Submitted by Biblioteca de Pós-Graduação em Geoquímica BGQ (bgq@ndc.uff.br) on 2016-04-20T17:14:11Z No. of bitstreams: 1 DissertacaoMelissaFINAL.pdf: 2104821 bytes, checksum: 4cf97bb77ff36dfccdfc01f9b4280238 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-20T17:14:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissertacaoMelissaFINAL.pdf: 2104821 bytes, checksum: 4cf97bb77ff36dfccdfc01f9b4280238 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Universidade Federal Fluminense. Instituto de Química. Programa de Pós-Graduação em Geociências-Geoquímica. Niterói, RJ / Esse estudo avaliou o potencial de remoção de Zn e Cd pela ação do biofilme bacteriano resistente a esses metais em uma área altamente contaminada, localizada na Baía de Sepetiba/RJ. Esse biofilme resistente foi coletado do manguezal do Saco do Engenho e teve sua biomassa amplificada no Laboratório de Ecologia Bacteriana (UFF), possibilitando estudos físico-químicos para investigar a sua capacidade de sorção de metais para fins de biorremediação. Experimentos em microcosmos foram realizados na água do mar e na interface água-sedimento, utilizando radiotraçadores, buscando identificar processos que interferem nessa remoção. Foram realizados estudos com 65Zn e 109Cd, em testemunhos de sedimento de manguezal, para determinar as cinéticas de sorção de Zn e Cd na interface água–sedimento, em 48 horas de experimento, e calculado o índice de atividade bentônica, que é a percentagem entre a diferença dos testemunhos não tratados e os testemunhos tratados com o formol, em relação aos testemunhos não tratados. Além disso, foram estudadas medidas de distribuição do 65Zn em duas fases, a líquida (ampola padrão de água do mar) e a sólida (biofilme resistente a Zn e Cd) para avaliar a capacidade de sorção do biofilme resistente a estes metais (BR Zn/Cd). Os resultados dessas medidas de distribuição, em um período experimental de 24 horas, sugerem que o BR Zn/Cd possui uma capacidade de sorção média de zinco em 67,60 ± 3,16 % na água do mar. O estudo cinético da sorção de Zn e Cd na interface água-sedimento, nos testemunhos incubados com o BR Zn/Cd, apresentou valores de remoção de 67,04 ± 2,93 % (Zn) e 79,89 ± 2,64 % (Cd) na cinética rápida inicial (3 horas de experimento), já os valores de sorção do sedimento controle, no mesmo período, mostrou valores de remoção 34,32 ± 2,43 % (Zn) e 47,68 ± 2,12 % (Cd). Os resultados de tempo de meia-vida de remoção mostraram também essa diferença. Os sedimentos incubados com o BR Zn/Cd apresentaram valores para Zn de 1,24 ± 0,02 h e para Cd de 0,86± 0,02 h na cinética rápida, enquanto o sedimento controle marcou valores de meia-vida para Zn de 2,74± 0,08 h e para Cd de 2,15 ± 0,05 h. A atividade bentônica foi estimada como responsável por 74,42% (Zn) e 80,03% (Cd) do índice do total do sedimento com o BR Zn/Cd, enquanto no sedimento controle, essa atividade foi calculada como responsável por 49,13% (Zn) e 60,86% (Cd) do mesmo índice, evidenciando o aumento da capacidade de retenção do Zn (aproximadamente 25%) e Cd (aproximadamente 20%), pelo BR Zn/Cd / This study evaluated the efficiency of Zn and Cd removal by using a bacterial biofilm resistant to these metals in a highly contaminated coastal area, Sepetiba Bay/RJ. This resistant biofilm was sampled in a mangrove at Saco do Engenho and had its biomass amplified in the Ecologia Bacteriana Laboratory. Physic-chemical studies enabled the research of metal sorption capacity by resistant biofilm for bioremediation purposes. Microcosm experiments were performed in sea water and sediment-water interface using radiotracers technique. Radiotracer studies, 65Zn and 109Cd, in mangrove sediment columns were performed to determine the removal kinetics of Zn and Cd in sediment-water interface in 48 hours experiments. Benthic activities indices were calculated as the relative percent difference between untreated sediments and formaldehyde-treated sediments data in relation to untreated sediments data. Distribution measurements of 65Zn were also studied in two phases: solid (resistant biofilm) and liquid (standard sea water) to evaluate the sorption capacity of biofilm resistant to these metals (RB Zn/Cd). The distribution results in 24 hours of experiment suggested that resistant biofilm has mean 67,60 ± 3,16 % in zinc sorption capacity on sea water. The faster removal kinetic study (3 hours) in sediment-water interface presented 67,04 ± 2,93 % and 79,89 ± 2,64 % of Zn and Cd removal, respectively, in sediment cores incubated with RB Zn/Cd. The faster removal kinetic in sediment control cores were 34,32 ± 2,43 % (Zn) and 47,68±2,12 % (Cd) on metals sorption in the same period of time. The half-removal times results also showed this difference between cores. Sediment cores incubated with RB Zn/Cd showed 1,24±0,02 h (Zn) and 0,86±0,02 h (Cd) in faster kinetic while sediment control cores scored 2,74±0,08 h (Zn) and 2,15 ±0,05 h (Cd). Benthic activity was estimated as responsible for 49,13% (Zn) and 60,86% (Cd) of total inventories within sediments control cores, while in RB Zn/Cd cores this indices represented 74,42% (Zn) and 80,03% (Cd). These estimates show the increase in metal sorption capacity by RB Zn/Cd for average 25% (Zn) and 20% (Cd) in sediments

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Fernanda_Valentini.pdf: 1829911 bytes, checksum: bf5dba534848b7d5aa2d2b2c757989ff (MD5) Previous issue date: 2012-05-04 / Opportunistic fungi are responsible for infectious diseases in oral cavity that rose in prevalence in the last years, especially in complete denture wearers. Thus, colonization and growth of Candida species and other microorganisms are of clinical importance. The aims of this study were (i) systematically review the literature to determine if there is a protocol of prevention or treatment of Candida colonization in denture liners and (ii) clinically assess how biofilm composition is affected by different materials, time and the presence of candidiasis in denture wearers. In vitro and in vivo studies were evaluated with regard to treatment and/or prevention of Candida colonization and biofilm formation in denture liners. Six databases were searched (Lilacs, Scopus, Pubmed / Medline, Scielo and Cochrane Database of Systematic Reviews) from 1950 to 2012 using the keywords denture liner , Candida , tissue conditioner , denture stomatitis and antifungal agents . For the in situ study, twenty-eight volunteers, half with candidiasis, half healthy but Candida carriers wearing complete dentures were selected to participate in this study. Biofilm formed on acrylic resin and temporary denture liners (silicone based and acrylic resin based) specimens mounted in the internal surface of the volunteers upper dentures were collected in two phases of 21 days. Specimens were randomly removed on days 7, 14 and 21. Representative samples of the specimens were analyzed by SEM in the various periods under evaluation. Colony forming units/mm2 of biofilm of mutans streptococci, lactobacilli, total microorganisms and Candida species were determined. Through the systematic review it was possible to observe that the incorporation of nystatin to prevent the disease and the immersion in sodium hypoclorite to disinfect denture liners was the most frequently found treatment. However, as the data was in general derived from in vitro studies, there is a high risk of bias. For the in situ study, non-albicans Candida species showed higher counts in the silicone-based denture liner in diseased patients (p=0,01). Patients with candidiasis showed higher counts of mutans streptococci after 7 days (p=0.0041), but this difference disappeared after 14-21 days of biofilm formation. Thus, silicone-based denture liners should be avoided in diseased patients, as they have shown 12 higher nonn-albicans Candida species, which are known to be more virulent and resistant to conventional therapies. / Os fungos oportunistas são responsáveis por doenças infecciosas na cavidade bucal que aumentaram em prevalência nos últimos anos, especialmente em usuários de prótese total. Assim, a colonização e o crescimento de espécies de Candida e outros microrganismos em próteses tem fundamental importância clínica. Este estudo teve por objetivo (i) fazer uma revisão sistemática para determinar se existe um protocolo de prevenção ou tratamento da colonização por Candida em reembasadores de prótese e (ii) avaliar clinicamente como a composição do biofilme é afetada por diferentes materiais, tempo e a presença ou não de candidíase, em usuários de prótese total. Estudos clínicos e in vitro foram avaliados quanto ao tratamento e / ou prevenção da colonização por Candida e formação de biofilme em reembasadores de prótese. Seis bases de dados eletrônicas foram pesquisadas (Lilacs, Scopus, Pubmed / Medline, Scielo e Cochrane Database of Systematic Reviews) de 1950 a 2012 usando as palavras-chaves denture liner , Candida , tissue conditioner , denture stomatitis e antifungal agents . Para o estudo in situ vinte e oito voluntários usuários de prótese total, quinze portadores de estomatite por dentadura, e doze pacientes com alguma espécie de Candida avaliados por screening inicial foram selecionados. Foi quantificada a formação de biofilme sobre espécimes de resina acrílica e reembasadores temporários (a base de resina acrílica ou silicone) inseridos na parte interna da prótese total superior em duas fases de 21 dias. Os espécimes foram removidos aleatoriamente no 7°, 14° e 21° dia. Amostras representativas foram analisadas em MEV nos diferentes períodos de avaliação. Unidades formadoras de colônia/mm2 de biofilme de estreptococos do grupo mutans, lactobacilos, microrganismos totais e espécies de Candida foram determinados. Através da revisão sistemática foi possível observar que a incorporação de nistatina para prevenir o aparecimento da doença e a imersão em hipoclorito de sódio para desinfectar reembasadores de tecidos são o tratamento mais frequentemente encontrado. No entanto, os dados encontrados foram quase que exclusivamente baseados em estudos in vitro, o que gera alto risco de viés. Para o estudo in situ, a contagem de Candida não-albicans para reembasadores a base de silicone foi maior 10 em pacientes com candidíase (p=0,01). Pacientes com candidíase apresentaram maiores contagens de estreptococos do grupo mutans após 7 dias (p=0,0041), mas essa diferença desapareceu após 14-21 dias de formação de biofilme. Com isso, reembasadores a base de silicone devem ser evitados em pacientes com candidíase já que estes materiais apresentaram aumento da contagem de espécies de Candida não-albicans, as quais são mais virulentas e resisitentes às terapias convencionais.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_ Marina_Sousa_Azevedo.pdf: 1003454 bytes, checksum: f38dd87ba882490bc6b3602f7494c899 (MD5) Previous issue date: 2010-04-29 / Micro-organisms belonging to the resident oral microflora are organized into complex communities, the biofilms, and are the direct cause of the caries process. It is necessary to understand the degree to which biofilm physicochemical and nutrient environments affect the plaque development in individuals differing in their oral environments. In this context, microcosm biofilm models could be used to answer specific questions related to caries. The aim of this study was to test the hypothesis that microcosm biofilms growth from inoculums of caries free children (CF), childrenwith early childhood caries (ECC) and with severe early childhood caries (S-ECC) would provide the same cariogenic response under regular sucrose exposure. Also, microcosm biofilms formed from saliva of children and their mothers considering cariogenic response and microbiota composition were compared. Three children of each group were selected: CF, ECC and S-ECC and their mothers. The mother-child pairs were examined and the dental status was recorded. Saliva samples were collected and screened for microbial composition. Microcosm plaque biofilms were initiated from saliva, growth on bovine enamel discs in artificial saliva enriched with mucin (DMM) for up to 10 days in 24-well microplates under anaerobic conditions. Biofilms were growth with and without sucrose under a semi-dynamic regimen previously tested. DMM was replaced daily and pH measurements were recorded for DMM with sucrose or DMM without sucrose supernatants.On the 10th day, biofilms were collected and microbiota composition was assessed by culture methods. The enamel mineral loss was obtained by the percentual surface microhardness change (%SHC) for each enamel disc. The relationship between outcome variables (pH, microbiota and %SHC) from mothers and children was estimated by Spearman s correlation test, considering each outcome within each caries risk group. Independent statistical comparisons among surface microhardness change, pH and biofilm microbiota were made for group and condition (sucrose exposure) and analyzed using 2-way ANOVA followed by Tukey s test. Values of p ≤ 0.05 were considered significant. The groups with cariogenic challenge condition showed: higher levels of the total aciduric counts, S. mutans and total oral lactobacilli, lower value of pure DMM pH and a higher mineral loss than the group without cariogenic challenge. Differences between groups (CF, ECC and S-ECC) could not be seen, except for DMM pH with sucrose for children (p=0.005) and for pure DMM pH (p=0.004) and for total aciduric counts (p=0.037) for mothers. A correlation was found between microcosm biofilms generated from children and their mothers inoculums under cariogenic challenge. Therefore, within the limitations of this study, it is possible to conclude that microcosm biofilms growth from inoculums of children with or without severe ECC provide similar cariogenic response under regular sucrose exposure. Moreover, cariogenic challenge was crucial to correlatecariogenic response of microcosm biofilms between the inoculum of mothers and their children / Os microrganismos pertencentes à microflora oral residente, os quais são organizados em comunidades complexas, o biofilme, atuam diretamente no processo cárie dentária. É necessário compreender o grau com que o ambiente nutricional e físico-químico do biofilme influenciam no desenvolvimento da placa em indivíduos que diferem em seu ambiente bucal. Nesse contexto, modelos de biofilme poderiam ser usados para responder a questões específicas relacionadas à cárie. O objetivo deste estudo foi testar a hipótese de que biofilmes de microcosmo crescidos a partir do inóculo de crianças livres de cárie (LC), com cárie na primeira infância (CPI) e com com CPI severa (CPI-S) dariam a mesma resposta cariogênica sob uma exposição regular de sacarose, em um modelo de biofilme padronizado. Além disso, biofilmes de microcosmos formados a partir da saliva de crianças e de suas mães foram comparados, considerando-se resposta cariogênica e composição microbiana. Três crianças de cada grupo: LC; CPI; CPI-S e suas mães foram selecionadas. Os pares foram examinados e a condição dentária registrada. Amostras de saliva foram coletadas e avaliadas quanto à composição microbiana. O biofilme de microcosmos foi iniciado a partir da coleta de saliva, crescida sobre discos de esmalte bovino em saliva artificial enriquecida com mucina (DMM) por 10 dias em placas de 24 micropoços em condição de anaerobiose. Os biofilmes cresceram com e sem sacarose sob um regime semi-dinâmico previamente testado. O DMM foi renovado diariamente e aferições do pH dos sobrenadantes foram registradas do DMM com e sem sacarose. No décimo dia os biofilmes foram coletados e a composição da microbiota foi avaliada por métodos de cultura. A perda mineral do esmalte foi obtida através da porcentagem de mudança da microdureza de superfície para cada disco de esmalte (%PDS).A relação entre as variáveis de desfecho estudadas (pH, microbiota e %PDS) das mães e de seus filhos foi estimada através do teste de correlação de Spearman. Comparações estatísticas independentes entre mudança da microdureza de superfície, pH e microbiota do biofilme foram conduzidas para cada grupo e condição (exposição a sacarose) e analisadas utilizando ANOVA duas vias, seguido do Teste de Tukey. Valores de p≤0,05 foram considerados significantes. Os grupos sob a condição de desafio cariogênico mostraram: maior contagem de acidúricos totais, S. mutans e lactobacilos totais, valores mais baixos de pH do DMM e maior perda mineral do que o grupo sem desafio cariogênico.Diferenças entre os grupos não foram significantes, com exceção do pH do DMM com sacarose para as crianças (p=0,005), do pH do DMM puro (p=0,004) e da contagem de acidúricos totais (p=0,037) para as mães. Houve correlação entre os biofilmes das crianças e de suas mães na condição de desafio cariogênico. Assim, o crescimento de biofilme de microcosmos originados a partir do inóculo de crianças com e sem cárie na primeira infância promovem resposta cariogênica similar sob exposições regulares de sacarose. Além disso, a presença do desafio carigênico foi determinante para existência de correlação na resposta cariogênica no biofilme de microcosmos entre o inóculo de mães e seus filhos

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Aline Pinheiro_Moraes.pdf: 846337 bytes, checksum: 66b01044077d89e98213868cd5b7582a (MD5) Previous issue date: 2011-04-01 / Candidiasis is the most common fungal infection in denture wearers. The association between Candida and denture base is directly related to the efficiency of this micro-organism to adhere and colonize these surfaces, which is an essential initial step for the development of denture-related stomatitis. Additionally, the use of denture liners has increased, with these materials more prone to microbial adhesion when compared with acrylic resin due to its higher surface roughness. These materials have demonstrated capacity to interact with oral micro-organisms.This important problem is the reason why several attempts have been made to develop biomaterials containing antifungal. Thus, the aim of this study was to investigate the potential antifungal activity of triazine added to acrylic resin and liners used in prosthodontics using microcosms biofilm model with saliva derived from patients with or without candidiasis, verifying its effectiveness in reducing microbial adherence and consequently reduce the incidence of Candida infections. The mechanical properties of the tested materials after the incorporation of triazine were also evaluated. We considered four commercially available materials (a microwave-cured acrylic resin and two soft denture liners and one hard denture liner) to which were added different concentrations of triazine (0; 2.5; 5.0 and 10%). The results indicated that no difference were found among triazine concentrations in acrylic resin flexural strength (p= 0.059). Triazine addition did not result in surface roughness changes, although all denture liners presented higher surface roughness compared with acrylic resin, while in general, SoftConfort presented the highest roughness (p<0.001). In general, 5 and 10% triazine addition resulted in more soluble materials. All materials presented increased water sorption with the addition of triazine (p<0.05), except for CoeSoft, where no change was observed. Candidiasis patient saliva presented higher counts of total micro-organisms (p= 0.0294) and total streptococci (p = 0.0008). Regarding materials, total streptococci, total micro-organisms and Candida counts were higher in CoeSoft (p<0.0001). Candida species counts was the same for both saliva donors (p>0.05). The addition of triazine did not result in decrease of total micro-organisms, total streptococci or Candida species in all materials tested (p>0.05). In conclusion, the addition of triazine to acrylic resin and denture liners in a complex biofilm model did not modify the development of biofilms in both patients with and without candidiasis / A candidíase é a infecção oral fúngica mais comum em usuários de próteses. A associação entre o microrganismo Candida e as bases das próteses está diretamente relacionada à eficiência deste microrganismo em aderir e colonizar estas superfícies, sendo esta a etapa inicial essencial para o desenvolvimento da estomatite induzida por prótese. Associado a isto, o uso de reembasadores para próteses tem aumentado, sendo estes materiais mais propensos à adesão microbiana quando comparados a resina acrílica devido a sua maior rugosidade de superfície. Além disso, estes materiais tem demonstrado capacidade de interagir com microrganismos bucais. Este importante problema tem levado a tentativa de desenvolvimento de diversos materiais contendo agentes antifúngicos. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar o potencial antifúngico da triazina adicionada à resina acrílica e reembasadores utilizados em prótese dentária, através de um modelo de biofilme de microcosmos, com salivas derivadas de pacientes com ou sem candidíase, verificando sua efetividade em reduzir a adesão microbiana e, consequentemente, diminuir a incidência de infecções por Candida. Também avaliaram-se as propriedades mecânicas dos materiais testados após a incorporação da triazina. Foram considerados quatro materiais comercialmente disponíveis (uma resina acrílica ativada por energia de micro-ondas, dois reembasadores resilientes e um reembasador permanente), aos quais foram adicionadas diferentes concentrações de triazina (0; 2,5; 5,0 e 10%). Os resultados indicaram que não houve diferença (p = 0,059) entre as concentrações de triazina para a resina acrílica de micro-ondas no teste de resistência à flexão. Em relação a rugosidade de superfície, embora a adição de triazina não tenha levado ao aumento da rugosidade, os reembasadores apresentaram maior rugosidade que a resina acrílica, com o SoftConfort apresentando, em geral, a maior rugosidade (p<0,001). De maneira geral, quando adicionada triazina a 5,0 e 10%, todos os materiais tornaram-se mais solúveis e apresentaram aumento de sorção de água (p<0,05), a exceção do CoeSoft, que não mostrou diferença com a adição do composto químico. Houve diferença entre salivas, sendo que aquela proveniente de individuo com candidíase apresentou maiores contagens de microrganismos totais (p = 0,0294) e estreptococos totais (p = 0,0008). Em relação aos materiais, a contagem de estreptococos, microrganismos totais e espécies de Candida foi maior no CoeSoft (p<0,0001). Entretanto, a contagem de espécies de Candida foi igual entre os doadores (p>0,05). A adição de triazina não resultou em diminuição de microrganismos totais, estreptococos totais ou espécies de Candida em nenhum dos materiais testados (p>0,05). Como conclusão, a adição de triazina a resina acrílica e reembasadores utilizados para confecção de base e reembasamento de próteses em um modelo complexo de biofilme não modificou o desenvolvimento de biofilmes em ambos os pacientes com ou sem candidíase

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_maria_cruzeiro.pdf: 1324834 bytes, checksum: f0cdefd1bc3305878b880d24b2cf37a7 (MD5) Previous issue date: 2013-02-20 / Biofilms are organized biological structures, where microorganisms form structured, coordinated and functional communities. The fungal biofilms has emerged due to pathogenic capacity, with emphasis on biofilms by Candida albicans, thereby treating of prothetic stomatitis and eliminating of fungal biofilm has been intensified because of the importance of oral health. The microorganisms that form the biofilm, in general, have different phenotypic characteristics such as differences in sensitivity to antifungal agents and greater resistance against host defenses, being responsible for different clinical manifestations. Commercially there are several antifungals available, such as mouth rinses and sanitizers, aiming to control biofilm, however, there has been interest in the search for plant products, as in the case of herbs, such as the Rosmarinus officinalis. The objective of the study was to evaluate the extracts of Rosmarinus officinalis action in the biofilm formation of C. albicans on the surfaces of acrylic resins. The specimens made of acrylic resin were sterilized and inoculated with C. albicans (1x107 cells / ml). Induction of biofilm was performed on evidence blocks that were treated before in the first experiment and after inoculation in second experiment according to the experimental groups. Six treatments were used being them a control group,non treated (G1) nystatin 0,5%, (G2), lotion 24% of R. officinalis essential oil,(G3) , essential oil of R. officinalis 24% in carbopol,(G4), hydroalcoholic extract of R. officinalis 20% in carbopol,(G5) and carbopol 3%(G6). After 48 hours of inoculation and after 48 hours of treatment biofilm were quantified using spectrophotometer with wavelength of 570nm. The results of the studies were analyzed statistically by ANOVA and Tukey tests. From all the different formulations of extract used, the 24% essential oil lotion of Rosmarinus officinalis proved to be much more effective in inhibiting biofilm formation and in the elimination of post formed biofilm. It is therefore concluded that the extracts of R. officinalis were efficient in controlling biofilm and may become an alternative in the profilaxy and elimination of the C. albicans biofilm. / Os biofilmes são estruturas biológicas organizadas, onde os microrganismos formam comunidades estruturadas, coordenadas e funcionais. Os biofilmes fúngicos tem se destacado devido a capacidade patogênica, com ênfase nos biofilmes por Candida albicans, desta forma, o tratamento da estomatite protética e eliminação do biofilme fúngico tem sido intensificado devido a importância deste para a saúde bucal. Os microrganismos que constituem os biofilmes, em geral, apresentam características fenotípicas diferentes, tais como diferenças de sensibilidade aos antifúngicos e maior resistência frente às defesas do hospedeiro, sendo responsáveis por diferentes quadros clínicos. Comercialmente tem-se disponível vários antifúngicos, enxaguatórios bucais e desinfetantes, para o controle do biofilme, entretanto, tem havido interesse na busca por produtos vegetais, como plantas condimentares, a exemplo do Rosmarinus officinalis. Assim, o objetivo do trabalho foi avaliar a ação de extratos vegetais de R. officinalis em biofilmes por C. albicans, formado sobre superfície de acrílico. Os corpos de prova confeccionados em resina acrílica foram esterilizados e inoculados com C. albicans (1x107 células/ ml). A indução de biofilme foi realizada em corpos de prova, que foram tratados previamente no expermento 1 e pós-inoculação no experimento 2 conforme os grupos de tratamentos. Utilizaram-se seis tratamentos: nistatina, óleo essencial de R. officinalis em carbopol, carbopol, extrato hidroalcoólico de R. officinalis, loção à 24% de R. officinalis, e o controle não tratados. Após 48 horas da inoculação e após 48 horas de tratamento foi realizada a quantificação do biofilme em espectrofotômetro com comprimento de ondas de 570nm. Os resultados dos trabalhos foram analisados estatísticamente, pelos testes ANOVA e TUKEY. Das diferentes formulações dos extratos usados, a loção à 24% de R. officinalis mostrou- se a mais eficaz tanto na inibição da formação do biofilme como no tratamento pós formação do biofilme. Conclui-se portanto, que, os extratos de R. officinalis foram eficientes no controle de biofilme e podem tornar-se uma alternativa na profilaxia e eliminação do biofilme por C. albicans.

Pseudomonas aeruginosa est une bactérie pathogène opportuniste qui est caractérisée par son ubiquité et sa grande capacité adaptative. Cette faculté lui est notamment permise par de nombreux systèmes de perception et de régulation, la sécrétion d'un large arsenal d'exoprotéines, une capacité à alterner entre deux modes de vie, une haute résistance naturelle aux antibiotiques ainsi qu'un génome riche soumis à une importante plasticité génomique. Cette dernière, associée aux pressions de sélection exercées par la grande diversité d'environnements rencontrés par P. aeruginosa, a permis l'émergence de nombreuses souches aux caractéristiques génotypiques et phénotypiques qui leur sont propres. Durant ma thèse, nous avons réalisé une analyse transcriptomique globale comparative entre les souches connues PA14, PAO1 et un nouvel isolat clinique atypique multirésistant aux antibiotiques, la souche PA7. Cette étude nous a permis de suggérer que cette souche, dépourvue des armes principales de la cytotoxicité, tendait naturellement vers un mode de développement associé à la formation de biofilm. Nous avons également caractérisé l'îlot génomique RGP69, unique à la souche PA7 qui code un troisième système de sécrétion de type II, Txc, qui sécrète dans le milieu extracellulaire une protéine d'affinité à la chitine, CbpE, sous le contrôle régulationnel d'un nouveau système de régulation à deux composants, Tts. Cet îlot génomique serait directement impliqué dans la physiologie particulière de la souche PA7. / Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic bacterial pathogen, characterized by its ubiquity and its high adaptative property. This faculty is particularly due to many systems of perception and regulation, the secretion of a wide arsenal of exoproteins, an ability to switch between two life styles, a high natural resistance to antibiotics and a rich genome submitted to an important genomic plasticity. The latter, combined with the selection pressure exerted by the wide variety of environments encountered by P. aeruginosa, has allowed the emergence of many strains with their own genotypic and phenotypic characteristics.During my thesis, we performed an overall comparative transcriptomic analysis between the known strains PA14 and PAO1, and a new atypical clinical isolate multiresistant to antibiotics, the PA7 strain. This study allowed us to determine that this strain, lacking the main weapons of cytotoxicity, naturally tended to a life-style associated with biofilm formation. We also characterized the RGP69 genomic island, unique in the PA7 strain, which encodes a third type II secretion system, Txc, that secretes in the extracellular medium a chitin-binding protein, CbpE, under the regulatory control of a component system, Tts. This genomic island could be directly involved in the particular physiology of the PA7 strain.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Gingival abrasions resulting from brushing are reversible epithelial lesions, presenting a superficial or exposed tissue. These lesions have been considered subrogated outcome of gingival recession, although the mechanisms by which gingival abrasion result in apical migration of the junctional epithelium, bone loss, gum recession and consequently, have not yet been known. The aim of this study was to evaluate the effect of the type of filament of soft bristle brushes (round and tapered), and the presence dentifrice. Gingival abrasion is the primary endpoint and secondary is the ability to remove plaque. The experimental design was crossed. Thirty-nine patients with gingival health abstained from oral hygiene for 72 hours. The following contralateral quadrants were randomized to be brushed with a toothbrush rounded or tapered filaments, each quadrant for 30 seconds, totaling to two minutes. In the first period was used fluoridated toothpaste, brushing the second period was performed with water only. "Washout" of a week between the periods will be held. Evaluation of Stained Plaque and gingival abrasion were performed before and after brushing. The results of this study demonstrated that both bristle brushes soft, rounded or conical, were effective in removing plaque (p <0.05), and promoted significantly more gingival abrasion injuries comparing the baseline period and after brushing (p <0.05), but no statistically significant difference between the brushes evaluated. The use of the dentifrice contributed to greater removal of plaque (p> 0.05) and increased number of injuries abrasion gum (p <0.05), most of the sites evaluated. The rounded brush filament showed higher levels of gingival abrasion injury, but was more effective at removing plaque stained. Both brushes used in the study were effective and safe. / Abrasões gengivais decorrentes de escovação são lesões epiteliais reversíveis, apresentando-se de forma superficial ou com exposição do tecido conjuntivo. Essas lesões têm sido consideradas desfecho sub-rogado de recessão gengival, embora os mecanismos pelos quais a abrasão gengival resultaria em migração apical do epitélio juncional, perda óssea, e consequente recessão gengival, não tenham sido ainda entendidos. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tipo de acabamento das cerdas de escovas macias (arredondado e cônico), e da presença dentifrício tendo como desfecho primário a abrasão gengival e secundário a remoção de placa. O desenho experimental utilizado foi cruzado, randomizado e cego. Trinta e nove pacientes com saúde gengival absteram-se de higiene bucal por 72 horas. A seguir, tiveram os quadrantes contralaterais randomizados para serem escovados com uma escova de filamentos arredondados e cônicos, durante 30 segundos cada quadrante, totalizando-se dois minutos. No primeiro período foi utilizado dentifrício fluoretado, no segundo período a escovação foi realizada apenas com água. Washout de uma semana entre os períodos foi realizado. Avaliações de Placa Corada e Abrasão Gengival foram realizadas pré e pós escovação. Os resultados do presente estudo demonstraram que o tipo de acabamento de cerdas de escovas macias, arredondadas ou cônicas, não influenciou na remoção de placa e abrasão gengival (p>0,05). O uso do dentifrício contribuiu para maior remoção de placa (p>0,05) e maior número de lesões de abrasão gengival (p<0,05), na maioria dos sítios avaliados. Os resultados do presente estudo demonstraram que ambas as cerdas de escovas macias, arredondadas ou cônicas, foram eficazes na remoção de placa (p<0,05), e promoveram significativamente mais lesões de abrasão gengival comparando-se no período baseline e pós escovação (p<0,05), porém não houve diferença estatisticamente significante entre as escovas avaliadas. O uso do dentifrício contribuiu para maior remoção de placa (p>0,05) e maior número de lesões de abrasão gengival (p<0,05), na maioria dos sítios avaliados. A escova de filamento arredondado mostrou maiores índices de lesão de abrasão gengival, porém foi mais eficaz na remoção de placa corada. Ambas as escovas utilizadas no estudo foram eficazes e seguras.

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Biofilmes de Listeria monocytogenes são fontes potenciais de contaminação de alimentos processados e podem diminuir a efetividade de procedimentos de higienização e sanitização nas indústrias. No presente estudo foi avaliada a estrutura e a dispersão de biofilmes formados por duas cepas de L. monocytogenes em diferentes superfícies, como aço inoxidável, vidro e poliestireno. Foram utilizados diferentes sistemas de cultivo como microplacas de 96 poços de poliestireno e de aço inoxidável, microplacas de 24 poços contendo lâminas circulares de aço inoxidável ou de vidro e, câmaras de poliestireno contendo 8 poços com fundo de borossilicato (vidro). Os experimentos foram realizados com incubação por 1, 4 e 8 dias a 25°C. A formação de biofilme foi verificada em microplacas de 96 de poliestireno e de aço inoxidável através do método de quantificação de biomassa do biofilme por coloração com cristal violeta, e também em sistema de microplaca de 24 poços contendo lâminas circulares de aço inoxidável ou de vidro, através de enumeração em placa das células aderidas nas superfícies. As estruturas dos biofilmes foram observadas por meio de microscopia de fluorescência (para o sistema de microplaca de 24 poços contendo lâminas circulares de aço inoxidável) e através de microscopia confocal a laser (para o sistema com câmaras com fundo de vidro). Para isso, os biofilmes foram corados com o kit de viabilidade bacteriana LIVE/DEAD®, a fim de diferenciar as células viáveis (coradas com Syto 9) das células mortas (coradas com iodeto de propídeo), sendo feitas estimativas do número de células aderidas à superfície de vidro através de quantificação por fluorescência. Foram realizados testes de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) de óleos essenciais de plantas de Cymbopogon citratus (capim-limão) e de Zingiber officinale (gengibre) e de dois sanitizantes comerciais (um à base de óleo de coco babaçu e outro à base de dióxido de cloro) frente a L. monocytogenes. Posteriormente, foi testada a eficácia desses antimicrobianos na remoção de biofilmes de L. monocytogenes formados por 4 e 8 dias a 25ºC, em superfície de aço inoxidável e de vidro, através da enumeração em placas de células aderidas e de observações microscópicas. Foi também avaliada a presença de moléculas relacionadas ao estresse oxidativo e nitrosativo em biofilmes maduros de duas cepas de L. monocytogenes formados em superfícies de aço inoxidável e de vidro, para o estudo do possível efeito do óxido nítrico (NO) exógeno e de inibidores de NO na dispersão de células do biofilme e na alteração dos níveis de expressão de genes de L. monocytogenes relacionados ao estresse oxidativo e nitrosativo (Lmo0990, Lmo0807 e Lmo1485), bem como à regulação do gene de virulência e formação de biofilme (PrfA). Foi verificada a presença de intermediários de oxigênio reativo (ROI - reactive oxygen intermediates) e de intermediários de nitrogênio reativo (RNI - reactive nitrogen intermediates) nos biofilmes de L. monocytogenes com 4 e 8 dias de incubação a 25ºC formados em superfícies de aço inoxidável e de vidro, por meio de marcadores ii fluorescentes específicos e visualizações microscópicas. A fim de confirmar indiretamente a presença de óxido nítrico (NO) em cultivos de L. monocytogenes incubados por 4 e 8 dias a 25ºC, foi realizada a dosagem de nitrito com o emprego do reagente Griess. Foram realizados testes de concentração inibitória mínima (CIM) do doador de óxido nítrico como nitroprussiato de sódio (SNP) e dos inibidores de NO como N?-Nitro-L-arginina metil éster (L-NAME) e 2-(4-carboxifenil)-4,4,5,5- tetrametilimidazolina-1-oxi-3-óxido (Carboxi-PTIO sal de potássio, C-PTIO) frente a L. monocytogenes. Foi testada a eficácia do SNP e dos inibidores de NO na remoção de biofilmes pré-formados por 4 e 8 dias de L. monocytogenes em superfície de aço inoxidável. Os resultados deste trabalho demonstraram que o biofilme de L. monocytogenes formado em vidro e em aço inoxidável apresentou uma arquitetura microscópica semelhante a um \"favo de mel\", com presença de canais de água, bem como cavidades de tamanhos variados devido à dispersão de grupos de células planctônicas ou morte celular. A utilização de óleos essenciais e/ou sanitizantes comerciais por 1h em biofilmes de L. monocytogenes formados por 4 e 8 dias, foi eficaz na redução do número de células aderidas na superfície de aço inoxidável e de vidro. No biofilme de L. monocytogenes foram detectadas moléculas relacionadas ao estresse oxidativo como peróxido de hidrogênio (H2O2) e radicais superóxidos, bem como moléculas de estresse nitrosativo como óxido nítrico (NO) e peroxinitrito. A adição de NO exógeno (por meio do doador SNP) e a adição de inibidores de NO no meio de cultivo não alteraram o crescimento planctônico de L. monocytogenes. Foi observado que a exposição a SNP e a inibidores de NO por 1h em biofilmes de L. monocytogenes pré-formados por 4 e 8 dias, não induziu a dispersão celular. A adição de NO exógeno bem como a remoção de NO do meio de cultura por moléculas inibidoras não alteraram o nível de expressão dos genes Lmo1485, Lmo0990, Lmo0807 e PrfA, em culturas de L. monocytogenes de 8 dias. A utilização de óleos essenciais de plantas e/ou sanitizantes comerciais em biofilmes pré-formados pode ser uma alternativa eficaz na eliminação de L. monocytogenes em superfícies de manipulação de alimentos, mas a melhor estratégia de controle é impedir a formação de biofilme pelo emprego de tratamentos combinados nos estágios iniciais de contaminação. Em conclusão, L. monocytogenes formou biofilme com estruturas bem definidas que podem contribuir para a sobrevivência e disseminação da bactéria no ambiente de processamento de alimentos. Apesar de L. monocytogenes não formar um biofilme espesso com multicamadas, as células aderidas apresentam geralmente maior resistência à ação dos antimicrobianos em comparação com as células planctônicas, conseguindo sobreviver e persistir na superfície, com mecanismos regulatórios bastante eficientes frente a diferentes tipos de estresse. / Biofilms of Listeria monocytogenes are potential sources of contamination of processed foods, and may interfere in the effectiveness of cleaning and sanitizing procedures in food industry. In the present study the structures and dispersion of biofilms formed by two strains of L. monocytogenes on different abiotic surfaces, such as stainless steel, glass and polystyrene were evaluated. Different cultivation systems such as polystyrene and stainless steel 96-wells microplates, 24-wells microplates containing round stainless steel or glass slides, and 8-wells polystyrene chambers with borosilicate bottom were used. The experiments were done for 1, 4 and 8 days of incubation at 25°C. Biofilm formation was observed in 96-wells microplates of polystyrene and stainless steel by the quantification of biofilm biomass by staining with crystal violet, and also in 24-wells microplates system with circular slides of stainless steel or glass, with enumeration of adhered cells on agar plates. The structure of biofilms were observed by fluorescence microscopy (for the system of 24-wells microplates containing circular slides of stainless steel) and by confocal laser scanning microscopy (for the system of glass bottom chambers). For this, biofilms were stained with the LIVE/DEAD® bacterial viability kit, in order to differentiate viable cells (stained with Syto 9) from dead cells (stained with propidium iodide). The estimative of the number of viable cells was done by measurement of fluorescence. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of the essential oils plants of Cymbopogon citratus (lemon grass) and Zingiber officinale (ginger) and two commercial sanitizers (babassu coconut oil-based sanitizer and chlorine dioxide-based sanitizer) against L. monocytogenes were also determined. Subsequently, the antimicrobials were evaluated against L. monocytogenes biofilms formed by 4 and 8 days at 25°C on the stainless steel and glass surfaces by enumeration on agar plates of adhered cells and microscopic observations. The presence of molecules related to oxidative and nitrosative stresses in mature biofilms of two strains of L. monocytogenes formed on glass and stainless steel surfaces was also evaluated, and the possible role of exogenous nitric oxide (NO) and inhibitors of NO were studied for induction of biofilm dispersal cells and changed of genic expression levels of L. monocytogenes related to oxidative and nitrosative stress genes (Lmo0990, Lmo0807 and Lmo1485), as well as the regulation of virulence and biofilm formation gene (PrfA). The presence of reactive nitrogen intermediates (RNI) and reactive oxygen intermediates (ROI) was investigated in biofilms of L. monocytogenes formed on stainless steel and glass surfaces with 4 and 8 days-old at 25°C, using specific fluorescent dyes and microscopic views. In order to indirectly confirm the presence of nitric oxide (NO) in cultures of L. monocytogenes incubated for 4 and 8 days at 25°C, the dosage of nitrite was carried out with Griess reagent. The minimum inhibitory concentration (MIC) of a nitric oxide donor as sodium nitroprusside (SNP) and two NO inhibitors such as N-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) and 2-(4-carboxyphenyl)-4,4,5,5- tetrametilimidazoline-1-oxy-3-oxide (Carboxy-potassium salt, C-PTIO), were iv evaluated for L. monocytogenes. It was also determined the effectiveness of SNP and of the two inhibitors of NO to eliminate biofilms of L. monocytogenes preformed for 4 and 8 days on stainless steel surfaces. The results of this work showed that L. monocytogenes biofilms formed on glass and on stainless steel surfaces, presented similar microscopic architectures in a \"honeycomb\" like structure, with water channels and hollows of different sizes, possibly due to cell dispersion or death. The exposure to essential oils and/or commercial sanitizers for 1h for L. monocytogenes biofilms formed for 4 and 8 days was effective in reducing the number of cells adhered on stainless steel and on glass surfaces. In biofilms of L. monocytogenes, molecules were detected related to oxidative stress such as hydrogen peroxide (H2O2) and superoxide radicals, as well as molecules related to nitrosative stress as nitric oxide (NO) and peroxynitrite. The addition of exogenous NO (SNP) and inhibitors of NO in the culture medium did not inhibit planktonic growth of L. monocytogenes, and exposure to SNP and to inhibitors of NO for 1 h for biofilms of L. monocytogenes preformed by 4 and 8 days did not induce cell dispersion. The addition of exogenous NO and NO removal from the culture medium by inhibitory molecules did not alter the level of expression of Lmo1485, Lmo0990, and PrfA Lmo0807 genes in cultures of 8- days-old of L. monocytogenes. The use of essential oils from plants and/or sanitizing commercial agents on pre-formed biofilms can be an effective alternative in the control of L. monocytogenes in food handling surfaces, but the best control strategy is avoid the biofilm formation by applying combined treatments in initial stages of contamination. In conclusion, L. monocytogenes formed biofilms with well defined structures that may contribute to the survival and spread of bacteria in food processing environment. Despite L. monocytogenes do not form a multilayer thick biofilms, adherent cells generally have greater resistance to antimicrobial activity compared to planktonic cells, surviving and persisting on the surface with regulatory mechanisms effective against different types of stress.

As espécies de Candida são patógenos oportunistas e as infecções nas cavidades bucais causadas por este gênero são comuns em pacientes com fatores predisponentes, entre eles imussuprimidos, diabéticos e usuários de próteses dentais. No Brasil o índice de endentados é elevado sendo necessária a utilização de próteses bucais, que são locais favoráveis à colonização de microrganismos e o desenvolvimento de biofilme. A utilização de antissépticos como medida complementar na higiene oral é cada vez mais difundida. O objetivo deste trabalho foi detectar em amostras de C. albicans e C. não-albicans, isoladas da saliva de portadores de próteses bucais, os fatores de virulência, proteinase e biofilme e genes relacionados à proteinase (SAP1, SAP3) e à adesão (ALS1 e ALS3) e avaliar a atividade antifúngica in vitro de três formulações comerciais à base de clorexidina 0,12%, cetilpiridínio 0,07% e 0,075% frente aos isolados de Candida e biofilmes. Foram coletadas amostras de saliva de 70 pacientes usuários de próteses bucais. As leveduras foram isoladas em meio de CHROMagar® Candida e identificadas pela metodologia clássica e a confirmação de C. albicans por biologia molecular (PCR). Leveduras do gênero Candida foram isoladas de 32 (45,7%) amostras. Destas foram identificadas: C. albicans (29), C. krusei (5), C. glabrata (4), C. tropicalis (3) e C. parapsilosis (2), totalizando 43 leveduras entre monoculturas e culturas mistas. Os genes pesquisados foram detectados somente em amostras de C. albicans, os genes ALS2, ALS3 e SAP3 foram identificados em 86% dos isolados e o SAP1 em 93%. A atividade de proteinase entre os dos isolados de C. albicans foi de 72,4% e entre das espécies de C. não-albicans 35,7%. A de formação de biofilme sobre placas de 96 poços, e após coloração com XTT, demonstrou que a maioria dos isolados de Candida e todas as culturas mistas desenvolveram biofilmes em 24 horas. A atividade de três antissépticos frente as leveduras foi de <=1,25%, equivalente a uma diluição de 1:80 do antisséptico. Concluímos os três antissépticos também foram eficazes frente aos biofilmes de monoculturas e culturas mistas, as cepas de C. albicans continua sendo a espécie prevalente na cavidade bucal, os genes SAP1, SAP3, ALS2 e ALS3 estão presentes na maioria dos isolados de C. albicans, nestas amostras a maioria foram proteinase e biofilme positivos. A atividade de proteinase foi superior nas espécies de C. albicans em comparação com C. não-albicans. Os biofilmes das espécies de Candida quando formados em culturas mistas se desenvolvem mais em comparação com a formação de biofilme em monocultura. As três formulações de antissépticos foram eficazes contra todos isolados de leveduras em forma planctônica e na maioria dos biofilmes. / Candida species are opportunistic pathogens and infections in the oral cavity caused by these yeasts are common in patients with predisposing factors, such as diabetic or immunocompromised individuals with dental prosthesis. In Brazil, the number of toothless patients is high and the use of dental prosthesis is common, which represents a niche for colonization and formation of microbial biofilms in the oral cavity. The use of mouthwashes to aid in the oral hygiene has increased. The objective of this research was to isolate C. albicans and C. non-albicans from saliva of dental prosthesis users and to evaluate the isolates for the presence of virulence factors, proteinase production, biofilm formation and to search for genes encoding for proteinases (SAP1, SAP3) and adhesion factors (ALS1 and ALS3). Another objective was to evaluate in vitro the antifungal activity of three commercial mouthwashes containing 0.12% chlorhexidine and 0.07% or 0.075% cetylpyridinium, against planktonic Candida sp. cultures and in biofilms. Saliva samples of 70 patients with dental prosthesis were collected, the yeasts were isolated on CHOMagar® Candida and identified by classical biochemical tests combined with molecular test (PCR) for confirmation of C. albicans. Yeasts of Candida genus were isolated from 32 samples (45.7%) and were identified as C. albicans (29), C. krusei (5), C. glabrata (4), C. tropicalis (3) and C. parapsilosis (2), with a total of 43 yeasts, including mono and mixed cultures. The genes studied were detected only in C. albicans: ALS2, ALS3 and SAP3 genes were detected in 86% of the isolates and SAP1 in 93%. The proteinase activity among the isolates of C. albicans was 72.4% and among the species of C. non-albicans it was 35.7%. Assay done with cultivation in 96-wells microplates and staining with XTT, showed the majority of Candida isolates and all the mixed cultures were able to form biofilms within 24h. The activity of the three mouthwashes towards the yeasts was < 1.25%, equivalent to a dilution of 1:80 of the formulation. The three mouthwashes tested were also active against mono or multispecies biofilms. In conclusion, it was shown C. albicans is the most prevalent species. The genes SAP1, SAP3, ALS2 and ALS3 are present in the majority of C. albicans isolates, which were also positive for proteinase and biofilm formation. There was more proteinase activity in C. albicans in comparison with C. non-albicans. The biofilms of Candida species grew better in mixed cultures than in monoculture. The three commercial mouthwashes formulations were effective against all the yeast isolates in planktonic growth and they also inhibited the majority of yeasts in biofilm. Future work is needed to completely elucidate the role of Candida species in biofilms of oral cavity. It is also interesting to propose studies to standardize sensitivity tests for mono and multi-species biofilms.