Les cellules beta pancréatiques sécrètent l’insuline lors d’une augmentation post-prandiale du glucose dans le sang. Ce processus essentiel est contrôlé par des facteurs physiologiques, nutritionnels et pathologiques. D’autres sources d’énergie, comme les acides aminés (leucine et glutamine) ou les acides gras potentialisent la sécrétion d’insuline. Une sécrétion d’insuline insuffisante au besoin du corps déclanche le diabète. Le rôle que joue l’augmentation du calcium intracellulaire et les canaux K+/ATP dans la sécrétion d’insuline est bien connu. Bien que le mécanisme exact de la potentialisation de la sécrétion d’insuline par les lipides est inconnu, le cycle Glycérolipides/Acides gras (GL/FFA) et son segment lipolytique ont été reconnu comme un composant essentiel de la potentialisation lipidique de la sécrétion d’insuline. Le diacylglycérol, provenant de la lipolyse, a été proposé comme un signal lipidique important d’amplification. Cependant, l’hydrolyse des triglycérides et des diacylglycérides a été démontrée essentielle pour la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose, en suggérant un rôle du monoacylglycérol (MAG) dans ce processus. Dans cette étude, on démontre que la réduction de la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose, lors d’une inhibition de la lipolyse, est restaurée par l’addition de MAG. Dans les cellules beta pancréatiques, le niveau de MAG augmente en présence des concentrations élevées du glucose, et également lorsqu’on inhibe l’enzyme MAG hydrolase abhydrolase-6 (ABHD6) avec l’inhibiteur spécifique WWL70. L’analyse lipidomique a démontré qu’après la stimulation des cellules beta pancréatiques avec le glucose et aussi avec le WWL70, l’espèce la plus accumulée de MAG était le 1-stearoylglycérol (1-SG). L’addition de 1-SG, de 1-palmitoylglycérol (1-PG) ou de WWL70 augmente la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose, et cette augmentation est indépendante de la génération de acides gras à partir de MAG. Cela suggère que le MAG est un signal lipidique pour la potentialisation de la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose. De plus, la surexpression du gène d’ABHD6 dans les cellules INS832/13 cause une réduction de la sécrétion d’insuline, due probablement à la diminution des niveaux intracellulaire de MAG. Avec le but de comprendre le mécanisme moléculaire impliqué dans la potentialisation de la sécrétion d’insuline par le MAG, on a bloqué l’action du récepteur vanilloid-1 (TRPV1) liant le MAG par l’agent pharmacologiste, AMG9810. Le traitement des cellules beta pancréatique par AMG9810 entraîne une diminution de la potentialisation de la sécrétion de l’insuline induite par le MAG. Il est a noter que le MAG pourrait activer TRPV1 par une liaison physique dans la membrane cellulaire interne; ce qui entraînerai l’entrée du calcium dans la cellule, et ensuite la stimulation de l’exocytose des granules à insuline. En soutien de cette hypothèse, on a trouvé une diminution du calcium intracellulaire lorsqu’on traite au AMG9810 des cellules beta pancréatique de rat (provenant des îlots dispersés) stimulées au glucose et au WWL70. L’ensemble des résultats suggère que le MAG est un médiateur de la potentialisation lipidique de la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose. Vu que l’inhibition pharmacologique d’ABHD6 augmente la sécrétion d’insuline, on pourra conclure que cette enzyme représente une cible thérapeutique potentielle dans le développement des médicaments anti-diabétiques, visant une augmentation de la sécrétion d’insuline. / Insulin secretion by the pancreatic b-cell in response to post-prandial increase in blood glucose levels is an essential physiological process that is governed by cellular, nutritional and pathological factors. Other fuels including amino acids like leucine and glutamine and also fatty acids contribute to further augment insulin secretion. Failure to secrete adequate amount of insulin according to the changing demands of the body by b-cell is a key determinant of diabetes. The role played by the elevated Ca2+ influx and K+-ATP channels in insulin secretion is well known. Even though the precise mechanism of the lipid amplification of insulin secretion and the involved molecular signals are not clear, Glycerolipid/Free fatty acid (GL/FFA) cycle and its lipolytic segment have been recognized as essential components in the lipid amplification pathway of insulin secretion. Diacylglycerol produced by lipolysis was proposed as an important lipid amplification signal. However, hydrolysis of triglycerides and also of diacylglycerols is shown to be essential for glucose stimulated insulin secretion (GSIS), indicating a possible role for monoacylglycerol (MAG) in this process. In the present study we demonstrate that the obliterated GSIS due to lipolysis inhibition in b-cells can be restored by providing exogenous MAG. In the b-cells MAG levels increase significantly in the presence of high glucose concentration and specific inhibition of the major MAG hydrolase, abhydrolase-6 (ABHD6), in b-cells and islets with WWL70 leads to accumulation of MAG with concomitant increase in insulin secretion. Lipidomics analysis indicated that the major MAG species that is elevated by high glucose as well as WWL70 addition is 1-stearoylglycerol (1-SG). Exogenously added 1-SG and also 1-palmitoylglycerol (1-PG) strongly enhanced GSIS and this augmentation is not dependent on the generation of FFA by these MAGs. This indicates that MAG is a potential candidate for being the lipid signal for GSIS amplification. Further evidence for this was provided by the observation that overexpression of the MAG hydrolase ABHD6 in INS832/13 cells, resulted in decreased insulin secretion, probably owing to the lowered MAG level inside the b-cells. Pharmacological studies using AMG9810, a specific antagonist of transient receptor potential vanilloid-1 (TRPV1) receptor that binds MAG, revealed that a blockade of TRPV1 strongly attenuated the MAG-augmented insulin secretion. Since MAG is a potential activator of TRPV1, it is likely that MAG binds on the inner surface of the cell membrane to TRPV1, which in turn triggers rapid influx of Ca2+ thereby promoting insulin granule exocytosis. Thus, AMG9810 was found to lower Ca2+ influx into dispersed rat islet cells that was induced by high glucose and also WWL70. These results collectively suggest that MAG is the potential mediator of the lipid amplification of glucose-stimulated insulin secretion. Our results also indicate that pharmacological intervening at the ABHD6 hydrolysis step enhances insulin secretion; this enzyme protein can be a promising thrapeutic target for the development of anti-diabetic drugs that promote insulin secretion.

Les cellules beta pancréatiques sécrètent l’insuline lors d’une augmentation post-prandiale du glucose dans le sang. Ce processus essentiel est contrôlé par des facteurs physiologiques, nutritionnels et pathologiques. D’autres sources d’énergie, comme les acides aminés (leucine et glutamine) ou les acides gras potentialisent la sécrétion d’insuline. Une sécrétion d’insuline insuffisante au besoin du corps déclanche le diabète. Le rôle que joue l’augmentation du calcium intracellulaire et les canaux K+/ATP dans la sécrétion d’insuline est bien connu. Bien que le mécanisme exact de la potentialisation de la sécrétion d’insuline par les lipides est inconnu, le cycle Glycérolipides/Acides gras (GL/FFA) et son segment lipolytique ont été reconnu comme un composant essentiel de la potentialisation lipidique de la sécrétion d’insuline. Le diacylglycérol, provenant de la lipolyse, a été proposé comme un signal lipidique important d’amplification. Cependant, l’hydrolyse des triglycérides et des diacylglycérides a été démontrée essentielle pour la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose, en suggérant un rôle du monoacylglycérol (MAG) dans ce processus. Dans cette étude, on démontre que la réduction de la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose, lors d’une inhibition de la lipolyse, est restaurée par l’addition de MAG. Dans les cellules beta pancréatiques, le niveau de MAG augmente en présence des concentrations élevées du glucose, et également lorsqu’on inhibe l’enzyme MAG hydrolase abhydrolase-6 (ABHD6) avec l’inhibiteur spécifique WWL70. L’analyse lipidomique a démontré qu’après la stimulation des cellules beta pancréatiques avec le glucose et aussi avec le WWL70, l’espèce la plus accumulée de MAG était le 1-stearoylglycérol (1-SG). L’addition de 1-SG, de 1-palmitoylglycérol (1-PG) ou de WWL70 augmente la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose, et cette augmentation est indépendante de la génération de acides gras à partir de MAG. Cela suggère que le MAG est un signal lipidique pour la potentialisation de la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose. De plus, la surexpression du gène d’ABHD6 dans les cellules INS832/13 cause une réduction de la sécrétion d’insuline, due probablement à la diminution des niveaux intracellulaire de MAG. Avec le but de comprendre le mécanisme moléculaire impliqué dans la potentialisation de la sécrétion d’insuline par le MAG, on a bloqué l’action du récepteur vanilloid-1 (TRPV1) liant le MAG par l’agent pharmacologiste, AMG9810. Le traitement des cellules beta pancréatique par AMG9810 entraîne une diminution de la potentialisation de la sécrétion de l’insuline induite par le MAG. Il est a noter que le MAG pourrait activer TRPV1 par une liaison physique dans la membrane cellulaire interne; ce qui entraînerai l’entrée du calcium dans la cellule, et ensuite la stimulation de l’exocytose des granules à insuline. En soutien de cette hypothèse, on a trouvé une diminution du calcium intracellulaire lorsqu’on traite au AMG9810 des cellules beta pancréatique de rat (provenant des îlots dispersés) stimulées au glucose et au WWL70. L’ensemble des résultats suggère que le MAG est un médiateur de la potentialisation lipidique de la sécrétion d’insuline stimulée par le glucose. Vu que l’inhibition pharmacologique d’ABHD6 augmente la sécrétion d’insuline, on pourra conclure que cette enzyme représente une cible thérapeutique potentielle dans le développement des médicaments anti-diabétiques, visant une augmentation de la sécrétion d’insuline. / Insulin secretion by the pancreatic b-cell in response to post-prandial increase in blood glucose levels is an essential physiological process that is governed by cellular, nutritional and pathological factors. Other fuels including amino acids like leucine and glutamine and also fatty acids contribute to further augment insulin secretion. Failure to secrete adequate amount of insulin according to the changing demands of the body by b-cell is a key determinant of diabetes. The role played by the elevated Ca2+ influx and K+-ATP channels in insulin secretion is well known. Even though the precise mechanism of the lipid amplification of insulin secretion and the involved molecular signals are not clear, Glycerolipid/Free fatty acid (GL/FFA) cycle and its lipolytic segment have been recognized as essential components in the lipid amplification pathway of insulin secretion. Diacylglycerol produced by lipolysis was proposed as an important lipid amplification signal. However, hydrolysis of triglycerides and also of diacylglycerols is shown to be essential for glucose stimulated insulin secretion (GSIS), indicating a possible role for monoacylglycerol (MAG) in this process. In the present study we demonstrate that the obliterated GSIS due to lipolysis inhibition in b-cells can be restored by providing exogenous MAG. In the b-cells MAG levels increase significantly in the presence of high glucose concentration and specific inhibition of the major MAG hydrolase, abhydrolase-6 (ABHD6), in b-cells and islets with WWL70 leads to accumulation of MAG with concomitant increase in insulin secretion. Lipidomics analysis indicated that the major MAG species that is elevated by high glucose as well as WWL70 addition is 1-stearoylglycerol (1-SG). Exogenously added 1-SG and also 1-palmitoylglycerol (1-PG) strongly enhanced GSIS and this augmentation is not dependent on the generation of FFA by these MAGs. This indicates that MAG is a potential candidate for being the lipid signal for GSIS amplification. Further evidence for this was provided by the observation that overexpression of the MAG hydrolase ABHD6 in INS832/13 cells, resulted in decreased insulin secretion, probably owing to the lowered MAG level inside the b-cells. Pharmacological studies using AMG9810, a specific antagonist of transient receptor potential vanilloid-1 (TRPV1) receptor that binds MAG, revealed that a blockade of TRPV1 strongly attenuated the MAG-augmented insulin secretion. Since MAG is a potential activator of TRPV1, it is likely that MAG binds on the inner surface of the cell membrane to TRPV1, which in turn triggers rapid influx of Ca2+ thereby promoting insulin granule exocytosis. Thus, AMG9810 was found to lower Ca2+ influx into dispersed rat islet cells that was induced by high glucose and also WWL70. These results collectively suggest that MAG is the potential mediator of the lipid amplification of glucose-stimulated insulin secretion. Our results also indicate that pharmacological intervening at the ABHD6 hydrolysis step enhances insulin secretion; this enzyme protein can be a promising thrapeutic target for the development of anti-diabetic drugs that promote insulin secretion.

L’obésité est un facteur de risque important du diabète de type 2 et des maladies cardio- vasculaires. Durant le développement de l’obésité, le remodelage pathologique du tissu adipeux et l’inflammation locale contribuent à la mise en place d’une inflammation systémique, une accumulation de gras ectopique et une résistance à l’insuline. Les macrophages jouent un rôle important dans la régulation des voies signalétiques inflammatoires qui sont liées à leurs différents états d’activation. En effet, l’influence de diverses adipokines, cytokines et hormones ainsi que la disponibilité des nutriments vont induire leur polarisation en un phénotype soit pro- inflammatoire M1, soit anti-inflammatoire M2. De ce fait, comprendre les mécanismes et acteurs impliqués dans la polarisation des macrophages résidents du tissu adipeux vers un phénotype anti-inflammatoire M2 pourrait apporter une stratégie pour traiter les complications de l’obésité. La suppression de l’α/β-hydrolase domain-6 (ABHD6), une monoacylglycérol lipase, a démontré chez la souris des effets bénéfiques contre l’obésité, le diabète de type 2 et d’autres maladies inflammatoires. Cependant, le rôle précis de l’ABHD6 dans l’activation et la polarisation des macrophages en conditions inflammatoires, ainsi que les mécanismes sous-jacents, ne sont pas clairement définis. Le but de cette étude était d’investiguer : 1) le rôle immuno-métabolique de l’ABHD6 dans l’inflammation chronique du tissu adipeux induite par l’obésité chez la souris, et 2) le rôle régulateur de l’ABHD6 dans l’activation et la polarisation des macrophages dans des conditions inflammatoires aiguës induite par le lipopolysaccharide (LPS). En employant des approches pharmacologiques et génétiques, nous avons démontré que la délétion globale de l’ABHD6, chez les souris rendues obèses par une diète riche en gras, permet de maintenir un tissu adipeux sain au niveau immuno-métabolique. En effet, les souris ABHD6-KO nourries avec une diète riche en gras montrent une expression réduite de l’expression des marqueurs pro- inflammatoires (Mcp1 and Cd11c), fibrotiques (Col5a1) et hypoxiques (Hif1a) dans tous leurs tissus adipeux (viscéral, sous-cutané et brun). Le nombre de macrophages pro-inflammatoires M1 est aussi diminué dans les tissus adipeux viscéral et brun des souris KO nourries à la diète grasse. De plus, la suppression de l’ABHD6 a changé la polarisation des macrophages d’un phénotype pro-inflammatoire M1 vers un phénotype anti-inflammatoire M2 dans des lignées cellulaires de macrophages (RAW264.7 et J774A.1) et des macrophages péritonéaux primaires de souris traités avec le LPS. Collectivement, nos résultats supportent la vision que l’ABHD6 a un rôle pro-inflammatoire dans induit par la diète riche en gras ou le LPS. Ces observations nous ont permis d’obtenir un aperçu du rôle de l’ABHD6 dans les voies immuno-métaboliques des tissus adipeux et suggèrent que l’ABHD6 pourrait être une cible thérapeutique intéressante pour contrer l’inflammation et les complications de l’obésité. / Obesity is a major risk factor for type 2 diabetes (T2D) and cardiovascular diseases. Pathologic adipose tissue (AT) remodeling and local inflammation contribute to systemic inflammation, ectopic fat accumulation and insulin resistance in obesity. Macrophages play an important role in inflammatory pathways, and these cells possess different activation states, M1 pro-inflammatory and M2 anti-inflammatory, influenced by adipokines, cytokines, hormones, and fuel availability. Thus, understanding the mechanisms and players involved in AT-resident macrophage polarization towards an anti-inflammatory M2 phenotype may provide a strategy to treat obesity complications. Suppression/deletion of the monoacylglycerol lipase α/β-hydrolase domain-6 (ABHD6) was previously shown to have beneficial effects against obesity, T2D, and other inflammatory disorders. However, it is not precisely known if ABHD6 plays any direct role in macrophage activation and polarization under inflammatory conditions, and if it does, the underlying mechanisms are yet to be defined. The aim of this study is to investigate: 1) the immunometabolic role of ABHD6 in obesity-induced chronic AT inflammation in mice, and 2) the regulatory role of ABHD6 in macrophage activation/polarization under conditions of acute lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammation. Employing pharmacological and genetic approaches, we demonstrate that global ABHD6 deletion maintains AT immunometabolic health during diet-induced obesity in mice. High-fat-diet(HFD)-fed whole-body ABHD6-KO (HFD-ABHD6- KO) mice exhibit lower expression of pro-inflammatory (Mcp1 and Cd11c), fibrosis (Col5a1) and hypoxia (Hif1a) markers in all fat depots. The pro-inflammatory M1-macrophages in the visceral and brown fat depots are also reduced in HFD-ABHD6-KO mice. Additionally, ABHD6 suppression switches LPS-induced macrophage polarization from an M1-like phenotype towards an anti- inflammatory M2 state in the macrophage cell lines (RAW264.7 and J774A.1) and in primary peritoneal macrophages. Collectively, our results support the view that ABHD6 has a pro-inflammatory role under conditions of HFD- and LPS-induced inflammation. These findings provide an insight into the role of ABHD6 in AT immunometabolic pathways in obesity, and suggest ABHD6 as a therapeutic target for inflammation and obesity-related complications.