Resumo: O objetivo do presente trabalho foi o de verificar a formação de incrustações e o bloqueio do cateter de Foley utilizando-se um modelo laboratorial de bexiga humana. Para tanto, foram utilizadas duas urinas artificiais de diferentes composições: a) urina AS composta por dez solutos em concentrações semelhantes as encontradas na urina humana de 24 horas, acrescida de gelatina; b) urina AT composta por 4 solutos também encontrados na urina humana, mas em concentrações maiores e suplementada com ovalbumina de galinha. Também foi utilizada a urina de 24 horas de três homens. As urinas contaminadas com o P. mirabilis foram bombeadas (0,5ml/min) para o frasco em que o cateter estava inserido até a oclusão do cateter. A Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) foi utilizada para verificar a presença de biofilme nos segmentos dos cateteres. Foi observado uma diferença significante no peso dos segmentos dos cateteres após a canalização das urinas AS, AT e UH contaminadas com o P. mirabilis vs a canalização das urinas sem o microrganismo (p<0,05). O tempo de bloqueio dos cateteres que canalizaram a urina AS vs urina AT e UH vs urina AT também foram diferentes (p<0,05). O tempo de bloqueio dos cateteres, o número de células viáveis presentes no inóculo inicial e no momento do bloqueio do cateter, e variação no peso dos segmentos dos cateteres após a canalização com as urinas sem a adição do P. mirabilis e contaminadas com o P. mirabilis não foram diferentes para as urinas AS, AT e UH. As três urinas examinadas mostraram a estabilização do P. mirabilis e a manutenção em 108UFC/ml bem como a formação de biofilme. Os cateteres que canalizaram a urina AS e UH apresentaram tempos semelhantes de bloqueio. Os cateteres que utilizaram a urina AT foram bloqueados mais rapidamente (p<0,05). Não houve alteração de peso dos segmentos dos cateteres quando testados com o P. mirabilis entre as urinas. / Abstract: The aim of the present work was to verify formation of encrustations and occlusion on Foley catheter using a laboratorial model of human bladder. Two artificial urines with different compositions were used: a) AS urine consisted by ten solutes in concentrations similar to those found in 24 hour human urine, added gelatin; b) AT urine consisted by four solutes, also found in human urine but in higher concentrations, and supplemented with chicken ovalbumin and UH 24 hour urine of three men. Urines contaminated with P. mirabilis were pumped (0,5ml/min) to flasks where the catheter was inserted reaching catheter occlusion. Scanning Electronic Microscopy (SEM) was used to check the presence of biofilms in catheter segments. The period of catheter occlusions after canalization was determined with the three urines, as well as the number of P. mirabilis viable cells present in the initial inoculum and in the end of the experiment. The period CFU/ml as well as biofilm formation. Catheters that canalized AS and HU urines showed similar occlusion periods. Catheters using AT urine were occluded faster (p<0.05). of catheter occlusions, the number of viable cells present in the initial inoculum and in the moment of catheter occlusion, as well as the variation in catheter segment weights after canalization with urines without P. mirabilis addition and with contaminated urines were not different for AS, AT and HU urines. The three examined urines showed stabilization of P. mirabilis, maintenance of 108 There was no alteration in catheter segment weights when tested with P. mirabilis among urines. / Orientador: Elisabeth Loshchagin Pizzolitto / Coorientador: Antonio Carlos Pizzolitto / Banca: Taís Maria Bauab / Banca: Beatriz Ernestina Cabilio Guth / Banca: Izabel Yoko Ito / Banca: José Vanderli Menani / Doutor

Orientador: Marco Antonio Compagnoni / Banca: Raphael Freitas de Souza / Banca: Ana Carolina Pero / Banca: João Neudenir Arioli Filho / Banca: Sicknan Soares da Rocha / Resumo: Por ser considerada um ambiente propício para proliferação de microrganismos bucais e formação de biofilme, possibilitando o aparecimento de estomatite protética, a adição de um polímero com ação antimicrobiana à resina acrílica poderia favorecer a saúde bucal do paciente edentado e torná-la menos suscetível à formação de biofilmes. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana de uma resina acrílica termopolimerizável para base protética combinada ao polímero antimicrobiano poli(2 tert-butilaminoetil) metacrilato (PTBAEMA) sobre formação de biofilme de Staphyloccocus aureus, Streptococcus mutans e Candida albicans. Trinta espécimes de formato circular foram confeccionados a partir da resina acrílica termopolimerizável (Lucitone 550) e divididos em três grupos de acordo com as diferentes concentrações de PTBAEMA 0, 10 e 25%. Os espécimes foram inoculados e incubados a 37ºC por 48h. Após esse período, cada espécimes foi transferido para tubos contendo solução salina. Em seguida, foram realizadas diluições seriadas da suspensão resultante e alíquotas dessas diluições foram semeados em placas de Petri e incubadas a 37ºC por 48h. Os dados obtidos foram transformados em log(UFC+1)/ml e analisados pelos testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis (α=0,05). Os resultados demonstraram que o grupo contendo 25% de PTBAEMA inibiu completamente a formação de biofilme de S. aureus e S. mutans. Uma redução significativa na contagem de log(UFC+1)ml de S. aureus (P=0,001) e S. mutans (P=0,001) para o grupo contendo 10% de PTBAEMA foi observada quando comparada aos valores encontrados nos respectivos grupos controle. Para C. albicans não foi encontrada diferença significante entre grupos contendo PTBAEMA e o grupo controle (P=0,079). Conclui-se que a resina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Denture base acrylic resins have been shown to be reservoirs for microorganisms and are a potential to support the formation of biofilm, which may result in the development of denture stomatitis. Thus, the addition of a polymer with antimicrobial activity to the acrylic resin could inhibit biofilm growth on denture base. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of an acrylic resin combined with antimicrobial polymer poly (2-tertbutylaminoethyl) methacrylate (PTBAEMA) to inhibit biofilm formation of three species of microorganisms (Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans and Candida albicans). Thirty discs of a heat-polymerized acrylic resin (Lucitone 550) were produced and divided into three groups, according to the concentration of PTBAEMA: 0% (control), 10% and 25%. The specimens were individually inoculated with appropriate media containing one of the tested microorganisms and incubated for 37ºC for 48h under aerobic or anaerobic conditions. After incubation, each specimen was transferred to sterile tube containing sterile distilled water. Replicate aliquots of resultant suspensions were plated at dilutions for 48h at 37ºC. After incubation, the mean microbial counts were expressed as log (CFU + 1)/mL and analyzed statistically with α=.05. The results showed that the group containing 25% of PTBAEMA completely inhibited biofilm formation of S. aureus and S. mutans. A significant reduction in count of log (CFU +1) ml of S. aureus (P=0.001) and S. mutans (P=0.001) was observed for the group containing 10% PTBAEMA when compared to respective control groups. For C. albicans, differences were not significant between groups containing PTBAEMA and control group (P=0.079). It was concluded that 10% and 25% of PTBAEMA showed, respectively, a bacteriostatic and bactericidal... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luiz Augusto do Amaral / Coorientador: Ana Maria Soares Pereira / Banca: Karina Paes Bürger / Banca: Fernando Antônio de Ávila / Banca: Iucif Abrão Nascif Junior / Banca: Elisabeth Loshchagin Pizzolitto / Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar in vitro o potencial de atividade antimicrobiana de extratos vegetais e substâncias isoladas de Croton antisyphiliticus e C. urucurana, espécies nativas do Cerrado, sobre estirpes de Staphylococcus aureus, isoladas de leite de vacas com mastite. Os microrganismos foram cultivados na forma livre e em biofilme. Os extratos foram avaliados quanto à capacidade de inibição da formação do biofilme e erradicação do mesmo. Foram utilizados os antibióticos sulfato de gentamicina como comparativo e sulfato de vancomicina como controle negativo. As plantas foram coletadas na época seca e chuvosa. A quantificação da atividade antimicrobiana foi realizada por meio do cristal violeta e da contagem de unidades formadoras de colônia. Os resultados obtidos demonstram que ambas espécies vegetais inibiram a formação do biofilme de S. aureus. O extrato bruto e frações de C. antisyphiliticus apresentaram atividade antimicrobiana semelhante à gentamicina, enquanto os compostos vegetais com características apolares, oriundos de C. urucurana foram significativamente mais ativos contra S. aureus em biofilme que o antibiótico vancomicina, reduzindo cerca de 5 logs da população bacteriana. Nas condições ensaiadas, não houve influencia sazonal na atividade antimicrobiana dos extratos. Entre as duas espécies de Croton avaliadas, conclui-se que C. urucurana foi a espécie mais promissora quanto a atividade antimicrobiana frente estirpes de S. aureus, causadoras de mastite bovina / Abstract: The present study aimed to evaluate the potential antimicrobial activity of plant extracts and substances isolated from Croton antisyphiliticus and C. urucurana, species in the Cerrado, against strains of Staphylococcus aureus isolated from milk of cows with mastitis. The microorganisms were grown in free form and in biofilm. The extracts were evaluated for their ability to inhibit biofilm formation and eradication. We used the antibiotic gentamicin as a comparison and vancomycin as negative control. The plants were collected in the dry and rainy season. Quantification of antimicrobial activity was performed using the crystal violet and count of colony forming units. The results show that both species inhibited the biofilm formation of S. aureus. The crude extract and fractions of C. antisyphiliticus presented antimicrobial activity similar to gentamicin, while the plant compounds with non polar characteristics, arising from C. urucurana were significantly more active in cells in biofilms of S. aureus that the antibiotic vancomycin, reducing around 5 logs of the bacterial population. In the conditions tested, there was no seasonal influence on antimicrobial activity of the extracts. Between the two species of Croton evaluated, between the two Croton species evaluated, it is concluded that C. urucurana was the most promising antimicrobial activity against strains of S. aureus causing bovine mastitis / Doutor

Memorial apresentado ao Instituto de Biociências de Botucatu da Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", como parte das exigências para obtenção do título de Livre-Docente em Microbiologia

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Orientador no exterior: Joshua Daniel Nosanchuk / Coorientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Carlos Pelleschi Taborda / Banca: Mauro Cintra Giudice / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Maria Aparecida de Resende Stoianoff / Resumo: Dermatófitos são fungos que apresentam a capacidade de invadir os tecidos queratinizados do homem e dos animais, produzindo a dermatofitose. Biofilmes são comunidades estruturadas de microrganismos que se agrupam de maneira organizada a uma superfície ou que se aderem uns aos outros, dentro de uma matriz extracelular que eles mesmos produzem. Pela primeira vez, neste trabalho, foi descrita a formação de biofilmes por isolados clínicos e cepas ATCC de dermatófitos. Também se avaliou a sensibilidade das cepas frente aos antifúngicos convencionais e derivados sintéticos do ácido protocatecuico, determinando sua toxicidade e eficiência, tanto nas formas planctônicas como de biofilme. A identificação molecular dos isolados clínicos mostrou concordância com a identificação convencional. Todas as cepas e isolados foram capazes de formar biofilmes nos quatro meios testados. Trichophyton. rubrum ATCC 28189, ATCC MYA-4438, T. rubrum 143 e Trichophyton. mentagrophytes 66 produziram mais biomassa e matriz extracelular que T. mentagrophytes ATCC 11481 (p<0.05). RPMI 1640, BHI e DMEM estimularam maior produção de biomassa e matriz extracelular que o meio de queratinócitos. Todas as espécies foram capazes de formar biofilmes maduros em 72 h e uma rede de hifas circundadas em vários pontos por uma matriz extracelular foi mostrada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Na microscopia confocal, aparentemente os meios RPMI e DMEM produziram biofilmes mais espessos e o meio BHI, biofilmes mais densos e compactos. As melhores atividades anti-dermatófitos foram expressas pelos protocatecuatos de butila, pentila, hexila, nonila e decila, que exibiram baixa toxicidade para as células HaCat, NHOK e HepG2 nas regiões da concentração inibitória mínima (CIM). Nonila foi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dermatophytes are fungi that have the ability to invade keratinized tissues of human and animals, producing a condition called dermatophytosis. Biofilms are structured microbial communities that are organized by adhering to a surface, as well as to each other via an extracellular polymeric matrix. For the first time, in this work, the biofilm formation by ATCC strains and clinical isolates of dermatophytes was described. Also, the susceptibilities of the strains to conventional antifungal drugs and to the synthetic derivatives of protocatechuic acid were evaluated, determining its toxicity and efficacy. The molecular identification corroborated with the conventional one. All strains were able to form biofilms in the four media tested. Trichophyton. rubrum ATCC 28189, Trichophyton. mentagrophytes 66, and T. rubrum 143 produced more biomass, polysaccharide structures and extracellular matrix than T. mentagrophytes ATCC 11481 (p <0.05). RPMI 1640, BHI and DMEM stimulated increased production of biomass and extracellular matrix when compared to the medium for keratinocytes. All species were able to form mature biofilms in 72 hours. The SEM results showed a coordinated network of hyphae in all directions, surrounded by an extracellular matrix. In confocal microscopy, apparently RPMI and DMEM media produced thicker biofilms, while the BHI produced denser and compact biofilms. The greatest antidermatophytes activities were expressed by butyl, pentyl, hexyl, nonyl and decyl, protocatechuates, which exhibit low toxicity to HaCat, HepG2 and NHOK cells in the regions of minimal inhibitory concentrations (MIC). Nonyl was the compound with improved selectivity index for HaCat and HepG2 cells; for NHOK cells, the most selective compounds were nonyl and hexyl. Fluconazole, griseofulvin... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Sérgio Luís de Carvalho / Coorientador: Alessandro Minillo / Banca: Edson Pereira Tangerino / Banca: Mauricio Luiz Sens / Resumo: A contaminação por compostos farmacêuticos nos ambientes aquáticos e sua difícil remoção no tratamento convencional de água representam um desafio às companhias de saneamento. O uso de carvão ativado granular (CAG) em filtros em conjunto com o tratamento de água em ETAs tem demonstrado resultados satisfatórios, porém apresenta uma capacidade de adsorção limitada, o que requer sua regeneração periódica nos leitos dos filtros. Entretando, durante o funcionamento dos filtros CAG, estes são naturalmente colonizados por microorganismos capazes de degradarem uma diversidade de compostos. Todavia, os fármacos são susceptíveis a degradação por microorganismos presentes na água, nos sedimentos e nos efluentes de esgoto orgânicos. Diante destes aspectos, o presente projeto avaliou a remoção dos fármacos: diclofenaco de sódio, ibuprofeno, naproxeno e amoxicilina por meio de filtros de carvão com atividade biológica (CAB) em condições de laboratório durante 24 semanas, bem como a biodegradação desses compostos por microrganismos aderidos nesses biofiltros, e a identificação filogenética dos microrganismos participantes no processo de degradação dos fármacos testados. Os resultados obtidos demonstram a remoção expressiva dos fármacos acima de 80% em filtração com carvão ativado. Foi constatada a biodegradação dos fármacos, possivelmente por bactérias dos gêneros Bacillus, Burkholderia, Cupriavidus, Pseudomonas, Shinella, e Sphingomonas presentes no biofilme, o que infere sobre a participação destes microrganismos durante o processo de biofiltração. A presença de microorganismos com potencial de metabolização pode ser uma alternativa para aumentar o tempo de uso dos filtros carvão nas Estações de Tratamento de Água. A possibilidade de isolar microrganismos específicos ou consórcios microbianos adaptados em remover os compostos farmacêuticos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The contamination by pharmaceutical compounds in aquatic environments and its difficult removal in the conventional water treatment represents a challenge to the sanitation companies. The use of granular activated carbon (GAC) in filters combined with the treatment in Water Treatment Plants (WTP) has showed satisfactory results, although presents a limited adsorption's capacity, which requires its periodical regeneration in the filters beds. During the functioning of the GAC filters, though, those are naturally colonized by microorganisms capable of degrading a whole sort of compounds. In the other hand, the drugs are susceptible to degradation by microorganisms presents in the water, in sediments and in organic effluent's sewage. Given these aspects, the project evaluated the removal of the drugs: sodium diclofenac, ibuprofen, naproxen and amoxicillin by the carbon with biological activity (BAC) in laboratory condition during 24 weeks, and the biodegradation of these compounds by microorganisms stucked in those biofilters, and the phylogenetic identification of the microorganisms participating in the degradation process of the tested drugs. The results demonstrate the expressive removal of the drugs above 80% using filtration with activated granular carbon. It was established the biodegradation of the pharmaceuticals, possibly by bacteries of the genera Bacillus, Burkholderia, Cupriavidus, Pseudomonas, Shinella, and Sphingomonas presents in the biofilm, which infers about the microorganism's participation during the biofiltration process. The presence of the microorganisms with metabolism's potential might be on alternative to increase the carbon's filter's timing in the WTP's. The possibility of isolating specific microorganisms or microbial consortia that are adapted to remove the drugs compounds from natural water... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-17Bitstream added on 2014-06-13T19:00:20Z : No. of bitstreams: 1 wady_af_me_arafo.pdf: 531289 bytes, checksum: f03e54a3a96691d52c47dbbf0cd1479d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Apesar do uso de drogas antifúngicas no tratamento da estomatite protética, freqüentemente a infecção é persistente e a resistência microbiana tem sido observada nos biofilmes de Candida albicans. Dessa forma, existe a necessidade de se desenvolver outros agentes antimicrobianos tais como as nanopartículas de prata (AgNPs). Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de uma solução preparada de AgNPs sobre C. albicans em suspensão. Além disso, os efeitos da incorporação de diferentes concentrações da solução de AgNPs em uma resina acrílica para base de prótese e o armazenamento por períodos de até 180 dias no ângulo de contato, adesão e formação de biofilme foram avaliados. A solução de AgNPs foi sintetizada por meio de redução química utilizando borohidreto de sódio (NaBH4) como agente redutor e polivinil álcool (PVA) como estabilizante, e foi caracterizada utilizando espectroscopia UV-visível (UV-vis), espectrometria de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e espalhamento de luz dinâmico (DLS). A susceptibilidade antimicrobiana da solução de AgNPs de diferentes concentrações (de 1000 a 20 ppm) foi avaliada em C. albicans suspensão (ATCC 90028). A solução de AgNPs foi também misturada com o pó da resina para produzir resinas acrílicas com AgNPs incorporadas nas concentrações finais de 1000, 750, 500, 250 e 30 ppm. Resina sem AgNPs foi utilizada como controle. Amostras em forma de discos (13 × 2 mm) de cada concentração (n=72) foram preparadas e armazenadas em PBS estéril por 0, 7, 90 e 180 dias (n=18). Após esses períodos, os ângulos de contato foram mensurados em um goniômetro. A seguir, 9 amostras de cada concentração foram utilizadas para o teste de aderência de C. albicans (90 minutos de incubação), e 9 para o teste de formação de... / Despite the use of antifungal drugs to treat denture stomatitis, infection is often persistent and antifungal resistance has been observed in C. albicans biofilms. Therefore, there is a need to develop alternative antimicrobial agents such as silver nanoparticles (AgNPs). Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of a prepared AgNPs aqueous solution against C. albicans suspension. Additionally, the effects of incorporation of different concentrations of the AgNPs solution into a denture base acrylic resin and storage for up to 180 days on the contact angle, C. albicans adhesion and biofilm formation were evaluated. The AgNPs solution was synthesized by chemical reduction using sodium borohydride as reducing agent and polyvinyl alcohol as stabilizer, and was characterized by UV-visible spectroscopy, Fourier transform infrared spectroscopy and Dynamic Light Scattering. The antimicrobial susceptibility of AgNPs solution of different concentrations (from 1000 to 20 ppm) was performed against C. albicans suspension (ATCC 90028). The AgNPs solution was also mixed with the acrylic powder to produce silver-incorporated acrylic resins at the final concentrations of 1000, 750, 500, 250 and 30 ppm. Resin without AgNPs was used as control. Disk-shaped samples (13 × 2 mm) of each concentration (n=72) were prepared and stored in sterile PBS for 0, 7, 90 and 180 days (n=18). After the storage periods, the contact angles were measured in a goniometer. Then, 9 samples of each concentration... (Complete abstract click electronic access below)

Biofilmes são comunidades bacterianas tridimensionais complexas, que vivem organizadas e aderidas a uma superfície, biótica ou abiótica, embebidas em uma matriz exopolimérica. Cerca de 80% das bactérias vivem organizadas na forma de biofilmes, pois dentro destas estruturas são menos sensíveis aos antibióticos e à resposta imune do hospedeiro. Dentre as principais bactérias formadoras de biofilmes têm-se Staphylococcus spp., Pseudomonas aeruginosa e enterobacteriaceas. Estas bactérias formadoras de biofilmes são importantes colonizadoras da superfície de dispositivos médicos e implantes, aumentando a morbidade e mortalidade dos pacientes que apresentam este tipo de infecção. A investigação de novas estratégias para prevenção e tratamento de infecções por biofilmes é urgentemente necessária. Dentre estas estratégias estão a pesquisa de diferentes mecanismos ou substâncias capazes de provocar a inibição da formação ou a erradicação do biofilme formado. Neste contexto, os venenos animais representam uma fonte ainda inexplorada de uma vasta quantidade de moléculas bioativas, candidatas ao desenvolvimento de novas terapias, inclusive antibiofilme. O principal objetivo deste estudo é avaliar diferentes venenos de serpentes e análogos sintéticos como fonte de moléculas contra biofilmes bacterianos patogênicos. O capítulo 1 revisa estudos que relatam a atividade antimicrobiana (contra bactérias, vírus, protozoários e fungos) de 170 peptídeos isolados de venenos de oito diferentes animais. Peptídeos antimicrobianos vêm ganhando destaque em pesquisas para o tratamento de infecções e peptídeos com atividade antibiofilme são uma nova e promissora abordagem, para o tratamento de infecções relacionadas. O capítulo 2 mostra as atividades antimicrobiana, antibiofilme e de erradicação de biofilmes pré-estabelicidos de 18 análogos de peptídeos de oriundos de venenos de serpentes. Inicialmente foram analisadas e alinhadas 170 sequências peptídeos oriundos de venenos animais. O pepptídeos 16 apresentou considerável atividade antimicrobiana contra cepas bacterianas Gram-positivas, sensíveis e resistentes. Para S. epidermidis os peptídeos 1, 2, 3, 4, 12, 13 e 16 apresentaram menos de 50% de formação de biofilme e os peptídeos 2, 3 e 16 reduziram o biofilme pré-formad. A citotoxicidade e a actividade hemolítica foram testadas e os peptídeos ativos 2 e 16 apresentaram citotoxicidade e hemólise significativas em comparação com os controles. A posição dos aminoácidos pode contribuir para as atividades, sendo que mais testes são necessários para entender a relação das posições de aminoácidos na ação. O capítulo 3 mostra as atividades antiformação e erradicação de biofilmes pré-estabelecidos de dezessete diferentes venenos de serpentes, duas de escorpiões e três de anêmonas marinhas, bem como as secreções de pele de três espécies de sapos. Consideráveis atividades antiformação e de erradicação foram verificadas contra as cepas de S. aureus, S. epidermidis e E. cloaceae por todos os venenos de serpentes testados, em diferentes concentrações. Além disso, um fracionamento inicial foi realizado e as melhores condições foram selecionadas para um novo fracionamento, onde foram testadas 27 frações de veneno de B. diporus. As frações 8, 14 e 23 apresentaram atividades com menos de 50% de formação de biofilme e menos de 80% do biofilme remanescente. Os resultados indicam a capacidade dos venenos, especialmente da serpente de B. diporus, de serem potenciais fontes de moléculas como estratégia para combater os biofilmes patogênicos bacterianos. O presente estudo aborda o potencial de venenos animais, principalmente venenos de serpentes, como fonte de moléculas, que podem apresentar inúmeras atividades farmacológicas inéditas, incluindo àquelas relacionadas com a prevenção da formação e de erradicação de biofilmes bacterianos patogênicos. Atualmente, existem seis medicamentos aprovados pelo Food and Drug Administration (FDA), oriundos de venenos, como o Captopril (Capoten®). Este estudo mostra a capacidade de venenos como fonte de novas moléculas ativas contra biofilmes patogênicos. / Biofilms are complex three-dimensional bacterial communities living organized and attached on a surface, embedded in exopolimeric matrix. About 80% of live bacteria are organized in the form of biofilms because in these structures are less sensitive to antibiotics and host immune response. Staphylococcus spp., Pseudomonas aeruginosa and enterobacteriaceas are the main biofilm forming bacteria. These forming biofilms bacteria are important colonizing surface of medical devices and implants, increasing the morbidity and mortality of patients with this kind of infection. The investigation of new strategies for prevention and treatment of infections caused by biofilms is urgently needed. Among these strategies, there are the research of different mechanisms or substances capable of inhibit the formation or to eradicate the formed biofilm. In this context, animal venoms represent an untapped source of vast amounts of bioactive molecules, candidates for the development of new therapies, including antibiofilm. The main objective of this study is to evaluate different venoms of snakes and synthetic analogs as source of molecules against pathogenic bacterial biofilms. The chapter 1 reviewed numerous studies reporting the antimicrobial activity (against bacteria, viruses, protozoa and fungi) of 170 peptides isolated from venoms of eight different animals. Antimicrobial peptides have been gaining attention in research for the treatment of infections and peptides with antibiofilm activity are a new and promising approach for the treatment of infections related. The chapter 2 shows the antimicrobial, antibiofilm and eradication of established biofilms activities of 18 analogs of peptides derived from snake venoms. Initially, 170 peptide sequences from animal venoms were analyzed and aligned. The peptide 16 showed considerable antimicrobial activity against Gram-positive bacterial strains, sensitive and resistant. For S. epidermidis, the peptides 1, 2, 3, 4, 12, 13 and 16 showed less than 50% of biofilm formation and peptides 2, 3 and 16 reduced preformed biofilm. Cytotoxicity and hemolytic activity were tested and active peptides 2 and 16 showed significant cytotoxicity and hemolysis compared with the controls. The position of the amino acids can contribute to the activities and more tests are needed to understand the relationship of the amino acid positions in the action. The chapter 3 shows the antiformation and eradication of established biofilms activities of seventeen different venoms of snakes, two of scorpions and three of marine anemones, as well as the skin secretions of three species of frogs. Significant activities were observed against strains of S. aureus, S. epidermidis and E. cloaceae for all venom of snakes tested at different concentrations. In addition, an initial fractionation was performed and the best conditions were selected for a new fractionation, where 27 fractions of B. diporus enom were tested. Fractions 8, 14 and 23 presented activities with less than 50% of biofilm formation and less than 80% of the remaining biofilm. The results indicate the ability of venoms, especially the snake B. diporus, to be potential sources of molecules as a strategy to combat bacterial pathogenic biofilms. This study addresses the potential of animal venoms, especially snake venoms, as source of molecules, which can present numerous unpublished pharmacological activities, including those related to the prevention of the formation and eradication of pathogenic bacterial biofilms. Currently, there are six drugs approved by Food and Drug Administration (FDA), derived from venoms, such as Captopril®. This study shows the ability of venoms as source of new bioactive molecules against pathogenic biofilms.

Curativos utilizados no tratamento de feridas crônicas e queimaduras devem apresentar carac terísticas antimicrobianas. Sabe-se que compostos de prata são utilizados há muito tempo como antissépticos, mas apresentam alguns problemas relacionados ao modo de liberação. A fim de controlar essa liberação, os íons Ag+ podem ser imobilizados em suportes, como por exemplo, zeólitas, que por sua vez devem estar dispersas no filme que é utilizado como curativo. Nesse contexto, este trabalho tem como objetivo o desenvolvimento e a caracterização de filmes à base de gelatina, adicionados de zeólita clinoptilolita impregnada com íons prata e a avaliação das propriedades antimicrobianas, visando à aplicação no tratamento de ferimentos. Filmes com 5,7 e 10% (m/v) de gelatina e 0, 5, 10, 15, 20 e 25% (v/v) de glicerol foram produzidos e caracterizados quanto à espessura, teor de umidade, capacidade de absorção de água (CAA), caráter hidrofílico, propriedades mecânicas, permeabilidade ao vapor de água (PVA), fluxo de permeação de vapor de água (FPVA), morfologia por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR). Com base nas características determinadas, foi possível selecionar três formulações para incorporação das zeólitas (10% de gelatina e 15, 20 e 25 % de glicerol). A zeólita comercial clinoptilolita foi caracterizada e impregnada com íons Ag+. Na sequência, por meio de um ensaio antimicrobiano preliminar, foi definido que as zeólitas seriam adicionadas aos filmes nas concentrações de 0,5; 1 e 2 % (m/v). Os filmes à base de gelatina com zeólitas foram caracterizados pelos mesmos ensaios citados e também por análise tennogravimétrica (TGA), calorimetria exploratória diferencial (DSC) e quantiticação de íons prata por espectrometria de absorção atômica com chama (FAAS). Através da avaliação antimicrobiana qualitativa, percebeu-se que a ação antimicrobiana é decorrente da presença dos íons Ag+, porém não foram identificadas diferenças expressivas entre o tamanho dos halos de inibição formados para as diferentes concentrações de clinoptilolita-Ag. Através do ensaio microbiológico quantitativo verificou-se que não havia carga bacteriana na solução onde o filme estava imerso. Os resultados obtidos mostram que os filmes desenvolvidos neste estudo têm potencial para serem aplicados como curativos, atuando como antimicrobiano, auxiliando, desta forma, na cicatrização dos ferimentos. / Dressings used in treatment of bums and chronic wound must present antimicrobial characteristics. It is known that silver compounels are used for long time as antiseptics, but they have some problems related to release mode. To control this release, Ag+ ions may be immobilized in supports, as zeolites, that must be disperseel in the film used as wound dressing. In this sense, this work objectives the development and characterization of gelatin based-films added of clinoptilolite zeolite impregnated with silver ions and antimicrobial properties evaluation, aiming the application in wound treatment, as burns, for example. Films with 5,7 anel 10% (w/v) of gelatin anel 0, 5, 10, 15, 20 anel 25 % (v/v) of glycerol were produced and characterized by the thickness, moisture content, water absorption capacity (CAA), hydrophilic character, mechanical properties, water vapor permeation (PVA), water vapor permeation flux (FPVA), morphology by scanning electron microscopy (MEV) and Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR). Based on the determined characteristics, it was possible select three formulations for zeolites incorporation (10% of gelatin and 15, 20 and 25 % of glycerol). Commercial clinoptilolite zeolite was characterized and impregnated with Ag+ ions. Subsequently, by a preliminary antimicrobial assay, it was defined that the zeolites would be added to the films in the concentrations of 0.5, 1 and 2 % (w/v). Gelatin based films with zeolites were characterizeel by the same assays cited and, also, thermogravimetric analysis (TGA), differential scanning calorimetry (DSC) and silver ions quantification by flame atomic absorption spectroscopy (FAAS). Characterization tests demonstrated that the zeolite concentration of 0.5% resulted in films with properties more suitable for wound dressing application. By the qualitative antimicrobial evaluation, it was noticed that the antimicrobial action is due to the Ag+ ions, but no significant differences between the size of the inhibition halos formed were observed for the different concentrations of clinoptilolite-Ag. By the quantitative antimicrobial evaluation, it was found that there was no bacterial load in the solution where the film was submerged. The results show that the films developed in this stuely have potential to be applied as wound dressings, acting as an antimicrobial, thus helping the wound healing.

Acinetobacter baumannii é um patógeno oportunista, geralmente resistente a muitos antimicrobianos, que causa surtos de infecções hospitalares. Assim, a sua habilidade de formar biofilme pode explicar a capacidade de sobreviver no ambiente hospitalar e em utensílios médicos. O objetivo desse estudo foi avaliar a capacidade de duas cepas clínicas de A. baumannii obtido de hospitais de Porto Alegre, Brasil (abC e abH) e uma cepa controle ATCC 19606 (abA) formar biofilme e realizar a análise transcricional dos genes possivelmente envolvidos na produção e manutenção do biofilme: bap, abaI, ompA, bfmRS, csuAB, pgaA, pilZ, wspR, eal, eagg, IscRSU e csdA. A capacidade de formação de biofilme foi avaliada pelo método cristal violeta em superfície plástica a 25°C e 37°C nos meios LB, LB + 1% glicose, urina pura e LB + 10% sangue de carneiro. A análise transcricional foi feita por real time PCR. A cepas AbH, AbC e AbA foram fortes formadoras de biofileme em LB e LB+glicose à 25 e 37°C. Em LB+sangue, as cepas AbH e AbA foram fortes formadoras e AbC foi fraca formadora de biofilme. Em urina, a cepa AbH foi moderadamente formadora, AbC e AbA foram fracas formadoras de biofilme. Os genes wspR, pgaA, ompA, bap, abaI de AbA, csdA de AbH e o operon IscRSU foram superexpressos em biofilme; os genes eagg de AbH, pilZ e csuAB foram inibidos e os genes bfmRS, eal, eagg de AbA, csdA de AbA e abaI de AbH não possuíram uma variação significativa na expressão durante o biofilme. Portantanto, a regulação positiva dos genes wspR, pgaA, ompA, bap, csdA e do operon IscRSU é um indício de sua importância na formação e manutenção do biofilme por esse patógeno. / Acinetobacter baumannii is an opportunistic pathogen which causes a wide range of nosocomial infections, being usually multirresistent to drugs. Their ability to form biofilm can explain the feature of surviving inside hospital environment and on medical devices. The aim of the present study was to evaluate the ability of two clinically isolated MDR A. baumannii strain, obtained from a general hospital of Porto Alegre, RS, Brazil (AbH and AbC), and the reference ATCC 19606 strain (AbA), to form biofilm and to analyze the relative expression of genes putatively involved in biofilm formation: bap, abaI, ompA, bfmRS, csuAB, pgaA, pilZ, wspR, eal, eagg, IscRSU e csdA. The biofilm formation capability was evaluated by the crystal-violet staining method on plastic surfaces at 25°C and 37°C using the broth LB, LB + 1% glucose, pure urine and LB + 10% sheep blood. The trancritional profiling of the genes was analyzed through real time PCR methodologies. The strains AbH, AbC e AbA were strong biofilm producers in LB e LB+glucose at 25 and 37°C. In the broth LB+blood, the strains AbH and AbA were strong biofilm producers and AbC was week biofilm producer. In urine, the strain AbH was moderated producer, AbC and AbA were week biofilm producers. The genes wspR, pgaA, ompA, bap, abaI from AbA, csdA from AbH and the operon IscRSU were overexpressed in biofilm; the genes eagg de AbH, pilZ e csuAB were suppressed and the genes bfmRS, eal, eagg from AbA, csdA from AbA e abaI from AbH did not vary their expression significantly during the biofilm condition. In conclusion, the factors wspR, pgaA, ompA, bap, csdA and of the operon IscRSU, that were positively regulated, appear to have an important role during the process of biofilm formation by A. baumannii.