Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-05-27T11:52:38Z No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-27T11:54:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-27T11:54:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_KhellidaLoianeVieiraRamos.pdf: 3419726 bytes, checksum: c52def39389e6f78cc9cb8b432b918f5 (MD5) / O câncer é definido como um conjunto de mais de cem doenças caracterizado por desordens celulares ocasionadas por múltiplas alterações genéticas que conduzem a um desequilíbrio na proliferação e morte celular. No Brasil, as estimativas para o ano de 2012 e 2013 apontam a ocorrência de aproximadamente 518.510 casos novos de câncer, dentre os quais, o mais incidente será o câncer de pele não melanoma. Devido a tantos efeitos colaterais das terapias convencionais no tratamento das neoplasias, a terapia fotodinâmica (TFD) desponta como uma alternativa segura e altamente eficaz no tratamento de diversos tipos de câncer. A sua alta eficácia decorre da indução direta de morte das células neoplásicas, da destruição da microvasculatura tumoral e do reforço da imunidade antitumoral. A TFD é realizada combinando-se o oxigênio molecular, luz de comprimento de onda específico e um fotossensibilizante. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver uma nanoemulsão (nanoA) à base de óleo de açaí como fotossensibilizante para uso na TFD e investigar os efeitos biológicos in vitro e in vivo no tratamento de câncer de pele não-melanoma. Para formulação da nanoA, foi utilizado água, óleo e surfactante Tween 80 e utilizou-se o método de temperatura de inversão de fase (PIT). Para a avaliação dos aspectos morfológicos e coloidais da nanoA utilizou-se recursos de microscopia eletrônica de transmissão e aparelho de dispersão dinâmica de luz Zetasizer, respectivamente. As propriedades fotofísicas foram avaliadas com leituras dos espectros de absorbância e fluorescência em espectrofotômetro. A nano A apresentou pico de absorção e emissão na região do vermelho,o que é bom para fotossensibilizantes a serem aplicados na TFD já que corresponde à janela óptica tecidual. O diâmetro hidrodinâmico obtido foi de 117,5 nm, o diâmetro médio de 74 nm, o índice de polidispersividade de 0,144 e potencial zeta de -0.536mV; características essas que viabilizam o uso da nanoA em sistemas biológicos devido a monodispersividade e pequeno diâmetro, favorecendo a retenção e permeação no tumor (EPR). A capacidade de geração de espécies reativas de oxigênio foi medida através do método de decaimento por benzofurano, comprovando a atividade fotoquímica do óleo, viabilizando seu uso como fotossensibilizante na TFD. A avaliação in vitro consistiu em análises de incorporação e distribuição da nanoA em células de carcinoma epidermóide humano A431 e em fibroblasto humano Detroit, assim como na avaliação da citotoxicidade das linhagens submetidas a diferentes concentrações da nanoA na ausência e na presença de luz. A linhagem normal mostrou-se inerte à incubação com a nanoA enquanto que a tumoral foi mais sensível nos menores tempos de exposição à nano tanto no escuro quanto pós-irradiação. O tempo necessário à incubação foi de quinze minutos e de irradiação equivalente à 10 minutos. A avaliação in vivo consistiu em análises clínica e histopatológica de tumores induzidos por injeção ortotópica de células A431 em camundongos nude, tratados com três sessões de TFD além de análises sanguíneas. Tanto a terapia quanto o fármaco sozinho apresentaram atividade antitumoral. A TFD foi responsável por 33% de regressão total enquanto que a nanoemulsão sozinha por 16% de regressão total e 33% de regressão parcial. Estes resultados indicam que esta inédita nanoemulsão é em potencial um novo fármaco para aplicação antitumoral, considerando a alta resistência do carcinoma estudado e a grande eficácia do tratamento alcançado. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cancer is defined as a set of more than hundred diseases characterized by cellular disorders caused by multiple genetic alterations that leads to imbalance between cell proliferation and death. In Brazil, approximately 518,510 new cases of cancer have been estimated from 2012 to 2013, majority being of non melanoma form of skin cancer. Due to so many side effects of the conventional therapies in the treatment of the neoplasias, the photodynamic therapy (PDT) emerges as a safe and highly efficient alternative in the treatment of several types of cancer. This high efficiency results from the straight induction of death of cancer cells , from the destruction of the tumor vasculature and to the reinforcement of the antitumor immunity. PDT is employed with combination molecular oxygen, specific wavelength and photosensitizers. So, the objective of this work was to develop a nanoemulsion (nanoA) with açai oil as a photosensitizer for the application in PDT and investigates the biological effects in vitro and in vivo to evaluate the efficacy in the treatment of non melanoma skin cancer. For This formulation used water, oil and Tween 80 surfactant by the method of phase inversion temperature (PIT). For morphological and colloidal evaluation of nanoA transmission electronic microscopy, scanning electronic microscopy and dynamic dispersal of light Zetasizer were used. The photo-physical properties were evaluated with readings of the spectrum of absorbance and fluorescence in a spectrophotometer. The peak of absorption and emission was in the red region, which is good for application in PDT. The hydrodynamic diameter obtained was 117.5 nm, the middle diameter was 74 nm, the polydispersity index was 0.144 and the zeta potential was -0.536 mV. These features enabled the use of nanoA in biological systems, due to the monodispersity and small diameter favoring the permeation and retention in the tumor (EPR). The capacity of generation of reactive oxygen species was measured through the decline method for benzofuran proving the photochemical activity of the oil, enabling it´s use as a photosensitizer in PDT. The in vitro evaluation consisted of analyses of internalization and distribution of the nanoA in human epidermoid carcinoma cells A431 and in human fibroblast Detroit, as well as of evaluation the cytotoxicity of the cell line subjected to different concentrations of nanoA in the absence and in the presence of light. The normal cell line appeared inert to the incubation with the nanoA whereas the tumoral was more sensitive. The time necessary for nanoemulsion association on cells was fifteen minutes. The in vivo evaluation of the effects of nano A consisted of clinic and histopathological analyses of ortotopic induced tumor by injection of A431 cells in nude mice, treated with three sessions of PDT. As much as drug therapy alone showed antitumor activity. PDT was responsible for 33 % of total regression while the nanoemulsion alone for 16 % of total regression and 33 % of partial regression. These results indicate that this nanoemulsion is good as photosensitizer and a potential new antitumor drug for application in squamous cell carcinoma (SCC), considering the high resistance of this carcinoma and the great efficiency of the treatment.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, Programa de Pós-Graduação em Ciências Florestais, 2014. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-05-28T12:44:49Z No. of bitstreams: 1 2014_JulianaMartinsdeMesquitaMatos.pdf: 1124161 bytes, checksum: f388b10718d29f8d75b5e15bd11a1534 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-28T15:03:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_JulianaMartinsdeMesquitaMatos.pdf: 1124161 bytes, checksum: f388b10718d29f8d75b5e15bd11a1534 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-28T15:03:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_JulianaMartinsdeMesquitaMatos.pdf: 1124161 bytes, checksum: f388b10718d29f8d75b5e15bd11a1534 (MD5) / A rapidez na avaliação da qualidade fisiológica das sementes agiliza as tomadas de decisões nas etapas finais da produção, armazenamento e comercialização das mesmas. O presente trabalho teve por objetivo analisar as metodologias para aplicação dos testes de tetrazólio, lixiviação de potássio, pH do exsudato, condutividade elétrica para a determinação da qualidade fisiológica de sementes recém colhidas de Dalbergia miscolobium Benth. As sementes foram desinfetadas e submetidas aos seguintes testes: I)Teste de germinação pelo método do rolo de papel filtro a 25ºC, aplicando os seguintes tratamentos: 1) sementes sem corte no tegumento e expostas a luz; 2) sementes com corte na parte lateral do tegumento e expostas a luz; 3) sementes sem corte e sem luz; e 4) sementes com corte na parte lateral do tegumento e sem luz. II) Teste de tetrazólio a 1% de concentração – aplicando os seguintes tratamentos de preparo da semente: i) hidratação entre folhas de papel filtro a 25ºC por 24 horas; ii) hidratação entre folhas de papel filtro a 25ºC por 24 horas seguido de corte na porção lateral do tegumento; e iii) hidratação entre folhas de papel filtro a 25ºC por 24 horas seguida de remoção completa do tegumento. III) Teste de condutividade elétrica, pH do exsudato e Lixiviação de potássio- As sementes foram agrupadas em conjuntos de 20 unidades, pesadas e colocadas para embeber em 100 mL de água Mili-Q empregando-se diferentes tempos de embebição (30, 60, 90, 120 e 240 minutos) em câmara de temperatura constante calibrada para 25ºC. Cada tratamento (tempo) foi composto por 10 repetições de 20 sementes. Após cada um dos períodos foram extraídos 15 mL da solução de embebição das sementes para determinar o potássio lixiviado por meio da Técnica de Espectrofotometria de Absorção Atômica (EAA). No restante da solução de embebição foram realizadas as medidas de: condutividade elétrica com o auxílio de um condutivímetro de bancada; do pH com auxílio do pHmetro de bancada e soluções indicadoras de pH. Essas metodologias de análises de potássio, pH e condutividade elétrica também foram realizadas com sementes envelhecidas artificialmente por períodos de 24, 48, 72 e 96 horas para verificar o efeito da deterioração sobre a liberação de exsudatos e a germinabilidade das sementes. Após essas avaliações as sementes envelhecidas foram postas para germinar. Os resultados demonstraram que as sementes coletadas possuem boa qualidade, com média de 87% de germinação, bem como a hidratação em papel filtro a 25ºC por 24 horas seguida da remoção do tegumento foi o tratamento que permitiu o melhor desempenho do teste de tetrazólio nas análises das sementes de Dalbergia miscolobium Benth. Verificou-se, ainda, que há um aumento da condutividade elétrica e da lixiviação do potássio em função do tempo de embebição das sementes de Dalbergia miscolobium. Para as sementes envelhecidas artificialmente verificou-se que houve um aumento nos valores de potássio lixiviado e da condutividade elétrica associados a um decréscimo dos valores de germinação das sementes. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The decision making during the final stages of production, storage and marketing of seeds depends directly on the legerity of the analysis in quality streamlines. This study aimed to analyze the methodologies for application of tetrazolium tests, leaching of potassium, pH and electrical conductivity of exudate to determine the physiological quality of seeds newly harvested Dalbergia miscolobium Benth. The seeds were disinfected and subjected to the following tests: i) Germination test by the filter paper at 25° C roll method by applying the following treatments: 1) seeds without cutting the seed coat and exposed to light , 2) seeds by cutting the side integument and exposed to light ; 3 ) seeds without cutting and without light , and 4) seeds with cut in the side of the integument and without light. II ) Test tetrazolium at 1% concentration - applying the following treatments to prepare the seed : i) hydration between sheets of filter paper at 25°C for 24 hours role ii ) hydration between sheets of filter paper at 25°C for 24 hours followed by cutting the side portion of the integument , and iii ) hydrating between sheets of filter paper at 25°C for 24 hours followed by complete removal of the seed coat paper. III ) Test electrical conductivity and pH of the exudate leaching potassium - Seeds were grouped by sets of 20 pieces , weighed and placed to soak in 100 mL Milli - Q water using different soaking times ( 30, 60, 90, 120 and 240 minutes) in a constant temperature chamber that was calibrated to 25°C. Each treatment (time) is comprised of 10 repetitions of 20 seeds. After each period, 15 mL of the seed soaking were extracted to determine the potassium leached through the technique of atomic absorption spectrometry (AAS ). The remainder of the soaking solution was measured in the electrical conductivity with the aid of a bench conductivity meter, PH with the aid of a pH meter and bench and pH indicator solutions. These potassium, pH and electrical conductivity analyzis’ methods were also performed with artificially aged seeds for periods of 24 , 48 , 72 and 96 hours with the aim to verify the effect of deterioration on the release of exudates and germination of seeds. After those reviews, the aged seeds were set to germinate. The results showed that seeds collected have good quality , with an average of 87 % germination, as well as hydration on filter paper at 25°C for 24 hours followed by removal of the seed coat, this was the treatment that allowed the best performance of the tetrazolium test in the analyzes seeds of Dalbergia miscolobium Benth. It was also showed by the results that there is an increase in electrical conductivity and potassium leaching according to time of seed imbibition Dalbergia miscolobium. For the artificially aged seeds were found that there was an increase in the amounts of leached potassium and electrical conductivity associated with a decrease in the values of seed germination.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-22T16:35:44Z No. of bitstreams: 1 2009_EricaSoaresMartins.pdf: 5953401 bytes, checksum: a4306cdea8c67f736b4ad735799a7225 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T14:22:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EricaSoaresMartins.pdf: 5953401 bytes, checksum: a4306cdea8c67f736b4ad735799a7225 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T14:22:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EricaSoaresMartins.pdf: 5953401 bytes, checksum: a4306cdea8c67f736b4ad735799a7225 (MD5) Previous issue date: 2009-07-16 / Toxinas Cry de Bacillus thuringiensis (Bt) são proteínas inseticidas utilizadas para controle de insetos. Elas agem por ingestão e são ativadas por proteases e interagem com receptores específicos localizados na superfície da célula hospedeira, resultando na lise de células do intestino médio. Este trabalho está dividido em quatro capítulos. No primeiro, foi feita uma revisão sobre Bacillus, ecologia e modo de ação, e insetos-praga do algodão. O segundo capítulo descreve a seleção e o estudo do conteúdo de genes cry de estirpes de B. thuringiensis com atividade para Anthonomus grandis. O terceiro capítulo descreve a clonagem, sequenciamento e expressão da toxina Cry1Ba da estirpe S601 de B thuringiensis, que é tóxica para A. grandis. A ligação da toxina Cry1Ba6 a proteínas localizadas na borda escovada de células do intestino médio de A. grandis foi analisada e descobriu-se que a proteína Cry1Ba6 se liga a duas proteínas (62 e 65 kDa) com atividade de fosfatase alcalina (ALP). Este trabalho é o primeiro relato da localização de receptores de toxina Cry em células do intestino médio de A. grandis. Finalmente, o capítulo quatro mostra como outras toxinas (Cry1Ia e Cry10A) expressas em Bt, com atividade já descrita para A. grandis interagem com BBMVs de A. grandis e S. frugiperda. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cry toxins from Bacillus thuringiensis (Bt) are isecticidal proteins used for insect control. They actin by ingetion and are activated by host proteases and interact with specific receptors located on the host cell surface, resulting in midgut epithelial cells lysis. This work is divided in four chapters. In the first, a review was done o Bacillus, ecology and action mode, and cotton insect-pests. The second chapter describes the selection and study of the content of cry genes of B. thuringiensis strains with activity against nthonomus. grandis. The third chapter describes cloning, sequencing and expression of a cry1Ba toxin gene from the B. thuringiensis S601 strain which is toxic to A. grandis. The binding of Cry1Ba6 toxin to proteins located on the midgut brush border membrane of A. grandis was analyzed and it was found that Cry1Ba6 binds to two proteins (62 and 65 kDa) that showed alkaline phosphatase (ALP) activity. This work is the first report that shows the localization of Cry toxin receptors on the midgut cells of A. grandis. Finally, the chapter four shows how other toxins (Cry1Ia and Cry10A) expressed in Bt, which previously had activity described to A. grandis, interact with A. grandis and S. frugiperda BBMVs.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2010-03-24T21:50:33Z No. of bitstreams: 1 2009_HelvecioLealSantosJunior.pdf: 1422454 bytes, checksum: d6ba3f63ea8dba7e9c2cd063c4a2d68f (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-17T18:27:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_HelvecioLealSantosJunior.pdf: 1422454 bytes, checksum: d6ba3f63ea8dba7e9c2cd063c4a2d68f (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-17T18:27:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_HelvecioLealSantosJunior.pdf: 1422454 bytes, checksum: d6ba3f63ea8dba7e9c2cd063c4a2d68f (MD5) Previous issue date: 2008-12-11 / Foram introduzidos em três piquetes (P, M e G) cultivados com Brachiaria decumbens, 21 ovinos, machos, de 4 meses de idade, durante dois meses. Nos piquetes a forrageira tinha 15, 45 e 90 dias de crescimento respectivamente. O aumento na concentração da enzima sérica aspartatoaminotransferase ocorreu na semana após o inicio do experimento nos grupos P e M e sétima semana no grupo G, enquanto que o aumento da gamaglutamiltransferase ocorreu na segunda semana no grupo P e M e no grupo G ocorreu na quarta semana. Os principais sinais clínicos incluíram apatia, fotofobia, secreção ocular bilateral, hiperemia e icterícia de mucosas além de edema de face. Quando os animais apresentavam os sinais clínicos severos da intoxicação eram retirados do experimento e realizava-se a biópsia hepática guiada por ultrasom. Os ovinos que morreram foram necropsiados. Os achados de necropsia foram a hepatomegalia e distensão da vesícula biliar. Na avaliação microscópica das biópsias e dos animais necropsiados os principais achados incluíam: tumefação e vacuolização de hepatócitos, macrófagos espumosos, colestase e cristais na luz de ductos biliares. A microscopia eletrônica do fígado dos animais intoxicados revelou hiperplasia de retículo endoplasmático liso associado a presença de cristais no citoplasma de hepatócitos. Não foram observados esporos do fungo Pithomyces chartarum nas coletas realizadas durante o experimento. Na avaliação dos níveis de protodioscina o grupo P, grupo em que a pastagem apresentava intensa brotação apresentou a maior concentração dos níveis de protodioscina. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Were introduced into three paddocks (P, M e G) cultivated with Brachiaria decumbens, 21 sheep, male, from 4 months of age, for two months. In the pickets had forage 15, 45 and 90 days of growth respectively. Increase in the concentration of seric enzyme aspartatoaminotransferase occurred in the after the start of the experimente in group P and M and at the seventh week in group G, while the increase in gamaglutamiltransferase ocorred in the second week in group P and M and in group G occurred in the fourth week. The main clinical signs included apathy, photophobia, bilateral ocular secretions, mucous hyperemia of jaundice and facial swelling. When the animals showed clinical signs of sever intoxication they were withdraw from the experiment and it was performed an ultrasound guided liver biopsy. The sheep´s that died were necropsied. The findings of the necropsy were hepatomegaly and distension of the gallbladder. In the microscopic assessment of biopsies and animals corpses the main findings included: swelling and vacuolization of hepatocytes, macrophages sparkling, crystal and cholestasis in light of bile ducts. The electron microscopy of liver of the poisoned animals reveled hyperplasia of smooth endoplasmic reticulum associated with the presence of crystals in the cytoplasm of hepatocytes. There were no Pitomyces chartarum spore in samples taken during the experiment. In assessing the levels of protodioscina the group P, group where the pasture was intense shooting had the highest concentration levels of protodioscina.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Raquel Viana (tempestade_b@hotmail.com) on 2010-03-29T13:47:46Z No. of bitstreams: 1 2009_GlauciaManoelladeSouzaLima.pdf: 6424079 bytes, checksum: ebb433df2157258c4cb5131712e0b77e (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T14:10:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_GlauciaManoelladeSouzaLima.pdf: 6424079 bytes, checksum: ebb433df2157258c4cb5131712e0b77e (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T14:10:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_GlauciaManoelladeSouzaLima.pdf: 6424079 bytes, checksum: ebb433df2157258c4cb5131712e0b77e (MD5) Previous issue date: 2009 / Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria Gram-positiva, entomopatogênica, que se caracteriza pela presença de inclusões cristalinas denominadas de #-endotoxinas ou proteínas Cry. Essas proteínas podem ser altamente tóxicas para insetos suscetíveis, não apresentando atividade para outros organismos. Alguns sistemas de expressão vêm sendo utilizados para expressar proteínas Cry com a finalidade de aumentar a sua toxicidade para diversas ordens de insetos. Os baculovírus são vírus de insetos que têm sido muito utilizados como vetores de expressão de genes heterólogos em células de insetos, devido principalmente à presença de promotores fortes que permitem altos níveis da proteína heteróloga na fase tardia da infecção. Neste trabalho, foram clonados genes cry (cry2Aa e cry11A) isolados das estirpes de Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki S447 e subsp. israelensis S1806, respectivamente, no genoma do baculovírus Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV), por transposição sítio-específica, gerando os vírus vAcCry2Aa e vAcCry11A. A avaliação da expressão bem como a presença do transcrito foi realizada por RT-PCR. As proteínas heterólogas Cry2Aa e Cry11A foram analisadas em gel SDS-PAGE 12%, revelando a presença de bandas de aproximadamente 65 kDa e 70 kDa, respectivamente. A toxicidade das proteínas heterólogas foi testada para larvas de inseto das ordens Lepidoptera e Diptera. A proteína heteróloga Cry2Aa apresentou uma CL50 1,036 $g/mL para larvas de segundo instar de Anticarsia gemmatalis , enquanto Cry11A mostrou ser bastante tóxica para larvas de segundo instar de Aedes aegypti com CL50 de 53,3 ng/mL. A presença de cristais derivados da proteínas heteróloga Cry2Aa só foi evidenciada nos extratos de lagartas infectadas com os vírus recombinantes. A análise ultraestrutural da proteína heteróloga Cry2Aa purificada a partir dos extratos das larvas de terceiro instar infectadas com o vírus recombinante vAcCry2Aa mostrou a presença de grandes cristais na forma cubóide Neste trabalho foi possível avaliar que o baculovírus é um bom vetor de expressão de proteínas Cry. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bacillus thuringiensis (Bt) is a Gram positive, entomopathogenic bacteria that produces crystalline inclusions called -endotoxins or Cry proteins. These proteins are highly toxic to susceptible insects, not showing activity against others organisms. Some expression systems have been used to express crystal proteins with the aim to increase their toxicity for several insect orders. Baculoviruses are insect viruses that have been widely used as expression vectors of heterologous proteins in insect cells, mainly due to the presence of strong promoters that allow high levels of expression of the heterologous protein during the late phase of virus infection. In this work, cry genes (cry2Aa and cry11A) from B. thuringiensis subsp. Kursaki S447 and subsp. israelensis S1806, respectively, were introduced into the genome of the baculovirus Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV), by site-specific transposition, generating the recombinant viruses vAcCry2Aa and vAcCry11A. Transcription of the heterologous genes were confirmed using mRNA from recombinant viruses infectedinsect cells (72 h p.i) by RT-PCR . The heterologous Total extracts from Spodoptera frugiperda infected with the recombinant viruses (vAcCry2Aa and vAcCry11A) were analyzed by SDS-PAGE, which detected the presence of polypeptides around 65 kDa and 70 kDa, respectively. Bioassays, using the heterologous proteins showed that Cry2Aa had toxicity to second instar Anticarsia gemmatalis larvae with a LC50 of 1.03 $g/mL and that Cry11A had toxicity to second instar Aedes aegypti larvae (Cry11A) with a LC50 of 53.3 ng/mL. Cuboid-shaped protein crystals (Cry2Aa) were observed only in vAcCry2Aa S. frugiperda infected-extracts by light and scanning electron microscopy. This work confirms the utility of the baculovirus expression system for the efficient expressionof Cry proteins.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-04-13T13:54:38Z No. of bitstreams: 1 2009_RICARDOROCHAPAVANDASILVA_dissertaçao.pdf: 2120078 bytes, checksum: 0eb01ef36a8d23ea73bca49643bf19b7 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-04-15T00:09:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_RICARDOROCHAPAVANDASILVA_dissertaçao.pdf: 2120078 bytes, checksum: 0eb01ef36a8d23ea73bca49643bf19b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-15T00:09:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_RICARDOROCHAPAVANDASILVA_dissertaçao.pdf: 2120078 bytes, checksum: 0eb01ef36a8d23ea73bca49643bf19b7 (MD5) Previous issue date: 2009 / A preocupação dos efeitos de cianobactérias na saúde humana cresce em muitos países. Casos de florações de cianobactérias em reservatórios e lagos criam problemas para o abastecimento de água, além de envenenamento, tanto animal como humano, se tornando uma preocupação para a saúde pública. As toxinas das cianobactérias são um grupo de toxinas naturais do ponto de vista químico e toxicológico. Podem ser neurotoxinas, hepatotoxinas, citotoxinas, toxinas irritantes e gastrintestinais. Microcystis aeruginosa é a espécie mais comum em florações de água doce de cianobactérias nocivas. Este trabalho teve como objetivo a avaliação da toxicidade e da genotoxicidade do extrato de uma floração de Microcystis spp contendo microcistina em peixes. Utilizaram-se duas espécies de peixes, sendo uma exótica (Oreochromis niloticus) e outra nativa do Brasil (Astyanax bimaculatus). Para a determinação da toxicidade aguda, utilizouse o método Trimed Spearman-Karber, e para a genotoxicidade aplicaram-se os testes de micronúcleo, do cometa e necrose versus apoptose com eritrócitos de sangue periférico coletados dos peixes. Estes foram expostos por duas vias (exposição corpórea e intraperitoneal) em diferentes concentrações. Verificou-se que em O. niloticus a CL50 (72 h) foi maior que 103,725 μg/L e a DL50 (72h) maior que 138 μg/100g de peso corpóreo. E para A. bimaculatus a CL50 (72h) calculada foi de 242,81 com intervalo de confiança de 152,74 a 386,00 μg/L e a DL50 (72h) igual a 491,9 com intervalo de confiança de 385,8 a 627,3 μg/100g de peso corpóreo. A maior média de micronúcleos observada em O. niloticus foi através de exposição corpórea à concentração de 103,725μg/L. Em A. bimaculatus a maior média foi na concentração 368,8μg/100g de peso expostos via i.p., seguida pela média da concentração 103,725μg/L e pela média da concentração 245,86μg/100g de peso via i.p. No teste do cometa os resultados demonstraram, tanto para O. niloticus como para A. bimaculatus, que em ambas as vias de exposição e concentrações mais elevadas, observaram-se valores significativos. No teste de necrose versus apoptose, observou-se, em O. niloticus, um maior índice de células em necrose com a maior dose e um maior índice de apoptoses na dose mais baixa. Em A. bimaculatus observaram-se células em necrose e em apoptose na dose mais alta e células em apoptoses com a dose mais baixa. O extrato da floração apresentou ação tóxica apenas para A. bimaculatus e ação genotóxica nas duas espécies de peixes. Em concentrações maiores, o extrato provocou necrose e em doses baixas provocou apoptose. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The concern with the effects of cyanobateria in the humans health raise in many countries. Cases of cyanobacteria bloom in reservoir and lakes turn out to be a problem for the water supply besides poisoning animals as human being becoming a source of issue for the public health. The cyanotoxins are a group of natural toxins form the toxicological and chemist point of view. They can be neurotoxin, hepatotoxin, citotoxin, irritating and gastrointestinal toxin. Microcystis aeruginosa is the most ordinary specie in fresh water bloom of harmful cyanobacteria. The objective of this project was the valuation of toxicity and the genotoxicity in fishes of the extract of a bloom of Microcystis spp containing microcystin. Two species were used, one of them is exotic (Oreochromis niloticus) and the other is native from Brazil (Astyanax bimaculatus). To determine the toxicity the method Trimed Spearman- Karber was used, and for the genotoxicity the micronucleus test, the comet assay and necrosis versus apoptosis test were applied using erythrocytes of peripheral blood from fishes. These were exposed by two ways (body exposure and via intraperitoneal (i.p.)) in different concentrations. One has checked that in O. niloticus. the LC50 (72 h) surpassed 103,725 μg/L and the LD50 (72h) surpassed 138 μg/100g of body weight. For A. bimaculatus the LC50 (72h) calculated was the 242,81 with confidence interval of 152,74 at 386,00 μg/L and the LD50 (72h) equal to 491,9 with confidence interval of 385,8 at 627,3 μg/100g of body weight. The largest average of the micronucleus observed in O. niloticus was given by the body exposition to the concentration of 103,725μg/L. In A. bimaculatus the largest average was in the concentration 368,8μg/100g of exposed weights via i.p., followed by the concentrated average 103,725μg/L and by the concentrated average 245,86μg/100g of weight via i.p. In the comet assay, for both O. niloticus and A. bimaculatus, the results show that in both ways of exposition and the highest concentrations, significant values were observed. In the necrosis versus apoptosis test one has observed a larger incidence of cells in necrosis with the highest dose and a higher incidence of apoptosis in the lowest dose in O. niloticus. And one has observed cells in necrosis and in apoptosis in the highest dose and cells in apoptosis with the lowest dose in A. bimaculatus. The extract of bloom has shown toxic action only for the A. bimaculatus. In higher concentrations the extract causing necrosis and in low doses the extract caused apoptosis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Psicologia, Departamento de Psicologia Social e do Trabalho, Programa de Pós-Graduação em Psicologia Social, do Trabalho e das Organizações, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-02-22T13:39:16Z No. of bitstreams: 1 2010_CamilaAkemiKarino.pdf: 3155085 bytes, checksum: 7a98a299aad3639f5c88414c640b94be (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2011-02-28T18:29:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_CamilaAkemiKarino.pdf: 3155085 bytes, checksum: 7a98a299aad3639f5c88414c640b94be (MD5) / Made available in DSpace on 2011-02-28T18:29:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_CamilaAkemiKarino.pdf: 3155085 bytes, checksum: 7a98a299aad3639f5c88414c640b94be (MD5) / A competição, a cobrança pessoal e social e a fase de preparação para a avaliação são alguns dos fatores que podem tornar a situação de prova um evento estressante e gerador de ansiedade. A ansiedade é um estado subjetivo de apreensão ou tensão, acompanhada de sensações físicas como uma iniciativa para se impedir uma ameaça. Este estudo teve como objetivo geral avaliar o efeito da ansiedade no desempenho em provas. O estudo foi realizado em uma amostra de 1.878 estudantes do ensino médio de escolas públicas e particulares de Brasília. Dois instrumentos de ansiedade foram desenvolvidos: um que busca medir as quatro dimensões de ansiedade, o Inventário de Ansiedade frente a provas (IAP) e outro que busca medir a ansiedade internamente e externamente causada (IAIEC). Os instrumentos foram aplicados momentos antes de um exame simulado para ingresso na universidade. A qualidade dos instrumentos foi analisada em termos de validade e de fidedignidade. Essas análises indicaram que os instrumentos têm adequadas estruturas fatoriais e boa consistência-interna. As análises de correlação do IAP e IAIEC com outros instrumentos de ansiedade (Escala Beck de Ansiedade, versão reduzida do Questionário de Saúde Mental e Inventário de Ansiedade Traço-Estado) indicaram evidências de adequada validade convergente com correlações entre 0,31 e 0,72. Os modelos da relação entre ansiedade e desempenho testados por meio de Modelagem por Equações Estruturais, principal objetivo do estudo, apresentaram índices de ajuste aceitáveis. A investigação da invariância dos modelos em subgrupos distintos (sexo e tipo de escola) confirmou a mesma estrutura fatorial, mas apontam a existência de cargas fatoriais distintas entre os grupos. De modo geral, os resultados corroboram com estudos que apontam que a ansiedade interfere negativamente no desempenho. É interessante notar que o fator emoção do IAP e o fator ansiedade externamente causada do IAIEC mostraram relações positivas com desempenho entre as mulheres e os homens, respectivamente. As implicações do estudo são notáveis no âmbito clínico, social e acadêmico. Um maior conhecimento sobre como a ansiedade impacta no desempenho pode gerar ações mais eficazes. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Competition, personal and social demands, and the preparation phase for an examination are all factors that might turn a test situation into a stressful and anxiety-inducing event. Anxiety is a subjective state of apprehension or tension, accompanied by physical sensations as an initiative to prevent a threat. The present study aims to evaluate the effect of anxiety on test performance. The study was conducted on a sample of 1,878 high school students from public and private schools in Brasilia. Two instruments measuring anxiety were developed: one that aims to measure the four dimensions of anxiety, the Testing Anxiety Inventory (IAP) and another that seeks to measure Internally and Externally Caused Anxiety (IAIEC). The anxiety instruments were applied moments before the application of a simulation of a university admission test. The quality of the administered instruments was analyzed in terms of their validity and reliability. The findings suggest that the instruments showed an adequate factor structure and a good internal consistency. Correlational analysis of IAP and IAIEC with other instruments of anxiety (Beck Anxiety Inventory, short version of the Questionnaire of Mental Health and State-Trait Anxiety Inventory) indicated evidence of an adequate convergent validity with correlations between .31 and .72. Testing models of the relationship among anxiety and test performance with Structural Equation Modeling, which was the main objective of the study, presented acceptable goodness of fit indices. Checking the invariance of the models for distinct subgroups (gender and school type) confirmed the same number of factors, but indicated the existence of different factor loadings between groups. Overall, the results of the present study support the results thar indicate that anxiety impairs performance. Interestingly, the emotion factor of the IAP and the externally caused anxiety factor of the IAIEC showed a positive relationship with performance for women and men, respectively. The implications of the present study are remarkable, both in the clinical, social and academic setting. A better understanding about how anxiety impacts cognitive performance can generate more effective interventions.

As lhamas são camelídeos sul-americanos encontrados em criações zoológicas no Brasil, com grande adaptação a diferentes regiões do mundo. Devido às variações que ocorrem em decorrência da influência da região, nutrição e resposta individual dos animais, é importante caracterizar seus parâmetros fisiológicos para estabelecer valores de referência da espécie. O objetivo do presente trabalho foi estudar valores hematológicos e bioquímicos de lhamas, de um zoológico localizado no município de Gravataí, Rio Grande do Sul, Brasil, avaliando também possíveis diferenças entre sexo e períodos do ano. Os resultados obtidos foram comparados com aqueles descritos na literatura, objetivando contribuir para a compreensão dos mecanismos que afetam sua adaptação na região. Foram utilizadas 16 lhamas clinicamente saudáveis, 8 machos e 8 fêmeas, na faixa etária de 1 a 6 anos de idade. Foram realizadas 8 coletas de sangue para cada sexo através de venipunção jugular, durante o período de um ano. Na comparação entre os sexos, observaram-se diferenças significativas de leucócitos, CK, AST, colesterol, creatinina, frutosamina, glicose, triglicerídeos, albumina, globulinas e fósforo. Em relação a época do ano, houve diferenças significativas entre hemoglobina, triglicerídeos, frutosamina, colesterol, creatinina, proteínas plasmáticas totais, albumina, globulinas, glicose, nas enzimas ALT, AST, LDH e CK, e nos níveis de cálcio e fósforo entre alguns meses. Comparando-se os valores encontrados com a literatura, os níveis de triglicerídeos, globulinas, CK, LDH, uréia e fósforo foram elevados, além de magnésio que mostrou-se mais alto nas fêmeas, enquanto os demais metabólitos tiveram valores similares. Os resultados encontrados mostraram que as lhamas possuem diferentes maneiras de responderem ao manejo, adaptando-se a situações novas num ambiente em constante transformação. Os valores encontrados podem servir como valores de referência para lhamas criadas no sul do Brasil. / Llamas are south American camelids found in zoological parks from Brazil, and are adaptable in different world conditions. Due the influence of the region (mainly climate and altitude), nutrition and individual animal responses, it is important to characterize physiological parameters for establishing reference values for this species. The objective of this study was to establish reference values for llamas on zoo conditions from Gravataí, southern Brazil, by evaluating the biochemical and hematological profiles among sex and seasons. Sixteen clinically healthy llamas (eight males and eight females), aged one to six years-Old were used in this trial. Eight blood collections were performed for each animal through jugular venipuncture, along one year. In the comparison between sex, significant differences were observed in leukocites, CK, AST, cholesterol, creatinine, fructosamine, glucose, tryglycerides, albumin, globulin and phosphorus. Regarding the year period, statistical difference was founded in the hemoglobin, tryglycerides, fructosamine, cholesterol, creatinine, total protein, albumin, globulin and, glucose, as well as in enzymes ALT, AST, LDH, CK, and calcium and phosphorus level. Compare with data from literature, the found values for tryglycerides, globulin, CK, LDH, urea and P were higher, and Mg exhibit higher values in females. Other metabolic data were similar to literature report. The results showed that llamas have different ways of responsing to husbandry, situations in an environment of constant transformations. On this basis, the results can be useful as reference values for llamas maintained in the south of Brazil.

A incidência de câncer de cavidade oral vem aumentando progressivamente em todo mundo, conforme dados da OMS. Não obstante, o diagnóstico de CCO costuma ser feito tardiamente, resultando em uma menor sobrevida para esses pacientes. Por isso, a investigação de novos métodos de diagnóstico precoce pode contribuir para a redução da mortalidade dessa neoplasia. O teste de micronúcleos para o monitoramento de indivíduos com alto risco de CCO vem demonstrando ser um método de baixo custo e de fácil aplicação. É relevante ressaltar; entretanto, que não há relatos na literatura sobre a acurácia diagnóstica do teste de micronúcleos para lesões da cavidade oral. Desta forma, o presente estudo teve o objetivo de verificar a sensibilidade e a especificidade do teste de micronúcleos para detectar lesões de cavidade oral malignas ou potencialmente malignas. Trata-se de um estudo transversal com 48 participantes, que foram submetidos à biópsia de lesões da cavidade oral no ambulatório de Estomatologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. As amostras de células esfoliadas foram coletadas em dois sítios diferentes da cavidade oral e a coloração de Feulgen foi utilizada para análise dos micronúcleos. As frequências de micronúcleos em amostras da área peri-lesional que foram maiores que 0,0005 apresentaram uma sensibilidade de 63,6% (49,9 – 77,2) e uma especificidade de 43,2% (29,1 – 57,9). Os valores preditivo positivo e preditivo negativo foram respectivamente de 25% (12,7 – 37,2) e 80% (68,6 – 91,3). Esses resultados sugerem que o teste de micronúcleos é pouco sensível e específico. / The World Health Organization predicts a continuing worldwide increase in the number of patients with oral cancer. Moreover, late diagnosis is often a reality for oral cavity cancer patients, leading to a poor overall survival rate. Investigations of screening methods that could contribute to early detection of cancer are; therefore, highly desirable. The micronucleus assay is a non-evasive, rapid, simple, sensitive and cost-effective bio-marker of chromosome damage. Nevertheless, as far as we know, there are no reports of the sensitivity and specificity of micronucleus test frequency for detecting malignant or potentially malignant oral cavity lesions in the literature. In order to fill this gap, we carried out a cross-sectional study with 48 participants presenting oral cavity lesion, who were indicated to undergo surgery biopsy (our reference standard) at Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Samples of exfoliated cells were collected from two different sites in the oral cavity and Feulgen-Fast-Green staining was used to analyze the micronucleus. Eleven patients (22.9%) presented malignant or potentially malignant oral cavity lesions. In samples of perilesional area, micronucleus frequencies that were higher than 0.0005 had a sensitivity of 63.6% (49.9 - 77.2) and a specificity of 43.2% (29.1 - 57.9). The predictive positive (PPV) and negative (PNV) values were 25% (12.7 - 37.2) and 80% (68.6 - 91.3) respectively. These results suggest that the micronucleus test is low sensitivity and specificity.

As maiores dificuldades encontradas no teste de software estão relacionadas à definição dos dados de teste e a decisão de quando encerrar os testes. Uma das formas encontradas para minimizar tais dificuldades está centrada na utilização de critérios de cobertura. O principal objetivo dos critérios de cobertura é tornar o processo de testes mais rápido e preciso, fornecendo informações que determinem o que testar em um software para garantir sua qualidade. A modelagem é um dos elementos de maior importância nas atividades relacionadas ao desenvolvimento de software. Os modelos são construídos principalmente para melhor se entender o sistema, descrever a estrutura e comportamento desejados, visualizar a arquitetura e documentar as decisões tomadas durante o seu desenvolvimento. Atualmente, o sistema de notação mais utilizado para a modelagem de sistemas baseados nos conceitos de orientação a objetos é a Linguagem de Modelagem Unificada – UML [LAR 99]. Nesta notação, um sistema é descrito por um conjunto de diagramas que apresentam diferentes aspectos do sistema. As informações disponibilizadas por estes diagramas propiciam, já nas fases iniciais do desenvolvimento da aplicação (análise e projeto), o planejamento dos casos de teste e a definição de critérios de cobertura. Observa-se que nestas fases a maioria das informações necessárias para o teste já estão disponíveis, como por exemplo, a definição das classes com seus atributos, métodos e relacionamentos, a representação da interação existente entre objetos para a realização de um cenário e a descrição dos possíveis estados e transições de um objeto em resposta a eventos externos e internos. Este trabalho propõe um conjunto de diretrizes e critérios de cobertura de teste, tendo como base as especificações diagramáticas UML. As diretrizes estabelecem um conjunto de instruções para que o teste seja feito e os critérios de cobertura identificam os pontos principais e serem considerados durante o teste. Na definição das diretrizes e dos critérios foram avaliadas as informações disponibilizadas pelos diagramas de classes, seqüência, colaboração e estados.