Na aquacultura de recirculação são utilizados filtros biológicos para o tratamento do efluente antes que este retorne aos tanques. Estas unidades de tratamento têm como finalidade a transformação de nitrogênio amoniacal em nitrato, pois a amônia e o nitrito são tóxicos para os peixes. O nitrogênio amoniacal tende a se acumular na água de cultivo, pois é um importante produto de excreção dos organismos aquáticos e degradação da ração não consumida. Nestes filtros biológicos, os microorganismos responsáveis pelo tratamento da água residuária se encontram aderidos no meio de preenchimento, formando um biofilme. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar as comunidades microbianas presentes no biofilme associado ao filtro biológico de uma unidade experimental de tratamento de efluente de aquacultura. Durante o experimento, realizado em dois sistemas paralelos representando unidades de aquacultura com e sem recirculação de água, também foram monitorados parâmetros de qualidade da água. Os tanques experimentais foram povoados com juvenis de tilápias-do-Nilo (Oreochromis niloticus), que foram submetidos a pesagens a cada quinze dias para avaliar seu ganho de biomassa. As bactérias foram identificadas através da técnica de análise microbiológica da hibridização fluorescente in situ (FISH). A estrutura do biofilme foi avaliada através de microscopia eletrônica de varredura. Os resultados indicam que a nitrificação teve um papel mais importante no controle da qualidade da água no sistema com recirculação em relação ao tanque sem recirculação. A análise microbiológica do meio de preenchimento do filtro revelou uma presença marcante (com proporções de Cy3/DAPI variando entre 0,5% e 7,6%) de células ativas de organismos nitrificantes (oxidadores de amônia e de nitrito), pertencendo a gêneros distintos como Nitrobacter, Nitrococcus e Nitrosomonas, além de outros grupos de presença expressiva, como bactérias filamentosas (com proporções de 11,2% a 17,3% da contagem de células marcadas com DAPI). As imagens de Microscopia Eletrônica de Varredura revelaram a natureza do arranjo destas bactérias no meio filtrante, caracterizando um biofilme bem desenvolvido, composto por diversos morfotipos microbianos. O conhecimento das bactérias que compõe este biofilme pode tornar possível a geração de melhorias que podem ser implementadas para aumentar a eficiência do sistema. / In recirculating aquaculture, biological filters are used for treating the effluent before it returns to tanks. These treatment units are intended for transforming ammoniacal nitrogen into nitrate, since ammonia and nitrite are toxic to fish. Ammoniacal nitrogen tends to accumulate in culture water, because it is an important excretion product from aquatic organisms and also due to degradation of non consumed feed. In these biological filters, microorganisms responsible for the treatment of waste water adhere to the filler, forming a biofilm. The present work intended to characterize the microbial community present in the biofilm associated to the biological filter at an experimental aquaculture effluent treatment unit. During the experiment, conducted in two parallel systems representing aquaculture units with and without water recirculation, water quality parameters were also monitored. Experimental tanks were populated with juvenile Nile Tilapias (Oreochromis niloticus), which were subjected to weighing every 15 days in order to assess their biomass gain. Bacteria were identified through the microbiological analysis technique of Fluorescent In Situ Hybridization (FISH). The biofilm structure was assessed using scanning electron microscopy. The results indicate that nitrification had a more important role in the control of water quality in the system with recirculation compared with the tank without recirculation. The microbiological analysis of the filter media revealed a significant presence (with Cy3/DAPI range between 0.5% e 7.6%) of active cells from nitrifying organisms (ammonia and nitrite oxidizers), which belonged to different genera such as Nitrobacter, Nitrococcus and Nitrosomonas, in addition to groups that had an expressive presence, such as filamentous bacteria (representing 11.2% to 17.3% of the total DAPI stained cells). Scanning Electron Microscopy images revealed the nature of the arrangement of these bacteria in the filtering media, characterizing a well developed biofilm made up of diverse microbial morphotypes. The knowledge about the bacteria making up the biofilm may enable improvements that can be implemented to increase system effectiveness.

Foram avaliados 528 isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa de 131 pacientes fibrocísticos atendidos em um centro de referência em fibrose cística (FC) durante o período de 2005 a 2008. 135 isolados clínicos (25,6%) apresentaram subpopulação hipermutante (isolados com altas taxas de mutações) utilizando teste modificado de suscetibilidade aos antimicrobianos. Destes, 9 isolados (6,7%) de 7 pacientes foram classificados como hipermutantes (HPM) segundo estimativa da freqüência de mutação. Após seqüenciamento do gene mutS e análise de mutações relacionadas à inativação do sistema de reparo de erros no pareamento do DNA (Mismatch Repair System - MRS), foi possível observar este tipo de mutação em 5 isolados HPM de 4 pacientes. Avaliamos a formação de biofilme em 45 isolados NHPM, 9 HPM e suas respectivas subpopulações por duas metodologias. Segundo o primeiro método, 24 (53,3%) e 3 (21,4%) isolados NHPM e HPM, respectivamente, foram classificados como não-formadores de biofilme. Pelo segundo método, apenas 4 (8,9%) isolados NHPM e nenhum isolado HPM foram classificados nessa categoria. Os percentuais de resistência aos antibióticos ceftazidima, ciprofloxacino e tobramicina em condições de biofilme foram mais elevados que aqueles obtidos em crescimento plantônico e, em ambas as condições, foi possível evidenciar forte associação entre hipermutabilidade e aumento de resistência antibiótica. A associação dos macrolídeos azitromicina e claritromicina, em concentrações sub-inibidoras, com os antibióticos anti-pseudomonas, demonstrou ação inibitória sobre isolados clínicos de P. aeruginosa em condições de biofilme, o que sugere sua indicação no tratamento de infecções por P. aeruginosa pela sua ação anti-biofilme. / We evaluated 528 clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa in 131 CF patients attended at a referral center for cystic fibrosis (CF) during the period of 2005 to 2008. 135 clinical isolates (25.6%) presented hypermutable subpopulation (isolates with high mutation rates) using a modified antimicrobial susceptibility method. Of these, 9 isolates (6.7%) of 7 patients were classified as hypermutable (HPM) according to the estimate of mutation frequency. After gene sequencing and analysis of mutS mutations related to inactivation of the repair system errors in DNA pairing (Mismatch Repair System - MRS), we observed this type of mutation in 5 HPM isolates of 4 patients. We evaluated the biofilm formation in 45 isolates NHPM, 9 HPM and their subpopulations by two methods. According the first method, 24 (53.3%) and 3 (21.4%) isolates NHPM and HPM, respectively, were classified as non-biofilm formers. According the second method, only 4 (8.9%) isolates NHPM and none HPM were classified in this category. The percentages of resistance to antibiotics ceftazidime, ciprofloxacin and tobramycin in conditions of biofilm were higher than those obtained in planktonic growth, and in both conditions, it was observed a strong association between hypermutability and increased antibiotic resistance. The association of macrolides azithromycin and clarithromycin, in sub-inhibitory concentrations, with anti-pseudomonas antibiotics, has shown inhibitory activity on clinical isolates of P. aeruginosa in biofilm conditions, which should be recommended for treatment of CF P. aeruginosa infections due to its anti-biofilm action.

During routine work, the dental staff and patients are exposed to contamination by water used in dental units, through accidental ingestion or aspiration of aerosols generated by high-speed and air-water syringe. This study evaluated the water quality of the dental equipment of public dental offices in Alagoas, conducting the count of heterotrophic bacteria, filamentous fungi, as well as the presence of total and fecal coliforms and Streptococcus mutans. We collected water from air-water syringe, supply hoses with handpieces disconnected, handpieces with supply hose attached, reservoir and water where the reservoir was filled from six dental offices. To search for heterotrophic bacteria and fungi volumes of 100 μL of pure sample and 10-1 dilution were plated in duplicate on plate count agar medium supplemented with 50 mg.L-1 of Ketoconazole and Sabouraud dextrose agar supplemented with chloramphenicol and amplicilina, 50 mg.L-1 of each. The results were expressed in CFU/mL. For quantification of total and fecal coliforms, we used the method of enzyme substrate (Colilert ®) and the results were expressed in MPN/100ml, according to a table supplied by the manufacturer. The research of S. mutans was accomplished through the use Mitis Salivarius Bacitracin with and without prior disinfection with alcohol 70% of the collection points in Petri dishes and a vial with medium Mitis Salivarius Bacitracin Sucrose without prior disinfection of the collection points. All results were expressed in CFU/mL and subjected to molecular analysis to confirm the identities. We did not observe the isolation of Streptococcus mutans. However the high contamination found indicated that the water was unfit for human consumption can be considered a potential source of cross infections. / Durante a rotina de trabalho, a equipe odontológica e os pacientes estão expostos a contaminação pelas águas utilizadas nas unidades dentais, através da ingestão acidental ou aspiração dos aerossóis gerados pela caneta de alta rotação e seringa tríplice. O presente estudo avaliou a qualidade da água dos equipamentos odontológicos da rede pública estadual de Alagoas, realizando a contagem de bactérias heterotróficas, a presença de coliformes totais e termotolerantes, assim como contagem de fungos filamentosos, potencialmente patogênicos e a presença de Streptococcus mutans. Foram coletadas água, da seringa tríplice, caneta de alta rotação com a peça de mão acoplada e desacoplada às mangueiras, reservatório de água e do local onde era abastecido o reservatório; de seis consultórios odontológicos. Para pesquisa de bactérias heterotróficas e fungos filamentosos volumes de 100 μl da amostra original e da diluição 10-1 foram semeados em duplicata, em meio Plate Count Agar adicionado de 50 mg.L-1 de Cetoconazol e em Agar Sabouraud dextrose adicionado de cloranfenicol e amplicilina, 50 mg.L-1 de cada. Os resultados foram expressos em UFC/mL. Para quantificação de coliformes totais e termotolerantes, foi utilizado o método do substrato enzimático (Colilert®) e os resultados foram expressos em NMP/100 mL, de acordo com tabela fornecida pelo fabricante. A pesquisa de S. mutans foi realizada utilizado o meio Mitis Salivarius Bacitracina com e sem desinfecção prévia com álcool a 70% dos pontos de coleta em placas de Petri e em um laminocultivo com meio Mitis Salivarius Bacitracina Sacarose sem limpeza prévia dos pontos de coleta. Todos os resultados foram expressos em UFC/mL e submetidos a testes moleculares para confirmação das identidades. Não foi observado o isolamento de Streptococcus mutans. Porem a alta contaminação encontrada indicou que a água era imprópria para o consumo humano; podendo ser considerada uma fonte potencial de infecções cruzadas.

VIEIRA, P. H. A. G. P. Avaliação in vitro do potencial anticárie de selantes resinosos e ionoméricos contendo digluconato de clorexidina. 2016. 76 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-20T13:18:07Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_phagpvieira.pdf: 1404772 bytes, checksum: ce74f306b269b6469e5e0715ad17f855 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-20T13:18:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_phagpvieira.pdf: 1404772 bytes, checksum: ce74f306b269b6469e5e0715ad17f855 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-20T13:18:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_phagpvieira.pdf: 1404772 bytes, checksum: ce74f306b269b6469e5e0715ad17f855 (MD5) Previous issue date: 2016-12-13 / Sealants are materials applied to scars and fissures to prevent onset the onset of the caries process or interrupt its progression. Chlorhexidine (CLX) is a broad spectrum antimicrobial agent whose incorporation has been tested in various dental materials. The objective of this study was to evaluate the in vitro effect of the incorporation of chlorhexidine digluconate (DC) at 0.5% on the properties of a resinous sealant (SR) and a chemically activated ionomeric sealant (SI). The effect of the incorporation of CLX on the roughness of the materials was also evaluated. (Bioseal®-control group), SRDC (Bioseal® + 0.5% DC), SI (Riva Protect®) and SIDC (Riva Protect®) + 0.5% of DC). For an enamel caries induction, a microbiological model of S. mutans biofilm formation was used for five days, three blocks of each group for each experimental triplicate. The antimicrobial effect was evaluated by counting UFCs (colony forming units), dry weight analysis and confocal microscopy. To evaluate the demineralization, the blocks were analyzed by longitudinal microhardness of the enamel at 50 μm and 100 μm of the restoration margin. In addition, for each experimental group, test specimens from all groups were analyzed for their surface roughness pattern. Data were analyzed using ANOVA (two factors), with significance level of 5%. SR presented fewer CFUs when compared to SI (p = 0.004). Regarding dry weight, SR was lower than SI (p = 0.006). In the analysis of hardness at 50 μm, lower demineralization was observed for groups with ionomer when compared to those with resin (p <0.001), as well as between groups with CLX when compared to groups without CLX (p = 0.026). In the distance of 100 μm, the groups with ionomer showed a lower demineralization when compared to those with resin (p <0.001). The roughness in SI was superior to SR, both before (p = 0.032) and after exposure to cariogenic biofilm (p <0.001). In general, confocal laser microscopy (MCLS) data provided information consistent with the efficiency of CLX incorporation favoring the antimicrobial activity of resinous sealants when compared to ionomeric sealants. The ionomeric materials have a higher anticaryeffect, however the incorporation of DC seems to be more effective and necessary when using resinous sealants. / Os selantes são materiais adesivos aplicados em cicatrículas e fissuras para prevenir in loco o início do processo de cárie ou interromper sua progressão. A clorexidina (CLX) é um agente antimicrobiano de amplo espectro, cuja incorporação tem sido testada em diversos materiais odontológicos. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito in vitro da incorporação de digluconato de clorexidina (DC) a 0,5% sobre as propriedades anticárie de um selante resinoso (SR) e um selante ionomérico quimicamente ativado (SI). O efeito da incorporação de CLX na rugosidade dos materiais também foi avaliado. Blocos de esmalte dentário bovino (8x8x4 mm) com preparos cavitários foram restaurados utilizando o selante, de acordo com os grupos: SR (Bioseal®-grupo controle), SRDC (Bioseal® + 0,5% de DC), SI (Riva Protect ®) e SIDC (Riva Protect ® + 0,5% de DC). Para a indução de cárie em esmalte, utilizou-se um modelo microbiológico de formação de biofilme de S. mutans durante cinco dias, sendo três blocos de cada grupo para cada triplicata experimental. O efeito antimicrobiano foi avaliado através da contagem de UFCs (unidades formadoras de colônia), análise do peso seco e microscopia confocal. Para avaliar a desmineralização, os blocos foram analisados por microdureza longitudinal do esmalte em 50 μm e 100 μm da margem de restauração. Além disso, para cada grupo experimental, corpos de prova de todos os grupos foram analisados quanto ao seu padrão de rugosidade de superfície. Os dados foram analisados utilizando ANOVA (dois fatores), com nível de significância de 5%. SR apresentou menos UFCs quando comparado a SI (p=0,004). Em relação ao peso seco, SR foi menor que o SI (p=0,006). Na análise de dureza à 50 µm, menor desmineralização foi observada para os grupos com ionômero quando comparados àqueles com resina (p<0,001), assim como entre os grupos com CLX quando comparados aos grupos sem CLX (p=0,026). Na distância de 100 µm, os grupos com ionômero apresentaram uma menor desmineralização quando comparados àqueles com resina (p<0,001). A rugosidade em SI foi superior a SR, tanto antes (p=0,032) quanto após a exposição ao biofilme cariogênico (p<0,001). De forma geral, os dados de microscopia confocal a laser (MCLS) forneceram informações condizentes com a eficácia da incorporação de CLX favorecendo a atividade antimicrobiana dos selantes resinosos quando comparada ao selantes ionoméricos. Os materiais ionoméricos têm um maior efeito anticárie, no entanto a incorporação de DC parece ser mais eficaz e necessária quando da utilização de selantes resinosos.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-05-06T16:54:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2543097 bytes, checksum: 2cf75ea8db42a45b228e5bd1fc41258d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-06T16:54:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2543097 bytes, checksum: 2cf75ea8db42a45b228e5bd1fc41258d (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os butenolídeos, γ-lactonas insaturadas, estão presentes na estrutura de um grande número de produtos naturais e apresentam uma variedade de atividades biológicas, tais como fungicida, bactericida, anti-inflamatória, citotóxica e reguladora de germinação de sementes. Essas atividades também são descritas para as γ-hidroxi- γ-lactamas e γ-alquilideno-γ-lactamas que estão presentes em vários produtos naturais biologicamente ativos. Visando contribuir com o estudo dessas classes de compostos, esse trabalho teve como objetivo sintetizar novas γ-alquilideno-γ- lactonas e seus correspondentes γ-hidroxi-γ-lactamas e γ-alquilideno-γ-lactamas, além de avaliar suas atividades citotóxica e inibitória da formação de biofilmes bacterianos. Na rota sintética escolhida, o ácido mucoclórico, utilizado como material de partida, foi inicialmente reduzido a 3,4-diclorofuran-2(5H)-ona e posteriormente reagiu com diferentes aldeídos aromáticos por meio da reação de alquilidenação, resultando no preparo de oito diferentes γ-alquilideno-γ-lactonas. Três desses análogos foram convertidos nas γ-hidroxi-γ-lactamas correspondentes pela reação de conversão lactona-lactama com isobutilamina e propilamina, e a subsequente desidratação das γ-hidroxi-γ-lactamas resultou na formação das (Z) e (E)-γ- alquilideno-γ-lactamas. Todos os compostos sintetizados foram caracterizados por espectroscopia no IV, espectroscopia de RMN de H e de 13 C, técnicas bidimensionais COSY e HETCOR e espectrometria de massas, além de experimentos de NOEDIF para determinar a estereoquímica da ligação dupla das unidades γ-alquilideno-γ-lactamas. O ensaio de citotoxicidade foi realizado com as linhagens celulares de câncer humano OVCAR-8, SF-295, HCT-116 e HL-60. Os resultados mostraram que as γ-lactonas são mais ativas do que as γ-lactamas. Os melhores efeitos citotóxicos observados estão relacionados a lactona (5Z)-3,4- dicloro-5-(4-bromobenzilideno)furan-2(5H)-ona (21), que apresentou significativa atividade contra as quatro linhagens celulares de câncer humano testadas. Em particular, a lactona 21 apresentou CR 50 = 0,66 μg/mL contra HL-60. No ensaio de inibição da formação de biofilme bacteriano de Streptococcus mutans, o melhor resultado foi observado para a lactona (5Z)-3,4-dicloro-5-(4- trifluorometilbenzilideno)furan-2(5H)-ona (26) que apresentado IC 50 equivalente a 0,21 ± 0,05 μg/mL. / The butenolides, γ-unsaturated lactones, are present in the structure of many natural products, and exhibit a variety of biological activities, such as fungicide, bactericide, anti-inflammatory, cytotoxicity and regulation of seed germination. These activities are also described for γ-hydroxy-γ-lactams and γ-alkylidene-γ-lactams which are present in many biologically active natural products. To contribute to the study of these classes of compounds, this study aimed to synthesize new γ-alkylidene-γ- lactones and their corresponding γ-hydroxy-γ-lactams and γ-alkylidene-γ-lactams and to evaluate their cytotoxicity and formation of bacterial biofilms inhibition. In the chosen synthetic route, the mucochloric acid was inittially reduced to 3,4- diclorofuran-2(5H)-one which subsequently reacted with various aromatic aldehydes through the reaction of aldol condensation, resulting in the preparation of eight different γ-alkylidene-γ-lactones. Three of these analogs were converted to the corresponding by γ-hydroxy-γ-lactams lactamization with isobutylamine and propylamine. Further dehydration of γ-hydroxy-γ-lactams resulted in the formation of (Z) and (E)-γ-alkylidene-γ-lactams. characterized by IR spectroscopy, All H and the synthesized compounds were 13 C NMR spectroscopy, COSY and HETCOR bidimensional techniques and mass spectrometry. NOEDIF experiments to determine the geometry of the double bond of the γ-alkylidene-γ-lactam units. The cytotoxicity assay was performed with OVCAR-8, SF-295, HCT-116 and HL-60 cancer cell lines. The results showed that the γ-lactones are more active than the γ- lactams. The best effects were associated with lactone (5Z)-3,4-dichloro-5-(4- bromobenzilidene)furan-2(5H)-one (21) which was active against all tested cell lines. Particularly, the compound 21 presented CR 50 = 0.66 μg/mL against HL-60. In the inhibition assay of bacterial biofilm formation of Streptococcus mutans, the compounds did not show good activity. Exception to this generalization is the lactone (5Z)-3,4-dichloro-5-(4-trifluoromethylbenzylidene)furan-2(5H)-one (26) which presented IC 50 = 0,21 ± 0,05 μg/mL.

Objetivos: Comparar o efeito do controle estrito do biofilme supragengival (SUPRA), em comparação ao controle combinado dos biofilmes supra e subgengival (SUPRA+SUB), na microbiota subgengival de pacientes durante a fase de manutenção periódica preventiva (MPP), ao longo de 1 ano. Materiais e métodos: Sessenta e dois pacientes com periodontite moderada ou avançada (idade média 50.97 ± 9.26 anos, 40 mulheres, 24 fumantes) foram tratados de acordo com um protocolo não-cirúrgico. Finalizada a fase terapêutica, os pacientes iniciaram a fase de MPP e foram randomicamente alocados para receber a intervenção SUPRA ou SUPRA+SUB. Exames periodontais, instruções de higiene bucal, e as respectivas intervenções (SUPRA ou SUPRA+SUB) foram realizados em consultas trimestrais. Biofilme subgengival foi coletado ao baseline, 3, 6 e 12 meses. Técnica de PCR em Tempo Real foi utilizada para quantificar as espécies bacterianas Porphyromonas gingivalis (Pg), Treponema denticola (Td), Tannerella forsythia (Tf), e o domínio Eubacteria (Bactérias totais). Equações de estimação generalizadas foram usadas para se estimar os efeitos dos tratamentos considerando-se a avaliação longitudinal. Resultados: Não foram observadas diferenças significativas entre os grupos para as contagens de Pg, Td, Tf, e Bactérias totais ao longo de 1 ano. Contudo, a partir dos 3 meses, as contagens de Pg e Tf aumentaram significativamente em ambos os grupos. As contagens de Bactérias totais e Td foram mantidas longitudinalmente. Por outro lado, as contagens médias das espécies bacterianas alvo permaneceram em baixos níveis (≤ 103) durante todo o estudo. Paralelamente, os parâmetros clínicos foram mantidos sem alterações significativas. Conclusões: As intervenções de manutenção investigadas produziram resultados microbiológicos semelhantes ao longo do tempo, o que demonstra o grande e importante impacto do controle do biofilme supragengival durante a fase de MPP. / Aim: Compare the effects of supragingival scaling alone (SPG) against the combined supra and subgingival scaling (SPG+SBG), on subgingival microbiota from patients during periodontal maintenance period (PMP), along 1 year. Material and Methods: Sixty-two patients with moderate or severe periodontitis (mean age 50.97 ± 9.26, 40 females, 24 smokers) were treated according to a non-surgical protocol. Ended the therapy phase, they entered a PMP and were randomly allocated to receive SPG or SPG+SBG interventions. Periodontal exams, oral hygiene instructions, and the respective intervention (SPG or SPG+SBG) were performed at quarterly appointments. Subgingival biofilm was sampled at baseline, 3, 6 and 12 months. Real-time PCR technique was used to quantify the bacteria species Porphyromonas gingivalis (Pg), Treponema denticola (Td), Tannerella forsythia (Tf), and Eubacteria domain (Total bacteria). Generalized estimating equations were used to estimate treatment effects while accounting for longitudinal evaluation. Results: No significant inter-groups differences were observed to Pg, Td, Tf, and Total bacteria counts over 1 year. However, from 3 months onward, Pg and Tf counts increased significantly in both groups. Total bacteria and Td counts were maintained overtime. Still, the mean counts of target bacteria species remained at low levels (≤ 103) throughout the study. In parallel, the clinical parameters were maintained without significant changes. Conclusions: The PMP interventions yielded similar microbiological results along time, demonstrating the great impact and importance of supragingival biofilm control during PMP.

O peptídeo antimicrobiano P34, produzido por Bacillus sp. P34 é uma substância que vem sendo explorada por apresentar potencial antibacteriano e antiviral. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antibiofilme deste composto frente aos biofilmes formados por Staphylococcus aureus e Enterococcus faecalis provenientes de alimentos. Foram realizadas avaliações frente a células planctônicas e sésseis, bem como, sobre os biofilmes formados por estas bactérias. Os resultados obtidos demonstram que a substância antimicrobiana possui capacidade em reduzir o percentual de células microbianas aderidas à superfície, não sendo verificada completa inibição do biofilme. Observou-se um percentual de inibição metabólica das células dos biofilmes dos isolados de S. aureus, porém, as células de E. faecalis apresentaram-se metabolicamente estimuladas. A associação do peptídeo antimicrobiano P34 com a bacteriocina nisina não apresentou efeito sinérgico sobre células de S. aureus F4-1, no entanto, ao ser avaliado individualmente, foi observado efeito bacteriostático sobre este isolado. Na avaliação do efeito deste composto sobre o biofilme polimicrobiano formado por Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Candida tropicalis 72-A e S. aureus F4-1 em aço inoxidável tipo AISI 304, observou-se diferença na disposição celular e na arquitetura do biofilme, com diminuição da aderência de células leveduriformes. Na avaliação dos diferentes meios de cultura empregados, a presença de glicose mostra-se como um fator que promoveu um incremento na formação de biofilme de Staphylococcus sp. Os resultados obtidos indicam que a substância apresenta potencial antibiofilme para a espécie S. aureus, e fornecem informações para posteriores estudos sobre os biofilmes polimicrobianos. / The antimicrobial peptide P34, produced by Bacillus sp. P34 is a substance that has been explored by having antibacterial and antiviral potential. The objective of this study was to evaluate the antibiofilm potential of this compound compared to biofilms formed by Staphylococcus aureus and Enterococcus faecalis from food. Evaluations were carried out against planktonic and sessile cells, as well as on biofilms formed by these bacteria. The obtained results evidence that the antimicrobial substance has ability to reduce the percentage of adhered microbial cells to the surface, not being verified complete inhibition of the biofilm. Was observed a metabolic inhibition percentage of cells isolated in the biofilm of S. aureus, however, E. faecalis cells performed metabolically stimulated. The combination of antimicrobial peptide P34 with the nisin bacteriocin showed no synergistic effect on cells of S. aureus F4-1, however, when evaluated individually, bacteriostatic effect was observed on this isolated. In the evaluation of this compound effect on the polymicrobial biofilm formed by Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Candida tropicalis 72-A and S. aureus F4-1 on stainless steel AISI 304, difference was observed in the cell layout and biofilm architecture, with reduced adhesion of yeast cells. The evaluation of different culture media used, the presence of glucose is presented as a factor that promoted an increment in the formation of Staphylococcus sp biofilms. The obtained results indicate that the substance presents antibiofilm potential for the S. aureus species, and provide information for further studies about polymicrobial biofilms.

Acinetobacter baumannii é um patógeno oportunista, geralmente resistente a muitos antimicrobianos, que causa surtos de infecções hospitalares. Assim, a sua habilidade de formar biofilme pode explicar a capacidade de sobreviver no ambiente hospitalar e em utensílios médicos. O objetivo desse estudo foi avaliar a capacidade de duas cepas clínicas de A. baumannii obtido de hospitais de Porto Alegre, Brasil (abC e abH) e uma cepa controle ATCC 19606 (abA) formar biofilme e realizar a análise transcricional dos genes possivelmente envolvidos na produção e manutenção do biofilme: bap, abaI, ompA, bfmRS, csuAB, pgaA, pilZ, wspR, eal, eagg, IscRSU e csdA. A capacidade de formação de biofilme foi avaliada pelo método cristal violeta em superfície plástica a 25°C e 37°C nos meios LB, LB + 1% glicose, urina pura e LB + 10% sangue de carneiro. A análise transcricional foi feita por real time PCR. A cepas AbH, AbC e AbA foram fortes formadoras de biofileme em LB e LB+glicose à 25 e 37°C. Em LB+sangue, as cepas AbH e AbA foram fortes formadoras e AbC foi fraca formadora de biofilme. Em urina, a cepa AbH foi moderadamente formadora, AbC e AbA foram fracas formadoras de biofilme. Os genes wspR, pgaA, ompA, bap, abaI de AbA, csdA de AbH e o operon IscRSU foram superexpressos em biofilme; os genes eagg de AbH, pilZ e csuAB foram inibidos e os genes bfmRS, eal, eagg de AbA, csdA de AbA e abaI de AbH não possuíram uma variação significativa na expressão durante o biofilme. Portantanto, a regulação positiva dos genes wspR, pgaA, ompA, bap, csdA e do operon IscRSU é um indício de sua importância na formação e manutenção do biofilme por esse patógeno. / Acinetobacter baumannii is an opportunistic pathogen which causes a wide range of nosocomial infections, being usually multirresistent to drugs. Their ability to form biofilm can explain the feature of surviving inside hospital environment and on medical devices. The aim of the present study was to evaluate the ability of two clinically isolated MDR A. baumannii strain, obtained from a general hospital of Porto Alegre, RS, Brazil (AbH and AbC), and the reference ATCC 19606 strain (AbA), to form biofilm and to analyze the relative expression of genes putatively involved in biofilm formation: bap, abaI, ompA, bfmRS, csuAB, pgaA, pilZ, wspR, eal, eagg, IscRSU e csdA. The biofilm formation capability was evaluated by the crystal-violet staining method on plastic surfaces at 25°C and 37°C using the broth LB, LB + 1% glucose, pure urine and LB + 10% sheep blood. The trancritional profiling of the genes was analyzed through real time PCR methodologies. The strains AbH, AbC e AbA were strong biofilm producers in LB e LB+glucose at 25 and 37°C. In the broth LB+blood, the strains AbH and AbA were strong biofilm producers and AbC was week biofilm producer. In urine, the strain AbH was moderated producer, AbC and AbA were week biofilm producers. The genes wspR, pgaA, ompA, bap, abaI from AbA, csdA from AbH and the operon IscRSU were overexpressed in biofilm; the genes eagg de AbH, pilZ e csuAB were suppressed and the genes bfmRS, eal, eagg from AbA, csdA from AbA e abaI from AbH did not vary their expression significantly during the biofilm condition. In conclusion, the factors wspR, pgaA, ompA, bap, csdA and of the operon IscRSU, that were positively regulated, appear to have an important role during the process of biofilm formation by A. baumannii.

Staphylococcus aureus destaca-se como principal micro-organismo associado à mastite bovina contagiosa, sendo que as infecções crônicas podem ser causadas pelo crescimento bacteriano na forma de biofilmes, o que pode estar associado à persistência desta bactéria na glândula mamária e à resistência a diversos antimicrobianos. Estudos epidemiológicos empregando técnicas como a macrorestrição seguida de eletroforese em campo pulsado (PFGE) têm sido realizados, com a finalidade de identificar clones e caracterizar as infecções por S. aureus. Os objetivos deste estudo foram: avaliar a frequência de isolamento de S. aureus em amostras de leite colhidas periodicamente em um grupo de propriedades leiteiras do Vale do Taquari, RS; avaliar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos dos isolados de S. aureus identificados; classificar esses isolados em grupos clonais; avaliar a distribuição e a permanência dos grupos clonais nas propriedades leiteiras ao longo do tempo, além de verificar a presença de genes relacionados à formação de biofilmes (icaA e icaD). Foram colhidas amostras de leite de todas as vacas em lactação de 21 propriedades, amostradas semestralmente durante dois anos, totalizando 1060 amostras. A presença de S. aureus nas amostras foi detectada por isolamento e a identificação foi realizada de acordo com o National Mastitis Council. Isolados confirmados foram testados, pela técnica de disco difusão em ágar, quanto à suscetibilidade frente a treze antimicrobianos. Os isolados também foram submetidos à macrorrestrição do DNA total – PFGE e posteriormente testados pela PCR para detecção dos genes icaA e icaD. Das 1060 amostras avaliadas, 395 não apresentaram crescimento bacteriano. Staphylococcus sp. coagulase negativa foram identificados em 262 amostras, seguido de 136 amostras em que identificou-se S. aureus. A frequência de isolamento de S. aureus variou de 3,45% a 70,59% nas 17 propriedades em que este agente estava presente. No teste de suscetibilidade aos antimicrobianos, a maioria (75,7%) dos 132 isolados testados apresentaram perfil de sensibilidade, sendo a resistência mais frequente à penicilina (18,2%) e ampicilina (14,4%). Em apenas 27,3% dos isolados detectou-se os genes associados à formação de biofilmes pesquisados, sendo o gene icaD o mais prevalente, seguido da presença de ambos os genes. Os 122 isolados clivados pela enzima SmaI e submetidos à PFGE foram classificados em 38 grupos clonais. Observaram-se poucos grupos clonais persistentes, pois somente seis foram descritos consecutivamente em pelo menos duas coletas. O grupo clonal 16 foi o mais prevantente, apresentando isolados em uma mesma propriedade ao longo de dois anos. Conclui-se que Staphylococcus aureus está presente na glândula mamária de bovinos em lactação em pequenas propriedades da região. Esses isolados apresentam baixa frequência de resistência aos antimicrobianos. Há uma grande variabilidade de pulsotipos entre os isolados presentes nessas propriedades, porém poucos grupos clonais persistem nas propriedades amostradas. Não foi possível associar a permanência dos grupos clonais nos rebanhos à presença dos genes icaA e icaD ou ao perfil de resistência a antimicrobianos. / Staphylococcus aureus stands out as the main microorganism associated with bovine contagious mastitis, whereas chronic infections can be caused by bacterial growth in the form of biofilms, which can be associated with the persistence of the bacteria in the mammary gland and resistance to various antibiotics. Epidemiological studies employing techniques such as macrorestriction followed by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) have been carried out, aiming to identify clones and characterize S. aureus infections. The objectives of this study were: to assess the frequency of S. aureus isolation in milk samples collected periodically in a group of dairy farms from Taquari Valley, RS; evaluate the profile of antimicrobial susceptibility of S. aureus identified isolates; classify these isolates in clonal groups; assess the distribution and retention of clonal groups in dairy herds over time and to verify the presence of genes related to biofilm formation (icaA and icaD). Milk samples were collected from all lactating cows from 21 properties that were sampled every six months for two years, totaling 1060 samples. The presence of S. aureus in the samples was detected by isolation and the identification was performed according to National Mastitis Council. Confirmed isolates were tested for susceptibility to thirteen antimicrobial by disk diffusion technique in agar. The isolates also underwent macro-restriction of total DNA - PFGE and were subsequently tested by PCR for detection of genes icaA and icaD. Of the 1060 samples tested, 395 showed no bacterial growth. Staphylococcus sp. coagulase-negative samples were identified at 262, followed by 136 samples in which S. aureus was identified. The frequency of isolation of S. aureus ranged from 3.45% to 70.59% in 17 properties wherein this agent was present. In antimicrobial susceptibility testing, the majority (75.7%) of the 132 isolates tested showed sensitivity profile, being most frequent resistance to penicillin (18.2%) and ampicillin (14.4%). In only 27.3% of the isolates were detected genes associated with biofilm formation surveyed and icaD was the most prevalent, followed by the presence of both genes. The 122 isolates cleaved by SmaI and submitted for PFGE were classified into 38 clonal groups. There were few persistent clonal groups, because only six groups were described consecutively in at least two collections. The clonal group 16 was the most prevalent, presenting isolates at the same property over two years. Is conclusive that Staphylococcus aureus is present in the mammary gland of lactating cattle on small farms in the region. These isolates have low frequency of antimicrobial resistance. There is great variability of pulsotypes among isolates in those properties, but few clonal groups persist in the sampled properties. It was not possible to associate the permanence of clonal groups in herds to the presence of icaA and icaD or to the profile of antimicrobial resistance.

O objetivo deste estudo foi comparar a concentração de flúor do biofilme dental de indivíduos residenteste em áreas com água fluoretada (AF) ou sal fluoretado (SF) e determinar o efeito do dentifrício fluoretado na concentração de flúor [F] do biofilme dental destes indivíduos. Dezesseis indivíduos resendentes em Montevidéu (SF) e dezesseis indivíduos residentes em Porto Alegre (AF) participaram deste estudo randomizado, cruzado e duplo-cego. Profilaxia dental e raspagem supragengivel foram realizaras antes de cada fase experimental. Durante as fases experimentais (14 dias/cada), os indivíduos escovaram os dentes, 2x/dia, com dentifrício fluoretado (DF) ou dentifrício não-fluoretado (DNF). As amostras de biofilme dental foram coletadas 8 horas após a última escovação. As análises de [F] no biofilme dental foram realizadas com um íon epecífico e as leituras foram convertidas em μgF¯/g de biofilme. Equações de estimativas generalizadas foram aplicadas para analisar a variância de medidas repetidas e as diferenças em cada desfecho. Uma maior [F] no biofilme foi observada na área com SF(2.69±0.10 IC 2.48–2.89) em comparação a área com AF (2.44±0.06 IC 2.32-2.57) quando do uso regular de DNF (p = 0.047). Entretanto, não houve diferença significativa na [F] no biofilme entre as áreas com SF (2.60±0.12 IC 2.37-2.83) e AF (2.81±0.10 CI 2.62-3.01) quando do uso de FD (p = 0.153). Adicionalmente, não foi observada diferença siginifcativa na [F] do biofilme quando DF e DNF foram usados nas áreas com SF (p = 0.294) e AF (p = 0.320). A maior [F] no biofilme observada na área com SF, sob uso regular DNF, pode não ter significância clínica, uma vez que ela desapareceu quando o DF foi usado. / The aim of this study was to compare the fluoride concentration in dental biofilm of subjects living in fluoridated- salt (FS) or water (FW) areas and to determine the effect of fluoride dentifrice on the fluoride concentration [F] in dental biofilm of these subjects. Sixteen individuals residing in Montevideo (FS) and sixteen individuals living in Porto Alegre (FW) participated in this randomized, double-blind, crossover study. Dental prophylaxis and scaling were performed prior to each experimental phase. During the experimental phases (14d/each) subjects brushed their teeth, 2x/day, with fluoridated dentifrice (FD) or non-fluoridated fluoride (NFD). Dental biofilm samples were collected 8 hours after the last toothbrushing. Analyses were performed with a fluoride ion-specific electrode and the reading was transformed into μgF¯/g biofilm. Generalized estimating equations were used to analyze the variance for repeated measures and the differences in each outcome. Higher biofilm [F] was found in FS (2.69±0.10 CI 2.48–2.89) compared to FW (2.44±0.06 CI 2.32-2.57) areas under regular use of NFD (p = 0.047). However, no significant differences were found on dental biofilm [F] between FW (2.60±0.12 CI 2.37-2.83) and FS (2.81±0.10 CI 2.62-3.01) areas under FD use (p = 0.153). Furthermore, no significant difference was observed in the biofilm [F] when FD or NFD were used in the FS (p = 0.294) and FW (p = 0.320) areas. The higher dental biofilm [F] was found in FS areas under NFD use may not have clinical significance once it disappeared when FD was used.