INTRODUÇÃO: Apesar dos primeiros relatos sobre o uso clínico de células estromais derivadas do tecido adiposo (ADSC) sugerirem que esta abordagem seja factível e efetiva na reconstrução de partes moles, não existem na literatura ensaios clínicos randomizados e com inclusão de controles. Assim sendo, foi objetivo deste estudo investigar se um novo protocolo para o isolamento de ADSC e seu uso em conjunto com os enxertos de gordura é de fato capaz de aumentar a sobrevivência destes enxertos. MÉTODOS: Pacientes com microssomia craniofacial (n=18) foram selecionados e randomicamente distribuídos para o grupo EC (com suplementação de ADSC) ou o grupo EE (sem suplementação de ADSC). Para o grupo EC, ADSC imediatamente isoladas a partir de metade do volume lipoaspirado foram utilizadas para o enriquecimento de células progenitoras do enxerto. A quantidade de tecido adiposo transplantado foi determinada pela simetria com o lado não afetado, não sendo realizado qualquer tipo de supercorreção. O número total de células viáveis isoladas antes e após a suplementação dos enxertos de gordura foi calculado, e através de citometria de fluxo estas células foram examinadas quanto à presença de marcadores de superfície para células mesenquimais. Tomografia computadorizada foi realizada para avaliar ambas as hemifaces no pré-operatório e no pós-operatório de seis meses. A espessura do revestimento de partes moles em quatro diferentes pontos de referência e o volume das hemifaces foram calculados. Morbidade geral e variáveis transoperatórias foram registradas. RESULTADOS: Para ambos os grupos o volume médio injetado foi de aproximadamente 28 mL. O número médio de células viáveis isoladas antes e após a suplementação dos enxertos foi 5,6 x 105 e 9,9 x 105 células por mL de tecido adiposo (p=0,015). Análise de citometria de fluxo revelou que ADSC foram positivas para marcadores de células mesenquimais (>95% para CD 73 e CD 105). No pós-operatório de seis meses, o índice de espessura média nos pontos de 1 a 4 foi de 0,91 (p=0,002), 1,02 (p=0,01), 1,05 (p=0,001), e 1,00 (p=0,04) no grupo EC, e 0,80 (p=0,58), 0,95 (p=0,18), 0,85 (p=0,009), e 0,84 (p=0,59) no grupo EE. Para o grupo EC o volume de gordura mantido após seis meses foi de 84 % e para o grupo EE foi de 51 % (p=0,003). Nenhuma complicação foi detectada. CONCLUSÕES: Estes resultados sugerem que o isolamento e a suplementação de ADSC é efetivo, seguro e superior à lipoenxertia convencional para o aumento de partes moles da face em pacientes portadores de microssomia craniofacial / INTRODUCTION: Although first reports of the clinical use of adipose-derived stromal cells (ADSC) suggest that this approach may be feasible and effective for soft tissue reconstruction, there is a lack of randomized, controlled clinical trials in the literature. Hence, this study aimed to investigate whether a novel protocol for isolation of ADSC and their use in combination with fat tissue could really improve the long-term retention of the grafts. METHODS: Patients with craniofacial microsomia (n=18) were selected and randomly assigned to group EC (with supplementation of ADSC) or group EE (without supplementation of ADSC). For group EC, ADSC freshly isolated from half of the aspirated fat sample were used to enrich for progenitor cells in the graft. Amount of transplanted adipose tissue was determined by trying to obtain symmetry with the unaffected side without any overcorrection. Number of viable cells isolated before and after the supplementation of the grafts was calculated, and these cells were examined for mesenchymal cell surface markers using flow cytometry. Computed tomography was performed to assess both hemifaces preoperatively and at six months postoperatively. Soft tissue thicknesses at four different reference points and the hemifaces volume were calculated. Overall morbidity and surgical variables were recorded. RESULTS: For both groups mean injected volume was 28 mL. Average number of viable cells isolated before and after supplementation of the grafts was 5,6 x 105 and 9,9 x 105 cells per mL of fat tissue (p=0,015). Flow cytometry analysis revealed that the ADSC were positive for mesenchymal cell markers (>95% for CD 73 and CD 105). At six months postoperatively, average thickness ratio at points 1 to 4 was 0,91 (p=0,002), 1,02 (p=0,01), 1,05 (p=0,001), and 1,00 (p=0,04) in group EC, and 0,80 (p=0,58), 0,95 (p=0,18), 0,85 (p=0,009), and 0,84 (p=0,59) in group EE. For group EC surviving fat volume at six months was 84 % and for group EE it was 51 % (p=0,003). No complications were detected. CONCLUSIONS: These results suggest that this strategy for isolation and supplementation of ADSC is effective, safe and superior to conventional lipoinjection for facial recontouring in patients with craniofacial microsomia

Nesta dissertação foi proposta a avaliação da estratégia de coleta de células progenitoras hematopoéticas por aférese ocorridas no Hemorio no período de julho de 2004 a julho de 2015 com o objetivo de verificar se a eficiência ou a eficácia de coleta se deterioram nos dias subsequentes. Os resultados desse estudo podem indicar que há um dia mais favorável para a coleta, no qual o processamento de maiores volumes de sangue poderá aumentar a chance de sucesso, reservando os dias subsequentes como exceção e não como regra, reduzindo os riscos e os custos associados às coletas múltiplas. INTRODUÇÃO: Nos dias de hoje o transplante de medula óssea tem papel relevante no tratamento de diversas neoplasias não hematológicas e hematológicas como o mieloma múltiplo e o linfoma. O processo de coleta dessas células através de múltiplas punções na medula óssea é um limitante para seu uso. As células progenitoras hematopoiéticas do sangue periférico coletadas por aférese automatizada representam a principal fonte para o transplante de medula óssea, quer pela facilidade do método, quer pela recuperação hematopoiética mais precoce ou pelo baixo risco de eventos adversos. Embora essa metodologia apresente diversos benefícios, ainda é necessário buscar alternativas para melhorar sua eficácia. MATERIAL E MÉTODOS: Foram estudados 109 procedimentos de aférese em 47 pacientes mobilizados apenas com G-CSF e com coleta iniciada no D5 de mobilização. Foi feita a análise da eficácia e eficiência desses procedimentos nos pacientes submetidos ao menos a 2 procedimentos em dias subsequentes, com comparação dos resultados do dia 1 com dia 2 e, deste com o 3. Também foram avaliadas as variáveis células CD34+ pré coleta e volemias processadas. RESULTADOS: Houve diferença estatisticamente significante entre as eficácias dos dias 1, 2 e 3. A eficiência e as volemias processadas não apresentaram diferença e, a contagem de células CD34+ pré coleta só foi relevante na comparação do 2° dia de coleta com o 3°. A média institucional do coeficiente de eficiência foi de 50.51 %. DISCUSSÃO: A eficácia do procedimento de aférese depende de fatores físicos e biológicos. A maior eficácia no 1° dia de coleta em relação ao 2° e 3 °dia sem que haja alteração dos fatores físicos nos leva a sugerir que o comportamento biológico do paciente é responsável por esse resultado. Este depende da quantidade das células CD34+ pré coleta e do recrutamento intra aférese. Como não houve variação expressiva das células CD34+ pré coleta acreditamos que o recrutamento foi o responsável por esses resultados. Portanto sugerimos que a planejamento da coleta de células progenitoras hematopoéticas do sangue periférico seja feito de modo a atingir a meta em um único dia, eventualmente utilizando o dia 2 e 3 para complementação. Assim sendo os procedimentos de aférese com o manejo adequado da toxidade ao anticoagulante, devem permitir o processamento de maiores volumes de sangue, visando, quando possível, atingir a meta de coleta em um único procedimento. / In this dissertation, the evaluation of the hematopoietic progenitor cell collection strategy for hematopoietic stem cells at Hemorio in the period from July 2004 to July 2015 was proposed, in order to verify if the collection efficiency or efficacy deteriorates on subsequent days. The results of this study may indicate that there is a more favorable day for collection, in which the processing of larger blood volumes may increase the chance of success, reserving the subsequent days as an exception rather than as a rule, reducing the risks and associated costs collection. INTRODUCTION: Bone marrow transplantation has a relevant role in the treatment of several non-hematological and hematological malignancies such as multiple myeloma and lymphoma. The process of collecting these cells through multiple punctures in the bone marrow is a limiting factor for their use. Peripheral blood hematopoietic progenitor cells collected by automated apheresis represent the main source for bone marrow transplantation, either by the ease of the method, by the earlier hematopoietic recovery or by the low risk of adverse events. Although this methodology has several benefits, it is still necessary to seek alternatives to improve its effectiveness. MATERIALS AND METHODS: A total of 109 apheresis procedures were studied in 47 patients mobilized with G-CSF alone and with collection initiated in D5 of mobilization. The efficacy and efficiency of these procedures were analyzed in patients submitted to at least 2 procedures on subsequent days, with a comparison of the results from day 1 to day 2 and from day 2 to day 3. Also, the variables CD34+ pre-collection and volemia processed were analyzed. RESULTS: There was a statistically significant difference between the efficacy of days 1, 2 and 3. Efficiency and volume of processed blood volume did not show any difference, and pre-collection CD34 + cell count was only relevant when comparing the 2 nd day of collection with the 3rd. The institutional average of the coefficient of efficiency was 50.51%. DISCUSSION: The efficacy of the apheresis procedure depends on physical and biological factors. The greater efficacy in the 1st day of collection in relation to 2nd and 3rd day without changes in physical factors leads us to suggest that the biological behavior of the patient is responsible for this result. This depends on the amount of pre-collection CD34+ cells and intra-apheresis recruitment. As there was no expressive variation of pre-collection CD34+ cells, we believe that recruitment was responsible for these results. Therefore, we suggest that the planning of collection of hematopoietic progenitor cells from the peripheral blood be done in order to reach the goal in a single day, possibly using day 2 and 3 for complementation. Therefore, apheresis procedures with appropriate anticoagulant toxicity should allow the processing of larger volumes of blood, aiming to reach the collection goal in a single procedure.

Mobilização inadequada de células progenitoras hematopoéticas (CPH) tem sido observada em 10 - 30% dos pacientes submetidos a transplante de medula óssea (TMO) autogênico para tratamento de doenças onco-hematológicas. Os fatores relacionados com má resposta à mobilização ainda não estão totalmente estabelecidos. Apresentamos uma análise retrospectiva de pacientes submetidos à TMO autogênico com o objetivo de identificar variáveis associadas com resposta ruim ao regime de mobilização utilizado. Casuística e Métodos: Fizeram parte desta análise 307 pacientes com diferentes diagnósticos, tratados com TMO autogênico em uma única Instituição, no período de Abril de 2001 a Abril de 2007. Todos os pacientes incluídos no estudo foram submetidos a um único regime de mobilização baseado na administração de ciclofosfamida (dose total de 60-120 mg/kg de peso IV) e fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF) (dose diária de 6 - 17 ug/(kg de peso)/dia SC). O sucesso na resposta ao regime de mobilização foi definido quando um número maior ou igual a 2,0x10 (6) células CD34 + /(kg de peso) foi coletado do sangue periférico com até três procedimentos de leucaférese. Resultados: Dos pacientes analisados, 260 apresentaram sucesso na mobilização (84,7%). Nestes pacientes, um número mediano de 3,67 (2,0 - 46,0) células CD34+ /(kg de peso) foi coletado por paciente com um número mediano de 1 (1-3) procedimento de leucaférese. O insucesso na mobilização foi observado em 47 pacientes (15,3%): 24 (7,8%) que foram submetidos à coleta de CPH de sangue periférico, porém não coletaram número maior ou igual 2,0x10 (6) células CD34+/(kg de peso) com pelo menos três procedimentos de leucaférese; e, 23 (7,5%) foram submetidos à coleta de CPH por punção da medula óssea, por não terem atingido número mínimo de 10 células CD34+/mm3 no sangue periférico para realização de leucaférese. De acordo com análise univariada, os fatores associados com o insucesso foram: diagnóstico (P < 0,0001), tempo de doença (P < 0,0001), número prévio de ciclos de quimioterapia (P = 0,0001), exposição prévia a agentes alquilantes (P = 0.0003) e a mitoxantrone (P = 0,0006), contagem de plaquetas pré-mobilização <150.000/mm3 (P = 0,0006) e intervalo entre o início da mobilização e o pico de células CD 34+ no sangue periférico (P < 0,0001). Idade, sexo, atividade da doença e envolvimento medular ao início da mobilização, tratamento prévio com radioterapia e exposição a análogos da platina não mostraram correlação significativa na resposta à mobilização. Após análise multivariada, as variáveis que permaneceram associadas com insucesso na mobilização foram: diagnóstico (P = 0,0232), número prévio de ciclos da quimioterapia (P = 0,0167), tratamento prévio com mitoxantrone (P = 0,0285) e contagem de plaquetas pré-mobilização < 150.000/mm3 (P = 0,0423). Conclusão: A carga cumulativa de quimioterapia administrada, exposição prévia à mitoxantrone, contagem de plaquetas pré-mobilização e diagnóstico foram os fatores independentes relacionados com a falha na resposta à mobilização. Os achados obtidos podem auxiliar no reconhecimento de pacientes de risco para resposta ruim à mobilização e permitir um planejamento alternativo ou mais agressivo no regime de mobilização para este grupo de pacientes. / Inadequate stem cells mobilization is seen in 10-30% of patients undergoing autotransplantation for hematologic malignancies. Factors affecting peripheral blood progenitor cell (PBSC) mobilization have not been clearly established. We retrospectively reviewed the data of patients treated by autologous bone marrow transplantation (BMT) with the aim to identify factors associated with poor PBSC mobilization. Design and Methods: We evaluated 307 patients with different diagnoses, submitted to autologous BMT between April 2001 and April 2007. PBSC were collected following mobilization with cyclophosphamide (60-120 mg/kg of weight IV) and granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) (dose of 6-17 ug/kg of weight/day SC). Success in mobilization was defined when > ou = a 2,0x10(6) CD34+ cells/(kg weight) could be collected from the peripheral blood with a maximum of three leukapheresis procedures. Clinical and laboratory parameters at the time of mobilization were analyzed for correlations with the number of CD34+ cells collected. Results: Two hundred and sixty patients (84.7%) presented success in mobilization. In this group, a median of 3.67 (2.0-46.0) CD34+ cells/(kg weight) was collected per patient in a median of 1(1-3) leukapheresis procedure. Poor response to mobilization was observed in 47 patients (15.3%): 24 (7.8%) were submitted to PBSC collection but didn\'t collected at least 2.0 x 106 CD34+ cells/(kg weight) with three leukapheresis procedures and 23 (7.5%) didn\'t reach an absolute number count of 10 CD34+ cells/mm3 in the peripheral blood to start collection by leukapheresis. In univariate analysis poorer PBSC mobilization was associated with diagnosis (Pp < 0.0001), time interval from the diagnosis to mobilization (P < 0.0001), number of cycles of previous chemotherapy (P = 0.0001), previous treatment with alkylating agents (P = 0.0003) and mitoxantrone (P = 0.0006), platelet count <150.000/mm3 before mobilization (P = 0.0006) and interval between mobilization and peak of CD34+ cells in peripheral blood (P < 0.0001). No significant correlation was found with age, gender, disease status, marrow involvement at mobilization, prior radiation therapy and exposition to platin analogues. In the stepwise regression model, diagnosis (P = 0.0232), number of cycles of previous chemotherapy (P = 0.0167), previous treatment with mitoxantrone (P = 0.0285) and platelet count <150.000/mm3 before mobilization (P = 0.0423) were found to be independent negative predictive factors for CD34+ cells mobilization. Conclusion: Cumulative load of chemotherapy, exposition to Mitoxantrone, platelet count just prior to mobilization and diagnosis were independent factors related to poor progenitor cells mobilization. These results could help in the previously recognition of patients at risk for poor or no response to mobilization and allow to plan an alternative or more aggressive regimen for this group of patients.

Nesta dissertação foi proposta a avaliação da estratégia de coleta de células progenitoras hematopoéticas por aférese ocorridas no Hemorio no período de julho de 2004 a julho de 2015 com o objetivo de verificar se a eficiência ou a eficácia de coleta se deterioram nos dias subsequentes. Os resultados desse estudo podem indicar que há um dia mais favorável para a coleta, no qual o processamento de maiores volumes de sangue poderá aumentar a chance de sucesso, reservando os dias subsequentes como exceção e não como regra, reduzindo os riscos e os custos associados às coletas múltiplas. INTRODUÇÃO: Nos dias de hoje o transplante de medula óssea tem papel relevante no tratamento de diversas neoplasias não hematológicas e hematológicas como o mieloma múltiplo e o linfoma. O processo de coleta dessas células através de múltiplas punções na medula óssea é um limitante para seu uso. As células progenitoras hematopoiéticas do sangue periférico coletadas por aférese automatizada representam a principal fonte para o transplante de medula óssea, quer pela facilidade do método, quer pela recuperação hematopoiética mais precoce ou pelo baixo risco de eventos adversos. Embora essa metodologia apresente diversos benefícios, ainda é necessário buscar alternativas para melhorar sua eficácia. MATERIAL E MÉTODOS: Foram estudados 109 procedimentos de aférese em 47 pacientes mobilizados apenas com G-CSF e com coleta iniciada no D5 de mobilização. Foi feita a análise da eficácia e eficiência desses procedimentos nos pacientes submetidos ao menos a 2 procedimentos em dias subsequentes, com comparação dos resultados do dia 1 com dia 2 e, deste com o 3. Também foram avaliadas as variáveis células CD34+ pré coleta e volemias processadas. RESULTADOS: Houve diferença estatisticamente significante entre as eficácias dos dias 1, 2 e 3. A eficiência e as volemias processadas não apresentaram diferença e, a contagem de células CD34+ pré coleta só foi relevante na comparação do 2° dia de coleta com o 3°. A média institucional do coeficiente de eficiência foi de 50.51 %. DISCUSSÃO: A eficácia do procedimento de aférese depende de fatores físicos e biológicos. A maior eficácia no 1° dia de coleta em relação ao 2° e 3 °dia sem que haja alteração dos fatores físicos nos leva a sugerir que o comportamento biológico do paciente é responsável por esse resultado. Este depende da quantidade das células CD34+ pré coleta e do recrutamento intra aférese. Como não houve variação expressiva das células CD34+ pré coleta acreditamos que o recrutamento foi o responsável por esses resultados. Portanto sugerimos que a planejamento da coleta de células progenitoras hematopoéticas do sangue periférico seja feito de modo a atingir a meta em um único dia, eventualmente utilizando o dia 2 e 3 para complementação. Assim sendo os procedimentos de aférese com o manejo adequado da toxidade ao anticoagulante, devem permitir o processamento de maiores volumes de sangue, visando, quando possível, atingir a meta de coleta em um único procedimento. / In this dissertation, the evaluation of the hematopoietic progenitor cell collection strategy for hematopoietic stem cells at Hemorio in the period from July 2004 to July 2015 was proposed, in order to verify if the collection efficiency or efficacy deteriorates on subsequent days. The results of this study may indicate that there is a more favorable day for collection, in which the processing of larger blood volumes may increase the chance of success, reserving the subsequent days as an exception rather than as a rule, reducing the risks and associated costs collection. INTRODUCTION: Bone marrow transplantation has a relevant role in the treatment of several non-hematological and hematological malignancies such as multiple myeloma and lymphoma. The process of collecting these cells through multiple punctures in the bone marrow is a limiting factor for their use. Peripheral blood hematopoietic progenitor cells collected by automated apheresis represent the main source for bone marrow transplantation, either by the ease of the method, by the earlier hematopoietic recovery or by the low risk of adverse events. Although this methodology has several benefits, it is still necessary to seek alternatives to improve its effectiveness. MATERIALS AND METHODS: A total of 109 apheresis procedures were studied in 47 patients mobilized with G-CSF alone and with collection initiated in D5 of mobilization. The efficacy and efficiency of these procedures were analyzed in patients submitted to at least 2 procedures on subsequent days, with a comparison of the results from day 1 to day 2 and from day 2 to day 3. Also, the variables CD34+ pre-collection and volemia processed were analyzed. RESULTS: There was a statistically significant difference between the efficacy of days 1, 2 and 3. Efficiency and volume of processed blood volume did not show any difference, and pre-collection CD34 + cell count was only relevant when comparing the 2 nd day of collection with the 3rd. The institutional average of the coefficient of efficiency was 50.51%. DISCUSSION: The efficacy of the apheresis procedure depends on physical and biological factors. The greater efficacy in the 1st day of collection in relation to 2nd and 3rd day without changes in physical factors leads us to suggest that the biological behavior of the patient is responsible for this result. This depends on the amount of pre-collection CD34+ cells and intra-apheresis recruitment. As there was no expressive variation of pre-collection CD34+ cells, we believe that recruitment was responsible for these results. Therefore, we suggest that the planning of collection of hematopoietic progenitor cells from the peripheral blood be done in order to reach the goal in a single day, possibly using day 2 and 3 for complementation. Therefore, apheresis procedures with appropriate anticoagulant toxicity should allow the processing of larger volumes of blood, aiming to reach the collection goal in a single procedure.

Mobilização inadequada de células progenitoras hematopoéticas (CPH) tem sido observada em 10 - 30% dos pacientes submetidos a transplante de medula óssea (TMO) autogênico para tratamento de doenças onco-hematológicas. Os fatores relacionados com má resposta à mobilização ainda não estão totalmente estabelecidos. Apresentamos uma análise retrospectiva de pacientes submetidos à TMO autogênico com o objetivo de identificar variáveis associadas com resposta ruim ao regime de mobilização utilizado. Casuística e Métodos: Fizeram parte desta análise 307 pacientes com diferentes diagnósticos, tratados com TMO autogênico em uma única Instituição, no período de Abril de 2001 a Abril de 2007. Todos os pacientes incluídos no estudo foram submetidos a um único regime de mobilização baseado na administração de ciclofosfamida (dose total de 60-120 mg/kg de peso IV) e fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF) (dose diária de 6 - 17 ug/(kg de peso)/dia SC). O sucesso na resposta ao regime de mobilização foi definido quando um número maior ou igual a 2,0x10 (6) células CD34 + /(kg de peso) foi coletado do sangue periférico com até três procedimentos de leucaférese. Resultados: Dos pacientes analisados, 260 apresentaram sucesso na mobilização (84,7%). Nestes pacientes, um número mediano de 3,67 (2,0 - 46,0) células CD34+ /(kg de peso) foi coletado por paciente com um número mediano de 1 (1-3) procedimento de leucaférese. O insucesso na mobilização foi observado em 47 pacientes (15,3%): 24 (7,8%) que foram submetidos à coleta de CPH de sangue periférico, porém não coletaram número maior ou igual 2,0x10 (6) células CD34+/(kg de peso) com pelo menos três procedimentos de leucaférese; e, 23 (7,5%) foram submetidos à coleta de CPH por punção da medula óssea, por não terem atingido número mínimo de 10 células CD34+/mm3 no sangue periférico para realização de leucaférese. De acordo com análise univariada, os fatores associados com o insucesso foram: diagnóstico (P < 0,0001), tempo de doença (P < 0,0001), número prévio de ciclos de quimioterapia (P = 0,0001), exposição prévia a agentes alquilantes (P = 0.0003) e a mitoxantrone (P = 0,0006), contagem de plaquetas pré-mobilização <150.000/mm3 (P = 0,0006) e intervalo entre o início da mobilização e o pico de células CD 34+ no sangue periférico (P < 0,0001). Idade, sexo, atividade da doença e envolvimento medular ao início da mobilização, tratamento prévio com radioterapia e exposição a análogos da platina não mostraram correlação significativa na resposta à mobilização. Após análise multivariada, as variáveis que permaneceram associadas com insucesso na mobilização foram: diagnóstico (P = 0,0232), número prévio de ciclos da quimioterapia (P = 0,0167), tratamento prévio com mitoxantrone (P = 0,0285) e contagem de plaquetas pré-mobilização < 150.000/mm3 (P = 0,0423). Conclusão: A carga cumulativa de quimioterapia administrada, exposição prévia à mitoxantrone, contagem de plaquetas pré-mobilização e diagnóstico foram os fatores independentes relacionados com a falha na resposta à mobilização. Os achados obtidos podem auxiliar no reconhecimento de pacientes de risco para resposta ruim à mobilização e permitir um planejamento alternativo ou mais agressivo no regime de mobilização para este grupo de pacientes. / Inadequate stem cells mobilization is seen in 10-30% of patients undergoing autotransplantation for hematologic malignancies. Factors affecting peripheral blood progenitor cell (PBSC) mobilization have not been clearly established. We retrospectively reviewed the data of patients treated by autologous bone marrow transplantation (BMT) with the aim to identify factors associated with poor PBSC mobilization. Design and Methods: We evaluated 307 patients with different diagnoses, submitted to autologous BMT between April 2001 and April 2007. PBSC were collected following mobilization with cyclophosphamide (60-120 mg/kg of weight IV) and granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) (dose of 6-17 ug/kg of weight/day SC). Success in mobilization was defined when > ou = a 2,0x10(6) CD34+ cells/(kg weight) could be collected from the peripheral blood with a maximum of three leukapheresis procedures. Clinical and laboratory parameters at the time of mobilization were analyzed for correlations with the number of CD34+ cells collected. Results: Two hundred and sixty patients (84.7%) presented success in mobilization. In this group, a median of 3.67 (2.0-46.0) CD34+ cells/(kg weight) was collected per patient in a median of 1(1-3) leukapheresis procedure. Poor response to mobilization was observed in 47 patients (15.3%): 24 (7.8%) were submitted to PBSC collection but didn\'t collected at least 2.0 x 106 CD34+ cells/(kg weight) with three leukapheresis procedures and 23 (7.5%) didn\'t reach an absolute number count of 10 CD34+ cells/mm3 in the peripheral blood to start collection by leukapheresis. In univariate analysis poorer PBSC mobilization was associated with diagnosis (Pp < 0.0001), time interval from the diagnosis to mobilization (P < 0.0001), number of cycles of previous chemotherapy (P = 0.0001), previous treatment with alkylating agents (P = 0.0003) and mitoxantrone (P = 0.0006), platelet count <150.000/mm3 before mobilization (P = 0.0006) and interval between mobilization and peak of CD34+ cells in peripheral blood (P < 0.0001). No significant correlation was found with age, gender, disease status, marrow involvement at mobilization, prior radiation therapy and exposition to platin analogues. In the stepwise regression model, diagnosis (P = 0.0232), number of cycles of previous chemotherapy (P = 0.0167), previous treatment with mitoxantrone (P = 0.0285) and platelet count <150.000/mm3 before mobilization (P = 0.0423) were found to be independent negative predictive factors for CD34+ cells mobilization. Conclusion: Cumulative load of chemotherapy, exposition to Mitoxantrone, platelet count just prior to mobilization and diagnosis were independent factors related to poor progenitor cells mobilization. These results could help in the previously recognition of patients at risk for poor or no response to mobilization and allow to plan an alternative or more aggressive regimen for this group of patients.

INTRODUÇÃO: Apesar dos primeiros relatos sobre o uso clínico de células estromais derivadas do tecido adiposo (ADSC) sugerirem que esta abordagem seja factível e efetiva na reconstrução de partes moles, não existem na literatura ensaios clínicos randomizados e com inclusão de controles. Assim sendo, foi objetivo deste estudo investigar se um novo protocolo para o isolamento de ADSC e seu uso em conjunto com os enxertos de gordura é de fato capaz de aumentar a sobrevivência destes enxertos. MÉTODOS: Pacientes com microssomia craniofacial (n=18) foram selecionados e randomicamente distribuídos para o grupo EC (com suplementação de ADSC) ou o grupo EE (sem suplementação de ADSC). Para o grupo EC, ADSC imediatamente isoladas a partir de metade do volume lipoaspirado foram utilizadas para o enriquecimento de células progenitoras do enxerto. A quantidade de tecido adiposo transplantado foi determinada pela simetria com o lado não afetado, não sendo realizado qualquer tipo de supercorreção. O número total de células viáveis isoladas antes e após a suplementação dos enxertos de gordura foi calculado, e através de citometria de fluxo estas células foram examinadas quanto à presença de marcadores de superfície para células mesenquimais. Tomografia computadorizada foi realizada para avaliar ambas as hemifaces no pré-operatório e no pós-operatório de seis meses. A espessura do revestimento de partes moles em quatro diferentes pontos de referência e o volume das hemifaces foram calculados. Morbidade geral e variáveis transoperatórias foram registradas. RESULTADOS: Para ambos os grupos o volume médio injetado foi de aproximadamente 28 mL. O número médio de células viáveis isoladas antes e após a suplementação dos enxertos foi 5,6 x 105 e 9,9 x 105 células por mL de tecido adiposo (p=0,015). Análise de citometria de fluxo revelou que ADSC foram positivas para marcadores de células mesenquimais (>95% para CD 73 e CD 105). No pós-operatório de seis meses, o índice de espessura média nos pontos de 1 a 4 foi de 0,91 (p=0,002), 1,02 (p=0,01), 1,05 (p=0,001), e 1,00 (p=0,04) no grupo EC, e 0,80 (p=0,58), 0,95 (p=0,18), 0,85 (p=0,009), e 0,84 (p=0,59) no grupo EE. Para o grupo EC o volume de gordura mantido após seis meses foi de 84 % e para o grupo EE foi de 51 % (p=0,003). Nenhuma complicação foi detectada. CONCLUSÕES: Estes resultados sugerem que o isolamento e a suplementação de ADSC é efetivo, seguro e superior à lipoenxertia convencional para o aumento de partes moles da face em pacientes portadores de microssomia craniofacial / INTRODUCTION: Although first reports of the clinical use of adipose-derived stromal cells (ADSC) suggest that this approach may be feasible and effective for soft tissue reconstruction, there is a lack of randomized, controlled clinical trials in the literature. Hence, this study aimed to investigate whether a novel protocol for isolation of ADSC and their use in combination with fat tissue could really improve the long-term retention of the grafts. METHODS: Patients with craniofacial microsomia (n=18) were selected and randomly assigned to group EC (with supplementation of ADSC) or group EE (without supplementation of ADSC). For group EC, ADSC freshly isolated from half of the aspirated fat sample were used to enrich for progenitor cells in the graft. Amount of transplanted adipose tissue was determined by trying to obtain symmetry with the unaffected side without any overcorrection. Number of viable cells isolated before and after the supplementation of the grafts was calculated, and these cells were examined for mesenchymal cell surface markers using flow cytometry. Computed tomography was performed to assess both hemifaces preoperatively and at six months postoperatively. Soft tissue thicknesses at four different reference points and the hemifaces volume were calculated. Overall morbidity and surgical variables were recorded. RESULTS: For both groups mean injected volume was 28 mL. Average number of viable cells isolated before and after supplementation of the grafts was 5,6 x 105 and 9,9 x 105 cells per mL of fat tissue (p=0,015). Flow cytometry analysis revealed that the ADSC were positive for mesenchymal cell markers (>95% for CD 73 and CD 105). At six months postoperatively, average thickness ratio at points 1 to 4 was 0,91 (p=0,002), 1,02 (p=0,01), 1,05 (p=0,001), and 1,00 (p=0,04) in group EC, and 0,80 (p=0,58), 0,95 (p=0,18), 0,85 (p=0,009), and 0,84 (p=0,59) in group EE. For group EC surviving fat volume at six months was 84 % and for group EE it was 51 % (p=0,003). No complications were detected. CONCLUSIONS: These results suggest that this strategy for isolation and supplementation of ADSC is effective, safe and superior to conventional lipoinjection for facial recontouring in patients with craniofacial microsomia

Orientador: Simone dos Santos Aguiar / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T08:24:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eid_KatiaAparecidadeBrito_D.pdf: 1187431 bytes, checksum: e62e4911ad1d92b3213551ba2a1b41a7 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Introdução: As células progenitoras periféricas hematopoiéticas (CPHP) é uma das alternativas de enxerto para a realização de transplante autólogo em crianças, adolescente e adulto jovem portadores de tumores sólidos e linfomas. Na mobilização, a dose clássica de G-CSF é 10µg/kg/peso do paciente SC em dose única. Acredita-se que doses maiores de G-CSF aplicadas duas vezes ao dia aumentariam o número de CD34+ coletadas com o menor número de leucaféreses. A tecnologia atual permite que seja realizado leucaférese em crianças com baixo peso (<10 kg). Objetivo: o mote do estudo foi avaliar se o G-CSF na dose de 15µg/kg peso do paciente ao dia e fracionado em duas doses, 10µg/kg e 5µg/kg, diminuiria o número de leucaférese realizada para atingir o mínimo de 3x106/kg/peso do paciente de CD34+ quando comparada com G-CSF na dose convencional, 10µg/kg/peso do paciente em dose única. Métodos: Os pacientes foram divididos em dois grupos. Grupo 10 formado por pacientes que receberam G-CSF 10µg/kg/peso SC ao dia em dose única às 6h e grupo 15 formado por pacientes que receberam G-CSF 15µg/kg/peso SC ao dia dividido em duas vezes, 10µg/kg SC às 6h e 5µg/kg SC às 18h. As leucaféreses foram realizadas em um separador celular automático de fluxo contínuo com anticoagulante ACD-A, foram processados 4 volemias em cada leucaférese. Pacientes com < 20 kg receberam priming de concentrado de hemácias filtradas e irradiadas (CHFI) durante as leucaféreses. A realização do transplante autólogo ocorreu com o número mínimo de 3x106/kg/peso de CD34+. Resultados: Sessenta e cincos pacientes portadores de tumores sólidos e linfomas foram avaliados, 39 pacientes receberam 10µg/kg/peso SC ao dia em dose única às 6h de G-CSF e 26 pacientes receberam 10µg/kg SC às 6h e 5µg/kg SC às 18h de G-CSF. Foram realizadas 146 leucaféreses, 110 (75,3%) no grupo 10 e 36 (24,7%) leucaféreses no grupo 15. No grupo 10 foi obtido uma mediana de 3 (1-7) leucaféreses e coletado uma média de 8,89x106/kg (± 9,59) de CD34+, o grupo 15 realizou uma mediana de 1 (1-3) leucaféreses e coletado uma média de 5,29x106/kg (± 4,95) de CD34+. Uma diferença estatística importante foi o número de leucaféreses (p<0,0001). Nenhum paciente apresentou intercorrências durante as leucaféreses. Os pacientes que receberam CHFI (<20 kg) não apresentaram hipovolemia nas leucaféreses realizadas. Conclusão: Para coletar o mínimo de 3x106/kg/peso de CD34+, a aplicação de G-CSF 15µg/kg/peso fracionada diminuiu significativamente o número de leucaférese realizada / Abstract: Introduction: The peripheral hematopoietic progenitor cells are a graft choice for performing autologous transplantation. In the mobilization, the classical dose of G-CSF is 10?g/kg of the patient in a single dose. There is a theory that higher doses of G-CSF applied twice daily could increase the number of collected CD34+ cells with a smallest number of leukapheresis. Objective: The aim of this study is to evaluate if a fractionated-dose of G-CSF at 15?g/kg of patient may reduce the number of leukapheresis for achieving the minimum target of 3 x 106/kg of CD34+ cells as compared to conventional dose of G-CSF. Methods: Patients were divided into two groups. Group 10: patients who received a single dose daily of G-CSF 10?g/kg and Group 15: patients who received twice dose daily of G-CSF 15?g/kg. The leukapheresis were processed in an automated cell separator. The autologous transplantation happened when the minimum number of 3x106/kg CD34+ was reached. Results: Group 10 enrolled 39 patients who received 10?g/kg of G-CSF and group 15 had 26 patients who received 15?g/kg fractionated of G-CSF. There were a total of 146 aphaeresis; 110 (75.3%) in group 10 and 36 (24.7%) group 15. Group 10 collected a median of 3 (1-7) leukapheresis and a mean of 8.89 x106/kg (± 9.59) CD34+, whereas group 15 had a median of 1 (1-3) leukapheresis and collected a mean of 5.29 x106/kg (± 4.95). The relevant difference statistic was the number of aphaeresis (p<0.0001). Conclusion: To collect a minimum target of 3x106/kg of CD34 +, the application of fractionated-dose of 15?g/kg G-CSF decreased significantly the number of leukapheresis performed / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutora em Ciências

Bei Patienten mit Keimzelltumoren werden Mobilisation und Separation peripherer Blut-stammzellen durch das Alter, die zytostatische Vorbehandlung und Art der Mobilisations-chemotherapie statistisch signifikant beeinfluát. Der beste pr diktive Parameter f r die gesammelten Stamm- und Vorl uferzellen ist die Anzahl der peripheren CD34+ Zellen, die am Tag der Leukapherese im Blutkreislauf zirkulieren. F r die Rekonstitution der Granulo- und Thrombozytopoese nach Hochdosischemotherapie ist die Dosis der trans-fundierten CD34+ Zellen von signifikantem Wert. Bei der Transplantation von mehr als 2,5 x 10 hoch 6 CD34+ Zellen/kg kann mit einer schnellen und sicheren Regeneration der H matopoese, einem niedrigeren Bedarf an Antibiotika, Erythrozyten- und Thrombozy-tenkonzentraten sowie einem k rzeren Krankenhausaufenthalt gerechnet werden. / In patients with germ cell cancer the mobilization and collection of peripheral blood progenitor cells are significantly influenced by patient's age, cytotoxic pretreatment and the mobilization chemotherapy used. The best predictive factor for harvested progenitor cells is the number of CD34+ cells circulating in the peripheral blood on the day of leukapheresis. The dose of transfused CD34+ cells has a significant impact on the reconstitution of granulocytes and platelets after high-dose chemotherapy. Transplantation of more than 2,5 x 10 to the power of 6 CD34+ cells/kg results in a rapid and safe regeneration of hematopoiesis, less antibiotics and transfusion requirements (red blood cell and platelet concentrates) and a shorter hospital stay.