O mosquito Aedes (Stegomyia) aegypti Linnaeus, 1762 é o principal vetor do vírus do dengue sorotipo 1-4 (DEN 1-4) e da febre amarela. Por não haver vacina disponível, a redução da transmissão da dengue só pode ser alcançada mediante o controle do vetor. Entre as medidas de controle, os órgãos responsáveis utilizam-se de compostos químicos, principalmente organofosforados. Além disso, devido ao grande incomodo causado pelo Aedes, a população faz uso de inseticidas domésticos, a base de piretróides, na tentativa de eliminar e ou repelir o mosquito. As repetidas aplicações destes inseticidas e seu uso contínuo possibilitam o desenvolvimento de resistência em populações de mosquitos, processo resultante do efeito seletivo de exposição a dosagens que matam os indivíduos suscetíveis, sobrevivendo os resistentes, que transferem essa capacidade a seus descendentes. Dentre os mecanismos de resistência, a redução da sensibilidade do sítio alvo é dada por mutações pontuais no sitio de ação dos inseticidas. Tais mutações podem levar a uma substituição de aminoácidos na molécula alvo e a uma diminuição da afinidade do inseticida com essa molécula. No caso dos piretróides a mudança estrutural na molécula formadora do canal de sódio (Nav), sítio alvo deste inseticida, é a causa da resistência tipo knockdown resistence (kdr), um mecanismo de resistência bastante conhecido. Em Aedes aegypti, a associação entre a presença da mutação V1016I e o fenótipo de resistência a piretróide já foi verificada em algumas regiões Brasileiras, utilizando primers alelo-específicos. A mutação I1011M também está associada à resistência a piretróides e já foi descrita no Brasil. O objetivo deste estudo foi determinar a frequência destas mutações que levam às substituições V1016I e I1011M no AaNav de populações de Aedes aegypti no estado de São Paulo e avaliar a evolução desta frequência no período de dez anos. Para isso, indivíduos coletados em 2001 e 2011 tiveram o DNA extraído e primers alelo específicos foram utilizados para a realização de PCR a fim de verificar a presença da mutação. Houve um aumento significativo do alelo 1016 Ile nas populações estudadas, comparando-se os anos 2001 e 2011. Entretanto para o alelo 1011 Met, somente a população de Santos apresentou essa diferença significativa. Este aumento na frequência destas mutações pode ter sido ocasionado pela utilização de inseticidas domésticos à base de piretróides, uma vez que os órgãos de controle interromperam a utilização desses compostos / The mosquito Aedes (Stegomyia) aegypti Linnaeus, 1762 is the main vector of the virus dengue serotypes 1-4 (DEN 1-4) and the yellow fever virus. As there is not vaccine available, the reduction of the transmission of dengue can only be achieved by controlling the vector. Among the control measures, the responsible agencies use chemical compounds, organophosphate mainly. Furthermore, due to the big nuisance caused by Aedes, the population makes use of domestic insecticide, pyrethroids based, trying to eliminate or repel the mosquito. The repeated applications of these insecticides and the continuous use of them enable the resistance development in the mosquitoes population. This process is the result of selective effect of exposure to dosages that can kill the susceptible individuals, and then the surviving individuals transfer these characteristics to their descendents. Among the mechanism of resistance, the reduction of sensibility of the target site is given by punctual mutation (SNIP) in the action site of the insecticides. This mutation can lead to a substitution of amino acids in the target molecule and a reduction of affinity of the insecticide with this molecule. In the case of pyrethroids, the structural change in the forming molecule of the sodium channel (Nav), target site of this insecticide, is the cause of knockdown resistence (kdr) type. In Aedes aegypti, the association between the presence of the mutation V1016I and the pyrethroid resistance phenotype has been previously verified in many Brazilian regions, using Allele Specific primers The mutation I1011M is also associated with the pyrethroids resistance and it has been described in Brazil. The objective of the this study was to determine the frequency of the mutations that leads to the substitutions V1016I e I1011M in AaNav of the Aedes aegypti population in the state of Sao Paulo and to evaluate the evolution of this frequency in the period of ten years. Therefore, collected individuals in 2001 and 2011 had their DNA extracted and specific primers were used for PCR, in order to verify the presence of the mutation. There was a significant raise of allele 1016 Ile in the studied population, comparing the years 2001 and 2011. Nevertheless for allele 1011 Met, only the population of Santos showed this significant difference. This raise in the frequency of these mutations may have been caused by the utilization of domestic insecticides pyrethroid based, whereas the control agencies interrupted the utilization of this compost

Submitted by Wagner Junior (wagner.junior@unioeste.br) on 2018-07-12T20:50:32Z No. of bitstreams: 2 Alexandre_Kraemer_2018.pdf: 14453842 bytes, checksum: f63c58cfcc4e7a07532d4215e51444db (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-12T20:50:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Alexandre_Kraemer_2018.pdf: 14453842 bytes, checksum: f63c58cfcc4e7a07532d4215e51444db (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Mobilization’s effectiveness of students enrolled in an elementary school through coaching based on a gamified web system as support strategy to Aedes aegypti mosquito control was tested. In order to that, 675 students from the municipality of Foz do Iguaçu (“Priest Luigi Salvucci“ school) on the triple border among Brazil, Paraguay, and Argentina attended an intervention research fulfilling a checklist of actions to eliminate potential mosquito breeding grounds in their homes during the month of March 2017. Effectiveness was tested in a field survey classifying types of mosquito breeding grounds in 126 households visited before and after that educational intervention, concluding for the necessity of new studies with sample size that considers the index of previous building infestation. Children were trained and received a guide with instructions for each item from the gamified checklist. / A efetividade da mobilização de estudantes do ensino fundamental por meio de um treinamento de escolares baseado em um sistema web gamificado como estratégia de apoio ao controle do mosquito Aedes aegypti foi testada. Para tanto, 675 escolares do município de Foz do Iguaçu (escola “Padre Luigi Salvucci”) na tríplice fronteira entre Brasil, Paraguai e Argentina participaram de pesquisa de intervenção cumprindo uma lista de checagem gamificada das ações de eliminação de possíveis criadouros em suas residências durante o mês de março de 2017. A efetividade foi testada em inquérito de campo classificando tipos de criadouros em 126 domicílios visitados antes e depois do treinamento, concluindo pela necessidade de novos estudos com tamanho de amostra que considere o índice de infestação predial prévio. As crianças receberam aulas práticas e um manual com instruções para cada item da lista de checagem gamificada.

O comportamento humano é influenciado por fatores sociais, culturais, econômicos e políticos, e pode aumentar ou diminuir o risco de infecção pela dengue, dependendo da relação entre a população e o inseto vetor da doença. Devido ao fato de nenhuma vacina 100% eficaz ter sido disponibilizada ainda, a disseminação da dengue só pode ser contida por técnicas de controle da população de vetores (Aedes aegypti e outros) e pela proteção individual dos componentes da população humana. Este estudo testou a hipótese de que as populações afetadas pela dengue provavelmente vão reduzir a intensidade de seus hábitos relacionados ao controle dos vetores na presença de uma vacina parcialmente protetora. Essa hipótese foi testada por uma avaliação em campo, na qual uma amostra de população de área endêmica para a dengue foi entrevistada sobre seus hábitos de controle do vetor na presença de uma vacina teórica. As entrevistas demonstraram que as pessoas que foram informadas sobre uma vacina muito eficiente iriam reduzir seus hábitos de controle do mosquito de maneira significativa mais importante do que a amostra que foi informada sobre a presença de uma vacina pouco eficaz / Human behaviors, which are influenced by social, cultural, economic and political factors, can increase or decrease the risk of dengue infection, depending on the relationship with the insect vector. Because no 100% efficacious vaccine is currently available, the spread of dengue can only be curtailed by controlling vector populations (Aedes aegypti and others) and by protecting individuals. This study tested the hypothesis that dengue-affected populations are likely to relax their vector-control habits if a potentially protective vaccine becomes available. The hypothesis was tested using an empirical field test in which the local population of an endemic area was interviewed about their vector-control habits given the presence of a theoretical vaccine. The interview showed that people who were informed that a very effective vaccine is available would reduce their vector-control habits significantly compared to a group that was informed that the vaccine is not very effective

Introdução: Após alguns anos possivelmente ausente do Brasil, o Ae. aegypti, principal transmissor dos vírus da dengue volta a ser encontrado, sendo este fato comprovado no Estado de São Paulo desde 1985. No município de Santos focos de Ae. aegypti foram assinalados em 1980, todavia a sua infestação foi comprovada em 1994 (SUCEN). Os primeiros casos de dengue autóctones (contraídos no município de Santos) emergiram no início de 1997. O objeto de estudo desse trabalho é a dengue no município de Santos e sua transmissão que parece ininterrupta. Objetivo: estudar a ocorrência da dengue no município de Santos no período de 1997 a 2008 em alguns de seus aspectos epidemiológicos, clínicos e vetoriais e possíveis causas da flutuação das epidemias1 consecutivas permeadas por períodos de surtos epidêmicos2. Método: Estudo descritivo com análise comparativa entre os índices de infestação do Aedes com a incidência3 da dengue no mesmo período para avaliar se houve impacto das ações de controle. As variáveis para a análise de incidência serão somente os casos notificados, confirmados e residentes em Santos nos anos de 1997 a 2008, por faixa etária, sexo, ano e mês de ocorrência. Resultados: A incidência acumulada da doença de aproximadamente 84% pode apontar para uma possível diminuição de suscetíveis para os três sorotipos (1, 2 e 3), e o risco de novas epidemias é possível, seja com a introdução do sorotipo 4, onde toda a população é suscetível, aumentando o risco dos casos de dengue hemorrágica, ou epidemias infantis, atingindo em maior número lactantes e crianças até 14 anos, uma vez que a prevalência é menor. Conclusões: O comportamento da incidência da dengue durante esses doze anos consecutivos de autoctonia no município de Santos mostrou como característica principal a ciclotimia, anos epidêmicos intercalados com surtos, possível esgotamento de suscetíveis adultos para cada novo vírus introduzido, e os métodos utilizados no controle da doença mostraram que não foram suficientes, embora legitimamente embasados, faltou a integração das ações, com planejamento, acompanhamento e avaliação / Introduction: After a few years away from possibly Brazil, Ae. aegypti, the main transmitter of the dengue virus is again found, and this was proven in the State of São Paulo since 1985. In the city of Santos foci of Ae. aegypti was reported in 1980, but its infestation was confirmed in 1994 (SUCEN). The first cases of indigenous dengue fever (contracted in the city of Santos) re-emerged in early 1997. The object of this paper is to study dengue in the city of Santos and its transmission that seems unbroken. Objective: To study the incidence of dengue in the city of Santos in the period 1997 to 2008 in some of its epidemiological, clinical and vector and possible causes of fluctuations in consecutive epidemics1 interspersed by periods of epidemic outbreaks2. Method: A descriptive and comparative analysis between the infestation levels of Aedes with the incidence3 of dengue in the same period to assess whether there was impact of control measures. The variables for the incidence analysis will only be notified cases confirmed and living in Santos in 1997 and 2008, by age, sex, year and month of occurrence. Results: The prevalence of the disease approximately 84% can point to a possible reduction of susceptibility to the three serotypes (1, 2 and 3), and the risk of new epidemics are possible, either with the introduction of serotype 4, where the entire population is susceptible, increasing the risk of cases of dengue hemorrhagic fever, epidemic or \"childish\", reaching in many infants and children up to 14 years, since the prevalence is lower. Conclusions: The behavior of the incidence of dengue during these twelve consecutive years of autochthony the city of Santos showed the main characteristic of cyclothymia, interspersed with years epidemic outbreaks, depletion of susceptible adults for each new virus introduced, and the methods used to control the disease showed that there were sufficient, although legitimately grounded, lacked the integration of action, with planning, monitoring and evaluation

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-12T14:03:58Z No. of bitstreams: 1 jenifercarvalhogorssi.pdf: 6998133 bytes, checksum: f49277dca971587203cbebb23396270d (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: on 2018-06-12T14:07:12Z (GMT) / Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-12T14:09:43Z No. of bitstreams: 1 jenifercarvalhogorssi.pdf: 6998133 bytes, checksum: f49277dca971587203cbebb23396270d (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: on 2018-06-12T14:27:20Z (GMT) / Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-12T14:30:28Z No. of bitstreams: 1 jenifercarvalhogorssi.pdf: 6998133 bytes, checksum: f49277dca971587203cbebb23396270d (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-06-14T11:34:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 jenifercarvalhogorssi.pdf: 6998133 bytes, checksum: f49277dca971587203cbebb23396270d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-14T11:34:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jenifercarvalhogorssi.pdf: 6998133 bytes, checksum: f49277dca971587203cbebb23396270d (MD5) Previous issue date: 2018-03-26 / As tiossemicarbazonas são uma classe de compostos químicos com amplo perfil farmacológico, contudo há poucos estudos sobre sua toxicidade em insetos. O Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) é na atualidade um dos mosquitos que mais tem causado problemas de saúde pública, devido ao seu potencial de disseminar doenças, como dengue, febre amarela, chikungunya e zika. Entre as estratégias mais eficientes no controle dessas doenças está o combate ao vetor. No entanto, o número limitado de agentes larvicidas e o surgimento de mosquitos resistentes podem comprometer esse combate, o que tem motivado a busca por novas moléculas que podem atuar como larvicidas. Neste trabalho foi avaliada a toxicidade de uma série de quatorze tiossemicarbazonas derivadas de benzaldeído, acetofenona e benzofenona contra larvas do Aedes aegypti. Os compostos foram preparados e caracterizados a partir de seus espectros de infravermelho e ressonância magnética nuclear, bem como, por sua estabilidade coloidal em solução aquosa com dimetilsulfóxido 1%. A toxicidade dos compostos em concentrações na faixa de 0,1 a 100 μM foi avaliada frente a larvas no estádio L4, sendo demonstrado que as tiossemicarbazonas derivadas de benzofenona apresentam atividade larvicida. O comportamento de nado e a morfologia externa e das células do intestino médio foram avaliados para os compostos que apresentaram atividade larvicida, sendo observado a redução da mobilidade, deformidade de algumas larvas e alterações nas células após a exposição com tiossemicarbazonas. Ensaios de imunofluorescência utilizando os anticorpos anti-fosfohistona H3, anti-proteína de cadeia leve 3 associada a microtúbulos (anti-LC3A/B), anti-caspase-3 e anti-peroxidase foram realizados nas células do intestino médio das larvas. Esses resultados ressaltaram o efeito citotóxico das tiossemicarbazonas, contudo sem a participação dos processos de apoptose, autofagia e de enzimas peroxidase. Os resultados obtidos corroboram a potencial atividade larvicida das tiossemicarbazonas, mas a origem da sua citotoxicidade deve ser melhor investigada. / The thiosemicarbazones are a class of chemical compounds with broad pharmacological profile, however, there is few studies on its toxicity in insects. Currently, Aedes aegypti mosquitoes (Linnaeus, 1762) has caused public health problems due to its potential for disease dissemination, such as dengue fever, yellow fever, chikungunya and zika. The fight against the vector is one of most efficient strategies used in the control of these diseases. However, the limited number of larvicidal agents and the emergence of resistant mosquitoes can compromise this fight, which has motivated the research for new molecules that can act as larvicides. In this work, a series of fourteen thiosemicarbazones derived from benzaldehyde, acetophenone and benzophenone against Aedes aegypti larvae were evaluated. The compounds were prepared and characterized by their infrared and nuclear magnetic resonance spectra as well as its colloidal stability in 1% DMSO aqueous solution. The larvicidal activity of the compounds, at concentration range from 0.1 to 100 μM, was evaluated against larvae in the L4 stage, being that benzophenone-derived thiosemicarbazones demonstrated larvicidal activity. The swimming behavior and external and midgut cells morphology were evaluated for the active compounds. In these experiments were observed a reduction of mobility, deformity of some larvae and alterations in cells upon exposition to thiosemicarbazones. Immunofluorescence assays involving anti-phospho-histone H3, microtubule-associated protein light chain 3 antibody (anti-LC3A/B), anti-caspase 3, and anti-peroxidase antibodies were performed on midgut cells from larvae. These results highlight the cytotoxic effect of thiosemicarbazones, but without the participation of apoptotic and autophagic processes and peroxidase enzymes. The results obtained corroborate a potential larvicidal activity of thiosemicarbazones, however, the origin of its cytotoxicity should be better investigated.

Orientadores: Roberto Wagner Lourenço, Maria Rita Donalísio Cordeiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T08:45:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbosa_GersonLaurindo_D.pdf: 4382667 bytes, checksum: 11ab540bd4300b50d395f50692cbdec4 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Diminuir os níveis de infestação pelo Aedes aegypti é uma das poucas estratégias para o controle da dengue na atualidade. O acompanhamento dos indicadores de infestação constitui parâmetro estratégico para as ações das equipes de controle da doença, porém pouco se sabe sobre a capacidade preditiva destes indicadores. Este trabalho tem como objetivo analisar a distribuição espacial dos indicadores entomológicos de Aedes aegypti nas fases ovos, larvas/pupas e mosquitos adultos e sua influência no risco de ocorrência de dengue em um município de médio porte no estado de São Paulo. Trata-se de um estudo caso-controle espacial, para avaliar a associação entre os indicadores entomológicos e o risco de dengue em Sumaré, SP, no ano de 2011. Os casos de dengue foram os confirmados e notificados pelo Sistema de Vigilância Epidemiológica da cidade e os controles foram obtidos por sorteio de pontos no perímetro da área habitada. Os indicadores entomológicos foram construídos a partir de coleta mensal de ovos (armadilhas), larvas/pupas e mosquitos adultos em quarteirões sorteados. Superfícies suavizadas dos valores dos indicadores entomológicos foram obtidas por meio do método de Krigagem ordinária. Estes indicadores foram incluídos no modelo aditivo generalizado para avaliar sua influência no risco espacial da doença. Observou-se ocorrência sazonal da doença e dos indicadores. Casos de dengue e vetores nas diversas fases do ciclo biológico foram encontrados em toda área de estudo. Entretanto, não houve coincidência espacial entre o risco da doença e a intensidade dos indicadores entomológicos. Os riscos relativos espaciais de dengue brutos e ajustados mostram feição espacial similar, indicando limitada interferência no risco da doença. Assim, a distribuição espacial e temporal da dengue possivelmente não depende da distribuição espacial dos vetores em locais onde os níveis de infestação são altos, antigos e estáveis, como no caso de Sumaré. Além disso, a área analisada apresenta infestação e transmissão antiga e deficiência de serviços públicos de saneamento e intensa circulação de pessoas, que podem ser fatores relevantes para explicar a circulação do vírus. O vetor foi identificado em abundância suficiente para desencadear e manter a circulação do vírus na área de estudo. A infestação não apresentou grande variação de intensidade e foi suficiente para a manutenção e/ou ocorrência de casos de dengue na área de estudo. O modelo aditivo generalizado não mostrou nenhum dos indicadores entomológicos analisados como preditores de áreas de risco de transmissão. A inclusão de outras variáveis nos modelos aditivos generalizados como sorotipos circulantes, imunidade populacional e intervenções por parte das equipes de controle poderiam eventualmente revelar efeito modulador do risco da doença, não encontrado utilizando-se apenas com os indicadores entomológicos / Abstract: Decrease the infestation levels of Aedes aegypti is one of the few strategies for dengue control today. Monitoring infestation indicators is strategic for the dengue control program, but little is known about the predictive capacity of these indicators. This study aimed to analyze the spatial distribution of entomological indicators of Aedes aegypti in the stages of egg, larva-pupae and adult forms and its influence on risk of dengue in a medium-sized city in the state of São Paulo. This is a spatial case-control study to evaluate the association between entomological indicators and risk of dengue in Sumaré, SP, in 2011. Dengue cases confirmed and reported by the Epidemiological Surveillance System of the municipality and the controls were obtained on the perimeter of the inhabited areas. Monthly entomological indicators were constructed from eggs, larvae-pupae and adult forms collected in the selected blocks. Smoothed surfaces for cases and entomological indicators were obtained by the ordinary kriging method. These indicators were included in the generalized additive model to assess its influence on the spatial risk of the disease. Seasonality of disease occurrence and entomological indicators were observed. Cases of dengue and vectors in the various life cycle stages were found throughout the study area. However, there was no spatial coincidence between disease risk and intensity of entomological indicators. The spatial crude and adjusted relative risks of dengue showed similar features, indicating its limited interference in disease risk. The spatial and temporal distribution of the disease may not depend exclusively on the spatial distribution of vectors in areas where infestation levels are high, longstanding and stable, like in the case of Sumaré-SP. Furthermore, the analyzed area has experienced dengue cases and high infestation for a long time and has poor public sanitation services and intense movement of persons, which may be relevant to explain the circulation of the virus. The vector was identified abundantly sufficient to initiate and maintain the virus in the study area. The infestation had no significant variation in intensity and was sufficient for the maintenance and / or occurrence of dengue cases in the study area. The entomological indicators analyzed in the generalized additive model didn¿t act as a predictor of the dengue risk in the area. Other variables as serotype circulation, the population immunity and interventions by the control teams could be included in the models in order to modulate disease risk, which was not found using only entomological indicators / Doutorado / Epidemiologia / Doutor em Saude Coletiva

Um dos grandes problemas da saúde pública no país esta diretamente ligada à dengue, uma vez que aproximadamente 550 mil pessoas são infectadas anualmente, e cerca de 20 mil vêm a óbito. Esta doença é causada pelo vírus da família Flaviviridae, transmitido pela fêmea ao hospedeiro durante o repasto sanguíneo. Este projeto teve como objetivo isolar e caracterizar células indiferenciadas de ovos embrionados e do tubo digestivo de larvas em quarto instar de Aedes aegypti, como fonte de pesquisa na área de biologia celular e estrutural destes vetores. Mediante cultura celular, as células foram isoladas e recultivadas em meio de cultura DMEM-High, e temperatura de 28 ºC. As seguintes análises foram feitas: morfologia celular, ciclo celular, testes de imunofenotipagem pelo método de citometria de fluxo e analise de imunohistoquimica. As células de Aedes aegypti analisadas pela morfologia celular, apresentaram formato globóide, tamanho pequeno e população heterogênica. A análise das fases do ciclo Sub-G1, G0-G1, S e G2-M após cultura primaria de ovos embrionados atingiram (27,5%; 68%; 30,2% e 1,9%, respectivamente). Após 24 horas atingiram (10%; 92,4%; 6,2% e 0,6%, respectivamente). A análise de imunofenotipagem realizada pelo método de citometria de fluxo demonstrou em ovos embrionados, marcações positivas para pluripotencia, assim como baixa expressão para Oct 3/4, e alta expressão para o (Sox2). As células mesenquimais tiveram alta expressão para os marcadores (Stro-1, Vimentina e Nestin). O marcador de morte celular por apoptose (Caspase3), teve alta expressão nas células cultivadas, enquanto que os marcadores endossomicos específicos para células de insetos (Anti GM130 e Anti RAB-5) também foram altamente expressos. Na cultura celular derivada do tubo digestivo de larvas de Aedes aegypti, as analises dos marcadores para pluripotencia tais como Oct 3/4 não demonstrou expressão, entretanto, o marcador Sox2 foi altamente expresso na cultura. Para as células mesenquimais não houve expressão de nenhum marcador utilizado, ou seja, (Stro-1, Vimentina e Nestin). No entanto para o marcador de morte celular por apoptose (Caspase 3) as células em cultura demonstraram alta expressão, enquanto que para os marcadores endossomicos específicos de insetos os mesmos foram altamente marcados. O teste de imunohistoquímica realizado em ovos embrionados no final do período embrionário demonstrou que as células tinham potencial ploriferativo mediante marcação positiva para PCNA. As células pluripotentes foram pouco expressas pelos marcadores Nanog, Oct 3/4, e muito expressas pelo marcador Sox2. As células de origem mesenquimais foram altamente expressas pelos marcadores SSEA-4, Stro-1, Vimentina e Nestin assim como para os marcadores endossomicos específicos para células de insetos, os quais demonstraram alta expressão nas células de embriões de Aedes. Sendo assim, conclui-se que tanto ovos embrionados quanto larvas de quarto instar de Aedes aegypti possuem células indiferenciadas, com grande potencial para estudos com biologia molecular, visando o controle biológico deste vetor / A major problem of public health in the country is directly linked to dengue, as approximately 550 million people are infected annually, and about 20,000 have died. This disease is caused by the virus of the Flaviviridae family, transmitted by the female to the host during blood feeding. This project aimed to isolate and characterize stem cells from fertilized eggs and larvae gut fourth instar Aedes aegypti, as a source of research in cell biology and structural area of these vectors. Upon cell culture, the cells were isolated and recultured in DMEM-high culture temperature and 28 º C. The following analyzes were performed: cell morphology, cell cycle tests immunophenotyping by flow cytometry and immunohistochemistry analysis. The Aedes aegypti cells analyzed by cell morphology showed globular shape, small size and heterogenic population. The analysis of sub-G1 phase of the cycle, G0, G1, S and G2-M after primary culture reached embryonated eggs (27.5%, 68%, 30.2% and 1.9%, respectively). Achieved after 24 hours (10%, 92.4%, 6.2% and 0.6%, respectively). Immunophenotyping analysis by flow cytometry demonstrated in embryonated eggs, positive for pluripotency markers, as well as low expression of Oct 3/4 and high expression for the (Sox2). The mesenchymal cells had high expression for markers (Stro-1, vimentin and Nestin). The marker of cell death by apoptosis (Caspase3) had high expression in cultured cells, whereas the endosomal markers specific for insect cells (GM130 and Anti-Anti RAB 5) were also highly expressed. In cell culture derived from the gut of larvae of Aedes aegypti, the analysis of pluripotency markers such as Oct for 3/4 showed no expression, however, the marker Sox2 was highly expressed in the culture. For mesenchymal cells no expression of any label used, ie (Stro-1, Nestin and vimentin). However marker for cell death by apoptosis (caspase 3) cells in culture showed high expression, whereas for the specific endosomal markers insects they were highly labeled. The immunohistochemistry test on embryonated eggs at the end of the incubation period the cells have demonstrated potential ploriferativo by positive staining for PCNA. Pluripotent cells were slightly expressed by markers Nanog, Oct 3/4, Sox2, and expressed by the marker. The cells of mesenchymal origin were highly expressed by SSEA-4 markers, Stro-1, Nestin and vimentin as well as the specific endosomal markers for insect cells, which showed high expression in cells of Aedes embryos. Therefore, it is concluded that both embryonated eggs as room instar larvae of Aedes aegypti have undifferentiated cells, with great potential for studies of molecular biology, targeting the biological control of this vector

São preocupantes as doenças que tem o Aedes aegypti como vetor. A elevada competência vetorial deste mosquito, bem como sua antropofilia e adaptação ao ambiente urbano, geram habitats favoráveis e torna sua prevenção uma árdua tarefa considerando os recursos disponíveis. O controle atual enfatiza o mosquito, mas ainda há espaço para o aprimoramento da sua efetividade e sucesso, o que torna fundamental o maior conhecimento sobre este inseto. O Brasil apresenta condições favoráveis para a disseminação do mosquito. Diante do exposto este estudo visa estudar a vigilância entomológica do Aedes aegypti no Município de São Paulo no ano de 2013, bem como descrever as características morfológicas, morfométricas da fase de ovo e seu desenvolvimento embrionário. A análise da vigilância entomológica no Município de São Paulo, foi realizada a partir de dados secundários oriundos da Secretaria de Saúde do município. Já a etapa envolvendo a descrição morfológica, morfometrica e o desenvolvimento embrionário foi realizada a partir do material biológico cedido pelo Instituto de Ciências Biomédicas-USP utilizando recursos, tais como a Microscopia Eletrônica de Varredura, Microscopia Eletrônica deTransmissão e Microscopia Confocal. Os indicadores entomológicos Índice de Breteau (IB), Índice de Infestação Predial (IP) e Índice por Tipos de Recipientes Positivos (ITR), tiveram comportamento similares entre si nos anos estudados. Já o ITR revelou que o principal tipo de recipiente positivo para presença do vetor foi o prato/pingadeira para planta, seguido do vaso de planta, ou seja, os principais recipientes positivos encontram-se no ambiente domiciliar. Na avaliação do padrão morfológico e da mensuração acerca do comprimento, largura, razão comprimento/largura (índice) e diâmetro da micrópila constatou-se diferenças significantes entre as duas populações de ovos estudados, para cada um dos atributos morfométricos avaliados. Já a morfologia e o desenvolvimento embrionário apontam exocórion de grande resistência e de difícil permeabilidade, dificultando o acesso ao embrião. Considera-se fundamental a avaliação integrada dos dados oriundos do levantamento entomológico e de pesquisas quanto a características deste vetor nas diversas fases do ciclo biológico, pois somente desta maneira é possível investir em áreas específicas e promissoras para elaboração de políticas públicas efetivas e com poder transformador da realidade. / The diseases that have Aedes aegypti as a vector are worrisome. The high vectorial competence of this mosquito, as well as its anthropophilia and adaptation to the urban environment, generate favorable habitats and makes its prevention an arduous task considering the available resources. The current control emphasizes the mosquito, but its effectiveness and success in containing its dispersion still needs to improve, which makes fundamental the greater knowledge about this insect. Brazil presents highly favorable conditions for the spread of the mosquito. In view of the above, this study aims to study the entomological surveillance of Aedes aegypti in the city of São Paulo in 2013, as well as the morphological, morphometric characteristics of the egg phase and its embryonic development. The analysis of entomological surveillance was based on secondary data from health secretariats. The morphology, morphometry and embryonic development stages were performed using the biological material provided by the Institute of Biomedical Sciences of the University of São Paulo using resources such as Scanning Electron Microscopy (SEM), Transmission and Confocal. The entomological indicators Breteau Index (IB), Infestation Index (PI) and Index by Types of Positive Containers (ITR), had similar behavior among themselves in the years studied, since the ITR revealed that the main type of positive container for presence of the vector was dish / drip tray for plant followed by plant pot, the main positive containers are in the home environment. In the evaluation of the morphological pattern and measurement on length, width, length / width ratio (index) and diameter of the micropyle, it was observed significant differences between the two egg populations for each of the evaluated morphometric attributes. The morphology and embryonic development point to exochorion of big resistance and of difficult permeability, making difficult the access to the embryo. It is considered fundamental the integrated evaluation of data from the entomological survey and research on the characteristics of this vector in the various phases of the biological cycle, since only in this way is it possible to invest in specific and promising areas for the elaboration of effective public policies with transformative power of reality.

La dengue et le chikungunya sont deux arboviroses émergentes qui sont transmises à l'homme par la piqûre de moustiques du genre Aedes. Il n'existe ni vaccin ni traitements commercialisés pour ces arboviroses. Il apparaît donc nécessaire de développer de nouvelles stratégies pour isoler les virus circulants et bloquer leur transmission. La compréhension des mécanismes mis en jeu dans les cellules des vecteurs Aedes lors d'une infection par le virus de la dengue (DENV) sont encore très peu étudiés, notamment pour les sérotypes 1 et 3. Par des analyses protéomiques de l'infection d'une lignée cellulaire du moustique Aedes albopictus par ces séroytypes, nous avons démontré qu'en réponse à l'infection, les cellules de moustiques utilisent les mécanismes antioxydants combinés à la production d'énergie pour faire face au virus. Les résultats de notre étude devraient permettre de mieux comprendre l'interaction DENV-vecteur Aedes au niveau cellulaire dans le but de concevoir des stratégies efficaces pour le contrôle du DENV. Nous avons également regroupé dans une revue les connaissances acquises sur les études protéomiques des principaux compartiments des arthropodes vecteurs de maladies humaines. Dans un second volet, nous avons mis en évidence une méthode rapide d'isolement et de concentration des DENV et du chikungunya. Cette technique d'isolement basée sur la capture de virus sur des billes magnétiques enrobées de polymères anioniques permet d'obtenir des particules virales infectieuses. Cette méthode combinée à des approches classiques de détection de virus pourrait non seulement permettre l'identification des échantillons infectés ayant une faible charge virale, mais aussi l'isolement simultanée de particules infectieuses de dengue et de chikungunya à partir d'un seul échantillon. / Dengue (DENV) and Chikungunya (CHIKV) viruses are two emerging arboviruses that are transmitted to humans by the bite of Aedes sp. mosquito vectors. Neither vaccines, nor medical treatments, are commercially available for these infections. It is, therefore, necessary to elaborate novel strategies to isolate the circulating viruses and block their transmission.Our understanding of the molecular mechanisms involved, during the infection of the Aedes vector by dengue virus (DENV), especially serotypes 1 and 3, remains very scant. We, therefore, performed a proteomics analysis of an Aedes albopictus cell line, infected by these two DENV serotypes, and showed that the cells use both anti-oxidant and energy-production mechanisms in the fight against the virus. These results should help to improve our knowledge of the interaction of the DENV virus and the Aedes mosquito vector, at the cellular level, with the aim of designing efficient strategies for the control of this virus. We have, in addition, developed a rapid and sensitive isolation technique, based on viral particle adsorption to magnetic beads coated with an anionic polymer. The use of this technique is of great interest, as it permits the rapid and simultaneous detection and isolation of CHIKV and DENV from samples with reduced viral loads.

Le virus chikungunya (CHIKV), transmis par les moustiques Aedes aegypti et Aedes albopictus, constitue un problème majeur de santé publique. Depuis 2004, des épidémies de CHIKV ont été rapportées en Afrique, en Asie, dans les îles de l'Océan Indien, et en Europe. Seule l'Amérique semblait épargnée malgré la présence de fortes densités de moustiques vecteurs et de multiples importations du virus dans le continent par des voyageurs de retour de pays où le virus circulait. Nous avons abordé dans cette thèse le risque d'émergence du CHIKV en Amérique à partir d'une évaluation de la compétence vectorielle de 35 populations d'Ae. aegypti et Ae. albopictus locaux avec différentes souches de CHIKV. Ces populations sont compétentes vis-à-vis du CHIKV avec un rôle des glandes salivaires comme "filtre" de la transmission. De plus, le génotypage des Ae. albopictus d'Amérique par microsatellites a permis d'identifier un cluster génétique de populations se caractérisant par une faible transmission des souches de CHIKV de génotype Est-Centre-Sud-africain. En octobre 2013, des souches asiatiques de CHIKV ont été signalées dans la Caraïbe. Nous avons alors évalué la réceptivité de 11 populations d'Ae. aegypti et Ae. albopictus d'Amérique vis-à-vis de CHIKV de génotype asiatique et avons mis en évidence que les deux espèces étaient compétents pour assurer la diffusion du virus sur le continent. On note aussi qu'Ae. albopictus peut faciliter la propagation du CHIKV vers l'Europe. Néanmoins, la compétence vectorielle d'Ae. albopictus de France vis-à-vis de CHIKV asiatique est affectée négativement par des températures plus basses que celles habituellement observées dans les pays tropicaux. / Chikungunya virus (CHIKV), transmitted mainly by the mosquitoes Aedes aegypti and Aedes albopictus, is a major public health problem. Since 2004, CHIKV epidemics have been reported in Africa, Asia, the Indian Ocean Islands, and Europe. Only the Americas seemed spared despite high densities of mosquitoes and multiple introductions of the virus to the continent by travelers returning from countries where CHIKV was circulating. We have assessed the risk of CHIKV emergence in the Americas by evaluating the vector competence of 35 local populations of Ae. aegypti and Ae. albopictus infected with different strains of CHIKV. These populations were shown to be susceptible to CHIKV infection, highlighting the predominant role of salivary glands as a "filter" of transmission. Genotyping of Ae. albopictus from the Americas using microsatellites allowed the identification of a genetic cluster of populations characterized by a low transmission of CHIKV strains of the East-Central-South-African genotype. In October 2013, Asian strains of CHIKV began circulating in the Caribbean. Thus, we evaluated the susceptibility of 11 populations of Ae. aegypti and Ae. albopictus to the Asian CHIKV genotype and showed that the two species were sufficiently competent to ensure dissemination of the virus throughout the continent. Furthermore, we showed that Ae. albopictus was likely to facilitate the spread of CHIKV to Europe. However, the vector competence of French Ae. albopictus to the Asian CHIKV genotype was negatively affected by temperatures lower than those usually found in tropical countries.