Made available in DSpace on 2014-06-12T15:03:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3025_1.pdf: 1641923 bytes, checksum: eebfd9fe41f05ee2cb2a6c66f3c18bd4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Trichosporon são leveduras pertencentes ao filo Basidiomycota, algumas espécies são destacadas na atividade proteolítica, xilanolítica dentre outras enzimas. Os objetivos deste estudo foram verificar a viabilidade, autenticar a taxonomia, caracterizar quanto à capacidade queratinolítica e/ou queratinofílica em meio sólido e cultivo submerso, selecionar isolados em meio sólido e em fermentação por cultura submersa para a produção de xilanases e otimizar as condições de produção de xilanases em culturas de Trichosporon preservados sob óleo mineral na Micoteca URM. Foram realizadas a reativação e autenticação das culturas através das características morfofisiológicas. Para caracterização queratinolítica e/ou queratinofílica e xilanolítica foram utilizados como substratos penas de aves e xilana em meio sólido e no cultivo submerso foram utilizados como fontes de carbono penas de aves e xilose respectivamente. Para determinação das melhores condições de produção de xilanases foi realizado planejamento fatorial completo (24). Das 22 amostras mantidas na Micoteca URM, 91% permaneceram viáveis e foram autenticadas confirmando a espécie depositada. Os vinte isolados viáveis foram capazes de colonizar as penas, apresentando atividade queratinofílica. Em meio sólido, todas as culturas apresentaram crescimento, sem presença de halo de degradação, contudo em cultivo submerso, todas as culturas apresentaram atividade queratinolítica, sendo T. aquatile URM4440 com 2,65 U/mL o melhor produtor que apresentou atividade ótima em pH 8,6 a 40°C. Na detecção da atividade xilanolítica, 12 culturas apresentaram halo de degradação, sendo selecionadas para teste em cultivo submerso. Em meio líquido, o isolado T. cutaneum URM4789 com 24,25 U/mL foi o melhor produtor, o qual apresentou atividade ótima em pH 6,0 a 60°C, sendo selecionado para otimização das condições de produção de xilanases. O melhor resultado das condições de produção da atividade xilanolítica foi obtido no ensaio 13, nas seguintes condições: tempo de 96 horas; concentração de xilose 1,5%; ausência de extrato de levedura; pH 7,0 e temperatura 27°C, nessas condições 65,15 U/mL de atividade enzimática foi obtida. As variáveis, concentração de xilose, temperatura e o pH mostraram efeito significativo sobre a produção de xilanases. Dentre as espécies avaliadas, T. aquatile URM4440 e T. cutaneum URM4789 apresentaram os melhores resultados quanto às atividades queratinolíticas e xilanolíticas respectivamente

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-05-11T14:03:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Final.pdf: 3056948 bytes, checksum: c1f1bdb2193095261e3561f1c0508bd9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-11T14:03:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Final.pdf: 3056948 bytes, checksum: c1f1bdb2193095261e3561f1c0508bd9 (MD5) Previous issue date: 2015-02-20 / CNPq / Piedra branca é uma infecção de etiologia fúngica caracterizada pela formação de nódulos restritos a porção extrafolicular dos pelos e cabelos, sendo ocasionada por leveduras do gênero Trichosporon. O diagnóstico é clínico e laboratorial micológico, sendo concluído com a identificação precisa do agente etiológico. Esta pesquisa teve como objetivo elaborar um modelo de infecção in vitro da piedra branca, analisar os aspectos morfológicos e ultraestruturais dos nódulos e seus agentes, e autenticar taxonomicamente os isolados por meio de uma abordagem de identificação polifásica. A infecção dos cabelos foi induzida utilizando 18 isolados do gênero Trichosporon, mantidos na Coleção de Culturas Micoteca URM. Para confirmação taxonômica dos isolados, foi adotada métodos empregados na taxonomia clássica, Espectroscopia de Massa (MALDI-TOF MS) e sequenciamento das regiões ITS (ITS1–5.8s-ITS2), IGS1 (Intergenic spacer) e domínios D1/D2 do rDNA. Foi verificado que 15 (83,33%) dos isolados de levedura foram identificados por meio da Espectrometria de Massa MALDI-TOF MS. Os métodos moleculares foram considerados os mais precisos, possibilitando a identificação dos isolados de levedura como: T. asahii (8), T. faecale (3), T. montevideense (5), T. mycotoxinivorans (1) e Hyphopichia burtonii (1). Os nódulos típicos foram formados por 12 isolados, seis formaram nódulo atípico (Quatro de T. asahii e dois de T. montevideense) e dois não formaram nódulo (um de T. montevideense e um de T. faecale). Os constituintes químicos detectados nos nódulos foram carbono, oxigênio, sódio, cálcio, manganês e magnésio. A consistência friável dos nódulos está relacionada com as baixas concentrações de cálcio e enxofre, conferindo a facilidade de rompimento do nódulo. Neste modelo, foi verificado que temperaturas elevadas e umidade excessiva não estão relacionadas com o desenvolvimento desta tricopatia. / White piedra is a fungal infection caused by Trichosporon species. The clinical condition of this mycosis is the production of white nodules adhered to the hair shaft. The diagnosis take in account the clinical feature and mycological laboratory results, which is finalized with the precise etiologic agent identification. This research aimed to develop an in vitro infection model of white piedra, analyzing the morphological and ultrastructural aspects of nodules and aetiological agents, and to identify the isolates by a polyphase approach. The infection of the hair was induced using 18 isolates of the genus Trichosporon, from the Culture Collection Micoteca URM. To taxonomic confirmation of the Trichosporon isolates, were adopted methods used in the classical taxonomy, Mass Spectroscopy (MALDI-TOF MS) and sequencing of the ITS (ITS1-5.8s-ITS2), IGS1 (Intergenic spacer) and D1/D2 domains of rDNA regions. A total of 15 (83.33%) yeast isolates were identified by mass spectrometry MALDI-TOF MS. Molecular tols were considered more accurate, allowing the identification of all yeast isolates as: T. asahii (8), T. faecale (3), T. montevideense (5), T. mycotoxinivorans (1) and Hyphopichia burtonii (1). Typical nodules were formed by 12 isolates, 6 isolates formed atypical nodules (T. asahii (4) and T. montevideense (2)) and 2 isolates did not formed nodules (T. montevideense (1) and T. faecale (1)). The chemical constituents detected in the nodules were carbon, oxygen, sodium, calcium, manganese and magnesium. The softh consistency of the nodules is associated with the low concentrations of calcium and sulfur, that providing ease disruption of the nodule. In this in vitro infection model, it was observed that the temperatures and humidity were not related to the development of this tricopatia.