O Sistema Nervoso Central (SNC) humano é formado por cerca de 86,1 bilhões de neurônios entre o encéfalo e a medula espinhal. O desenvolvimento pré-natal humano (tempo da concepção ao nascimento) possui cerca de 38 semanas, e é dividido na fase embrionária que corresponde ao período das 8 semanas iniciais da gestação, seguido pela fase fetal. A fase embrionária é o período mais vulnerável à ocorrência de anormalidades congênitas. Por ser um órgão com grande período de desenvolvimento, o SNC está sujeito às alterações genéticas, epigenéticas e ambientais. Durante a fase de implantação do embrião, o DNA é mais vulnerável às influências externas, como à fumaça do cigarro, aumentando o risco de retardo do desenvolvimento fetal, o risco de morte súbita pós-natal e de anormalidades do sistema imune. Neste contexto, o objetivo deste trabalho é avaliar os efeitos da exposição à fumaça do cigarro sobre o processo de neuroinflamação da prole de camundongos C57BL/6 expostos à fumaça do cigarro durante a gestação e desafiados ou não com LPS. Para tanto, camundongos C57BL/6 fêmeas prenhes foram expostas à fumaça do cigarro desde o plug vaginal até o nascimento da prole. No 3º dia de vida, os filhotes foram separados para três linhas de trabalho: 1) in vivo: os animais foram desafiados com LPS pelo período de 4h, seguidos de eutanasia e análises de PCR Array do SNC. 2) in vitro: os encéfalos dissecados foram utilizados para a preparação de cultura mista de glia e da cultura enriquecida com neurônio. Após a maturação celular, as células foram estimuladas com LPS 100 ng/mL e, após 24h, foram realizados ensaios de CBA, citometria de fluxo, PCR, dosagem de NO, avaliação de morte celular e metilação global. 3) Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE): após o desmame, os animais foram mantidos em suas caixas moradia por 8 semanas sem nenhum estímulo externo, e então foram imunizados com MOG35-55 para o desenvolvimento da EAE. Nos experimentos in vivo observamos o aumento da transcrição de genes relacionados ao processo inflamatório, como interleucinas e quimiocinas. Em relação aos experimentos in vitro observamos maior crescimento de células astrocitárias (astrogliose), e células da microglia com aumento de moléculas co-estimuladoras (CD80 e CD86) bem como da transcrição e concentração de citocinas pró-inflamatórias e produção de NO. Em cultura enriquecida de neurônio, foi observado aumento na porcentagem de células em apoptose no grupo exposto à fumaça do cigarro desafiados ou não com LPS. O bloqueio da atividade da microglia pela minociclina reverteu a apoptose e diminuiu a produção de NO minimizando a morte celular. Em relação aos experimentos de EAE, os animais expostos à fumaça do cigarro no período gestacional, quando imunizados na vida adulta apresentam aumento no grau da doença bem como maior persistência da mesma quando observado escore clínico, além de acompanhados de um grau maior de infiltrado celular e desmielinização. Desta forma podemos concluir que a exposição à fumaça do cigarro durante o período gestacional leva a uma programação fetal com aumento da resposta neuroinflamatória frente a um estimulo sistêmico, trazendo consequências na vida adulta. / The human central nervous system (CNS) is made up of about 86.1 billion neurons between the brain and the spinal cord. The human prenatal development (time from conception to birth) is about 38 weeks, and is divided into the embryonic phase that corresponds to the period of the initial 8 weeks of gestation, followed by the fetal phase. The embryonic stage is the period most vulnerable to the occurrence of congenital abnormalities. Because it is an organ with a long period of development, the CNS is subject to genetic, epigenetic and environmental changes. During the embryo implantation phase, DNA is more vulnerable to external influences such as cigarette smoke, increasing the risk of delay on fetal development, risk of sudden postnatal death, and abnormalities of the immune system. In this context, the aim of this work is to evaluate the effects of exposure to cigarette smoke on the neuroinflammation process of offspring of C57BL/6 mice exposed to cigarette smoke during gestation and challenged or not with LPS. For this, pregnant female C57BL/6 mice were exposed to cigarette smoke from vaginal plug to offspring birth. On the 3rd day of life the offspring were separated into three lines of work: 1) in vivo: the animals were challenged with 1mg/Kg LPS and after 4h they followed to euthanasia; PCR analysis of the CNS was made in this period. 2) in vitro: dissected encephalons were used for the preparation of mixed culture of glia and the culture enriched with neuron. After cell maturation, the cells were stimulated with 100 ng/mL LPS and, after 24 hours, CBA, flow cytometry, PCR, NO assay, cell death and global methylation assays were performed. 3) Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE): After weaning, the animals were kept in their housing for 8 weeks without any external stimulus, and then were immunized with MOG35-55 for the development of EAE. In the in vivo experiments we observed increased transcription of genes related to the inflammatory process, such as interleukins and chemokines. In vitro experiments showed higher growth of astrocytes (astrogliosis) and microglia cells with increased stimulatory molecules (CD80 and CD86) as well as the transcription and concentration of proinflammatory cytokines and NO production. In the enriched neuron culture, an increase in the percentage of cells in apoptosis was observed in the group exposed to cigarette smoke challenged or not with LPS. Blocking microglial activity by minocycline reversed apoptosis and decreased NO production by minimizing cell death. The EAE experiments shows that the animals exposed to cigarette smoke in the gestational period, when immunized in adulthood, present an increase in the degree of the disease as well as a greater persistence of the disease; The higher as the clinical score higher is the degree of cellular infiltration and demyelination. In this way we can conclude that the exposure to cigarette smoke during the gestational period leads to a fetal programming with increased neuroinflammatory response to a systemic stimulus and that this is able to last until the adult stage.

Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) é um modelo animal para o estudo da Esclerose Múltipla, doença autoimune na qual células do sistema imune atacam a bainha de mielina e os oligodendrócitos, levando a desmielinização, perda axonal e morte neuronal. Astrócitos são importantes na doença e na modulação da neuroinflamação. O estrógeno apresenta ação protetora, porém a ação via receptor acoplado a proteína G (GPER) é pouco conhecido. Como GPER está presente nos astrócitos, o objetivo deste projeto foi verificar se o tratamento com G1 (agonista seletivo de GPER) seria capaz de modular o processo inflamatório presente no SNC. O tratamento com o G1 (3mg/Kg, via subcutânea, durante três dias, iniciando no 5º dia após a indução da EAE) atenuou o escore clínico no pico da doença e alterou a morfologia dos astrócitos da medula espinhal, tanto na substância branca como na cinzenta, sugerindo um efeito anti-inflamatório do G1. Estudos subsequentes in vitro foram feitos para tentar elucidar possíveis vias de ativação relacionadas ao GPER. / Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an animal model for the study of Multiple Sclerosis, an autoimmune disease in which cells of the immune system attack the myelin sheath and oligodendrocytes, leading to demyelination, axonal loss, and neuronal death. Astrocytes are important in disease and modulation of neuroinflammation. Estrogen has protective action, but the action by G protein-coupled estrogen receptor (GPER) is little known. GPER is present in astrocytes, the objective of this project was to verify if treatment with G1 (selective agonist of GPER) would be able to modulate the inflammatory process present in the CNS. Treatment with G1 (3 mg / kg, subcutaneously for three days, beginning on the 5th day after EAE induction) attenuated the clinical score at the peak of the disease and altered the morphology of the spinal cord astrocytes both in white matter and Suggesting an anti-inflammatory effect of G1. Subsequent in vitro studies have been done to try to elucidate possible pathways of activation related to GPER.

INTRODUÇÃO: Atualmente as células da microglia têm recebido grande atenção dentro da resposta imune, isto devido ao fato de que sua ativação por citocinas inflamatórias é capaz de promover a infiltração e destruição do sistema nervoso central (SNC) durante algumas doenças, principalmente no caso da esclerose múltipla (EM). Além de seu papel pró-inflamatório, já demonstrou-se que estas também são capazes de expressar moléculas supressoras como a indoleamina-2,3-dioxigenase (IDO), capaz de suprimir a proliferação de células T. Contudo, ainda pouco se sabe sobre seu verdadeiro papel na patogenia da EM. Recentemente tem sido descrita uma população de células T chamadas Th17, capaz de secretar grandes quantidades de IL-17, IL-21 e GM-CSF possuindo uma importância fundamental na patogenia da EM e de seu modelo murino, a EAE. Nesse contexto, a relação entre as Th17 e as células da microglia pode nos fornecer dados importantes acerca dos mecanismos envolvidos nas lesões observadas no SNC. OBJETIVO: Este trabalho teve como objetivo melhor elucidar a relação existente entre a expressão das moléculas imunes por células da microglia e a ação que estas promovem sobre as células T. MÉTODOS: Utilizamos culturas de células da microglia de linhagem, chamadas C8-B4, assim como cultura primária de células da microglia obtidas a partir sistema nervoso de camundongos C57BL/6 adultos. Caracterizamos o perfil imune da microglia, avaliando a transcrição de genes para citocinas através de PCR em tempo real assim como a expressão de suas moléculas ativadoras por citometria de fluxo. A avaliação da IDO se deu através da expressão da mesma por células da microglia ativadas ou não por LPS ou IFN-?. Ja sua capacidade funcional foi medida através da atividade proliferativa de linfócitos T CD4 específicos para MOG 35-55. RESULTADOS: Nossos resultados demonstraram que as células de ambas as culturas possuem a capacidade de expressar diversas moléculas imunes, tanto pró quanto anti-inflamatórios. Dentre estas observamos TLR-4, TLR-2, IL-6, IL-10 e TGF-?. Além disso, confirmamos a expressão da enzima IDO por estas células. O bloqueio de tal enzima impede o controle que a microglia tem sobre a proliferação dos linfócitos T CD4, tanto in vitro quanto in vivo. No modelo in vivo tal efeito repercute em uma encefalomilite mais severa, onde o quadro clínico do animal não regride. CONCLUSÃO: Os resultados aqui obtidos nos dão a certeza da influência das microglias dentro do contexto inflamatório, afirmando sua capacidade de modular a resposta imune. Além disto, fica clara a importância da enzima IDO, cuja ação dentro do controle de uma autoimunidade demonstra ser altamente necessária / INTRODUCTION: Microglia cells has gained great attention recently because its activation by inflammatory cytokines can promote infiltration and destruction of Central Nervous System (CNS) during some disease, mainly in the case of Multiple Sclerosis (MS). On the other hand, these cells may also express suppressor molecules such as the indoleamine-2,3-dioxygenase (IDO), able to suppress T cell proliferation. However, still little is known about its role in MS pathogenesis. Recently it has been described a new population of T cells called Th17, able to secrete high amounts of IL-17, IL-21 and GM-CSF, with a fundamental importance on MS and its murine model, EAE. In this context, the relationship between Th17 and microglia cells can provide us important data about the mechanisms involved in the establishment of CNS lesions. OBJECTIVES: This work had the objective to better elucidate the relationship between the expression of some molecules by microglia and its role T cell activation. METHODS: Through a cellular lineage knowing as C8-B4 and primary cultures of microglia obtained from CNS of adult mice C57BL6 we investigated the transcription of several genes for cytokines and membrane expression of several pattern recognition receptors. The IDO evaluation was performed after activation with LPS or rIFN-?. Its functional capacity was measured trough its action over T cell proliferation. RESULTS: Our results demonstrated that both cells have the capacity of express several immune molecules, both pro and anti-inflammatory. Among this, we observed TLR-4, TLR-2, IL-6, IL-10 and TGF-?. We also confirmed IDO expression by these cells. The blockade of such enzyme prevents the control of microglia above T CD4 lymphocytes proliferation, both in vitro and in vivo. Using the in vivo model, IDO blocker rendered a encephalomyelitis more severe. Conclusion: The results here obtained give us the certainty of microglia influence in inflammatory context, stating its capacity of modulating the immune response

A saliva de insetos hematófagos possui moléculas capazes de modular o sistema imune do hospedeiro. Com base na literatura a respeito das atividades presentes na saliva de Aedes aegypti, investigamos se o EGS dessa espécie era capaz de modular a EAE. Imunizamos animais C57BL/6 com MOG35-55, e realizamos um tratamento com EGS. O tratamento com EGS diminuiu a incidência da doença e provocou um atraso no aparecimento dos sinais clínicos, além de estes serem mais brandos. Observamos que a modulação se deu na fase de indução da resposta imune, não na efetora. De fato, o EGS consegue suprimir a doença por 4 vias: 1) diminuindo a expressão de MHCII, CD80 e CD86 em células dendríticas, e diminuindo a produção de citocinas responsáveis pela indução das respostas Th1/Th17; 2) induzindo células produtoras de IL-10 in vivo; 3) induzindo apoptose em linfócitos T naive; 4) induzindo células com perfil Th2 produtoras de IL-4 e IL-5. Concluímos que o EGS é capaz de atuar na supressão dos sintomas durante o curso da EAE e na inibição do início da resposta imune. / The saliva of hematophagous insects has molecules that can modulate the host immune system. Based on the literature about activities found in Aedes aegypti saliva, we investigate if SGE of this species could modulate EAE. We have immunized C57BL/6 mice with MOG35-55, and carried out a treatment with SGE. The treatment with SGE reduced the incidence of disease and caused a delay onset of clinical signs making them softer. We have observed that modulation occured in the induction phase of immune response, not in effector phase. In fact, SGE can suppress the disease by four ways: 1) decreasing the expression of MHCII, CD80 and CD86 in dendritic cells and decreasing the production of cytokines responsible for Th1/Th17 response induction; 2) inducing cells producing IL-10 in vivo; 3) inducing apopotosis in naive T lymphocytes; 4) inducing cells Th2 producing IL-4 e IL-5. We came to the conclusion that SGE can act in supressing symptoms during the course of EAE and inhibiting the beggining of autoimmune response.

Introdução: Esclerose múltipla (EM) é uma doença desmielinizante e inflamatória do sistema nervoso central. Seu diagnóstico é clínico, auxiliado pela imagem de ressonância magnética, mas essa imagem não diferencia processos de inflamação e desmielinização. A tomografia por emissão de pósitrons (PET), usando radiofármacos específicos, pode ser uma ferramenta para diferenciar esses processos. O radiofármaco [11C]PK11195 se liga na proteína translocadora 18 kDa (TSPO) presente nas mitocôndrias das células gliais. O radiofármaco [11C]PIB é utilizado para detecção de placa Beta-amiloide, mas tem sido utilizado também na análise do conteúdo de mielina. Esta nova aplicação foi fundamentada na captação deste radiofármaco em substância branca. A utilização em conjunto destes dois radiofármacos pode diferenciar processos de neuroinflamação, desmielinização e remielização através da imagem PET. Objetivo: O objetivo deste trabalho é validar o uso dos radiofármacos [11C]PK11195 e [11C]PIB para estudo pré-clínico para a quantificação de neuroinflamação e quantidade de mielina, respectivamente, na progressão da doença de modelos animais de esclerose múltipla, modelo de roedores, e em seguida realizar análise de lesões em substância cinzenta e substância branca em modelo de primatas não humanos. Material e Métodos Projeto aprovado pelo comitê de ética (UNIFESP 2628300415 e FMUSP 25/15 e 0556/15). O modelo de lisolecitina em ratos (Wistar, machos) foi induzido pela injeção estereotáxica de lisolecitina 1% em dois locais do estriado direito (2 + 2 microL) e no corpo caloso (3 microL). As imagens de PET com [11C]PK11195 e [11C]PIB foram adquiridas nos tempos basal, 3 dias, 1 semana e 4 semanas após a administração estereotáxica. O modelo de encefalomielite autoimune experimental (EAE) em saguis foi induzido por injeção de glicoproteína da mielina do oligodendrócito (MOG) emulsionada em Adjuvante Incompleto de Freund (IFA) ou em Adjuvante Completo de Freund (CFA). As imagens de PET foram adquiridas antes da imunização (basal) e ± 100 dias após a imunização (final). O tecido cerebral foi utilizado para análise imuno-histológica. Resultados: No modelo de lisolecitina em rato foi observado um aumento na captação de [11C]PK11145 no corpo caloso, 25 % (P = 0,002) e no estriado, 24 % (P < 0,05) uma semana após a imunização comparando com a imagem basal. Com o [11C]PIB não foram observadas diferenças significativas. No modelo de EAE em saguis, induzido com MOG/IFA, foi possível observar uma redução significativa da captação de [11C]PIB nas regiões do esplênio do corpo caloso direito de 38,17 % (P = 0,0365), globo pálido direito, 22,75 %, (P = 0,0355), núcleo caudado direito, 29,36 % (P = 0,0284) e córtex cingulado, 18,99 % (P = 0,0453), enquanto para o grupo MOG/CFA foi observada uma redução significativa para a região do córtex motor esquerdo, 9,51 % (P = 0,0083). Com o [11C]PK11195 foi observada uma redução significativa na captação do radiofármacos na imagem intermediária do grupo MOG/IFA comparada com a captação basal nas regiões do córtex somatossensorial direito, 22,8 % (P = 0,0041), córtex de associação direito, 18,98 % (P = 0,0228), córtex subpial direito, 23,37 % (P = 0,0006) e região do núcleo caudado inferior esquerdo, 18,97 % (P = 0,0233). Nos ensaios post mortem realizados com os ratos foi possível observar na imuno-histoquímica uma correlação, entre micróglia ativada (Iba-1) e [11C]PK11195, tanto no corpo caloso como no estriado. Para os saguis foi observado correlação entre [11C]PK11195 e Iba-1 e esta não foi observada para o [11C]PK11195 e GFAP. Na histologia, foi observada uma correlação entre os dados da imagem de [11C]PIB e a técnica de luxol fast blue. Conclusão: A imagem PET com [11C]PK11195 e [11C]PIB foi eficiente para as quantificações de neuroinflamação e mielina, respectivamente, na progressão da doença dos modelos animais (roedor e primata não humano) da EM / Introduction: Multiple sclerosis (MS) is a demyelinating and inflammatory disease of the central nervous system. Its diagnosis is clinical, helped by magnetic resonance imaging, but this image modality does not differentiate between inflammation and demyelination. Positron Emission Tomography (PET), using specific radiopharmaceuticals, can be a tool to differentiate these processes. The radiopharmaceutical [11C]PK11195 binds to the translocator protein 18 kDa (TSPO) present in the mitochondria of glial cells. [11C]PIB is a radiopharmaceutical used for detection of Beta-amyloid plaques, but has also been used in the analysis of myelin content. This new application was based on the white matter uptake of this radiopharmaceutical. The use of these two radiopharmaceuticals together can differentiate processes of neuroinflammation, demyelination and remyelination by the PET imaging. Objective: The objective of this work is to validate the use of tracers [11C]PK11195 and [11C]PIB for preclinical study for the qualification of neuroinflammation and amount of myelin, respectively, in the disease progression of animal models of multiple sclerosis, rodent model, and then perform analysis of grey matter and white matter lesions in non-human primate model. Material and Methods: Project approved by the ethics committee (UNIFESP 2628300415 and FMUSP 25/15 and 0556/15). The rat lysolecithin model (Wistar, male) was induced by stereotactic injection of lysolecithin 1% at two sites of the right striatum (2 + 2 microL) and in the corpus callosum (3 microL). PET images with [11C]PK11195 and [11C]PIB were acquired at baseline, 3 days, 1 week and 4 weeks after stereotactic injection. The experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model in marmosets was induced by injection of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) emulsified in Incomplete Freund\'s Adjuvant (IFA) or Complete Freund\'s Adjuvant (CFA). PET images were acquired prior to immunization (baseline) and ± 100 days after immunization (end of experiment). Brain tissue was used for immunohistochemical analysis. Results: In the rat lysolecithin model, an increase in [11C]PK11145 uptake of 25% (P = 0.002) was observed in the corpus callosum and 24% (P < 0.05) in the striatum, one week after immunization compared to the baseline image. The IFA/MOG and CFA/MOG groups showed clinical signs in 100% of the animals. The comparison between baseline and symptoms time points showed in the CFA/MOG group a significant 11C-PIB uptake reduction only in the left motor cortex, 9.5 % (P = 0.0083). For the IFA/MOG group, a significant decrease in 11C-PIB uptake was observed in the splenium of corpus callosum, 38.4 % (P = 0.0365), globus pallidus, 22.9 % (P = 0.0355) and tail of caudate nucleus, 28.9 % (P = 0.0284), being these 3 regions in the right brain hemisphere, and also in the cingulate cortex (midline above corpus callosum), 19.5 % (P = 0.0453). 11C-PK11195 uptake was significantly decreased in IFA/MOG group in the intermediary time point in the right somatosensorial cortex, 22.08 % (P = 0.0041), right association cortex, 18.98 % (P = 0.0228), right subpial cortex, 23.37 % (P = 0.0006) and left tail of caudate nucleus, 18.97 % (P = 0.0233). In the post mortem analysis performed with rat tissue, a weak correlation between activated microglia (Iba-1) and [11C]PK11195 uptake was observed both in the corpus callosum and in the striatum. For the marmosets we observed correlation between [11C]PK11195 and Iba-1 but we didn\'t observed between [11C]PK11195 and GFAP. In histology, we observed correlation between [11C]PIB and luxol fast blue. Conclusion: The PET images with [11C]PK11195 and [11C]PIB were efficient for quantifying neuroinflammation and myelin content, respectively, in the disease progression of animal models (rodent and nonhuman primate) of MS

INTRODUÇÃO: 50-86% dos pacientes recidivam a hepatite autoimune (HAI) após a suspensão do tratamento imunossupressor. A manutenção da imunossupressão em longo prazo diminui o risco de recidiva, entretanto é necessário ajuste da dose/suspensão do tratamento em 10-30%, em razão do maior risco de neoplasias e infecções. O difosfato de cloroquina (CQ) é droga imunomoduladora que foi utilizada anteriormente em monoterapia para manutenção da remissão da HAI com diminuição da recidiva quando comparada com controle histórico. O objetivo desse estudo foi investigar a eficácia e segurança do CQ na manutenção da remissão em estudo duplo cego e randomizado e avaliar se há um subgrupo com maior benefício ao seu uso. METODOLOGIA: 61 pacientes com diagnóstico provável ou definitivo de HAI em remissão histológica, 90,1% HAI tipo 1; 23% com reatividade do anti-SLA/LP, 56,6% com fibrose avançada (F3/4) à inclusão no estudo, mas com doença hepática compensada, foram randomizados de forma duplo cego e aleatória para receber CQ 250 mg/d ou placebo, durante 36 meses ou até recidiva da doença. No primeiro mês a droga foi utilizada em combinação com a imunossupressão que induziu remissão; com posterior desmame semanal da prednisona, suspensão imediata da azatioprina e manutenção do CQ/placebo até 36 meses. As curvas de sobrevida livre de recidiva foram estimadas pelo método de Kaplan-Meyer e comparadas pelo teste de Log-Rank; as razões de risco e seus respectivos intervalos de confiança foram estimados por regressão simples de Cox. Na regressão múltipla foram avaliadas co-variáveis clinicamente relevantes para recidiva. Para investigar o subgrupo com maior benefício, as interações entre a droga e reatividade de autoanticorpos e perfil de HLA foram analisadas por regressão múltipla de Cox. As variáveis categóricas foram comparadas pelo teste exato de Fisher e as quantitativas pelo teste-t ou teste de Mann-Whitney. Foi considerado estatisticamente significante um valor de p < 0,05. RESULTADOS: 31 pacientes receberam CQ e 30 placebo. Não houve diferenças entre os grupos em relação aos achados clínicos, laboratoriais, histológicos e perfil de HLA. A sobrevida livre de recidiva foi significativamente maior no grupo CQ quando comparada ao placebo (59,3% X 19,9%, p=0,039). Após a suspensão da medicação ao término do estudo, houve 41,6% de recidiva no grupo CQ e 0% no placebo. Na regressão simples de Cox, os fatores associados com recidiva da HAI foram uso placebo, reatividade do anticorpo anti-SLA/LP, perfil de HLA DR3 e DR8. Na regressão múltipla, o uso de placebo (razão de risco de 2,4[IC 95%:1,05- 5,5], p=0,039) e reatividade do anticorpo anti-SLA/LP (razão de risco= 5.4 [IC 95%:1,91-15,3], p=0,002) associaram-se a maior risco de recidiva. Não foi possível definir subgrupo de maior benefício com uso de CQ no que se refere à reatividade do anti-SLA/LP ou perfil de HLA, embora a recidiva tenha ocorrido em 100% dos pacientes anti-SLA/LP(+) no grupo placebo e 50% no grupo CQ. No grupo CQ, 54,8% apresentaram efeitos colaterais, com suspensão da droga em 19,3%. Os efeitos colaterais mais comuns foram prurido e hiperpigmentação cutânea. CONCLUSÕES: O CQ reduziu com segurança o risco de recidiva de HAI, mas não foi possível definir subgrupo com maior benefício com essa medicação / INTRODUCTION: 50-86% of patients relapse autoimmune hepatitis (AIH) after immunosuppressive treatment withdrawal, with a higher risk of progression to liver cirrhosis, death due to liver disease and liver transplantation. The maintenance of long-term immunosuppression decreases the risk of relapse, however, treatment dose adjustment and/or interruption is required in 10-30%, with increased risk of neoplasias and infections. Chloroquine diphosphate (CQ) is an immunomodulatory drug used previously in monotherapy to maintain AIH remission with a decrease risk in relapse rates when compared to a historical control. The aims of this study were to investigate the efficacy and safety of CQ in the maintenance of remission in a double-blind and randomized study, and to evaluate if there is a subgroup with a greater benefit of its use. METHODS: 61 patients with probable or definitive diagnosis of AIH in histological remission, 90.1% type 1; 23% with anti-SLA / LP seropositivity, 56.6% with advanced fibrosis [F3 / 4] at inclusion in the study and with compensated liver disease were randomized double-blindly to receive either CQ 250 mg/day or placebo for 36 months or until relapse. In the first month, the drug was used in combination with the immunosuppressive regimen that induced the remission; with subsequent weekly weaning of prednisone, immediate withdrawal of azathioprine and maintenance of CQ/placebo for up to 36 months. Recurrence-free survival curves were estimated by the Kaplan-Meyer method and compared by the Log-Rank test; the hazard ratios and their respective confidence intervals were estimated by simple Cox regression. Clinically relevant covariables for relapse were re-evaluated bymultiple Cox regression. To investigate the existence of a subgroup with a greater benefit, interactions between the drug and autoantibody reactivity and HLA profile were analyzed by the Cox multiple regression. Categorical variables were compared by Fisher\'s exact test and the quantitative by the t-test or Mann- Whitney test. A p value of < 0.05 was considered statistically significant. RESULTS: 31 patients received CQ and 30 placebo. There were no differences between the two groups in relation to clinical, laboratory, histological and HLA profiles. Relapse-free survival was significantly higher in the CQ group when compared to placebo (59.3% X 19.9%, p=0.039). After antimalarial withdrawal at the end of the study, there was 41.6% relapse in the CQ group and 0% in the placebo. In the Cox simple regression, factors associated with AIH relapse were placebo use, anti-SLA/LP seropositivity, and HLA DR3 and DR8 profiles. In multiple regression, placebo use (Hazard Ratio = 2.4 [95% CI: 1.05-5.5], p = 0.039) and anti-SLA/LP seropositivity (Hazard Ratio = 5.4 [95% CI: 1.91-15.3], p = 0.002) were associated with a higher risk of relapse. It was not possible to define a subgroup with a greater benefit of CQ with respect to anti-SLA/LP positivity or HLA profile, although all anti-SLA/LP(+) patients in placebo group relapsed, compared to 50% in CQ group. In the CQ group, 54.8% had side effects, but 19.3% had drug withdrawal. The most common side effects were pruritus and cutaneous hyperpigmentation. CONCLUSIONS: Chloroquine safely reduced the risk of relapse of AIH, but it was not possible to define a subgroup with greater benefit with medication use

INTRODUÇÂO: A tireoidite crônica autoimune (TCA) é a principal causa de hipotireoidismo adquirido, o qual requer tratamento contínuo com levotiroxina (LT4). Até o momento, não há terapia capaz de regenerar o tecido tireóideo lesado e melhorar sua função. Como a terapia com Laser de baixa intensidade (LILT) foi eficaz em outras doenças autoimunes, bem como na regeneração de vários tecidos, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do Laser de baixa intensidade no tratamento de pacientes com hipotireoidismo decorrente de tireoidite crônica autoimune utilizando-se os seguintes parâmetros de resposta: a) o mapeamento dúplex-Doppler colorido da tireoide; b) a função tireóidea estimada pela dose de LT4 necessária para manter as concentrações séricas de T3 total, T4 total, T4 livre e TSH normais; c) as concentrações séricas de anticorpos antiperoxidase tireóidea (TPOAb) e antitireoglobulina (TgAb). MÉTODOS: Trata-se de ensaio clínico randomizado, placebo-controlado, conduzido no Instituto de Radiologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, de março de 2006 a março de 2009, no qual foram incluídos 43 pacientes com hipotireoidismo causado por TCA. Todos eles apresentavam altas concentrações séricas de TPOAb e/ou TgAb e padrão ultrassonográfico compatível com TCA. Os pacientes foram randomizados em grupo L (submetido à LILT, n = 23) e P (submetido ao placebo, n = 20). Os limites da tireoide foram demarcados com o auxílio da ultrassonografia. Pacientes do grupo L submeteram-se à LILT (830 nm) e os do grupo P à função placebo do mesmo equipamento. Ambos os grupos foram submetidos, no total, à 10 sessões, duas vezes por semana, com a mesma técnica. Realizou-se pré e 30 dias pós-intervenção: o estudo ultrassonográfico (US) pelo modo-B, que incluiu o histograma computadorizado de escala de cinzas para estimar quantitativamente o índice de ecogenicidade; o US-Doppler colorido de amplitude atribuindo-se valores de 0 a 4 para os padrões de vascularização e o US-Doppler pulsado para estimar a velocidade de pico sistólico e o índice de resistividade das artérias tireóideas superiores e inferiores. Após o segundo US, os pacientes descontinuaram a LT4, a qual foi reintroduzida para os pacientes que apresentaram hipotireoidismo, em dose suficiente para obter normalização hormonal. Realizaram-se determinações séricas de T3 total, T4 total, T4 livre, TSH, TPOAb e TgAb pré-intervenção e no 1º, 2º, 3º, 6º e 9º meses pós-suspensão de LT4. RESULTADOS: No US modo-B pós-intervenção, verificou-se aumento estatisticamente significativo do índice de ecogenicidade no grupo L (1,24 ± 0,11) comparado ao P (0,98 ± 0,07; P < 0,001), assim como a proporção de pacientes com volume normal foi estatisticamente maior no grupo L (P = 0,005). O US-Doppler colorido de amplitude mostrou que o valor do padrão de vascularização foi estatisticamente maior no grupo P (2,3 ± 0,27) do que no L (1,87 ± 0,36; P = 0,033). Observou-se redução da dose de LT4 no grupo L (38,59 ± 20,22 g/dia) comparada à do P (106,88 ± 22,9 g/dia; p < 0,001). TPOAb foi menor no grupo L (681,91 ± 317,44 U/mL) do que no P (1176,40 ± 551,9 U/mL; p = 0,043). Não houve redução de TgAb e efeitos adversos. CONCLUSÕES: A LILT foi eficaz no tratamento da TCA, uma vez que no grupo L verificou-se: a) melhora da ecogenicidade, do volume e do padrão de vascularização da glândula tireoide no mapeamento dúplex-Doppler colorido; b) melhora da função da glândula tireoide, evidenciada pela redução da dose de LT4 necessária para tratar o hipotireoidismo c) modulação parcial da autoimunidade, demonstrada por meio da redução das concentrações séricas de TPOAb / INTRODUCTION: A chronic autoimmune thyroiditis (CAT) is the main cause of acquired hypothyroidism which requires continuous treatment with levothyroxine (LT4). So far there has been no such therapy which can make the damaged thyroid tissue regenerate, improving its function. As the low-intensity Laser therapy (LILT) was effective in other autoimmune diseases, as well as in regenerating several tissues, the objective of this study was to evaluate the efficacy of LILT in patients with hypothyroidism caused by CAT by utilizing the following response parameters: A) Color Doppler ultrasonography of thyroid; B) The thyroid function estimated by the dose of LT4 in order to keep the serum concentrations of normal T3, T4, free T4 (fT4) and TSH; C) The serum concentrations of thyroid peroxidase (TPOAb) and thyroglobulin antibodies (TgAb). METHODS: This is a placebo-controlled randomized clinical essay guided at the Institute of Radiology, Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo from March 2006 to March 2009, made up of 43 patients with hypothyroidism caused by CAT. All the patients showed high serum concentrations of TPOAb and/or TgAb and ultrasound pattern compatible with CAT. The patients were randomized in L group (submitted to LILT, n = 23) and P group (submitted to placebo, n = 20). The limits of thyroid were marked off with the help of ultrasonography. The patients in L group were submitted to LILT (830 nm) and the patients in P group were submitted to the placebo function of the same equipment. Both groups were submitted a total of 10 sessions, twice a week, using the same technique. Pre- and 30 days post-intervention were applied: ultrasonographic study (US) by B-mode, which included the grey scale computerized histogram to quantitatively estimate the index of echogenicity; the amplitude color Doppler US with values given from 0 to 4 for the vascularization patterns and the pulsed Doppler US to estimate the systolic peak velocity and the index of resistivity of superior and inferior thyroid arteries. After the second US the patients discontinued the LT4, which was later re-introduced in the patients having hypothyroidism in a certain amount so as to be sufficient to obtain hormonal normalization. Serum determinations of total T3, total T4, fT4, TSH, TPOAb and TgAb pre-intervention were accomplished and also in the 1st, 2nd, 3rd, 6th and 9th month post-suspension of LT4. RESULTS: In post-intervention B-mode US a significant increase in the index of echogenicity in L group (1.24 ± 0.11) was statistically observed compared with the P group (0.98 ± 0.07; P < 0.001), as well as the proportion of patients with normal volume was shown statistically higher in L group (P = 0.005). The amplitude color Doppler US showed the standard value of vascularization was statistically greater in P group (2.3 ± 0.27) than in L group (1.87 ± 0.36; P = 0.033). Pulsed Doppler US showed an increase in the systolic peak velocity of the inferior thyroid arteries in L group (34.47 ± 4.81 cm/s) in relation to P group (26.12 ± 4.29 cm/s; P = 0.016). A reduction in the dose of LT4 in L group (38.59 ± 20.22 g/day) was observed compared with the one in P group (106.88 ± 22.9 g/day; p < 0.001). TPOAb was smaller in L-group (681.91 ± 317.44 U/mL) than in P-group (1176.40 ± 551.9 U/mL; p = 0.043). There was no reduction of TgAb and adverse effects. CONCLUSIONS: LILT was effective in the treatment of CAT, once L group showed: A) amelioration of echogenicity, of volume and of vascularization of the thyroid gland in the color Doppler ultrasonography; B) improvement of thyroid function, featured through the reduction in the necessary dose of LT4 to treat the hypothyroidism; C) partial modulation of autoimmunity demonstrated by reduction of TPOAb serum concentrations

INTRODUÇÂO: A tireoidite crônica autoimune (TCA) é a principal causa de hipotireoidismo adquirido, o qual requer tratamento contínuo com levotiroxina (LT4). Até o momento, não há terapia capaz de regenerar o tecido tireóideo lesado e melhorar sua função. Como a terapia com Laser de baixa intensidade (LILT) foi eficaz em outras doenças autoimunes, bem como na regeneração de vários tecidos, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do Laser de baixa intensidade no tratamento de pacientes com hipotireoidismo decorrente de tireoidite crônica autoimune utilizando-se os seguintes parâmetros de resposta: a) o mapeamento dúplex-Doppler colorido da tireoide; b) a função tireóidea estimada pela dose de LT4 necessária para manter as concentrações séricas de T3 total, T4 total, T4 livre e TSH normais; c) as concentrações séricas de anticorpos antiperoxidase tireóidea (TPOAb) e antitireoglobulina (TgAb). MÉTODOS: Trata-se de ensaio clínico randomizado, placebo-controlado, conduzido no Instituto de Radiologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, de março de 2006 a março de 2009, no qual foram incluídos 43 pacientes com hipotireoidismo causado por TCA. Todos eles apresentavam altas concentrações séricas de TPOAb e/ou TgAb e padrão ultrassonográfico compatível com TCA. Os pacientes foram randomizados em grupo L (submetido à LILT, n = 23) e P (submetido ao placebo, n = 20). Os limites da tireoide foram demarcados com o auxílio da ultrassonografia. Pacientes do grupo L submeteram-se à LILT (830 nm) e os do grupo P à função placebo do mesmo equipamento. Ambos os grupos foram submetidos, no total, à 10 sessões, duas vezes por semana, com a mesma técnica. Realizou-se pré e 30 dias pós-intervenção: o estudo ultrassonográfico (US) pelo modo-B, que incluiu o histograma computadorizado de escala de cinzas para estimar quantitativamente o índice de ecogenicidade; o US-Doppler colorido de amplitude atribuindo-se valores de 0 a 4 para os padrões de vascularização e o US-Doppler pulsado para estimar a velocidade de pico sistólico e o índice de resistividade das artérias tireóideas superiores e inferiores. Após o segundo US, os pacientes descontinuaram a LT4, a qual foi reintroduzida para os pacientes que apresentaram hipotireoidismo, em dose suficiente para obter normalização hormonal. Realizaram-se determinações séricas de T3 total, T4 total, T4 livre, TSH, TPOAb e TgAb pré-intervenção e no 1º, 2º, 3º, 6º e 9º meses pós-suspensão de LT4. RESULTADOS: No US modo-B pós-intervenção, verificou-se aumento estatisticamente significativo do índice de ecogenicidade no grupo L (1,24 ± 0,11) comparado ao P (0,98 ± 0,07; P < 0,001), assim como a proporção de pacientes com volume normal foi estatisticamente maior no grupo L (P = 0,005). O US-Doppler colorido de amplitude mostrou que o valor do padrão de vascularização foi estatisticamente maior no grupo P (2,3 ± 0,27) do que no L (1,87 ± 0,36; P = 0,033). Observou-se redução da dose de LT4 no grupo L (38,59 ± 20,22 g/dia) comparada à do P (106,88 ± 22,9 g/dia; p < 0,001). TPOAb foi menor no grupo L (681,91 ± 317,44 U/mL) do que no P (1176,40 ± 551,9 U/mL; p = 0,043). Não houve redução de TgAb e efeitos adversos. CONCLUSÕES: A LILT foi eficaz no tratamento da TCA, uma vez que no grupo L verificou-se: a) melhora da ecogenicidade, do volume e do padrão de vascularização da glândula tireoide no mapeamento dúplex-Doppler colorido; b) melhora da função da glândula tireoide, evidenciada pela redução da dose de LT4 necessária para tratar o hipotireoidismo c) modulação parcial da autoimunidade, demonstrada por meio da redução das concentrações séricas de TPOAb / INTRODUCTION: A chronic autoimmune thyroiditis (CAT) is the main cause of acquired hypothyroidism which requires continuous treatment with levothyroxine (LT4). So far there has been no such therapy which can make the damaged thyroid tissue regenerate, improving its function. As the low-intensity Laser therapy (LILT) was effective in other autoimmune diseases, as well as in regenerating several tissues, the objective of this study was to evaluate the efficacy of LILT in patients with hypothyroidism caused by CAT by utilizing the following response parameters: A) Color Doppler ultrasonography of thyroid; B) The thyroid function estimated by the dose of LT4 in order to keep the serum concentrations of normal T3, T4, free T4 (fT4) and TSH; C) The serum concentrations of thyroid peroxidase (TPOAb) and thyroglobulin antibodies (TgAb). METHODS: This is a placebo-controlled randomized clinical essay guided at the Institute of Radiology, Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo from March 2006 to March 2009, made up of 43 patients with hypothyroidism caused by CAT. All the patients showed high serum concentrations of TPOAb and/or TgAb and ultrasound pattern compatible with CAT. The patients were randomized in L group (submitted to LILT, n = 23) and P group (submitted to placebo, n = 20). The limits of thyroid were marked off with the help of ultrasonography. The patients in L group were submitted to LILT (830 nm) and the patients in P group were submitted to the placebo function of the same equipment. Both groups were submitted a total of 10 sessions, twice a week, using the same technique. Pre- and 30 days post-intervention were applied: ultrasonographic study (US) by B-mode, which included the grey scale computerized histogram to quantitatively estimate the index of echogenicity; the amplitude color Doppler US with values given from 0 to 4 for the vascularization patterns and the pulsed Doppler US to estimate the systolic peak velocity and the index of resistivity of superior and inferior thyroid arteries. After the second US the patients discontinued the LT4, which was later re-introduced in the patients having hypothyroidism in a certain amount so as to be sufficient to obtain hormonal normalization. Serum determinations of total T3, total T4, fT4, TSH, TPOAb and TgAb pre-intervention were accomplished and also in the 1st, 2nd, 3rd, 6th and 9th month post-suspension of LT4. RESULTS: In post-intervention B-mode US a significant increase in the index of echogenicity in L group (1.24 ± 0.11) was statistically observed compared with the P group (0.98 ± 0.07; P < 0.001), as well as the proportion of patients with normal volume was shown statistically higher in L group (P = 0.005). The amplitude color Doppler US showed the standard value of vascularization was statistically greater in P group (2.3 ± 0.27) than in L group (1.87 ± 0.36; P = 0.033). Pulsed Doppler US showed an increase in the systolic peak velocity of the inferior thyroid arteries in L group (34.47 ± 4.81 cm/s) in relation to P group (26.12 ± 4.29 cm/s; P = 0.016). A reduction in the dose of LT4 in L group (38.59 ± 20.22 g/day) was observed compared with the one in P group (106.88 ± 22.9 g/day; p < 0.001). TPOAb was smaller in L-group (681.91 ± 317.44 U/mL) than in P-group (1176.40 ± 551.9 U/mL; p = 0.043). There was no reduction of TgAb and adverse effects. CONCLUSIONS: LILT was effective in the treatment of CAT, once L group showed: A) amelioration of echogenicity, of volume and of vascularization of the thyroid gland in the color Doppler ultrasonography; B) improvement of thyroid function, featured through the reduction in the necessary dose of LT4 to treat the hypothyroidism; C) partial modulation of autoimmunity demonstrated by reduction of TPOAb serum concentrations

A saliva de insetos hematófagos possui moléculas capazes de modular o sistema imune do hospedeiro. Com base na literatura a respeito das atividades presentes na saliva de Aedes aegypti, investigamos se o EGS dessa espécie era capaz de modular a EAE. Imunizamos animais C57BL/6 com MOG35-55, e realizamos um tratamento com EGS. O tratamento com EGS diminuiu a incidência da doença e provocou um atraso no aparecimento dos sinais clínicos, além de estes serem mais brandos. Observamos que a modulação se deu na fase de indução da resposta imune, não na efetora. De fato, o EGS consegue suprimir a doença por 4 vias: 1) diminuindo a expressão de MHCII, CD80 e CD86 em células dendríticas, e diminuindo a produção de citocinas responsáveis pela indução das respostas Th1/Th17; 2) induzindo células produtoras de IL-10 in vivo; 3) induzindo apoptose em linfócitos T naive; 4) induzindo células com perfil Th2 produtoras de IL-4 e IL-5. Concluímos que o EGS é capaz de atuar na supressão dos sintomas durante o curso da EAE e na inibição do início da resposta imune. / The saliva of hematophagous insects has molecules that can modulate the host immune system. Based on the literature about activities found in Aedes aegypti saliva, we investigate if SGE of this species could modulate EAE. We have immunized C57BL/6 mice with MOG35-55, and carried out a treatment with SGE. The treatment with SGE reduced the incidence of disease and caused a delay onset of clinical signs making them softer. We have observed that modulation occured in the induction phase of immune response, not in effector phase. In fact, SGE can suppress the disease by four ways: 1) decreasing the expression of MHCII, CD80 and CD86 in dendritic cells and decreasing the production of cytokines responsible for Th1/Th17 response induction; 2) inducing cells producing IL-10 in vivo; 3) inducing apopotosis in naive T lymphocytes; 4) inducing cells Th2 producing IL-4 e IL-5. We came to the conclusion that SGE can act in supressing symptoms during the course of EAE and inhibiting the beggining of autoimmune response.

INTRODUÇÃO: 50-86% dos pacientes recidivam a hepatite autoimune (HAI) após a suspensão do tratamento imunossupressor. A manutenção da imunossupressão em longo prazo diminui o risco de recidiva, entretanto é necessário ajuste da dose/suspensão do tratamento em 10-30%, em razão do maior risco de neoplasias e infecções. O difosfato de cloroquina (CQ) é droga imunomoduladora que foi utilizada anteriormente em monoterapia para manutenção da remissão da HAI com diminuição da recidiva quando comparada com controle histórico. O objetivo desse estudo foi investigar a eficácia e segurança do CQ na manutenção da remissão em estudo duplo cego e randomizado e avaliar se há um subgrupo com maior benefício ao seu uso. METODOLOGIA: 61 pacientes com diagnóstico provável ou definitivo de HAI em remissão histológica, 90,1% HAI tipo 1; 23% com reatividade do anti-SLA/LP, 56,6% com fibrose avançada (F3/4) à inclusão no estudo, mas com doença hepática compensada, foram randomizados de forma duplo cego e aleatória para receber CQ 250 mg/d ou placebo, durante 36 meses ou até recidiva da doença. No primeiro mês a droga foi utilizada em combinação com a imunossupressão que induziu remissão; com posterior desmame semanal da prednisona, suspensão imediata da azatioprina e manutenção do CQ/placebo até 36 meses. As curvas de sobrevida livre de recidiva foram estimadas pelo método de Kaplan-Meyer e comparadas pelo teste de Log-Rank; as razões de risco e seus respectivos intervalos de confiança foram estimados por regressão simples de Cox. Na regressão múltipla foram avaliadas co-variáveis clinicamente relevantes para recidiva. Para investigar o subgrupo com maior benefício, as interações entre a droga e reatividade de autoanticorpos e perfil de HLA foram analisadas por regressão múltipla de Cox. As variáveis categóricas foram comparadas pelo teste exato de Fisher e as quantitativas pelo teste-t ou teste de Mann-Whitney. Foi considerado estatisticamente significante um valor de p < 0,05. RESULTADOS: 31 pacientes receberam CQ e 30 placebo. Não houve diferenças entre os grupos em relação aos achados clínicos, laboratoriais, histológicos e perfil de HLA. A sobrevida livre de recidiva foi significativamente maior no grupo CQ quando comparada ao placebo (59,3% X 19,9%, p=0,039). Após a suspensão da medicação ao término do estudo, houve 41,6% de recidiva no grupo CQ e 0% no placebo. Na regressão simples de Cox, os fatores associados com recidiva da HAI foram uso placebo, reatividade do anticorpo anti-SLA/LP, perfil de HLA DR3 e DR8. Na regressão múltipla, o uso de placebo (razão de risco de 2,4[IC 95%:1,05- 5,5], p=0,039) e reatividade do anticorpo anti-SLA/LP (razão de risco= 5.4 [IC 95%:1,91-15,3], p=0,002) associaram-se a maior risco de recidiva. Não foi possível definir subgrupo de maior benefício com uso de CQ no que se refere à reatividade do anti-SLA/LP ou perfil de HLA, embora a recidiva tenha ocorrido em 100% dos pacientes anti-SLA/LP(+) no grupo placebo e 50% no grupo CQ. No grupo CQ, 54,8% apresentaram efeitos colaterais, com suspensão da droga em 19,3%. Os efeitos colaterais mais comuns foram prurido e hiperpigmentação cutânea. CONCLUSÕES: O CQ reduziu com segurança o risco de recidiva de HAI, mas não foi possível definir subgrupo com maior benefício com essa medicação / INTRODUCTION: 50-86% of patients relapse autoimmune hepatitis (AIH) after immunosuppressive treatment withdrawal, with a higher risk of progression to liver cirrhosis, death due to liver disease and liver transplantation. The maintenance of long-term immunosuppression decreases the risk of relapse, however, treatment dose adjustment and/or interruption is required in 10-30%, with increased risk of neoplasias and infections. Chloroquine diphosphate (CQ) is an immunomodulatory drug used previously in monotherapy to maintain AIH remission with a decrease risk in relapse rates when compared to a historical control. The aims of this study were to investigate the efficacy and safety of CQ in the maintenance of remission in a double-blind and randomized study, and to evaluate if there is a subgroup with a greater benefit of its use. METHODS: 61 patients with probable or definitive diagnosis of AIH in histological remission, 90.1% type 1; 23% with anti-SLA / LP seropositivity, 56.6% with advanced fibrosis [F3 / 4] at inclusion in the study and with compensated liver disease were randomized double-blindly to receive either CQ 250 mg/day or placebo for 36 months or until relapse. In the first month, the drug was used in combination with the immunosuppressive regimen that induced the remission; with subsequent weekly weaning of prednisone, immediate withdrawal of azathioprine and maintenance of CQ/placebo for up to 36 months. Recurrence-free survival curves were estimated by the Kaplan-Meyer method and compared by the Log-Rank test; the hazard ratios and their respective confidence intervals were estimated by simple Cox regression. Clinically relevant covariables for relapse were re-evaluated bymultiple Cox regression. To investigate the existence of a subgroup with a greater benefit, interactions between the drug and autoantibody reactivity and HLA profile were analyzed by the Cox multiple regression. Categorical variables were compared by Fisher\'s exact test and the quantitative by the t-test or Mann- Whitney test. A p value of < 0.05 was considered statistically significant. RESULTS: 31 patients received CQ and 30 placebo. There were no differences between the two groups in relation to clinical, laboratory, histological and HLA profiles. Relapse-free survival was significantly higher in the CQ group when compared to placebo (59.3% X 19.9%, p=0.039). After antimalarial withdrawal at the end of the study, there was 41.6% relapse in the CQ group and 0% in the placebo. In the Cox simple regression, factors associated with AIH relapse were placebo use, anti-SLA/LP seropositivity, and HLA DR3 and DR8 profiles. In multiple regression, placebo use (Hazard Ratio = 2.4 [95% CI: 1.05-5.5], p = 0.039) and anti-SLA/LP seropositivity (Hazard Ratio = 5.4 [95% CI: 1.91-15.3], p = 0.002) were associated with a higher risk of relapse. It was not possible to define a subgroup with a greater benefit of CQ with respect to anti-SLA/LP positivity or HLA profile, although all anti-SLA/LP(+) patients in placebo group relapsed, compared to 50% in CQ group. In the CQ group, 54.8% had side effects, but 19.3% had drug withdrawal. The most common side effects were pruritus and cutaneous hyperpigmentation. CONCLUSIONS: Chloroquine safely reduced the risk of relapse of AIH, but it was not possible to define a subgroup with greater benefit with medication use