Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Marianne Spalding / Banca: Vivian Cristina Costa Castilho Hyodo / Resumo: Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumoniae são enterobactérias que acometem especialmente indivíduos imunologicamente comprometidos com grande importância por sua resistência a antibióticos, dessa forma, o objetivo do estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana de extratos de própolis (glicólico e aquoso) distribuídos comercialmente em cepas ATCC e clínicas multirresistentes das espécies. Inicialmente foram determinados os valores de Concentração Microbicida Mínima (CMM) sobre cultura planctônica por microdiluição em caldo, segundo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), seguido por semeadura em ágar. A concentração correspondente ao quádruplo da CMM foi utilizada para testes em biofilmes monotípicos (contato de 5 min). Foi usada como controle positivo a solução de clorexidina (0,12%) e como controle negativo caldo BHI. Após o tratamento foi verificada a viabilidade dos micro-organismos pelo teste MTT, com leitura em espectrofotômetro de microplacas. Os dados de densidade óptica foram convertidos em porcentagem de redução microbiana e foi realizada a análise estatística com 5% de significância em todos os testes. Os extratos apresentaram ação contra forma planctônica e biofilmes de cepas multirresistentes de ambas as espécies. Para culturas planctônicas, P. aeruginosa apresentou CMM de 6,25 e 12,5 mg/mL para o extrato glicólico e de 13,75 e 55 mg/mL para o extrato aquoso, enquanto K. pneumoniae apresentou CMM de 6,25 a 25 mg/mL para o extrato glicólico e de ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae are enterobacteria that especially affect immunologically compromised individuals with great importance for their resistance to antibiotics. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antimicrobial activity of propolis extracts (glycolic and aqueous) commercially distributed in ATCC and multiresistant clinics strains of these species. The values of Minimum Microbicidal Concentration (MMC) on plankton culture were determined by microdilution in broth, according to Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), followed by sowing in agar. The concentration corresponding to the quadruple MMC was used for monotypic biofilm tests (5-minute contact). A positive control solution of chlorhexidine (0.12%) and as a negative control BHI broth were used. After the treatment, the viability of the microorganisms was verified by the MTT test, with microplate spectrophotometer reading. Optical density data were converted to microbial reduction percentage and statistical analysis was performed with 5% significance in all tests. The extracts showed action against planktonic form and biofilms of multiresistant strains of both species. For planktonic cultures, P. aeruginosa presented MMC of 6.25 and 12.5 mg / mL for the glycolic extract and 13.75 and 55 mg / mL for the aqueous extract, while K. pneumoniae had MMC of 6.25 to 25 mg / mL for the glycolic extract and 55 mg / mL for the aqueous extract. The reduction of viability in biofilms of P. aeruginosa reached 54.42% for the glycolic extract, and 64.66% for the aqueous extract. K. pneumoniae presented a maximum reduction of 64.24% with glycolic extract and 65.13% with aqueous extract, these reductions being statistically significant in relation to the negative control (p <0.05). Therefore, it can be concluded that propolis extracts present an important ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Este estudo avaliou o efeito de soluções higienizadoras de próteses totais quanto ao controle do biofilme (análise clínica) e à alteração de propriedades da resina acrílica (análise laboratorial). A análise clínica foi realizada em 32 desdentados totais que foram orientados a escovar suas próteses (escova Denture e sabonete líquido) três vezes ao dia e imergí-las (&Prime;overnight&Prime;) nas soluções: 1) Controle: Água Natural; 2) Pastilha Corega Tabs; 3) Hipoclorito de Sódio 0,5%. Cada solução foi utilizada por 21 dias (03 ciclos de 07 dias). Ao final de cada ciclo, a superfície interna da prótese superior foi evidenciada (vermelho neutro 1%) e fotografada (HX1- Sony). As áreas (total e corada com biofilme) foram medidas (Image Tool 3.00), sendo a porcentagem de biofilme calculada como a relação entre a área do biofilme multiplicado por 100 e área da superfície total da base interna da prótese. Para a análise laboratorial, foram confeccionados 140 corpos de prova de resina acrílica termopolimerizável (Lucitone 550) que foram imersos por 08 horas nas soluções: 1) Controle 1 (sem imersão); 2) Controle 2 (água destilada); 2) Pastilha Corega Tabs; 3) Hipoclorito de sódio 0,5%, simulando uma higienização diária de 03 anos (1095 dias). Antes e após as imersões, os corpos de prova foram avaliados quanto à alteração de cor (Espectrocolorímetro Color Guide 45/0), rugosidade superficial (rugosímetro Surftest SJ-201P) e resistência à flexão (Máquina Universal de Ensaios DL 2000). Os dados de cor foram também calculados de acordo com a National Bureau of Standards (NBS). As análises estatísticas compreenderam o método de equações de estimação generalizadas (GEE) e comparações múltiplas (Teste de Bonferroni - &alpha; = 1,67%) para análise clínica; e Análise de Variância (ANOVA) e teste HSD de Tukey (&alpha;=0,05) para análise laboratorial. Os resultados clínicos mostraram que a imersão em hipoclorito de sódio 0,5% diminuiu a área coberta por biofilme (8,29 ± 13,26 - B), quando comparado ao controle (18,24 ± 14,91 - A) e à pastilha (18,18 ± 16,62 - A). O hipoclorito (2,75 ± 0,49 - B) e a pastilha (3,01 ± 0,35 - B) provocaram alteração de cor significativamente maior que o controle (0,66 ± 0,29 A), sendo classificadas como perceptível, segundo a NBS. As soluções não alteraram a rugosidade da resina. Houve uma diminuição na resistência à flexão dos grupos pastilha (85,61 ± 10,46 - C) e hipoclorito (82,17 ± 8,47 - C) quando comparados com o controle (sem imersão) (105,4 ± 14,93 - A). O controle (água destilada) apresentou uma redução na resistência à flexão (67,06 ± 11,89 - B). Os achados deste estudo revelaram que a solução de hipoclorito de sódio 0,5% foi a mais efetiva na remoção do biofilme das próteses totais e que ambas as soluções (hipoclorito de sódio 0,5% e peróxido alcalino) não alteraram a rugosidade superficial, porém provocaram alterações de cor classificadas como perceptíveis segundo a NBS, bem como acarretaram uma diminuição da resistência à flexão da resina acrílica termicamente ativada. / This study evaluated the effect of denture cleansers on denture biofilm removal (clinical trial) and changes the properties of acrylic resin (laboratory analysis). A randomized clinical trial was performed in 32 edentulous patients who were instructed to brush their dentures (denture-specific brush and liquid soap) three times a day and to soak them overnight in the solutions: 1) Control: Water; 2) Efervescent Tablet (Corega Tabs); 3) 0.5% Sodium Hypochlorite. Each solution was used for 21 days (03 alternate cycles of 07 days). At the end of each cycle, the inner surfaces of maxillary dentures were disclosed (1% neutral red) and photographed (HX1 Sony). Total and stained biofilm areas were measured (Image Tool 3.00), and the percentage of biofilm calculated as the ratio between the area of the biofilm multiplied by 100 and total surface area of the internal base of the denture. For laboratory analysis, 140 specimens were prepared from heat-polymerized acrylic resin (Lucitone 550) and immersed for 08 hours in the solutions: 1) Control 1 (without immersion); 2) Control 2 (distilled water); 3) Efervescent Tablet Corega Tabs; 4) 0.5% Sodium Hypochlorite, simulating a daily hygiene of 03 years (1095 days). Before and after immersion, specimens were evaluated for color change (portable colorimeter Color Guide 450), surface roughness (Surface Roughness Tester SJ-201P) and flexural strength (universal testing machine DL 2000). Color data were also calculated according the National Bureau of Standards (NBS). Statistical analysis comprised the method of generalized estimating equations (GEE) and multiple comparisons (Bonferroni - &alpha; = 1.67%) for clinical analysis, and analysis of variance (ANOVA) and Tukey&prime;s HSD test (&alpha;=0.05) for laboratory analysis. Clinical results showed that the immersion in sodium hypochlorite 0.5% reduced the area covered by biofilm (8.3 ± 13.3 - B) compared to the control (18.2 ± 14.9 - A) and tablet (18.2 ± 16.6 - A). Hypochlorite (2.8 ± 0.5 - B) and tablet (3.0 ± 0.4 - B) caused significantly higher color change than the control (0.7 ± 0.3 A); such changes were classified as noticeable, according to NBS. The solutions did not alter the roughness of the resin. There was a decrease in the flexural strength of the groups tablet (85.6 ± 10.5 - C) and hypochlorite (82.2 ± 8.5 - C) compared to control (without immersion) (105.4 ± 14.9 - A). The control (distilled water) showed a reduction in flexural strength (67.1 ± 11.9 - B). The findings revealed that the 0.5% sodium hypochlorite solution was the most effective for biofilm removal from complete dentures and that both solutions (0.5% sodium hypochlorite and alkaline peroxide) did not alter surface roughness, but caused color changes classified as noticeable according to the NBS, and resulted in a decrease of flexural strength of heat-polymerized acrylic resin.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The goal of this study was to determine the occurrence of two resistance mechanisms described in micro-organisms, but not described in R. equi isolates from horses and environment samples. The first mechanism studied it was the biofilm formation in R. equi isolates from clinical (n=41) and fecal (n=72) equine samples. In order to verify the biofilm formation it was employed the biofilm-culturing assay (with and without glucose supplementation) and the epifluorescence microscopy method. Biofilm-producers R. equi isolates (n=8) were selected and analyzed by two in vitro susceptibility tests with three antimicrobial agents belonging to macrolides group and commonly used in equine rhodococcosis treatment. The biofilm formation was observed in 80.5% of fecal and 63.4% of clinical isolates of R. equi. The methods used in this study were useful to verify the biofilm formation by R. equi isolates. However, the glucose supplementation was an important factor for biofilm formation in fecal samples. Antimicrobial resistance was demonstrated in biofilm antimicrobial susceptibility test. The second mechanism studied included the efflux system in R. equi isolates from clinical (n=30), fecal (n=30) and soil (n=30) sources. The presence of req_39680 gene, encoding a putative efflux system, was determined by PCR. Phenotypic expression of efflux systems was determined in agar containing ethidium bromide. The req_39680 gene was detected in 60% of the isolates and the phenotypic expression in 20%. In clinical isolates was observed high correlation between the presence of this gene and the expression of efflux systems. Both mechanisms studied were demonstrated in R. equi and may be contributing to increase the antimicrobial resistance, as well as to be associated to the survival of R. equi in the environment and host. / O objetivo do presente estudo foi determinar a ocorrência de dois mecanismos de resistência descritos em micro-organismos, porém, ainda não verificados em isolados de R. equi provenientes de amostras de equinos e de solo. O primeiro mecanismo estudado foi a formação de biofilmes em isolados de R. equi de amostras clínicas (n=41) e fecais (n=72) de equinos. Para verificação da formação de biofilmes empregaram-se as técnicas de formação de biofilme em cultura (com e sem a suplementação de glicose) e a microscopia de epifluorescência. Oito isolados formadores de biofilme foram selecionados e submetidos a testes de susceptibilidade frente a três antimicrobianos da classe dos macrolídeos, comumente utilizados no tratamento da rodococose equina. A formação de biofilmes foi observada em 80,5% dos isolados fecais e em 63,4% dos clínicos. Os métodos utilizados neste estudo foram adequados para verificar a formação de biofilmes nos isolados de R. equi. No entanto, foi constatado que a glicose é um substrato importante para formação de biofilme em isolados de origem fecal. Nos testes de susceptibilidade observou-se resistência aos antimicrobianos testados apenas quando os isolados de R. equi foram desafiados na forma de biofilme. O segundo mecanismo explorado envolveu a pesquisa de sistema de efluxo em isolados de R. equi de origem clínica (n=30) fecal (n=30) e de solo (n=30). Neste estudo buscou-se identificar a presença de um gene denominado req_39680, o qual foi descrito como codificador de um possível sistema de efluxo, Por fim, avaliou-se a expressão fenotípica de mecanismo de efluxo nos isolados analisados. A presença do gene req_39680, foi determinada por meio da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) e a análise da expressão fenotípica de mecanismo de efluxo foi visualizada em ágar contendo brometo de etídeo. Foi evidenciada a presença do gene req_39680 em 60% dos isolados e a expressão fenotípica em 20%. Nos isolados de origem clínica, um alto índice de correlação entre a presença do gene estudado e a expressão de mecanismo de efluxo foi observada. Ambos os mecanismos estudados estão presentes em R. equi e podem estar contribuindo para a crescente resistência aos antimicrobianos, bem como, estar relacionados à sobrevivência de R. equi tanto no ambiente quanto no hospedeiro.

Na Odontologia, existe uma grande preocupação com a formação de placa bacteriana ou biofilme devido ao seu potencial cariogênico. Essa atenção se estende à ortodontia, devido ao acúmulo de biofilme formado nos aparelhos ortodônticos, tanto nos aparelhos removíveis quanto nos aparelhos fixos. É muito comum a presença de lesões brancas após a remoção dos bráquetes, em torno de 50 a 75% dos pacientes, provocadas pela presença do biofilme. É necessário um controle químico e mecânico rigoroso, a fim de se evitar alterações irreversíveis nos dentes e periodonto. O controle mecânico se dá pela escovação adequada, pelo correto uso de fio dental e pela frequência desses hábitos, além, claro, de um acompanhamento profissional periódico. O controle químico pode ser viabilizado pelo uso de enxaguatórios bucais, nos quais residem alguns efeitos indesejáveis e contraindicações relacionadas ao uso e à idade dos pacientes. Este estudo tem como objetivo avaliar comparativamente dois enxaguatórios bucais, um de natureza comercial (Cepacol®), e outro não comercial, elaborado com extratos hidroalcoólicos das plantas Nasturtium officinale (agrião), Rosmarinus offinalis (alecrim), Tabebuia impetiginosa (ipê roxo), Achillea millefolium (mil folhas) e Plantago major (tanchagem), desenvolvido na Faculdade de Ciências Farmacêuticas/UNESP Araraquara. Foram selecionados 40 pacientes, jovens e adultos, entre 18 e 45 anos, usuários de aparelho ortodôntico corretivo (fixo), divididos em dois grupos, o grupo do Cepacol e o grupo do Enxaguatório base de plantas. Foram coletadas amostras nos períodos de 0, 7, 15 e 21 dias e analisadas observando-se as Unidades Formadoras de Colônia (UFC) de cada amostra. Houve uma queda significativa da quantidade de bactérias após o uso do Enxaguatório à base de plantas, revelando um produto de extrema utilidade no auxílio do controle do biofilme bacteriano nas superfícies dentárias. / In dentistry, there is a great concern with the formation of plaque or biofilm, due to its cariogenic potential. This attention extends to orthodontics due to the accumulation of biofilm on orthodontic appliances, removable appliances as much in the brackets. It is very common the presence of white spots after removal of the brackets, around 50 to 75% of patients, which are caused by biofilms. It takes a rigorous mechanical and chemical control in order to avoid irreversible changes in the teeth and periodontium. The mechanical control is by proper brushing, correct flossing and also the frequency of these habits, besides, of course, a periodical professional monitoring. Chemical control can be achieved by the use of mouthwashes, home to some undesirable effects and contraindications related to the use and age of patients. This study aimed to assess two mouthwashes, a commercial type (Cepacol ®) and other non-commercial, made with hydroalcoholic extracts of plants Nasturtium officinale (watercress), offinalis Rosmarinus (rosemary), Tabebuia impetiginosa ( purple ipe), Achillea millefolium (thousand leaves) and Plantago major (plantain), developed at the Faculty of Pharmaceutical Sciences / UNESP Araraquara. We selected 40 patients, young and adults between 18 and 45 years, users of orthodontic appliance (fixed), divided into two groups, the Cepacol group and the group of herbal mouthwash. Samples were collected during periods of 0, 7,15 and 21 days and analyzed by observing the Colony Forming Units (CFU) of each sample. There was a significant decrease in the amount of bacteria after using herbal mouthwash, revealing a product of the utmost use in aiding the control of bacterial biofilms on tooth surfaces.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-17Bitstream added on 2014-06-13T19:58:19Z : No. of bitstreams: 1 andrade_mc_me_arafo.pdf: 1842420 bytes, checksum: 8ab56a86c157ba82b8e80912d3966136 (MD5) / O surgimento da resistência antifúngica aos tratamentos convencionais tem exigido o desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas para o tratamento da candidíase bucal. Nesse contexto, a Terapia Fotodinâmica (Photodynamic Therapy – PDT) tem sido sugerida como método alternativo para a inativação de microorganismos patogênicos. O sucesso da PDT depende, dentre outros fatores do tempo de pré-irradiação (TPI), que é o tempo em que o fotossensibilizador (FS) permanece em contato com os micro-organismos previamente à iluminação. O objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade da PDT mediada pela curcumina (Cur), associando diferentes TPIs, concentrações e doses de luz, na redução da viabilidade celular de três espécies de Candida ATCC (C. albicans ATCC 90028; C. glabrata ATCC 2001; C. dubliniensis ATCC 7987), em culturas planctônicas e biofilmes. A Cur foi ativada por um aparelho de LED (luz emitida por diodo) que emite luz no espectro azul, com comprimento de onda predominante de 455 nm. Inicialmente, suspensões celulares padronizadas dos micro-organismos foram transferidas para placas de 96 orifícios, e tratadas com três diferentes concentrações de Cur (5, 10 e 20 YM), ou mantidas nos poços por 48 horas para formação dos biofilmes, seguida de tratamento com outras três concentrações de Cur (20, 30 e 40 YM). As culturas celulares foram deixadas em contato com a Cur por 1, 5, 10 ou 20 minutos, anteriormente à iluminação. Em seguida, as culturas planctônicas foram expostas à dose de luz de 5,28 J/cm2. Os biofilmes, por sua vez, foram tratados com duas doses de luz (5,28 e 10,56 J/cm2). Suspensões/biofilmes adicionais foram tratados somente com as três concentrações de Cur (pelo maior tempo usado em cada estudo) ou apenas com a maior dose de luz. Amostras controle não foram tratadas com Cur e não receberam luz. Após a PDT, as suspensões celulares... / The emergence of antifungal-resistant yeasts to conventional therapy has demanded the development of new therapy modalities against oral candidiasis. On this context, Photodynamic Therapy (PDT) has been suggested as a possible alternative treatment for inactivation of pathogenic microorganisms. PDT success depends, among other factors, on the pre-irradiation time (PIT). The aim of this study was to evaluate the effectiveness of curcumin (Cur)-mediated PDT associating different PITs, Cur concentrations and light doses, against planktonic and biofilm cultures of three different Candida species (C. albicans ATCC 90028; C. glabrata ATCC 2001; C. dubliniensis ATCC 7987). Cur was activated by a LED (light emitting diode) device, which emits light on the blue spectrum, with predominant wavelength at 455 nm. Standardized cell suspensions were treated with three different concentrations of Cur (5, 10 e 20 YM), or kept into the wells for 48 hours to allow adhesion and biofilm formation. The biofilms were treated with other three different concentrations of Cur (20, 30 e 40 YM). The cultivated fungus (planktonic and biofilms) were maintained in the dark in contact with the PS for either 1, 5, 10 or 20 minutes before irradiation. The suspensions were exposed to LED light dose of 5.28 J/cm2, while the biofilms were exposed to either 5.28, or 10.56 J/cm2. Additional samples of suspensions/biofilms were treated only with the three Cur concentrations (for the highest incubation period used in the study), without illumination, or only with the highest light dose, without Cur. Control samples had neither light nor Cur. After PDT, suspensions were plated on Sabouraud Dextrose Agar (SDA) in duplicate, while biofilm results were read using the XTT-salt reduction method. The results for the planktonic cultures were statistically analyzed by Kruskal-Wallis and Dunn, while for the biofilms, analysis of variance... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Coorientador: Paulo César Gomes / Banca: Maria Lúcia Taylor / Banca: Mário Sérgio Palma / Banca: Guilherme Targino Valente / Banca: Daniel Guariz Pinheiro / Resumo: Histoplasma capsulatum variedade capsulatum é um patógeno fúngico dimórfico causador de uma importante micose sistêmica, denominada histoplasmose. A patogenia da histoplasmose ocorre como resultado da inalação dos microconídios da fase miceliar, que afetam primariamente os pulmões onde ocorre a diferenciação em leveduras, que posteriormente, induzem uma infecção pulmonar e disseminação para outros órgãos, particularmente em indivíduos imunocomprometidos. Recentemente, foi estabelecida uma correlação entre o modo de infecção de H. capsulatum e a formação de biofilmes, estruturas caracterizadas como redes tridimensionais complexas que induzem, entre outros, a resistência antifúngica. Por esta razão, é emergente a identificação de um novo alvo e/ou biomarcador que possa ser selecionado, a fim de estabelecer um novo regime terapêutico e/ou ferramenta diagnóstica para a histoplasmose. Com base nisto, este trabalho tem como objetivo analisar a regulação transcricional codificante e metabólica diferencial entre as duas formas de crescimento de H. capsulatum, em biofilmes e em crescimento planctônico, bem como determinar o perfil de microRNAs (miRNAs) aberrantes em células hospedeiras em resposta à infecção com leveduras livres e biofilmes. O sequenciamento completo das regiões transcritas foi realizado utilizando a plataforma HiSeq da Illumina e a investigação do padrão de miRNAs em macrófagos (Mø) hospedeiros infectados foi conduzida empregando uma técnica de RT-qPCR (reverse trans... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Histoplasma capsulatum variety capsulatum is a dimorphic fungal pathogen that causes an important systemic mycosis, called histoplasmosis. The pathogenesis of histoplasmosis occurs as a result of the inhalation of mycelial microconidia, which primarily affect the lungs where differentiation occurs in yeast, which subsequently induce pulmonary infection and dissemination to other organs, particularly in immunocompromised individuals. Recently, a correlation was established between the mode of infection of H. capsulatum and the formation of biofilms, structures characterized as complex three-dimensional networks that induce, among others, antifungal resistance. For this reason, it is emerging the identification of a new target that can be selected in order to establish a new therapeutic strategy for histoplasmosis. Based on this, this work aims to analyze the differential transcriptional and coding transcriptional regulation between the two forms of growth of H. capsulatum in biofilms and planktonic growth, as well as to determine the profile of aberrant microRNAs (miRNAs) in host cells post-infection with free yeasts and biofilms. Complete sequencing of the transcribed regions was performed using the Illumina HiSeq platform and the investigation of the miRNA pattern in infected host macrophages (Mø) was conducted using a reverse transcription-quantitative PCR (RT-qPCR) technique. Subsequently, the production of total polysaccharides was determined in samples of planktonic cultures, biofilms and supernatant of the biofilms and, additionally, the abundance of non-protein metabolites and small peptides in these growth forms was established by LC-MS/MS. In summary, the data obtained showed that the structure of yeasts in biofilms induces a negative regulation in the direct (coding genome - mRNA) and indirectly... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Teresinha Knobl / Banca: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Resumo: O biofilme representa uma importante fonte de contaminação de alimentos, podendo estar presente em vários pontos da cadeia de processamento da carne de frango. O controle do biofilme na indústria alimentícia necessita de métodos alternativos, a fim de superar a resistência a desinfetantes comuns e garantir um alimento livre de resíduos químicos. Os objetivos deste estudo foram avaliar a influência das superfícies de inox, vidro e PVC sobre a formação de biofilmes de Salmonella spp. em diferentes momentos, e avaliar a ação lítica de um pool de bacteriófagos sobre biofilmes destas bactérias. A maioria das amostras foi classificada como fracas produtoras de biofilme, e os sorovares Heidelberg e Enteritidis apresentaram um número significativamente maior de amostras formadoras. As superfícies de inox e vidro favoreceram significativamente a formação de biofilme em três e cinco períodos, respectivamente. O pool de bacteriófagos reduziu a formação de biofilme nas superfícies de inox, vidro e PVC, e seu período de ação concentrou-se principalmente em 3h, porém estes resultados não foram estatisticamente significantes. Nossos achados sugerem que o sorovar e a superfície envolvidos podem interferir significativamente na produção de biofilme, porém através dos métodos utilizados neste estudo, não podemos confirmar a ação de bacteriófagos sobre biofilmes de Salmonella spp. nas superfícies de vidro, inox e PVC / Abstract: Biofilm is a major source of food contamination and may be present in various parts of the chicken meat processing chain. The control of biofilm in the food industry needs alternative methods in order to overcome resistance to disinfectants and ensure food free of chemical residues. The objective of this study was to evaluate the influence of the surfaces of stainless steel, glass and PVC in the biofilm formation by Salmonella spp. at different times and evaluate the action of a pool of bacteriophages against this bacterial biofilms. Most samples were classified as weak biofilm producers. Heidelberg and Enteritidis serotypes showed a significantly higher number of samples capable to produce biofilm. The surfaces of stainless steel and glass significantly favored the biofilm formation in three and five periods, respectively. The bacteriophage pool reduced biofilm formation on the surfaces of stainless steel, glass and PVC and its action period focused mainly at 3h. Our findings suggests that there is a difference in the production of biofilms by different serotypes of Salmonella spp., as well as significantly interference of the surfaces in the production of biofilms by this bacteria, however more studies should be conducted in order to characterize the bacteriophage action in the control of biofilms / Mestre

Orientador: Marlise Inês Klein / Resumo: A cárie representa a doença humana mais prevalente no mundo, sua etiologia é dependente de biofilme e da dieta. Os biofilmes são comunidades altamente dinâmicas e estruturadas de células microbianas que se encontram embebidas em uma matriz extracelular tridimensional (MEC). Esta estrutura age como uma barreira que limita a difusão e fornece estabilidade e proteção aos microrganismos. Streptococcus mutans tem um potencial acidogênico e acidúrico, orquestra a construção do biofilme e modula sua virulência, produzindo ácidos lipoteicóicos (LTA), DNA extracelular (eDNA) e exopolissacarídeos (EPS), promovendo assim a adesão e coesão microbiana. Ao mesmo tempo a MEC produzida dificulta a difusão de metabólitos no biofilme. O objetivo do estudo foi determinar por meio de RT-qPCR a dinâmica da expressão de genes de S. mutans associados ao metabolismo de LTA (dltABCD, SMU_775c), eDNA (lytST, lrgAB, ccpA) e exopolissacarídeos (gtfBCD, gbpB, dexA), durante o desenvolvimento da MEC de biofilmes mistos em um estudo longitudinal. Biofilmes mistos de S. mutans UA159 (cepa parental) ou ΔgtfB (mutante com deleção do gene gtfB), Actinomyces naeslundii ATCC 12104 e Streptococcus gordonii DL-1 foram formados em discos de hidroxiapatita revestidos de película salivar, e cultivados a 37° C e 5% de CO2 em caldo triptona e extrato de levedura contendo 25% de saliva e alternando 0,1% de sacarose (escassez) e 0,5% de sacarose + 1% de amido (abundância). O pH do meio de cultura manteve-se ácido durante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dental caries represents the most prevalent human disease worldwide, its etiology is biofilm-diet dependent. Biofilms are highly dynamic and structured communities of microbial cells that are enmeshed in a three-dimensional extracellular matrix (ECM). This structure acts as a diffusion-limiting barrier providing stability and protection to the microorganisms. Streptococcus mutans is acidogenic, aciduric, and orchestrates the biofilm build-up process. It modulates the biofilm’s virulence by producing lipoteichoic acids (LTA), extracellular DNA (eDNA) and exopolysaccharides (EPS), thereby promoting microbial adhesion and cohesion. The resulting ECM hinders diffusion in the biofilm. The aim of the study was to determine via RT-qPCR the dynamics of expression of S. mutans genes associated with LTA (dltABCD, SMU_775c), eDNA (lytST, lrgAB, ccpA) and exopolysaccharides (gtfBCD, gbpB, dexA) metabolism, during ECM development in mixed-species biofilm by time-lapse studies. Mixed-species biofilms of S. mutans UA159 (parental strain) or ΔgtfB (mutant with deletion of the gene gtfB), Actinomyces naeslundii ATCC 12104 and Streptocsoccus gordonii DL-1 were formed onto saliva-coated hydroxyapatite discs. These biofilms were cultivated at 37°C and 5% CO2 in triptone with yeast extract containing saliva 25% and alternating 0.1% sucrose (scarcity) and 0.5% sucrose + 1% starch (abundance). The pH of the spent media remained acid during the experimental periods, and was lower after prolonged inc... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Banca: Eunice Teresinha Giampaolo / Banca: Claudia Helena Lovato da Silva / Resumo: O surgimento da resistência antifúngica aos tratamentos convencionais tem exigido o desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas para o tratamento da candidíase bucal. Nesse contexto, a Terapia Fotodinâmica (Photodynamic Therapy - PDT) tem sido sugerida como método alternativo para a inativação de microorganismos patogênicos. O sucesso da PDT depende, dentre outros fatores do tempo de pré-irradiação (TPI), que é o tempo em que o fotossensibilizador (FS) permanece em contato com os micro-organismos previamente à iluminação. O objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade da PDT mediada pela curcumina (Cur), associando diferentes TPIs, concentrações e doses de luz, na redução da viabilidade celular de três espécies de Candida ATCC (C. albicans ATCC 90028; C. glabrata ATCC 2001; C. dubliniensis ATCC 7987), em culturas planctônicas e biofilmes. A Cur foi ativada por um aparelho de LED (luz emitida por diodo) que emite luz no espectro azul, com comprimento de onda predominante de 455 nm. Inicialmente, suspensões celulares padronizadas dos micro-organismos foram transferidas para placas de 96 orifícios, e tratadas com três diferentes concentrações de Cur (5, 10 e 20 YM), ou mantidas nos poços por 48 horas para formação dos biofilmes, seguida de tratamento com outras três concentrações de Cur (20, 30 e 40 YM). As culturas celulares foram deixadas em contato com a Cur por 1, 5, 10 ou 20 minutos, anteriormente à iluminação. Em seguida, as culturas planctônicas foram expostas à dose de luz de 5,28 J/cm2. Os biofilmes, por sua vez, foram tratados com duas doses de luz (5,28 e 10,56 J/cm2). Suspensões/biofilmes adicionais foram tratados somente com as três concentrações de Cur (pelo maior tempo usado em cada estudo) ou apenas com a maior dose de luz. Amostras controle não foram tratadas com Cur e não receberam luz. Após a PDT, as suspensões celulares... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The emergence of antifungal-resistant yeasts to conventional therapy has demanded the development of new therapy modalities against oral candidiasis. On this context, Photodynamic Therapy (PDT) has been suggested as a possible alternative treatment for inactivation of pathogenic microorganisms. PDT success depends, among other factors, on the pre-irradiation time (PIT). The aim of this study was to evaluate the effectiveness of curcumin (Cur)-mediated PDT associating different PITs, Cur concentrations and light doses, against planktonic and biofilm cultures of three different Candida species (C. albicans ATCC 90028; C. glabrata ATCC 2001; C. dubliniensis ATCC 7987). Cur was activated by a LED (light emitting diode) device, which emits light on the blue spectrum, with predominant wavelength at 455 nm. Standardized cell suspensions were treated with three different concentrations of Cur (5, 10 e 20 YM), or kept into the wells for 48 hours to allow adhesion and biofilm formation. The biofilms were treated with other three different concentrations of Cur (20, 30 e 40 YM). The cultivated fungus (planktonic and biofilms) were maintained in the dark in contact with the PS for either 1, 5, 10 or 20 minutes before irradiation. The suspensions were exposed to LED light dose of 5.28 J/cm2, while the biofilms were exposed to either 5.28, or 10.56 J/cm2. Additional samples of suspensions/biofilms were treated only with the three Cur concentrations (for the highest incubation period used in the study), without illumination, or only with the highest light dose, without Cur. Control samples had neither light nor Cur. After PDT, suspensions were plated on Sabouraud Dextrose Agar (SDA) in duplicate, while biofilm results were read using the XTT-salt reduction method. The results for the planktonic cultures were statistically analyzed by Kruskal-Wallis and Dunn, while for the biofilms, analysis of variance... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Cláudia Pavarina / Abstract: Biofilmes formados por Candida estão relacionados a infecções bucais, como a candidíase. Embora a resistência do biofilme seja multifatorial, a proteção exercida por sua matriz extracelular (MEC) é importante para os altos níveis de resistência a drogas antifúngicas. O conhecimento dos princípios estruturais da MEC possibilita maior compreensão de como atuar para desorganizá-la e melhorar a difusão de agentes antifúngicos para que atinjam mais eficientemente o biofilme, além de, futuramente, possibilitar o desenvolvimento de terapias mais eficazes para o controle da formação de biofilmes. Sendo assim, os objetivos principais deste estudo foram: (1) verificar a influência da inativação de genes envolvidos na filamentação (EFG1 e TEC1) em características estruturais dos biofilmes e na produção de componentes da MEC; (2) verificar a influência do fluconazol (FLZ) na MEC de biofilmes de Candida albicans ATCC 90028 (susceptível a fluconazol- CaS), C. albicans ATCC 96901 (resistente a fluconazol- CaR), Candida glabrata ATCC 2001 (susceptível a fluconazol- CgS) e C. glabrata ATCC 200918 (resistente a fluconazol- CgR) e (3) estudar a ação de enzimas hidrolíticas (DNase, Dextranase e β-glucanase individualmente ou em diferentes combinações) sobre a MEC de biofilmes de CaS e CaR. Biofilmes maduros (48 horas) foram analisados através de contagem de unidades formadoras de colônia (ufc/mL), peso seco total, peso seco insolúvel e proteínas insolúveis. Os componentes da MEC- polissacarídeos... (Complete abstract click electronic access below) / Resumo: Biofilms formed by Candida are related to bucal infections, such as candidiasis. Although the biofilm resistance is multifactorial, the protection exerted by its extracellular matrix (ECM) is essential for its high levels of resistance to antifungals. The knowledge of the structural principles of the ECM permits a better understanding of how to disorganize the ECM and improve the diffusion of antifungal drugs to reach the biofilm. Moreover, the study of the ECM may enable the development of more effective therapies to control biofilm formation. Thus, the main objectives of this study were: (1) to verify the influence of the inactivation of genes involved in filamentation and structural characteristics of the biofilms (EFG1 and TEC1) on the production of ECM components; (2) to verify the influence of fluconazole (FLZ) on the biofilms' ECM of Candida albicans ATCC 90028 (fluconazole-susceptible: CaS), C. albicans ATCC 96901 (fluconazole-resistant: CaR), Candida glabrata ATCC 2001 (fluconazolesusceptible: CgS) and C. glabrata ATCC 200918 (fluconazole-resistant: CgR) and (3) to study the action of hydrolytic enzymes (DNase, Dextranase and β-glucanase individually or in different combinations) on the ECM of CaS and CaR biofilms. Mature biofilms (48 hours) were analyzed by colony counting forming units (cfu/mL), total dry weight, insoluble dry-weight and total proteins. ECM components- alkali-soluble polysaccharides (ASPs), water-soluble polysaccharides (WSPs), extracellular DNA (e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor