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Efeito do peróxinitrito na atividade das oxidoredutases vasculares

Batschauer, Anna Paula de Borba January 2001 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-19T03:32:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-26T00:07:31Z : No. of bitstreams: 1 182935.pdf: 5542999 bytes, checksum: 2d570361b04e7f6623421d367aed94e0 (MD5) / O sistema vascular encontra-se constituído por diversas enzimas oxidoredutases dependentes de NAD(P)H, que em situações fisiopatológicas podem gerar o ânion superóxido, um radical livre altamente tóxico aos sistemas biológicos. Este ânion superóxido no sistema vascular apresenta uma alta afinidade pelo óxido nítrico , um mediador da vasodilatação dependente do endotélio, gerado na parede vascular. O produto desta reação é o peroxinitrito, uma espécie reativa, com um grande potencial oxidativo. O presente trabalho avaliou a atividade das oxidoredutases dependentes de NAD(P)H, em artérias ilíacas e carótidas de coelhos, na presença de peroxinitrito. Para confirmar a viabilidade do peroxinitrito foram realizados controles com os subprodutos do peroxinitrito, como nitrato, nitrito e peroxinitrito decaído, nas mesmas concentrações de 0,3 mM e 0,1 mM, não foram observadas diferenças estatísticas entre estes produtos Foi observado um comportamento inibidor no sinal quimiluminescente vinculado a presença de superóxido, determinado por lucigenina. Na presença de NADH não ocorreu inibição estatisticamente significativa do sinal quimiluminescente pelo peroxinitrito nas concentrações estudadas (0,1 mM e 0,3 mM) e foram necessárias concentrações superiores a 0,1 mM de peroxinitrito para inibição efetiva da atividade da oxidoredutase vascular NADPH dependente, indicando que a enzima oxidoredutase vascular seja dependente de NADPH.
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Remodelamento estrutural do tecido parabronquial de pintinhos em resposta à hipóxia durante o desenvolvimento fetal /

Silva, Lara do Amaral. January 2016 (has links)
Orientador: Kênia Cardoso Bícego / Banca: Wilfried Klein / Banca: Glauber dos Santos Ferreira da Silva / Resumo: O oxigênio é essencial para o desenvolvimento e a funcionalidade celular nos organismos aeróbicos. A exposição de embriões à hipóxia pode alterar a trajetória de desenvolvimento geneticamente estabelecida e gerar alterações morfofisiológicas em diversos órgãos e sistemas. Em aves precoces, a hipóxia durante a incubação é conhecida por alterar tamanho dos órgãos, taxa metabólica e ventilação em pintinhos recém-eclodidos. Nestes animais o desenvolvimento das estruturas parabrônquiais envolvidas em trocas gasosas e condução de ar, ocorre principalmente durante a segunda metade da incubação. Baseados nos fatos expostos, nós hipotetizamos que a hipóxia durante esta fase de desenvolvimento pode induzir um remodelamento nestas estruturas, favorecendo as trocas gasosas na vida pós-natal. Para testar esta hipótese, os embriões foram expostos à normóxia durante toda a incubação, ou à 15% O2 (dia 12 ao 18 de incubação) e as estruturas parabrônquiais, incluindo capilares aéreos, capilares sanguíneos, infundíbulo, átrio, lúmen parabronquial, vasos sanguíneos maiores que capilares, e tecido interparabronquial, foram analisados através de método estereológico em pintinhos com 1 e 10 dias de idade. A hipóxia aumentou os volumes relativos das estruturas diretamente relacionadas com trocas gasosas, como capilares aéreos e sanguíneos, enquanto não afetou o volume dos pulmões, e o volume relativo de infundíbulo, vasos sanguíneos maiores que capilares e tecido interparabronquial em pintinhos de 1 e 10 dias. A menor concentração de oxigênio, diminuiu o volume relativo dos átrios em ambas idades e o lúmen parabronquial nos pintinhos mais velhos. Concluímos que a hipóxia durante a fase embrionária de desenvolvimento parabronquial pode trazer um remodelamento morfológico, caracterizado por aumento de estruturas responsáveis diretamente por trocas gasosas... / Abstract: Oxygen is essential for cell development and function in aerobic organisms. Exposure of embryos to hypoxia can change the genetically estabilished developmental trajectory and generate morphological and physiological changes of several organs and systems. In precocious birds, hypoxia during incubation is known to change size of organs, metabolic rate and ventilation in hatchlings. In these animals, embryonic development of the parabronchial structures, involved in gas exchange and conduction, occurs mainly during the second half of incubation time. Based on the above facts, we can hypothesize that hypoxia during this phase of development can induce a remodeling of such structures, favoring gas exchange, later in post-hatch life. To test this hypothesis, embryos were exposed to normoxia for the entire incubation or to 15% O2 (from day 12 to 18 of incubation) and their parabronchial structures, including air capillaries, blood capillaries, infundibula, atria, parabronchial lumen, blood vessels larger than capillaries and interparabronchial tissue, were analyzed by stereological method in 1 and 10-day old chicks. Hypoxia increased the relative volume of structures directly involved in gas exchange such as air and blood capillaries, while did not change total lung volume and relative volumes of infundibula, blood vessels larger than capillaries and interparabronchial tissue of 1 and 10 days-old chicks. The lower concentration of oxygen decreased the relative volume of atria in both groups of chicks, and parabronchial lumen in the older ones. It can be concluded that hypoxia during the embryonic phase of parabronchial development can lead to a morphological remodeling characterized by increase of structures responsible directly for gas exchange at the expense of regions that participate in the conduction of air in chicks up to 10 days after hatch / Mestre
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Estudo comparativo de ultrassonografia modo-B, Doppler e histograma em escala de cinza na avaliação das artérias carótidas comuns em equinos e muares

Fogaça, Jéssica Leite January 2018 (has links)
Orientador: Maria Vasconcelos Machado Machado / Resumo: Os estudos com a ultrassonografia convencional (modo-B), Doppler e histograma em escala de cinza (HEC) na avaliação das artérias carótidas comuns de equinos e muares são considerados escassos. Esse trabalho comparou as variáveis de ultrassonografia modo-B, Doppler e HEC para avaliação das artérias carótidas em 11 fêmeas equina e 11 muares, além de analisar a diferença entre os gêneros de muar. As variáveis de interesse foram correlacionadas com massa corpórea, idade e circunferências dos pescoços dos animais. Essas variáveis foram avaliados em três regiões diferentes denominadas de cranial (próximo da cabeça), médio e caudal (base do pescoço). O diâmetro e EIM não possuem diferença significativa entre fêmeas equina e muares. Em relação as variáveis do Doppler, o IR, IP e VS, tanto para o lado direito e esquerdo caudal, possuem diferença, sendo que as fêmeas equina obtiveram maiores valores. O HEC as fêmeas equina e muares apresentaram paredes heterogêneas, sendo que as fêmeas equina tiveram valores maiores. No que se refere à ecogenicidade, os muares apresentaram um padrão superior ao das fêmeas equina. A idade dos muares possuíram correlações positivas com a massa corpórea, diâmetros e com as circunferências dos pescoços. Já, as fêmeas equina, apresentaram correlação positiva com parede longitudinal e correlações negativas com massa corpórea e base do pescoço. Em relação a massa corpórea, os muares possuíram correlações positivas com idade e com os diâmetros, já, às fêmeas e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre
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Aspectos morfofuncionais da mioarquitetura cardíaca e angiologia do ventrículo de Arapaima gigas (Osteoglossiformes, Arapaimidae) associados a alteração do modo de respiração /

Gardinal, Mario Vitor Buzete January 2018 (has links)
Orientador: Carlos Alberto Vicentini / Banca: Luis Alberto Domingo Francia Farje / Banca: Maria Terezinha Siqueira Bombonato / Resumo: O Arapaima gigas é uma espécie nativa da bacia amazônica que apresenta transição no modo de respiração. Em estágios iniciais do desenvolvimento, esta espécie possui respiração exclusivamente aquática, alterando para respiração aérea com aproximadamente 9 dias após eclosão dos ovos. Essa transição está associada a modificações morfológicas nas brânquias que se tornam cada vez menos eficientes para realizar trocas gasosas, tornando esta espécie progressivamente mais dependente do oxigênio atmosférico. Entretanto, não se sabe se esta característica pode afetar a morfologia cardíaca. Em relação ao coração de teleósteos, o ventrículo é uma câmara que exibe grande variabilidade morfológica entre as espécies e pode apresentar características específicas em espécies adaptadas a condições ambientais extremas. Diante do exposto, o objetivo do presente estudo foi descrever a morfologia cardíaca em A. gigas com ênfase na mioarquitetura ventricular e a distribuição de vasos coronários durante etapas de seu desenvolvimento relacionadas a dependência da respiração aérea. Assim, foram utilizados espécimes distribuídos em três grupos de acordo com o peso dos animais e dependência da respiração aérea (grupo 1 - baixa dependência; grupo 2 - transição; grupo 3 - alta dependência). Os corações foram coletados e submetidos a análise anatômica, ultraestrutural e histológica. O ventrículo de A. gigas apresentou alterações anatômicas entre os grupos, exibindo inicialmente aspecto sacular com miocárdi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Arapaima gigas is a native species of the Amazon basin that presents a transition in the breathing mode. In early stages of development, this species has exclusively water breathing, changing to air breathing with approximately 9 days after egg hatching. This transition is associated with morphological changes in the gills that become less and less efficient to perform gas exchange, making this species progressively more dependent on atmospheric oxygen. However, it is not known whether this feature can affect cardiac morphology. In relation to the teleosts heart, the ventricle is a chamber that exhibits great morphological variability among the species and may present specific characteristics in species adapted to extreme environmental conditions. Thus, the objective of the present study was to describe the cardiac morphology in A. gigas with emphasis on ventricular myoarchitecture and distribution of coronary vessels in stages of its development related to the dependence of air breathing. To perform the study, were used A. gigas specimens distributed in three groups according to the weight of the animals and dependence on air breathing (group 1 - low dependence; group 2 - transition; group 3 - high dependence). The hearts were collected and submitted to anatomical, ultrastructural and histological analyzes. The A. gigas ventricle presented anatomical changes among the groups, initially showing a saccular shape with fully trabeculated myocardium (group 1) and later a defi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Produção e degradação in vitro de vasos sanguíneos artificiais à base de celulose bacteriana

Oliveira, Vanessa Almeida de January 2011 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2012-10-25T18:17:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 303900.pdf: 810905 bytes, checksum: 598ce76086962abe1b2818d3bad1e3d9 (MD5) / O alto índice de mortes por doenças coronarianas leva a engenharia de tecidos a voltar-se para o desenvolvimento de métodos paliativos a essas patologias como, por exemplo, a construção de vasos sanguíneos artificiais. Esses vasos precisam atender aos requisitos do organismo assim como ter como base um material biocompatível. Nessa linha alguns grupos de pesquisa já desenvolveram vasos artificiais à base de celulose bacteriana (CB), um biopolímero que tem sido largamente estudado para aplicações biomédicas como na construção de matrizes 3D para suporte ao crescimento celular. Esses vasos já estão caracterizados, porém nada se estudou sobre a degradação destes no organismo vivo. Para tanto nesse trabalho foi desenvolvido um aparato para a produção de vasos artificiais à base de CB, assim como a produção, caracterização e estudo da degradabilidade in vitro desses vasos em ensaio com fluidos que simularam condições fisiológicas. Segmentos de vasos de CB foram imersos em PBS e salina a 37,8ºC seguindo um protocolo de 20 semanas com retiradas mensais para análises estruturais em microscopia eletrônica de varredura (MEV) dos vasos pós-ensaio e verificação de glicose nos líquidos de imersão por espectrofotometria no UV-VIS. Como resultados não houve mudanças estruturais aparentes e características de degradação polimérica nas análises em MEV, tão menos presença de glicose nos líquidos de imersão. Os resultados caracterizaram que não houve degradação nas amostras durante o período de 20 semanas. / The high death rate from coronary heart disease leads to tissue engineering to turn the development of palliative methods to these pathologies such as the construction of artificial blood vessels. These vessels have to fulfill the requirements of the body and be based on a biocompatible material. In this line some research groups have developed artificial blood vessels based on bacterial cellulose (BC), a biopolymer that has been widely studied for biomedical applications as the construction of 3D matrices to support cell growth. These vessels are characterized however nothing has been studied on the degradation of these in the living organism. To this end in this work was developed an apparatus for the production of artificial vessels based on BC, as well as production, characterization and in vitro degradability of these vessels in fluids that simulated physiological conditions. BC vessel segments were immersed in PBS and saline at 37.8 ° C following a protocol of 20 weeks with monthly withdrawals for structural analysis in scanning electron microscopy in the vessels after testing and evaluating of glucose in the liquid immersion by spectrophotometry on UV-VIS. As results there were no apparent structural changes and characteristics of polymeric degradation in SEM analysis, neither the presence of glucose in the liquids of immersion. The results characterized that there was no degradation in the samples during the 20 weeks.
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Origens da vascularização da polpa dentária

Ferreira, Cimara Fortes January 2006 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T06:52:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 233225.pdf: 998248 bytes, checksum: 4fc9f044bae849afbb9cbad9be988d1f (MD5) / Na tentativa de estudar a formação de vasos sanguíneos durante a formação dentária, examinou-se a expressão de marcadores endoteliais. Objetivando rastrear as origens dos vasos sanguíneos da polpa dentária, modelos de animais transgênicos foram utilizados. Mandíbulas primordiais derivadas de embriões de camundongos selvagens e Green fluorescent protein, respectivamente, de 10.5 e 13.5 dias embrionários, foram transplantadas em cápsulas renais de camundongos adultos Rosa26. Duas semanas após, análises histológicas, de imunofluorescência e de hibridização radioativa in situ, foram conduzidas nos dentes desenvolvidos. O transplante de mandíbulas primordiais de 10.5 dias embrionários resultou na formação de vascularização químérica, derivada do hospedeiro e do doador. O transplante de mandíbulas primordiais de 13.5 dias embrionários resultou em formação de dentes com vasculatura derivada apenas do doador. Apesar de, adicionalmente, existirem células não-identificadas presentes dentro da polpa dental em proximidade com os vasos sanguíneos e com a camada de odontoblastos. Concluímos que as células derivadas da circulação sanguínea podem contribuir para a angiogênese durante a formação dentária inicial, um fenômeno no qual ocorre em órgãos derivados da somatopleura. Adicionalmente, células circulantes podem contribuir para a formação de outros tipos celulares dentro da polpa dental que ainda não foram identificados.
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Adaptação transcultural e validação clínica do Difficult Intravenous Access Score - Diva Score - para uso no Brasil

Müller, Paula Christina de Souza January 2015 (has links)
Orientadora: Profª Drª Marcia Helena de Souza Freire / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Enfermagem. Defesa: Curitiba, 14/12/2015 / Inclui referências : f. 80-89 / Área de concentração: Prática profissional de enfermagem / Resumo: A Punção Intravenosa Periférica é considerada um dos procedimentos mais desgastante para crianças hospitalizadas, familiares e equipe de saúde. Para minimizar possíveis traumas, o uso de score de predição ao insucesso à primeira tentativa, no estabelecimento de PIP, já é uma realidade internacional. A tradução informal de instrumentos, desenvolvidos em nacionalidades diferentes compromete a qualidade dos resultados esperados com seu emprego. Portanto, procedeu-se a adaptação transcultural e validação clínica de instrumento aplicável à pediatria, o Difficult Intravenous Access score - DIVA score. Os seguintes passos foram implementados: 1. Tradução inicial; 2. Síntese das traduções; 3. Retro tradução; 4. Avaliação da documentação por comitê de juízes especialistas; 5. Pré-teste; 6. Apresentação da documentação aos juízes especialistas e autor do instrumento original. Com o emprego da metodologia proposta, obteve-se instrumento adaptado transculturalmente, que foi validado para uso confiável no Brasil, como recurso adjuvante à punção intravenosa de crianças. Os principais atributos que cercam a adaptação transcultural e validação de instrumento de saúde internacional, é sua aplicabilidade coerente, para que possam surtir efeitos positivos à nossa realidade. Destarte, tem-se um instrumento útil para diagnóstico do insucesso na primeira tentativa de punção e de risco de trauma vascular, que poderá, apontar pela adoção de recursos tecnológicos adjuvantes à venopunção, disponível para profissionais de saúde, sobretudo para a enfermagem, no território brasileiro. Descritores: Pesquisa Metodológica em Enfermagem; Estudos de Validação; Enfermagem Pediátrica; Hospitalização; Vasos Sanguíneos. / Abstract: The Peripheral Venipuncture is considered one of the most tiring processes for hospitalized children, family members and health team. In order to minimize possible traumas, the use of a failure prediction score to the first attempt, at establishing the Peripheral Venipuncture, is already an international reality. The informal translation of instruments, developed in different nationalities, compromises the quality of the expected results with its employment. Therefore, a transcultural adaptation and clinical validation of instrument applied to pediatrics, the Difficult Intravenous Access score – DIVA score. The following steps were implemented: 1. Initial translation; 2. Translations synthesis; 3. Back-translation; 4. Documentation evaluation by specialized judges committee. 5. Pretest. 6. Presentation of the documentation to the specialized judges and author of the original instrument. By employing the proposed methodology, it was obtained a transculturally-translated instrument that was validated for reliable use in Brazil as an adjuvant resource to the peripheral venipuncture of children. The main attribute that concerns the transcultural adaptation and the international health instrument validation is its consistent application so that they may result in positive effects to our reality. This way, we have an useful instrument for the diagnosis of failure on the first attempt of puncture and of vascular trauma risk, that may point to the adoption of adjuvant technological resources to the venipuncture, available to health professionals, above all to nursing, in Brazilian territory. Keywords: Nursing Methodology Research; Validation Studies; Pediatric Nursing; Hospitalization; Blood Vessels.
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Efeitos do LRP6 e Frizzled6 na diferenciação endotelial de DPSC /

Silva, Gleyce Oliveira January 2015 (has links)
Orientador: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Banca: Mabel Mariela Rodríguez Cordeiro / Banca: Bruno das Neves Cavalcanti / Banca: Renata de Azevedo Canevari / Banca: Márcia Carneiro Valera Garakis / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a função da via de sinalização Wnt/β- catenina através dos receptores LRP6 e Frizzled6 na diferenciação de células-tronco de polpa dental de dentes permanentes (DPSC) em células endoteliais. DPSC foram transduzidas com marcadores eGFP e vetores lentivirais shRNA (LRP6, Frizzled6 ou vetor vazio - controle) para os experimentos. Os testes in vitro avaliaram a expressão de GSK3-β e β- catenina por western blot na presença de rhWnt1 e rhVEGF165 e de VEGF e CXCL-8 (IL-8) por ELISA. A expressão de marcadores endoteliais (western blot e PCR) e formação de túbulos capilares foram analisados após a diferenciação endotelial das DPSCs. In vivo, fatias dentárias/matrizes condutivas semeadas com DPSCs-shRNA foram implantadas em subcutâneo de dorso de camundongos imunodeprimidos por 28 dias e o número de vasos sanguíneos foi determinado por imunohistoquímica para eGFP e coloração por HE. β-catenina ativa foi mais expressa em shRNA-LRP6 e shRNA-Frizzled6 que nas células controle, e sua expressão aumentou com a suplementação com rhVEGF165 e rhWnt1. A expressão de GSK3-β fosforilado foi menor, porém também aumenta ou permanece estável com rhVEGF165 ou rhWnt1. Quanto à expressão de VEGF, em shRNA-Frizzled6 foi maior que nas células controle e em shRNA-LRP6 (p<0,05), enquanto que a expressão de IL8 foi menor em shRNA-LRP6, diferindo estatisticamente das outras células. A expressão dos marcadores endoteliais CD31 e VEGFR2 diminuiu nas células shRNA-LRP6, enquanto que em shRNAFrizzled6 a expressão de VEGFR2 foi aumentada. A formação de túbulos capilares de shRNA-Frizzled6 e shRNA-LRP6 foi menor quando comparado ao controle, porém shRNA-Frizzled6 obteve uma tendência de aumento na proliferação de capilares em 144h. In vivo, DPSC-shRNALRP6 apresentou menor número de capilares formados quando comparados com as outras duas... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the function of Wnt/β-catenin signaling through LRP-6 and Frizzled-6 receptors in the differentiation of dental pulp stem cells from permanent teeth (DPSC) into endothelial cells. DPSC were transduced with EGFP-tagged lentiviral shRNA vectors (LRP6, Frizzled6 or empty vector - control) for experiments. In vitro assay evaluated GSK3-β and β-catenin expression by western blot in rhWnt1 and rhVEGF165 presence, and VEGF and CXCL-8 (IL-8) expression by ELISA. Endothelial markers expression (western blot and PCR) and tube formation were analyzed after endothelial differentiation of DPSCs. In vivo, tooth slices/scaffolds seeded with transduced DPSCs were implanted subcutaneously in back of immunodefficient mice and blood vessels were counted per immunohistochemistry for eGFP and HE staining. Active β- catenin was more expressed in shRNA-LRP6 and shRNA-Frizzled6 than in control cells, and increased with rhVEGF165 and rhWnt1 supplementation. Phosphorylated GSK3-β expression was lower, however also increased or maintained with rhVEGF165 or rhWnt1. VEGF expression was higher in shRNA-Frizzled6 than in control and shRNA-LRP6 (p<0,05), IL8 expression was lower in shRNA-LRP6, with statistically difference of the others cells. Endothelial markers CD31 and VEGFR2 expression decreased in shRNA-LRP6, but VEGFR2 expression increased in shRNAFrizzled6. shRNA-Frizzled6 and shRNA-LRP6 tube formation was lower when compared to control, however shRNA-Frizzled6 had tendency to increase proliferation in 144h. In vivo, shRNA-LRP6 showed fewer blood vessels formed than other cells (p<0,05). Collectively, the results of this study suggest that Wnt/β-catenin signaling regulates endothelial differentiation of DPSC through LRP6 / Doutor
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Comportamento anatômico da artéria cerebral caudal no cão, sem raça definida (Canis familiaris - Linnaeus, 1758) /

Heinzen, Rosane Porto Seleme January 2000 (has links)
Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T23:10:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T17:06:39Z : No. of bitstreams: 1 153029.pdf: 33672043 bytes, checksum: db38900bb7de87c043bdb27122ebd81c (MD5) / Estudo do comportamento anatômico da artéria cerebral caudal em cães, injetados com a Solução de Schlesinger, que, sempre única, surgiu em todos os casos na face ventral do pedúnculo cerebral, rostralmente ao nervo oculomotor, diretamente das artérias comunicantes caudais. No segmento mesencefálico emitiu o ramo para substância perfurada caudal (86,70%), o ramo para a face ventral do pedúnculo cerebral (73,30%), o ramo coróide caudal (98,30%), o ramo para face lateral do pedúnculo cerebral (83,30%) e o ramo para corpo geniculado medial (76,70%). No segmento diencefálico surgiram o ramo piriforme (96,70%), o ramo suprasilvio (100%), o ramo ectomarginal (100%) e o ramo marginal (100%), cujos ramos terminais se anastomosaram com a artéria cerebral média, participando da irrigação da face medioventral do lobo piriforme e do giro parahipocampal, face ventral dos giros composito caudal, esplenial e occipital, e região caudal da face dorsolateral dos giros suprasilvio, ectomarginal , marginal e endomarginal. No segmento telencefálico originaram-se o ramo occipital caudal (100%), o ramo occipital médio (98,30%) e o ramo occipital rostral (96,70%), participando da vascularização do região caudal da face medial dos giros do cíngulo, esplenial e occipital, e da face dorsolateral dos giros endomarginal, marginal e ectomarginal.
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Efeitos do LRP6 e Frizzled6 na diferenciação endotelial de DPSC

Silva, Gleyce Oliveira [UNESP] 31 July 2015 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:34Z : No. of bitstreams: 1 000860768.pdf: 1686526 bytes, checksum: 979e2944f4a6b89a46fd9bb6b0302204 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar a função da via de sinalização Wnt/β- catenina através dos receptores LRP6 e Frizzled6 na diferenciação de células-tronco de polpa dental de dentes permanentes (DPSC) em células endoteliais. DPSC foram transduzidas com marcadores eGFP e vetores lentivirais shRNA (LRP6, Frizzled6 ou vetor vazio - controle) para os experimentos. Os testes in vitro avaliaram a expressão de GSK3-β e β- catenina por western blot na presença de rhWnt1 e rhVEGF165 e de VEGF e CXCL-8 (IL-8) por ELISA. A expressão de marcadores endoteliais (western blot e PCR) e formação de túbulos capilares foram analisados após a diferenciação endotelial das DPSCs. In vivo, fatias dentárias/matrizes condutivas semeadas com DPSCs-shRNA foram implantadas em subcutâneo de dorso de camundongos imunodeprimidos por 28 dias e o número de vasos sanguíneos foi determinado por imunohistoquímica para eGFP e coloração por HE. β-catenina ativa foi mais expressa em shRNA-LRP6 e shRNA-Frizzled6 que nas células controle, e sua expressão aumentou com a suplementação com rhVEGF165 e rhWnt1. A expressão de GSK3-β fosforilado foi menor, porém também aumenta ou permanece estável com rhVEGF165 ou rhWnt1. Quanto à expressão de VEGF, em shRNA-Frizzled6 foi maior que nas células controle e em shRNA-LRP6 (p<0,05), enquanto que a expressão de IL8 foi menor em shRNA-LRP6, diferindo estatisticamente das outras células. A expressão dos marcadores endoteliais CD31 e VEGFR2 diminuiu nas células shRNA-LRP6, enquanto que em shRNAFrizzled6 a expressão de VEGFR2 foi aumentada. A formação de túbulos capilares de shRNA-Frizzled6 e shRNA-LRP6 foi menor quando comparado ao controle, porém shRNA-Frizzled6 obteve uma tendência de aumento na proliferação de capilares em 144h. In vivo, DPSC-shRNALRP6 apresentou menor número de capilares formados quando comparados com as outras duas... / The aim of this study was to evaluate the function of Wnt/β-catenin signaling through LRP-6 and Frizzled-6 receptors in the differentiation of dental pulp stem cells from permanent teeth (DPSC) into endothelial cells. DPSC were transduced with EGFP-tagged lentiviral shRNA vectors (LRP6, Frizzled6 or empty vector - control) for experiments. In vitro assay evaluated GSK3-β and β-catenin expression by western blot in rhWnt1 and rhVEGF165 presence, and VEGF and CXCL-8 (IL-8) expression by ELISA. Endothelial markers expression (western blot and PCR) and tube formation were analyzed after endothelial differentiation of DPSCs. In vivo, tooth slices/scaffolds seeded with transduced DPSCs were implanted subcutaneously in back of immunodefficient mice and blood vessels were counted per immunohistochemistry for eGFP and HE staining. Active β- catenin was more expressed in shRNA-LRP6 and shRNA-Frizzled6 than in control cells, and increased with rhVEGF165 and rhWnt1 supplementation. Phosphorylated GSK3-β expression was lower, however also increased or maintained with rhVEGF165 or rhWnt1. VEGF expression was higher in shRNA-Frizzled6 than in control and shRNA-LRP6 (p<0,05), IL8 expression was lower in shRNA-LRP6, with statistically difference of the others cells. Endothelial markers CD31 and VEGFR2 expression decreased in shRNA-LRP6, but VEGFR2 expression increased in shRNAFrizzled6. shRNA-Frizzled6 and shRNA-LRP6 tube formation was lower when compared to control, however shRNA-Frizzled6 had tendency to increase proliferation in 144h. In vivo, shRNA-LRP6 showed fewer blood vessels formed than other cells (p<0,05). Collectively, the results of this study suggest that Wnt/β-catenin signaling regulates endothelial differentiation of DPSC through LRP6

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