that the resin with 0.3% concentration of nanoparticle had a better mechanical properties in compression, and resin with a concentration of 0.6% worse performance, compared with the resin without silver nanoparticles, It was concluded that the composites with 0.3% silver nanoparticles are advantageous for clinical application, because it showed how a material less favorable to bacterial adhesion, without prejudice to its mechanical resistance. They may therefore benefit patients, assisting in the prevention of recurrent caries, which occur around the margins of restorations, and in the maintenance of good oral hygiene. / A bactéria Streptococcus mutans é uma das principais espécies iniciadoras do biofilme dentário e está relacionada à etiologia da cárie. Atualmente surgem muitos estudos que buscam novas maneiras de reduzir a adesão bacteriana e a formação de biofilme sobre biomateriais, com a finalidade de prevenir a ocorrência de infecções e a transmissão de doenças, tais como o uso de nanopartículas de prata incorporadas nestes materiais. Porém poucos são os estudos que investigam os benefícios destas partículas em materiais que são empregados dentro da cavidade bucal. O principal objetivo desta pesquisa foi comparar a formação do biofilme desta espécie bacteriana sobre a resina composta fotopolimerizável em sua forma comercial atual e uma resina composta experimental, onde foram acrescentadas nanopartículas de prata, que são bactericidas, utilizando um método de contagem de células viáveis recuperadas dos biofilmes. Foram produzidos corpos de prova cilíndricos, de 4 mm de altura e base circular de 4 mm de diâmetro, de resina e de resina com nanopartículas em três concentrações diferentes, 0,1, 0,3 e 0,6% em massa. Eles foram incubados em meio de cultura líquido com sacarose, contendo cerca de 108 UFC/ml, para que ocorresse a adesão bacteriana e a formação de biofilme, in vitro. A contagem de células viáveis provenientes dos corpos de prova foi feita após a desagregação dos biofilmes sobre eles aderidos em cuba ultrassônica, e foi realizada após 1 dia, 4 dias, e 7 dias de incubação. Considerando-se a média e desvio padrão dos valores, os resultados mostraram que sobre as resinas experimentais com as concentrações de 0,3 % e 0,6 % em massa de nanopartículas de prata, o número de células bacterianas aderidas foi menor do que na resina não modificada, sem prata, e também menor do que na resina a 0,1 %, nos 3 períodos de incubação estudados. A eletromicrografia de varredura do biofilme de S. mutans aderido sobre a superfície de cada corpo de prova foi realizada também após os mesmos intervalos de tempo, e permitiu a análise morfológica das células e da estrutura dos conjuntos celulares aderidos às superfícies. Foi realizado um ensaio de compressão para verificar se a inclusão das nanopartículas bactericidas na resina não prejudica o desempenho mecânico da mesma. Os resultados deste ensaio mostraram que, em comparação com a resina não modificada, a resina com a concentração de 0,3 % de nanopartículas teve um melhor desempenho mecânico em compressão, e a resina com a concentração de 0,6 % um desempenho pior. Concluiu-se que as resinas compostas com 0,3% de nanopartículas de prata são vantajosas para a aplicação clínica, pois se apresentaram como um material menos favorável à adesão bacteriana, sem prejuízo à sua resistência mecânica. Podem portanto beneficiar os pacientes, auxiliando na prevenção das cáries recidivantes, que ocorrem ao redor das margens de restaurações, e na manutenção de uma boa condição de higiene bucal.

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-30. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:17:14Z : No. of bitstreams: 1 000865632.pdf: 903176 bytes, checksum: 3e51870d6b17dcc44625fae1468b3e9d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade da molécula de quorum sensing farnesol na formação de biofilmes simples e misto de Candida albicans ATCC 10231 e Streptococcus mutans ATCC 25175. Inicialmente o farnesol foi diluído em metanol e posteriormente em saliva artificial (SA). Os testes de concentração inibitória mínima (CIM) do farnesol contra as células de Candida albicans ATCC 10231 e Streptococcus mutans ATCC 25175 em suspensão foram baseados no método da microdiluição. O farnesol diluído nas concentrações de 1,56, 3,125, 6,25, 12,5, 25, 50, 70, 150 e 300 mM foi aplicado sobre os biofilmes de Candida albicans e Streptococcus mutans (formação) e após 48 horas de contato sua atividade antibiofilme foi determinada por meio da quantificação da biomassa total (coloração com violeta cristal (CV)), enumeração das unidades formadoras de colônias (UFCs) e atividade metabólica (XTT). Foi ainda realizada uma curva de tempo de morte celular para os dois microrganismos estudados. Após o tratamento com o farnesol, a matriz dos biofilmes foi extraída e analisada em termos de concentração de proteínas e carboidratos, além do teste de pH para S. mutans e verificação das atividades enzimáticas de proteinase, fosfolipase e hemolítica para Candida albicans, ainda a estrutura dos biofilmes foi analisada por meio da microscopia eletrônica de varredura. Os resultados de CIM foram de 150 mM para C. albicans e de 6.25 mM para S. mutans. O farnesol diminuiu a formação de biofilmes simples e mistos, com reduções significativas de 37-90% e 64-96%, respectivamente para a biomassa total e atividade metabólica. Para os biofilmes simples, concentrações de farnesol iguais ou maiores que 3,125 mM promoveram reduções significativas (1,3-4,2 log10; p < 0,05) nas UFCs, enquanto que para os biofilmes mistos reduções... / The aim of this study was to evaluate the activity of a quorum sensing molecule, farnesol, in biofilm formation of Candida albicans ATCC 10231 and Streptococcus mutans ATCC 25175. Initially farnesol was diluted in methanol and then in artificial saliva (AS). Minimum inhibitory concentration tests (MIC) of farnesol against Candida albicans ATCC 10231 cells and Streptococcus mutans ATCC 25175 suspension were based on the microdilution method. Farnesol was prepared at concentrations of 1.56, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 70, 150 and 300 mM, and placed in contact with biofilms in formation of Candida albicans and Streptococcus mutans for 48 hours. Its antibiofilm activity was determined by quantifying the total biomass (stained with crystal violet (CV)), enumeration of colony forming units (CFUs) and metabolic activity (XTT). It was further carried out a cell death time curve for both microorganisms studied. After the treatment with farnesol, the matrix of the biofilm was extracted and analyzed in terms of protein and carbohydrates, in addition to the pH test for S. mutans and examination of enzymatic activities of proteinase, fosfolipase and hemolytic for Candida albicans. The structure of biofilms was analyzed by scanning electron microscopy. The MIC values were 150 mM for C. albicans and 6.25 mM for S. mutans. Farnesol decreased the formation of single and mixed biofilms, with significant reductions of 37-90% and 64-96% respectively for the total biomass and metabolic activity. For single biofilms, farnesol concentrations equal to or higher than 3.125 mM promoted significant reductions (1,3-4,2log10; p <0.05) in the CFU for single biofilms, while in mixed biofilms the reductions (0,67-5,32log10; p <0.05) were noted at concentrations of 1.56 mM. For cell death curve after an hour in contact with those microorganisms, farnesol reduced 1 log10... / FAPESP: 13/23592-0

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-25. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:50:58Z : No. of bitstreams: 1 000865661.pdf: 1072062 bytes, checksum: 10bc25031317dce0b4b6d74a8b1c13c1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A cárie e a doença periodontal são doenças infecciosas que refletem falha no equilíbrio da microbiota bucal, e seus agentes podem ser transmissíveis. A clorexidina tem sido utilizada como agente antimicrobiano no combate à carie, porém seu uso é controverso devido à ocorrência de efeitos colaterais. Assim, tem sido incansável a busca de novos produtos com atividade antimicrobiana e com menor efeito colateral. A própolis é um produto resinoso, elaborado pelas abelhas a partir de diversas partes das plantas, e se destaca por suas propriedades biológicas e farmacológicas, e pela possibilidade de aplicação na indústria farmacêutica e alimentícia. Neste projeto, visamos comparar a própolis com um agente antimicrobiano (clorexidina), bem como a combinação própolis/clorexidina, diretamente sobre Streptococcus mutans ou sobre a ação de monócitos humanos contra esta bactéria. Para tal, monitoramos a qualidade do produto odontológico elaborado à base de própolis em relação à sua estabilidade e possível contaminação durante 120 dias. Avaliamos o efeito do produto sobre S. mutans, determinando a concentração inibitória mínima e a concentração bactericida mínima, bem como seu efeito sobre monócitos humanos, avaliando a expressão de receptores celulares, a via de sinalização do NF-kB, a produção de citocinas pró- e antiinflamatórias, e a atividade bactericida de monócitos contra este agente causador da cárie. Tomados em conjunto, os dados evidenciaram que o produto apresentou-se palatável e livre de contaminantes, além de inibir o crescimento de S. mutans. Este produto pode favorecer o reconhecimento de antígenos por monócitos, ativar a via de sinalização do NF-kB e aumentar a atividade bactericida de monócitos humanos contra S. mutans. Ademais, o produto também desempenhou papel anti-inflamatório quanto à produção de citocinas, o que pode trazer benefícios no tratamento de doenças... / The caries and periodontal disease are infectious diseases, reflecting failure to balance the oral microbiota, whose agents can be transmitted. Chlorhexidine has been used as anti-caries agent, but its use is controversial due to the occurrence of side-effects. Thus, there is a need to search for new products with antimicrobial activity and fewer side-effects. Propolis is a resinous product produced by bees from different parts of the plants, and stands out for its biological and pharmacological properties, and the application possibility in the pharmaceutical and food industry. In this project, we aimed to investigate propolis, an antimicrobial agent (chlorhexidine) and the combination propolis/chlorhexidine, directly on S. mutans and the action of human monocytes against this bacteria. The quality of propolis-based odontological product was analysed with regard to its stability and possible contamination for 120 days. We evaluated the effect of this product on S. mutans determining the minimum inhibitory concentration and minimum bactericidal concentration, and its effect on human monocytes, evaluating cell receptors expression, the NF-kB signaling pathway, the production of pro- and anti-inflammatory cytokines, and the bactericidal activity of these cells against S. mutans. Together, data showed that propolis/chlorhexidine in combination was palatable and contaminant-free, besides inhibiting the growth of S. mutans. The product may favor the recognition of antigens by human monocytes, activate the NF-kB signaling pathway and increase the bactericidal activity of monocytes against S. mutans. Also, the combination played an anti-inflammatory role in cytokine production, what can be beneficial in the treatment of periodontal diseases. The findings open perspectives for further research, denoting the practical application of this research and its implications for the pharmaceutical industry / FAPESP: 11/22112-0

Submitted by JAIME GAZOLA FILHO (DINTER) null (jaime@saolucas.edu.br) on 2017-01-13T22:14:56Z No. of bitstreams: 1 Tese Jaime pdf.pdf: 1161900 bytes, checksum: 88085fe3b7f98950a6283f7926a857fd (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-01-17T19:27:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gazolafilho_j_dr_araca.pdf: 1161900 bytes, checksum: 88085fe3b7f98950a6283f7926a857fd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-17T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gazolafilho_j_dr_araca.pdf: 1161900 bytes, checksum: 88085fe3b7f98950a6283f7926a857fd (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / Streptococcus mutans é conhecido por sua capacidade de aderir, colonizar e formar biofilme nas superfícies dentárias. Para sobreviver na cavidade bucal, S. mutans coordena a expressão de vários genes em resposta aos fatores ambientais, como na presença de agentes antimicrobianos. Os objetivos deste estudo foram: 1) avaliar a influência de concentrações subinibitórias (sub-MIC) de fluoreto de sódio (NaF) e digluconato de clorexidina (Chx) sobre o crescimento planctônico; 2) avaliar a influência desses antimicrobianos em concentrações sub-MIC na formação de biofilme das cepas de S. mutans; 3) avaliar a expressão dos genes covR e vicR de cepas de S. mutans expostas aos sub-MIC de Chx e NaF. Cepas de S. mutans padrão (ATCC 25175 e UA159) e isolada de criança com cárie precoce da infância (3FV2) foram reativadas em BHI caldo e expostas a Chx e NaF para determinação da MIC e MBC. A partir desses valores, curvas de crescimento foram obtidas para as cepas de S. mutans expostas a concentrações sub-MIC de Chx (0,25 x MIC a 0,75 x MIC) e NaF (0,125 x MIC a 0,75 x MIC). Ensaios de biofilme foram realizados para as cepas de S. mutans expostas ou não aos sub-MIC dos agentes antimicrobianos (0,25 x MIC; 0,5 x MIC e 0,75 x MIC). A expressão dos genes covR e vicR foram avaliadas por PCR quantitativo para as cepas de S. mutans em condições planctônicas expostas a 0,125/0,25/0,5 x MIC de NaF e Chx. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística considerando p≤0,05. Os resultados mostraram que sub-MIC de Chx e de NaF afetaram o crescimento planctônico das cepas de S. mutans, de maneira dose-dependente. Sub-MIC de Chx afetou somente a formação de biofilme de 3VF2 e valores de NaF acima de 0,5 x MIC causaram redução do crescimento do biofilme para todas as cepas testadas, de maneira dose-dependente, com exceção da cepa ATCC 25175, que foi afetada igualmente por todas as concentrações avaliadas. Concentrações sub-MIC gradativas de Chx induziram a expressão crescente do gene vicR das cepas avaliadas. Quando NaF e Chx foram associados, o gene covR teve sua expressão reduzida quando expostas a 0,5 x MIC. Conclui-se que concentrações sub-MICs de NaF acima de 0,5 x MIC causaram redução do crescimento planctônico e em biofilme das cepas de S. mutans. Concentrações sub-MIC de Chx induzem a expressão de vicR podendo favorecer a formação de biofilme pelas cepas de S. mutans. / Streptococcus mutans is known for its ability to adhere, colonize and form biofilm on dental surfaces. To survive in the oral cavity, S. mutans coordinates the expression of several genes in response to environmental factors, such as in the presence of antimicrobial agents. The objectives of this study were: 1); to evaluate the influence of subinhibitory concentrations (sub-MIC) of chlorhexidine (Chx) and sodium fluoride (NaF) on planktonic growth 2) to evaluate the influence of sub-MIC of these agents on biofilm formation of S. mutans strains; 3) to evaluate the expression of the covR and vicR genes of S. mutans strains exposed to sub-MIC of Chx and NaF. Standard strains of S. mutans (ATCC 25175 or UA159) and clinical strain isolated from child with caries (3FV2) were reactivated in BHI broth and exposed to Chx and NaF for determination of MIC and MBC. From these values, growth curves were obtained for S. mutans strains exposed to sub-MIC concentrations of Chx (0.25 x MIC to 0.75 x MIC) and NaF (0.125 x MIC to 0.75 x MIC). Biofilm assays were performed for S. mutans strains exposed or not to the sub-MIC of antimicrobial agents (0.25, 0.5 and 0.75 x MIC). Expression of covR and vicR genes were evaluated by quantitative PCR for strains of S. mutans under plankton conditions exposed to 0.125 / 0.25 / 0.5 x MIC of NaF and Chx. The data were submitted to statistical analysis considering p≤0.05. The results showed that Chx and NaF sub-MIC affected planktonic growth of S. mutans strains in a dose-dependent manner. Sub-MIC of Chx only affect the biofilm formation for ATCC 25175, and, NaF values above 0.5 x MIC caused reduction of the biofilm growth for all tested strains, in a dose-dependent manner, except for ATCC 25175, which was also affected by all concentrations evaluated. Gradual sub-MIC concentrations of Chx induced increasing expression of the vicR gene of the strains evaluated. When NaF and Chx were related, the covR gene had its expression reduced when exposed to 0.5xMIC. It is concluded that sub-MICs concentrations of NaF above 0.5 x MIC caused reduction of planktonic and biofilm growth of S. mutans strains. Sub-MICs concentrations of Chx induce vicR expression and may favor biofilm formation by S. mutans strains.

Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Regina Maria Puppin Rontani / Banca: Josimeri Hebling / Resumo: O presente estudo teve o objetivo de investigar o número (UFC) e a prevalência de Streptococcus grupo mutans e Candida spp. e das respectivas espécies no biofilme dental supragengival de crianças sem cárie, com cárie e cárie de mamadeira, e na dentina cariada de crianças com cárie e cárie de mamadeira, comparando a freqüência destes microrganismos nos sítios coletados. Foram coletadas amostras de biofilme dental e dentina cariada de 56 crianças de 1 a 5 anos de idade, as quais foram divididas em 3 grupos: 1- cárie de mamadeira (n=24); 2- cárie (n= 11) e 3- livres de cárie (n=21). As amostras foram semeadas em SB20 e SA, para S. mutans e Candida spp., respectivamente, e após 48h foram contadas. As espécies de S. mutans foram identificadas bioquimicamente, enquanto que as espécies de Candida foram identificadas pelo CHROMagar® Candida. Os testes estatísticos de Kruskall-Wallis e Mann-Whitney foram aplicados aos valores de unidades formadoras de colônias (UFC) e para as freqüências de cultura das espécies de S. mutans e Candida spp. foram aplicados testes estatísticos de Fisher. Os resultados mostraram que na contagem de UFC para S. mutans houve apenas diferença estatística entre os grupos 1 e 3 e entre os grupos 2 e 3 no biofilme, não existindo diferença na dentina. Com relação à contagem de UFC para Candida ssp. houve apenas diferença entre os grupos 1 e 3 no biofilme, não existindo diferença na dentina. A espécie mais prevalente foi S. mutans c, f e Candida albicans estando presentes com maior freqüência na cárie de mamadeira (85,4% e 60,4%, respectivamente), independente do local da coleta. Apenas para S. mutans c, f houve associação significante para dentes cariados, seja cárie de mamadeira ou não. Porém, a freqüência de Candida albicans no grupo cárie de mamadeira foi destacadamente maior quando comparada a dos grupos sem cárie e cárie...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study aimed to determine count (CFU) and the prevalence of Streptococcus mutans and Candida spp., and respectives species, in the dental supragengival biofilm of children caries-free, with early childhood caries and caries. Carious dentin was collected in the children with caries and early childhood caries to compare the frequency of these microorganisms in the collected sites. Pooled samples of dental biofilm and carious dentin were collected from 56 children aged 1 to 5 years, which were divided in 3 groups: 1 - early childhood caries (n=24); 2 - caries (n = 11) and 3 - caries-free (n=21). The samples were inoculated in SB20 medium and SA medium, for S. mutans and Candida spp., respectively, and incubated by 48 hours/37°C. Colonies growth were counted and identification was performed by biochemical tests. The statistical tests of Kruskall-Wallis and Mann-Whitney were applied to the total count of microorganisms (CFU). Fisher's tests were applied with the objective to evaluated the independence between the species and the caries type. The results showed that the count of CFU for S. mutans was statisticaly different between groups 1 and 3 and groups 2 and 3 in the biofilm, but not in dentin. The count of CFU for Candida ssp. was statisticaly different between groups 1 and 3 in the biofilm, but not in dentine. The more prevalent species was S. mutans c, f and Candida albicans, present more frequently in early childhood caries (85.4% and 60.4%, respectively), independent of the sampling site. Just S. mutans c, f had significant association for carious teeth, wether early childhood caries or not. However, the frequency of Candida albicans in the group early childhood caries was higher when compared to the groups caries-free and caries. There is a significant association between the presence of C. albicans and early childhood caries. / Mestre

Orientador: Marlise Inêz Klein / Resumo: A cárie dentária é uma doença dependente de biofilme, da dieta e fatores de hospedeiro. O biofilme é uma comunidade microbiana dinâmica, coberta pela matriz extracelular (MEC). Em biofilmes cariogênicos, a MEC rica em exopolissacarídeos proporciona microambientes ácidos, causando desmineralização do esmalte. Este estudo avaliou a função de DNA extracelular (eDNA) e ácido lipoteicóico (ALT) nas propriedades estruturais e funcionais da MEC de biofilmes cariogênicos. Biofilmes monoespécie de Streptococcus mutans UA159 (cepa parental ou mutantes knockout) e mistos (UA159 cepa parental ou mutantes, Actinomyces naeslundii ATCC 12104 e Streptococcus gordonii DL-1) foram formados em discos de hidroxiapatita com película salivar, em meio com saliva e 0,1% sacarose, alternado com 0,5% sacarose+1% amido (37°C/5% CO2). O pH do meio de cultura foi verificado a cada troca. Para modular componentes da MEC foram utilizadas cepas mutantes de S. mutans para os genes lytTS (∆SMu.525 e ∆SMu.526 - eDNA), operon dltABCD (∆SMu.1538 e ∆SMu.1541 - ALT) e gtfB (exopolissacarídeos insolúveis). A população microbiana foi avaliada longitudinalmente. Nas idades do biofilme 67 e 115 h, os biofilmes foram processados para avaliar a biomassa, as proteínas totais, e os componentes da matriz: eDNA, ALT, proteínas e exopolissacarídeos solúveis (WSP) e insolúveis (ASP) em água. Os dados foram analisados com ANOVA um critério e teste de Tukey (α=0,05). Na presença de 0,5% sacarose+1% amido, o pH do meio tornou-se... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dental caries is a disease dependent of biofilm, diet and host factors. Biofilm is a dynamic microbial community enmeshed by an extracellular matrix (ECM). In cariogenic biofilms, the ECM rich in exopolysacharides provide acidic microenvironments that cause demineralization of enamel. The present study evaluated the role of extracellular DNA (eDNA) and lipoteichoic acid (LTA) in the structural and functional properties of the matrix of cariogenic biofilm. Single-species biofilms of Streptococcus mutans UA159 (parental or knockout strains) and mixed-species (UA159 parental or mutant strains, Actinomyces naeslundii ATCC 12104 and Streptococcus gordonii DL-1) were grown onto saliva-coated hydroxyapatite discs, in medium with saliva and 0.1% sucrose, alternating with 0.5% sucrose + 1% starch (37°C / 5%CO2). The pH of spent media was verified at each medium change. The S. mutans knockout mutant strains of genes lytTS (ΔSMu.525 and ΔSMu.526 - eDNA), operon dltABCD (ΔSMu.1538 and ΔSMu.1541 - LTA) and gtfB (insoluble exopolysaccharide) were used to modulate ECM' components. The microbial population was evaluated longitudinaly. At 67 and 115 h, biofilms were processed to assess biomass, total protein and ECM components: eDNA, LTA, soluble proteins, and water soluble (WSP) and insoluble (ASP) exopolysaccharides. The data were analyzed by ANOVA one-way and Tukey test (α=0.05). In the presence of 0.5% sucrose + 1% starch the pH of spent media became more acid. During the initial stages of mixed-species biofilm development, S. gordonii prevail (p<0.05); the proportion of the three species was similar at 67 h, and S. mutans becomes the dominant species over time (p<0.05), independently of ECM' components modulation. The biomass and the total protein content of single- and mixed-species biofilms usually showed significant increases over time (p<0.05)... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Cristine Yumi Koga-Ito / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Silvana Cai / Banca: Renata de Oliveira Mattos Graner / Resumo: Objetivo deste trabalho foi avaliar diferentes materiais restauradores após indução de cárie secundária in vitro, in situ e aderência de S. mutans sobre estes materiais. Oitenta e quatro molares humanos foram restaurados com diferentes materiais (Z250, Freedom, Vitremer e Fuji IX) e subdivididos em: desafio cariogênico com S. mutans ou ciclagem de pH (n=12). Para o estudo in situ, aparelhos removíveis contendo um espécime restaurado com cada material foram utilizados por 12 voluntários por 14 dias (dia e noite). Uma gota de sacarose a 20% foi pingada nos espécimes 8X/dia. O grupo controle teve espécimes restaurados e não submetidos aos desafios cariogênicos. Os espécimes foram submetidos à microscopia de luz polarizada e EDS. Para a aderência, espécimes dos materiais foram imersos em cultura de S. mutans ATCC 35688 em caldo sacarosado. Após 48h (37°C/5% CO2), foi realizada contagem das unidades formadoras de colônias (log UFC/mL). Os resultados foram submetidos à análise estatística Kruskall-Wallis e Student-Newman-Keuls ou Comparação de Dunn e demonstraram diferenças entre as metodologias in vitro e in situ (p<0,05), porém sem diferenças entre as metodologias in vitro. Fuji IX demonstrou maior concentração de cálcio e menor desmineralização do esmalte adjacente, diferindo dos demais materiais. Os valores médios de aderência (±desvio padrão) foram: Z250 6,41 (0,15)a; Freedom 4,90 (0,95)b; Vitremer 5,13 (0,27)b; Fuji IX 4,89 (0,62)b. Letras diferentes significam diferença estatística significante. Concluiu-se que conforme a metodologia de desafio cariogênico, os materiais restauradores apresentaram diferentes resultados e que materiais fluoretados apresentaram menor aderência de S. mutans. / Abstract: The purpose of this study was to different restorative materials under in vitro and in situ secondary caries-inducing methodologies and the adherence of S. mutans to restorative materials. Eighty-four extracted human third molars were restored with different materials (Z250, Freedom, Vitremer and Fuji IX) and divided into: S. mutans cariogenic challenge or pH-cycling cariogenic challenge (n=12). For the in situ study, removable appliances having enamel specimens restored with each material were used by 12 volunteers for 14 days (day and night). One drop of 20% sucrose solution was dripped on the specimens 8X/day. Control group had restored specimens that were not submitted to any cariogenic challenge. Specimens were submitted to polarized light microscopy, SEM and EDS. For the adherence testing, specimens of each restorative material were immersed in S. mutans ATCC 35688 culture in sucrose broth. After 48h (37°C/ 5% CO2), the countage of colony forming units was performed (log cfu/mL). Results were submitted to Kruskall-Wallis and Student-Newman-Keuls or Dunn Comparison statistical analysis and showed differences between in vitro and in situ methodologies (p<0.05), however no differences were found between in vitro methodologies. Enamel adjacent to Fuji IX showed higher calcium concentration and less demineralization, differing from the other materials. Mean adherence values (±standard deviation) were: Z250 6.41 (0.15)a; Freedom 4.90 (0.95)b; Vitremer 5.13 (0.27)b; Fuji IX 4.89 (0.62)b. Different letters indicate significant statistical difference. It was concluded that according to secondary-caries inducing methodology, restorative materials presented different results and fluoridated materials presented less S. mutans adherence. / Doutor