SOARES, E. L. Regeneração "in vitro", estudos histológicos e transformação genética da momoneira (Ricinus communis). 2009. 77 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-07-02T19:17:49Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_elsoares.pdf: 3374159 bytes, checksum: efb8876cd60eca8158d94430cbc8e870 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-07-02T20:00:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_elsoares.pdf: 3374159 bytes, checksum: efb8876cd60eca8158d94430cbc8e870 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-02T20:00:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_elsoares.pdf: 3374159 bytes, checksum: efb8876cd60eca8158d94430cbc8e870 (MD5) Previous issue date: 2009 / Castor bean (Ricinus communis) is an oilseed crop with considerable economic value because of the composition of its oil seed. However, there are some constraints in your use for human and animal food because of the presence of toxic and allergenic proteins. This problem could be solved or reduced through genetic engineering. However, this crop is recalcitrant to tissue culture techniques, thus limiting the formation of transformed plants, and the protocols existing are not well established. The aim of this work was to test the applicability of the regeneration protocol which has been published for the Nordestina cultivar; to determine the regeneration way and to verify trough histochemical techniques, the transformed cells around the meristem. For this purpose, embryo axes were cultured on Murashig and Skoog (MS) medium supplemented with thiadiazuron (TDZ) (0,1; 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 e 10,0 mg.L-1). Between the TDZ concentrations tested, 0,1 mg.L-1 presented the better results after 56 days of incubation with 7,42 shoots per explant. Gibberellic acid (GA3) (0,1 mg.L-1) and indole-3-butyric acid (1,0 mg.L-1) were used for elongation and rooting, respectively, of the shoots obtained, however, in the concentrations used, any effect was evidenced. Histological analysis revealed that the shoots were formed by pre existing or neo formed meristems indicating direct organogenesis. Transformed cells were viewed at least in the second cellular layer. Analysis for stable gus expression showed gus expression 19 days after bombardment. In the histological analysis transformed cells in process of division were observed. In conclusion the Nordestina cultivar formed multiple shoots on medium supplemented with TDZ and this protocol of regeneration was compatible with a protocol for biolistic-mediated transformation. / A mamoneira (Ricinus communis) é uma oleaginosa com valor econômico considerável devido à composição do óleo de suas sementes. No entanto, há algumas limitações no seu uso para alimentação humana e animal devido à presença de proteínas tóxicas e alergênicas, as quais podem ser solucionadas ou minimizadas através da engenharia genética. Contudo, essa cultura é recalcitrante para técnicas de cultura de tecidos limitando a geração de plantas transformadas e os protocolos existentes não são bem estabelecidos. O objetivo desse trabalho foi avaliar a aplicabilidade de um protocolo de regeneração existente na literatura à cultivar Nordestina; determinar a via de regeneração e avaliar, através de técnicas histoquímicas, as células transformadas por biobalística em torno do meristema. Para este propósito, eixos embrionários foram cultivados em meio Murashig and Skoog (MS) suplementado com concentrações crescentes de tidiazuron (TDZ) (0,1; 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 e 10,0 mg.L-1). Observou-se que entre as concentrações de TDZ avaliadas a que apresentou a melhor resposta foi 0,1 mg.L-1, apresentando, em média, após 56 dias de incubação,7,42 partes aéreas por explante. Ácido giberélico (0,1 mg.L-1) e ácido-indol-3 butírico (1,0 mg.L-1) foram utilizados na tentativa de alongar e promover o enraizamento, respectivamente, das partes aéreas obtidas, contudo, nas concentrações utilizadas, não evidenciou-se nenhum efeito com estes reguladores de crescimento. Análises histológicas revelaram que as partes aéreas foram formadas de meristemas pré-existentes e neo-formados indicando organogênese direta. Observaram-se células transformadas pelo menos até a segunda camada celular. Análises da expressão estável do gene gus mostraram expressão do mesmo, 19 dias após o bombardeamento. Nas análises histológicas foram observadas células transformadas em divisão. Como conclusão a cultivar Nordestina foi capaz de formar múltiplas partes aéreas em meio contendo TDZ e este protocolo de regeneração foi compatível com um protocolo de transformação por biobalística.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A mamoneira (Ricinus communis) à uma oleaginosa com valor econÃmico considerÃvel devido à composiÃÃo do Ãleo de suas sementes. No entanto, hà algumas limitaÃÃes no seu uso para alimentaÃÃo humana e animal devido à presenÃa de proteÃnas tÃxicas e alergÃnicas, as quais podem ser solucionadas ou minimizadas atravÃs da engenharia genÃtica. Contudo, essa cultura à recalcitrante para tÃcnicas de cultura de tecidos limitando a geraÃÃo de plantas transformadas e os protocolos existentes nÃo sÃo bem estabelecidos. O objetivo desse trabalho foi avaliar a aplicabilidade de um protocolo de regeneraÃÃo existente na literatura à cultivar Nordestina; determinar a via de regeneraÃÃo e avaliar, atravÃs de tÃcnicas histoquÃmicas, as cÃlulas transformadas por biobalÃstica em torno do meristema. Para este propÃsito, eixos embrionÃrios foram cultivados em meio Murashig and Skoog (MS) suplementado com concentraÃÃes crescentes de tidiazuron (TDZ) (0,1; 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 e 10,0 mg.L-1). Observou-se que entre as concentraÃÃes de TDZ avaliadas a que apresentou a melhor resposta foi 0,1 mg.L-1, apresentando, em mÃdia, apÃs 56 dias de incubaÃÃo,7,42 partes aÃreas por explante. Ãcido giberÃlico (0,1 mg.L-1) e Ãcido-indol-3 butÃrico (1,0 mg.L-1) foram utilizados na tentativa de alongar e promover o enraizamento, respectivamente, das partes aÃreas obtidas, contudo, nas concentraÃÃes utilizadas, nÃo evidenciou-se nenhum efeito com estes reguladores de crescimento. AnÃlises histolÃgicas revelaram que as partes aÃreas foram formadas de meristemas prÃ-existentes e neo-formados indicando organogÃnese direta. Observaram-se cÃlulas transformadas pelo menos atà a segunda camada celular. AnÃlises da expressÃo estÃvel do gene gus mostraram expressÃo do mesmo, 19 dias apÃs o bombardeamento. Nas anÃlises histolÃgicas foram observadas cÃlulas transformadas em divisÃo. Como conclusÃo a cultivar Nordestina foi capaz de formar mÃltiplas partes aÃreas em meio contendo TDZ e este protocolo de regeneraÃÃo foi compatÃvel com um protocolo de transformaÃÃo por biobalÃstica / Castor bean (Ricinus communis) is an oilseed crop with considerable economic value because of the composition of its oil seed. However, there are some constraints in your use for human and animal food because of the presence of toxic and allergenic proteins. This problem could be solved or reduced through genetic engineering. However, this crop is recalcitrant to tissue culture techniques, thus limiting the formation of transformed plants, and the protocols existing are not well established. The aim of this work was to test the applicability of the regeneration protocol which has been published for the Nordestina cultivar; to determine the regeneration way and to verify trough histochemical techniques, the transformed cells around the meristem. For this purpose, embryo axes were cultured on Murashig and Skoog (MS) medium supplemented with thiadiazuron (TDZ) (0,1; 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 e 10,0 mg.L-1). Between the TDZ concentrations tested, 0,1 mg.L-1 presented the better results after 56 days of incubation with 7,42 shoots per explant. Gibberellic acid (GA3) (0,1 mg.L-1) and indole-3-butyric acid (1,0 mg.L-1) were used for elongation and rooting, respectively, of the shoots obtained, however, in the concentrations used, any effect was evidenced. Histological analysis revealed that the shoots were formed by pre existing or neo formed meristems indicating direct organogenesis. Transformed cells were viewed at least in the second cellular layer. Analysis for stable gus expression showed gus expression 19 days after bombardment. In the histological analysis transformed cells in process of division were observed. In conclusion the Nordestina cultivar formed multiple shoots on medium supplemented with TDZ and this protocol of regeneration was compatible with a protocol for biolistic-mediated transformation

Memoria para optar al título profesional de Ingeniera Agrónoma. Mención Fruticultura / Con el objetivo de evaluar cómo afectan distintas técnicas de aplicación del regulador de crecimiento Tidiazurón (TDZ) sobre el crecimiento de bayas, se realizó un ensayo en un parronal de la variedad Thompson Seedless, ubicado en la localidad de La Arena, Región de Atacama. La aplicación se efectuó en bayas de 6 mm y los tratamientos consistieron en 1,67 mg•L-1 de TDZ aplicado mediante atomizador hidroneumático; 1,67 mg•L-1 de TDZ aplicado por bomba de espalda; 1,67 mg•L-1 de TDZ aplicado por inmersión; 0,84 mg•L-1 de TDZ aplicado por inmersión; y un tratamiento sin aplicación de TDZ (control). Al momento de la cosecha, definida por un contenido de sólidos solubles de 16,5°Brix, se evaluó el tamaño y peso de bayas, peso de racimo, color de racimo, desgrane de bayas, sólidos solubles y calidad de raquis. No hubo diferencias en el peso, diámetro ecuatorial y polar de bayas en cuanto a las formas de aplicación. Las bayas tratadas con TDZ con la concentración completa presentaron mayor peso y diámetro polar que el control sin aplicación. En el diámetro ecuatorial, la inmersión fue el único tratamiento que mostró un aumento respecto al control. La aplicación mediante inmersión con la mitad de la concentración no fue suficiente y presentó el mismo tamaño que los racimos no aplicados. El TDZ redujo los racimos color ámbar y aumentó los de color verde. Además, generó un atraso en la fecha de cosecha como también una disminución de los sólidos solubles. De acuerdo a este ensayo, las formas de aplicación de TDZ no determinan diferencias en el tamaño y peso de baya. / In order to assess how different Thidiazuron (TDZ) growth regulator application techniques affect berry growth, a trial was carried out in a cv. Thompson Seedless vineyard, located in La Arena, Atacama Region, Chile. The application was done at 6 mm berry diameter and treatments consisted in 1,67 ppm of TDZ applied atomizer sprayer; 1,67 ppm of TDZ applied by manual sprayer; 1,67 ppm of TDZ applied by immersion; 0,84 ppm of TDZ applied by immersion; and a treatment without application of TDZ (control). At harvest, determined by cluster reaching 16° Brix soluble solids berry size and weight were evaluated. Other parameters were also assessed like cluster weight, color, berry drop and soluble solids, besides rachis quality. There were no differences in berry size regarding method of application. The treated berries showed more weight and polar diameter than those of control treatment without application. In relation at equatorial diameter, immersion was the only treatment showing a significant difference with control. The immersion application with half concentration was not enough and showed the same size than control clusters no application. TDZ reduced number of amber color clusters, and produced a delay harvest date on additionally soluble solids decrease was observed. Berry weight increased with TDZ application, confirming that applications were effective. According to this trial, the application method do not determine differences on berry size.