Orientador: Meire Cristina Nogueira de Andrade / Coorientador: Leonardo de Barros Pinto / Banca: Geisiany Maria de Queiroz-Fernandes / Banca: Jose Raimundo de Souza Passos / Resumo: O cultivo de cogumelos comestíveis, como o Pleurotus ostreatus (shimeji), vêm se expandindo no Brasil devido as suas características nutricionais, medicinais e possibilidade de empregar técnicas rústicas para o seu cultivo. Um dos fatores que influenciam este cultivo é a qualidade do inóculo. Alguns produtores acreditam que as sucessivas repicagens de um micélio resultam em perda de vigor e consequente queda na produtividade, porém a literatura carece de informações referentes a essa questão. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a produtividade, expressa pela perda de matéria orgânica, massa do basidioma fresco, eficiência biológica, número de cachos, atividade enzimática e caracterização química do substrato do inóculo de P. ostreatus em função de repicagens sucessivas, em três linhagens diferentes (SB, MB e CP3), cada qual com quatro tratamentos (I1, I2, I3 e I4, correspondendo aos inóculos repicados sucesssivamente), bem como analisar o processo de produção de inóculo e sua sustentabilidade sob o ponto de vista emergético. A linhagem SB apresentou os melhores resultados de produtividade, com uma massa média de 513 g, as linhagens MB e CP3 não diferiram estatisticamente entre si quanto à produtividade, com massa média de 371 g e 310 g, respectivamente. A linhagem CP3 produziu cogumelos maiores que as demais, com uma massa média de 278 g por cacho, enquanto a linhagem SB obteve uma massa média de 218 g por cacho e a linhagem MB 185 g por cacho. As repicagens suces... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The cultivation of edible mushrooms, such as the Pleurotus ostreatus (shimeji), has been expanding in Brazil due to its nutritional and medicinal characteristics, as well as the possibility of employing rustic techniques for its cultivation. One of the factors that influence this cultivation is the quality of the spawn. Some producers believe that the successive multiplications of the mycelium results in a loss of vigor and consequently a decline in productivity, however the literature lacks information regarding this issue. Therefore, the objective of this study was to evaluate the productivity, expressed by the loss of organic matter, fresh basidioma mass, biological efficiency, number of fruiting bodies, enzymatic activity and chemical characterization of the substrate of the Pleurotus ostreatus spawn as a function of successive multiplications, in three different strains (SB, MB and CP3), each with four treatments (I1, I2, I3 and I4, corresponding to the successively multiplied spawns), as well as to analyse the spawn production process and its sustainability under the emergetic point of view. The SB strain presented the best productivity results, with an average mass of 513 g, the MB and CP3 strains did not differ statistically among each other regarding productivity, with an average mass of 371 g and 310 g, respectively. The CP3 strain resulted in larger mushrooms than the others, with an average mass of 278 g per bunch, whereas the SB strain resulted in a mass of 218 g per bunch and the MB strain resulted in 185 g per bunch. The successive multiplications did not affect the size of the mushrooms. The spawns presented a similar behaviour on the substrate according to the data of enzymatic activity and chemical characterization of the substrate, indicating that the successive multiplications did not affect the behaviour of the fungi on the substrate. The data suggests that until the fifth ... / Mestre

Os frutooligossacarídeos (FOS) são oligômeros de frutose, cujas unidades frutosil estão ligadas na posição β-(2→1) na molécula de sacarose. Esses açúcares, de baixa caloria, são classificados com prebióticos, não são cariogênicos, podem ser usados por diabéticos, são de 0,4 a 0,6 vezes menos doce que a sacarose, sendo amplamente utilizados pelas indústrias farmacêutica e de alimentos como açúcares funcionais. Apesar dos FOS serem produzidos naturalmente por enzimas presentes em diversos vegetais, são disponibilizados comercialmente por meio da produção sintética, utilizando enzimas de origem microbiana como as frutosiltransferases (FTases, E.C.2.4.1.9) e sacarose como principal substrato. Diante deste contexto, o presente trabalho teve como objetivo a produção de FTases extracelular e micelial de Aspergillus oryzae IPT-301 por fermentação submersa aeróbia utilizando meio de cultura sintético, assim como a caracterização e estudos cinéticos das enzimas produzidas. Também foram investigados os efeitos da temperatura e pH do meio reacional nas atividades enzimáticas mediante técnica de planejamento experimental. Para a produção de FTases foi necessário o cultivo do micro-organismo em meio de cultura estéril e a fermentação foi conduzida em agitador orbital do tipo shaker. Com o caldo de fermentação filtrado e o micélio úmido foi possível determinar as atividades de transfrutosilação (quantidade de enzima necessária para produzir 1 µmol de FOS por minuto nas condições experimentais) e hidrolítica (quantidade de enzima necessária para liberar 1 µmol de frutose por minuto nas condições experimentais) extracelular e micelial, respectivamente, para as diferentes condições experimentais avaliadas. A concentração máxima de biomassa celular obtida foi de 9,35 ± 1,26 g.L-1 em 48 h de fermentação, sendo que em 76 h, houve a produção de 7,51 ± 1,57 g.L-1, período em que ocorreu a acidificação do caldo fermentado (pH 4,82). As condições nas quais a enzima extracelular obteve maior atividade de transfrutosilação foi aquela produzida em 64 h de fermentação, incubada na faixa de pH 4,5-6,0, temperatura reacional de 50 °C, concentração de sacarose a partir de 296,0 g.L-1, apresentando estabilidade entre 30 e 35 ºC e em pH 6,0. Por outro lado, a FTase micelial mostrou sua máxima atividade quando produzida em 72 h de fermentação, incubada na faixa de pH 4,5-6,0, temperatura reacional entre 45-55 °C, concentração de substrato igual a 470,6 g.L-1, indicando estabilidade para faixas de pH entre 6,0-8,0 e temperatura entre 30-40 ºC. A FTase extracelular apresentou cinética michaeliana em relação à concentração de substrato, exibindo valores de Vmax igual a 16,23 U.mL-1 e Km de 50,41 g.L-1 , enquanto a FTase micelial ajustou-se satisfatoriamente ao Modelo de Hill, cujos valores dos parâmetros Vmax, K0,5 e n foram iguais a 342,23 U.g-1 e 234,73 g.L-1 e 1,41, respectivamente. O estudo da influência do tempo e da temperatura reacional na síntese de FOS mostrou que a FTase extracelular produziu maior concentração de FOS a 50 °C, enquanto a FTase micelial a 40°C. A otimização do processo para a obtenção de FOS comprovou que a zona ótima da FTase extracelular (em que elevada atividade de transfrutosilação e baixa atividade hidrolítica são esperadas) ocorreu nas faixas de temperatura entre 45-50 °C e de pH entre 5,5-6,75. Para a FTase micelial, apenas a atividade de transfrutosilação ajustou-se satisfatoriamente ao modelo quadrático com interação, cuja zona ótima ocorreu em temperaturas superiores a 46 °C e valores de pH abaixo de 6,5. Os resultados obtidos atestaram que o fungo se destacou como fonte produtora de FTases e, estas, por sua vez, mostraram-se promissoras para a obtenção de FOS em escala laboratorial. / Fructooligosaccharides (FOS) are fructose oligomers in which the fructosyl units are bound in β-(2→1) position of sucrose molecule. These sugars, that present properties such as low caloric value and non-cariogenicity, are classified as prebiotics and can be used in diabetic products; they are 0.4 to 0.6 times less sweet than sucrose, being widely applied in the pharmaceutical and food industries as functional sugars. Despite the natural production of FOS by enzymes present in various vegetables, they are commercially available by synthetic production, using microbial enzymes such as fructosyltransferases (FTases, E.C.2.4.1.9) and sucrose as main substrate. In face of this context, the objective of the present study was the production of extracellular and mycelium FTases by Aspergillus oryzae IPT-301 from aerobic submerged fermentation using synthetic growth media, as well as the characterization of the enzymes produced and the conduction of kinetic studies. It was also investigated the temperature and pH effects of the growth media in the enzymatic activities through experimental planning. For FTases production was necessary the use of sterile growth media, and the fermentation was carried out in rotary shaker. With the filtered broth and the humid mycelium it was possible to determine the transfructosylation and hydrolytic activities of the extracellular and mycelium enzymes in different experimental conditions; the transfructosylation activity was defined as the amount of enzyme necessary to produce 1 µmol of FOS per minute under the experimental conditions, while the hydrolytic activity was defined as the amount of enzyme necessary to release 1 µmol of fructose per minute under the experimental conditions. The maximum biomass concentration (9.35 ± 1.26 g.L-1) was obtained in 48 h of fermentation; in 76 h there was a biomass production of 7.51 ± 1.57 g.L-1 and the acidification of the fermented broth (pH 4.82). The conditions in which was observed the maximum transfructosylation activity of the extracellular enzyme were 64 h of fermentation, pH range of 4.5 to 6.0, reactional temperature of 50 °C and sucrose concentration from 296.0 g.L-1; the thermal stability was between 30 and 35 °C and pH 6.0. On the other hand, mycelium FTase had its optimum in 72 h of fermentation, pH range of 4.5 to 6.0, reactional temperature between 45-55 °C and substrate concentration of 470.6 g.L-1; the thermal stability was between 30 and 40 °C and pH range 6.0 to 8.0. Extracellular FTase presented michaelian kinetic according to substrate concentration, showing Vmax and Km values of 16.23 U.mL-1 and 50.41 g.L-1, while micelial FTase fitted to Hill Model, whose Vmax, K0,5 e n values was 342.23 U.g-1 e 234.73 g.L-1 and 1.41, respectively. The study of reaction’s time and temperature showed that extracellular FTase produced a maximum concentration of FOS at 50 °C, while the micelial one at 40 °C. The process optimization for FOS production verified that the optimum zone for extracellular FTase, in which are expected high transfructosylation and low hydrolytic activities, occurred in temperature range of 45 - 50 °C and pH range of 5.5 - 6.75. For mycelium FTase, only the transfructosylation activity presented a satisfactory adjustment to the quadratic model with interaction, in which the optimum zone occurred in temperatures above 46 °C and pH values below 6.5. The results obtained showed that the fungus stood out as source of FTase, and these enzymes presented themselves as promising sources for FOS production in laboratorial scale. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-09Bitstream added on 2014-06-13T18:40:34Z : No. of bitstreams: 1 dantas_bf_dr_botfca.pdf: 285129 bytes, checksum: 63cec0eda142ffb4303d4c3cd029e95a (MD5) / Foram realizadas análises de qualidade fisiológica, bem como ensaios enzimáticos de a-amilase e amilases totais em sementes de milho, cv. Saracura BRS4154 e CATI AL34, submetidas a diferentes períodos de deficiência de oxigênio (hipoxia), com a finalidade de avaliar a resposta das sementes a essa condição. Para tanto, as sementes das cultivares AL34 e Saracura foram submersas em 50mL de água destilada e incubadas em germinadores a 27oC, no escuro, durante 0, 1, 2, 3, 4 e 5 dias. Após esse período foram realizados testes de germinação e vigor (primeira contagem do teste de germinação, condutividade elétrica, crescimento de plântulas, emergência das plântulas em campo, índice de velocidade de emergência e tempo médio de emergência). Para a avaliação da atividade de a-amilase e de amilases totais, as sementes submetidas aos períodos de submersão foram divididas em quatro grupos. Um grupo foi prontamente congelado e os outros três foram semeados em gerbox e mantidas a 27oC durante 2, 4 e 7 dias. Para a extração das enzimas amilolíticas, retirou-se os tecidos de reserva das sementes, que foram macerados em tampão TRIS-HCl 0,1mol.L-1, pH 7, contendo NaCl 0,1mol.L-1e CaCl2 10mmol.L-1 e centrifugadas a 12.000g, 4oC durante 10 minutos. O sobrenadante foi congelado até a realização dos ensaios. A atividade de amilases totais e de a-amilase foi medida em um sistema de reação, contendo Acetato de sódio 50mmol.L-1, pH 5,2 e CaCl2 10mmol.L-1 e amido solúvel de batata 2,5% como substrato, incubado a 35oC durante 15minutos. Para inativar outras amilases, permanecendo apenas a a-amilase, o extrato cru foi mantido a 70oC, durante 15 minutos. A atividade amilolítica foi expressa em mmol de açúcares redutores produzidos pela degradação de amido, por mg de proteína, por minuto... / Maize seeds cultivars Saracura BRS-4154 and CATI AL34, subjected to several flooding periods, were accessed for physiological quality and total amylase and a- amylase activity aiming to evalute seeds response to this condition. The seeds were submerged in 50mL of distilled water and incubated at 27oC, in the dark during 0, 1, 2, 3, 4 and 5 days. After that, germination and vigor (first counting, electrical conductivity, seedlings growth, seedlings field emergence, germination index and germination speed) tests were carried out. For the amylolitic activity, the seeds subjected to hypoxia were divided in four portions. One portion was readily frozen and the other three were germinated during 2, 4 and 7 days. The enzymes were extracted by the seeds reserve tissues homogenization in buffer 0.1mol.L-1 TRIS-HCl, pH 7, with 0.1mol.L-1 NaCl and 10mmol.L-1 CaCl2. After that, the solution with the homogenized tissues was centrifuged at 12000g at 4oC during 10 minutes. The pellet was discarded. The amylolitic activity was measured in a reaction buffer containing, sodium acetate 50mmol.L-1, pH 5.2 and CaCl2 10mmol.L-1 along with soluble potato starch 2.5% as substrate incubated at 35oC during 15minutes. To inactivate other amylases, and purify a- amylase, the crude extract was incubated at 70oC, during 15 minutes. The amylase activity was expressed in reducing sugars mmol produced by starch degradation per protein mg, per minute. After the hypoxia periods the seeds were germinated in germitest paper imbibed in 100 mg.L-1 GA3, 0.375% CaCl2 and 100 mg.L-1 GA3 + 0.375% CaCl2 solutions and assessed for germination and vigor tests and amylolitic activity. The results indicate both cultivars are tolerant to hypoxia but had their reserve degradation and mobilization inhibited by oxygen deficiency. Calcium and GA individually have no effect on submerged seeds, but...(Complete abstract, click electronic access below)

Orientador: Marcos Hikari Toyama / Banca: Selma Dzimidas Rodrigues / Banca: Luciana Reitz de Carvalho / Resumo: Os estudos na área de biotecnologia marinha vêm crescendo nas ultimas décadas e os trabalhos recentes têm revelado inúmeros compostos com potencial farmacológico. O Brasil apresenta um extenso litoral, bastante diversificado em espécies e recursos abundantes para uma pesquisa tecnológica dos organismos marinhos. Os polissacarídeos sulfatados de algas já vêm sendo utilizados em diversas aplicações, principalmente inibindo a atividade de determinadas enzimas, como aquelas relacionadas à cascata de coagulação. Este estudo teve como objetivo mostrar a relevância destas moléculas na modulação das atividades enzimática e inflamatórias das Fosfolipases A2 secretórias extraídas do veneno da Crotalus durissus terrificus. O estudo mostrou que os efeitos biológicos e farmacológicos estão relacionados com a fonte dos polissacarídeos sulfatados, ou seja, a macroalga de origem, mas também com sua estrutura química, a composição dos açucares e a massa molecular. Através da cromatografia por exclusão molecular foi possível identificar as massas moleculares aproximadas dos açucares e também pode revelar a interação existente entre a Fosfolipase A2 e os polissacarídeos sulfatados. Os testes enzimáticos revelaram que a ação fosfolipásica é dose dependente do açúcar, ou seja, em baixas doses de polissacarídeos sulfatados das macroalgas Botryocladia occidentalis e Codium isthmocladum, a atividade da Fosfolipase A2 diminuiu e aumentou, respectivamente. Porém, em altas doses, a atividade enzimática aumentava e diminuía, respectivamente, para as mesmas algas. A atividade enzimática diminuiu ao longo do tempo para o polissacarídeo sulfatado da Caulerpa racemosa. Para esta clorófita, a atividade edematogênica aumentou enquanto para as outras diminuíam, bem como para o teste de miotoxicidade / Abstract: Studies in the field of marine biotechnology have been growing in recent decades, and recent studies have revealed numerous compounds with pharmacological potential. Brazil has an extensive coastline, quite diverse in species and abundant resources for technological research of marine organisms. The sulfated polysaccharides of algae have already been used in several applications, mainly by inhibiting the activity of certain enzymes, such as those related to the coagulation cascade. This study aimed to show the relevance of these molecules in the modulation of inflammatory and enzymatic activities of Phospholipase A2 secretory extracted from the venom of Crotalus durissus terrificus. The study showed that the biological and pharmacological effects are related to the source of sulfated polysaccharides, or origin of the seaweed, but also their chemical structure, composition and molecular weight of sugars. Through molecular exclusion chromatography was possible to identify approximate molecular masses of sugars and can also reveal the interaction between the phospholipase A2 and sulfated polysaccharides. The tests revealed that the enzyme phospholipase action is dose-dependent sugar, or low doses of sulfated polysaccharides of macroalgae and Codium isthmocladum, Botryocladia occidentalis, the phospholipase A2 activity decreased and increased, respectively. However, at high doses, the enzyme activity increased and decreased, respectively, for the same algae. The enzyme activity decreased over time for the sulfated polysaccharide the Caulerpa racemosa. For this seaweed, the enzymatic activity increased while the edema decreased / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-09-04Bitstream added on 2014-06-13T20:29:44Z : No. of bitstreams: 1 000736000.pdf: 1119345 bytes, checksum: 15a1cf62b53cf447a235fce25ed7705b (MD5) / Os estudos na área de biotecnologia marinha vêm crescendo nas ultimas décadas e os trabalhos recentes têm revelado inúmeros compostos com potencial farmacológico. O Brasil apresenta um extenso litoral, bastante diversificado em espécies e recursos abundantes para uma pesquisa tecnológica dos organismos marinhos. Os polissacarídeos sulfatados de algas já vêm sendo utilizados em diversas aplicações, principalmente inibindo a atividade de determinadas enzimas, como aquelas relacionadas à cascata de coagulação. Este estudo teve como objetivo mostrar a relevância destas moléculas na modulação das atividades enzimática e inflamatórias das Fosfolipases A2 secretórias extraídas do veneno da Crotalus durissus terrificus. O estudo mostrou que os efeitos biológicos e farmacológicos estão relacionados com a fonte dos polissacarídeos sulfatados, ou seja, a macroalga de origem, mas também com sua estrutura química, a composição dos açucares e a massa molecular. Através da cromatografia por exclusão molecular foi possível identificar as massas moleculares aproximadas dos açucares e também pode revelar a interação existente entre a Fosfolipase A2 e os polissacarídeos sulfatados. Os testes enzimáticos revelaram que a ação fosfolipásica é dose dependente do açúcar, ou seja, em baixas doses de polissacarídeos sulfatados das macroalgas Botryocladia occidentalis e Codium isthmocladum, a atividade da Fosfolipase A2 diminuiu e aumentou, respectivamente. Porém, em altas doses, a atividade enzimática aumentava e diminuía, respectivamente, para as mesmas algas. A atividade enzimática diminuiu ao longo do tempo para o polissacarídeo sulfatado da Caulerpa racemosa. Para esta clorófita, a atividade edematogênica aumentou enquanto para as outras diminuíam, bem como para o teste de miotoxicidade / Studies in the field of marine biotechnology have been growing in recent decades, and recent studies have revealed numerous compounds with pharmacological potential. Brazil has an extensive coastline, quite diverse in species and abundant resources for technological research of marine organisms. The sulfated polysaccharides of algae have already been used in several applications, mainly by inhibiting the activity of certain enzymes, such as those related to the coagulation cascade. This study aimed to show the relevance of these molecules in the modulation of inflammatory and enzymatic activities of Phospholipase A2 secretory extracted from the venom of Crotalus durissus terrificus. The study showed that the biological and pharmacological effects are related to the source of sulfated polysaccharides, or origin of the seaweed, but also their chemical structure, composition and molecular weight of sugars. Through molecular exclusion chromatography was possible to identify approximate molecular masses of sugars and can also reveal the interaction between the phospholipase A2 and sulfated polysaccharides. The tests revealed that the enzyme phospholipase action is dose-dependent sugar, or low doses of sulfated polysaccharides of macroalgae and Codium isthmocladum, Botryocladia occidentalis, the phospholipase A2 activity decreased and increased, respectively. However, at high doses, the enzyme activity increased and decreased, respectively, for the same algae. The enzyme activity decreased over time for the sulfated polysaccharide the Caulerpa racemosa. For this seaweed, the enzymatic activity increased while the edema decreased

Submitted by Josilei da Silva Ferreira (josilei.ferreira@gmail.com) on 2018-05-07T15:35:02Z No. of bitstreams: 1 dissertaçãofinal_final_josilei.pdf: 4103586 bytes, checksum: 62cfc606264fba78b377feae104b2cd8 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Carolina Gonçalves Bet null (abet@iq.unesp.br) on 2018-05-08T17:44:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ferreira_js_me_araiq_int.pdf: 3747353 bytes, checksum: aba9cd38616fb14effcaaabc94315088 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-08T17:44:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ferreira_js_me_araiq_int.pdf: 3747353 bytes, checksum: aba9cd38616fb14effcaaabc94315088 (MD5) Previous issue date: 2018-04-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo desta dissertação de mestrado foi o desenvolvimento de um método não-invasivo e rápido para o monitoramento dos processos relacionados com a deterioração fisiológica pós-colheita (PPD), tendo como estudo de caso amostras comerciais de mandioca não-resfriadas e resfriadas, utilizando sinais de TD-NMR em combinação com modelos quimiométricos. Os modelos de classificação multivariados se mostraram promissores somente para as amostras não-resfriadas. Um método analítico foi desenvolvido com os sinais TD-NMR combinados com valores de referência provenientes de método padrão bioquímico e PLS (partial least squares). As figuras de mérito evidenciaram excelentes limites de detecção e de quantificação de 0,06 UA∙mL-1 e de 0,2 UA∙mL-1, respectivamente. A sensibilidade foi de 0,4 [intensidade (u.a.)/( UA∙mL-1] e o erro padrão de validação cruzada de 0,7 UA∙mL-1 para o modelo que considera os dois tipos de amostras no mesmo conjunto de dados. / The objective of this master's thesis was the development of a non-invasive and rapid method for the monitoring of processes related to post-harvest physiological deterioration (PPD), having as case study commercial samples of non-refrigerated and refrigerated cassava using TD-NMR signals in combination with chemometric models. The multivariate classification models were promising only for the non-refrigerated samples. An analytical method was developed with TD-NMR signals combined with reference values from standard biochemical and partial least squares (PLS) methods. The merit figures showed excellent detection and quantification limits of 0.06 UA∙mL-1 and 0.2 UA∙mL-1, respectively. The sensitivity was 0.4 [intensity (a.u.)/(UA∙mL-1] and the standard error of cross-validation (SECV) of 0.7 UA∙mL-1 for the model considering the two types of samples in the same set of data.

Resumo: Foram realizadas análises de qualidade fisiológica, bem como ensaios enzimáticos de a-amilase e amilases totais em sementes de milho, cv. Saracura BRS4154 e CATI AL34, submetidas a diferentes períodos de deficiência de oxigênio (hipoxia), com a finalidade de avaliar a resposta das sementes a essa condição. Para tanto, as sementes das cultivares AL34 e Saracura foram submersas em 50mL de água destilada e incubadas em germinadores a 27oC, no escuro, durante 0, 1, 2, 3, 4 e 5 dias. Após esse período foram realizados testes de germinação e vigor (primeira contagem do teste de germinação, condutividade elétrica, crescimento de plântulas, emergência das plântulas em campo, índice de velocidade de emergência e tempo médio de emergência). Para a avaliação da atividade de a-amilase e de amilases totais, as sementes submetidas aos períodos de submersão foram divididas em quatro grupos. Um grupo foi prontamente congelado e os outros três foram semeados em gerbox e mantidas a 27oC durante 2, 4 e 7 dias. Para a extração das enzimas amilolíticas, retirou-se os tecidos de reserva das sementes, que foram macerados em tampão TRIS-HCl 0,1mol.L-1, pH 7, contendo NaCl 0,1mol.L-1e CaCl2 10mmol.L-1 e centrifugadas a 12.000g, 4oC durante 10 minutos. O sobrenadante foi congelado até a realização dos ensaios. A atividade de amilases totais e de a-amilase foi medida em um sistema de reação, contendo Acetato de sódio 50mmol.L-1, pH 5,2 e CaCl2 10mmol.L-1 e amido solúvel de batata 2,5% como substrato, incubado a 35oC durante 15minutos. Para inativar outras amilases, permanecendo apenas a a-amilase, o extrato cru foi mantido a 70oC, durante 15 minutos. A atividade amilolítica foi expressa em mmol de açúcares redutores produzidos pela degradação de amido, por mg de proteína, por minuto...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Maize seeds cultivars Saracura BRS-4154 and CATI AL34, subjected to several flooding periods, were accessed for physiological quality and total amylase and a- amylase activity aiming to evalute seeds response to this condition. The seeds were submerged in 50mL of distilled water and incubated at 27oC, in the dark during 0, 1, 2, 3, 4 and 5 days. After that, germination and vigor (first counting, electrical conductivity, seedlings growth, seedlings field emergence, germination index and germination speed) tests were carried out. For the amylolitic activity, the seeds subjected to hypoxia were divided in four portions. One portion was readily frozen and the other three were germinated during 2, 4 and 7 days. The enzymes were extracted by the seeds reserve tissues homogenization in buffer 0.1mol.L-1 TRIS-HCl, pH 7, with 0.1mol.L-1 NaCl and 10mmol.L-1 CaCl2. After that, the solution with the homogenized tissues was centrifuged at 12000g at 4oC during 10 minutes. The pellet was discarded. The amylolitic activity was measured in a reaction buffer containing, sodium acetate 50mmol.L-1, pH 5.2 and CaCl2 10mmol.L-1 along with soluble potato starch 2.5% as substrate incubated at 35oC during 15minutes. To inactivate other amylases, and purify a- amylase, the crude extract was incubated at 70oC, during 15 minutes. The amylase activity was expressed in reducing sugars mmol produced by starch degradation per protein mg, per minute. After the hypoxia periods the seeds were germinated in germitest paper imbibed in 100 mg.L-1 GA3, 0.375% CaCl2 and 100 mg.L-1 GA3 + 0.375% CaCl2 solutions and assessed for germination and vigor tests and amylolitic activity. The results indicate both cultivars are tolerant to hypoxia but had their reserve degradation and mobilization inhibited by oxygen deficiency. Calcium and GA individually have no effect on submerged seeds, but...(Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: João Domingos Rodrigues / Coorientador: Ana Catarina Cataneo / Doutor

Orientador: Cintia Duarte de Freitas Milagre / Banca: Maysa Furlan / Banca: Leandro Helgueira Andrade / Resumo:  - aminoésteres/ácidos quirais enantiomericamente puros são blocos construtores quirais economicamente importantes para a indústria farmacêutica, de química fina, e agroquímica. As transaminases, também conhecidas como aminotransferases têm emergido como uma importante classe de enzimas com grande potencial na síntese enantiosseletiva de sses compostos. Neste trabalho foi avaliada a reatividade de  - transaminases frente a  - cet oésteres arílicos (benzoilacetato de etila) e alquílicos (acetoacetato de etila) visando à síntese enantiosseletiva de  - aminoésteres/ácidos . As enzimas utilizadas neste trabalho foram produzidas no laboratório a partir de plasmídeos contendo genes que cod ificam  - transaminases ( R ) e ( S ) - seletivas provenientes de diferentes micro - organismos. Essas enzimas juntamente com uma enzima comercial ( S ) - seletiva foram empregadas em reações de aminação assimétrica utilizando substratos  - cetoésteres, e na resolução c inética da ( R,S ) - feniletilamina. Parâmetros como concentração de enzima:substrato, com postos doadores de grupo amino, temperatura e pH foram avaliados visando à otimização dos rendimentos e enantiosseletividade. As enzimas produzidas apresentaram excel entes conversões (> 99 %) na s reações de síntese assimétrica e elevados excessos enantioméricos (> 99 %) em praticamente todas as reações de resolução cinética nas quais o acetoacetato de etila foi empregado como substrato. Por outro lado, nas reações onde o benzoilacetato de etila foi empregado como aceptor de amina, não se observou a f ormação do produto de interesse. / Abstract: Optically pure  - amino esters/ acids constitute economically important chiral building blocks for the pharmaceutical, fine chemical and agrochemical industries. T ransaminase s, also known as aminotransferases have emerged as an important class of enzymes with great potential in the enantioselective synth esis of these compounds. In this work, was evaluated the reactivity of  - transaminase against aryl ( ethyl benzoylacetate) and alkyl (ethyl acetoacetate)  - keto esters for the enantioselective synthesis of  - amino esters/ acids . The enzymes used in this work were produced in the lab oratory from pla smids containing genes encoding ( R ) and ( S ) - selective  - transaminases from different micro - organisms. These e nzyme s along with a ( S ) - selective commercial enzyme were employed in the asymmetric amination reactio ns using  - keto esters substrates and kinetic resolution of ( R, S ) - phenylethylamine. Parameters s uch as concentration of enzyme:substrate, amino group donors, temperature and pH were evaluated aiming to optimize yields and enantioselectivity. The e nzymes produced showed excellent conversion (> 99%) in the asymmetric synthesis reactions and high enantiomeric excess (> 99%) in practically all kinetic resolution reactions in which ethyl acetoacetate was used as substrate. On the other hand, in reaction s where the ethyl benzoylacetate was used as amino acceptor, was not observed the formation of the product of interest. / Mestre

Orientador: Elias Basile Tambourgi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-15T15:59:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moura_MarieleNairdeCampos_M.pdf: 414668 bytes, checksum: 15e538377d1bb0cb64d19192903c7b9e (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Bromelina é o nome dado a um conjunto de enzimas proteolíticas encontradas nos vegetais da família Bromeliaceae, na qual abacaxi é o mais conhecido. A bromelina é encontrada na casca, no talo e no fruto do abacaxi. A enzima não está presente nos primeiros estágios de desenvolvimento do fruto, seu nível aumenta rapidamente, ficando alto até a maturação do fruto. A bromelina tem diversas aplicações nas indústrias alimentícias e farmacêuticas. Com o desenvolvimento de novas técnicas de extração e purificação da bromelina, tornou-se necessário um estudo de estabilidade desta enzima. É importante saber em que condições a bromelina se mantém estável, ou seja, ativa e por qual período de tempo. Este trabalho apresenta um estudo da condição do pH em que a Bromelina P.A e a da casca e talo do abacaxi, mantém se ativa, ou seja, não desnaturada e suas influências com o tempo. A atividade enzimática foi medida através da hidrólise da caseína. Foi observado que a bromelina P.A e a da casca e talo do abacaxi apresentam ótima atividade enzimática em pH neutro e mantém-se estável por aproximadamente quinze dias / Abstract: Bromelain is a set of proteolitics enzymes found in vegetables of the Bromeliaceae family, from which pineapple is known more. The bromelain is found in pineapple stem and fruit. The Enzyme are not presented in the early stages of fruit development, however, their levels increase quickly, remaining high until the maturation. Bromelain has several uses in food industry and pharmaceutical industry. The development of new extraction and purification processes of bromelain have been studied, however, its necessary a enzyme stabilization investigation. It is important to know the conditions and the time which bromelain remain stabilized, active. This work presents a study about pH condition which a bromelain aqueous solution and bromelain of a pineapple stem, remains with biological activity and its influences within time. The enzyme activity was tested across the casein hydrolysis. It was observed wich a bromelain aqueous solution and bromelain of a pineapple stem showed optimum activity at neutral pH and 37 °C and kept stable for around fifteen days / Mestrado / Sistemas de Processos Quimicos e Informatica / Mestre em Engenharia Química

Orientadores: Aline Carvalho da Costa, José Geraldo da Cruz Pradella / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campoinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-21T13:46:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_BeatrizMerchelPiovesan_M.pdf: 1535419 bytes, checksum: fa059ca3da52ab10581615a140f2bc82 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A produção de enzimas lignocelulolíticas por Trichoderma reesei RUT-C30 foi otimizada em frascos agitados e bioreatores de 0,5 e 3L visando maximizar os títulos enzimáticos e produtividade volumétrica. Para isso, foram testadas como fontes de carbono (1% m/v) bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado por processo hidrotérmico (BH) ou por explosão a vapor, com (BED) e sem (BEX) deslignificação, em meio contendo proteose peptona, tween 80 e solução salina. Celulose comercial Celufloc200 (CE) foi testada para comparação. Maior produção de enzimas celulolíticas foi obtida com a utilização de BED (1,38 ± 0,11 FPU/mL) quando em comparação com CE (0,78 ± 0,14 FPU/mL) em frascos agitados, sendo esse material utilizado como fonte de carbono nos demais ensaios. A produção de hemicelulases (xilanases) foi similar para os dois meios (em U/mL): 18,03 ± 1,56 para BED e 20,04 ± 1,50 para CE. A variação da concentração da solução salina, da fonte de carbono e dos nutrientes permitiu aumento da produção de enzimas celulolíticas para 1,89 ± 0,12 (meio com o dobro de solução salina) e 2,73 ± 0,09 (meio com 2% m/v de BED e nutrientes proporcionais) em frascos agitados. A suplementação da fonte de carbono com farelo de soja, sacarose, licor de pré-tratamento, lactose e glicerol foi estudada e farelo de soja foi selecionado como suplemento do meio. A elaboração de um meio de mistura contendo o dobro de solução salina, farelo de soja e nutrientes proporcionais à concentração da fonte de carbono (meio MIX) permitiu o aumento da produção de enzimas para, em FPU/mL: 3,33 ± 0,10 (MIX15: contém 1,5% m/v de BED), 3,78 ± 0,33 (MIX20) e 3,67 ± 0,34 (MIX30) em frascos agitados. As atividades de xilanases foram superiores a 130 U/Ml utilizando os meios de mistura. Em bioreator de 3L a produção de enzimas celulolíticas utilizando o meio MIX15 atingiu 2,29 ± 0,20 FPU/mL. Para o meio padrão (BED 1% m/v) o pico de atividade obtido foi de 1,14 ± 0,32 FPU/mL. O aumento da concentração da fonte de carbono em bioreator para 3% (m/v) a partir do meio MIX15 resultou no aumento da atividade celulolítica para 4,20 ± 0,34 FPU/mL. Os picos de atividade de xilanases atingiram valores superiores a 180 U/mL em bioreator. O desempenho do coquetel enzimático produzido no meio MIX15 foi avaliado na hidrólise de BED e BH, e comparado ao coquetel produzido no meio padrão e a um coquetel comercialmente disponível (Sigma). Os valores de conversão de celulose em glicose foram superiores para o coquetel MIX15 em relação aos demais coquetéis ao se utilizar 3 ou 5% de sólidos, com ou sem adição de beta-glucosidase comercial (Novozym 188) / Abstract: The production of lignocellulolytic enzymes by Trichoderma reesei RUT-C30 was optimized in shake flasks and 0.5 and 3L bioreactors to maximize the enzymatic titles and volumetric productivity. The carbon sources considered were sugar cane bagasse (1% w/v) pretreated by the hydrothermal process (BH) or steam explosion, with (BED) and without (BEX) delignification. The medium contained proteose peptone, Tween 80 and saline solution. Commercial cellulose Celufloc200 (CE) was used for comparison. Increased production of cellulolytic enzymes in flasks was obtained with BED as carbon source (1.38 ± 0.11 FPU / ml) when compared to CE (0.78 ± 0.14 FPU / ml), and this material was selected as carbon source for further studies. The production of hemicellulases (xylanases) was similar for the two carbon sources (U / mL): 18.03 ± 1.56 with BED and 20.04 ± 1.50 with CE. Variation of the concentration of the salt solution, carbon source and nutrients led to an increased production of cellulolytic enzymes: 1.89 ± 0.12 (medium with doubled saline solution concentration) and 2.73 ± 0.09 (medium with 2% w/v BED and nutrients proportional to the carbon source) in shake flasks. Supplementation of the carbon source with soybean meal, sucrose, pretreatment liquor, lactose and glycerol was studied and soybean meal has been selected as supplement. The preparation of a mixture medium containing doubled saline solution, soybean meal and nutrients proportional to the concentration of the carbon source allowed increasing the production of enzymes for (in FPU / ml): 3.33 ± 0.10 (MIX15 - containing 1.5% w/v BED) , 3.78 ± 0.33 (MIX20) and 3.67 ± 0.34 (MIX30) in shake flasks. Xylanase activities were higher than 130 U/mL. In a 3L bioreactor, production of cellulolytic enzymes using MIX15 medium reached 2.29 ± 0.20 FPU / mL. For the standard medium (BED 1% w/v) the peak activity was 1.14 ± 0.32 FPU / mL. Increasing the concentration of the carbon source in the bioreactor to 3% w/v starting from MIX15 resulted in a cellulolytic activity of 4.20 ± 0.34 FPU / mL. Xylanase activity reached values higher than 180 U/mL in the bioreactor. The performance of the enzyme cocktail produced in MIX15 medium was evaluated for the hydrolysis of BED and BH, and compared to the cocktail produced in the standard medium and to a cocktail commercially available (Sigma). The values of conversion of cellulose to glucose were higher for the cocktail MIX15 compared to the other cocktails when using 3 or 5% solids, with or without adding commercial beta-glucosidase (Novozym 188) / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Químicos / Mestra em Engenharia Química