Na aquacultura de recirculação são utilizados filtros biológicos para o tratamento do efluente antes que este retorne aos tanques. Estas unidades de tratamento têm como finalidade a transformação de nitrogênio amoniacal em nitrato, pois a amônia e o nitrito são tóxicos para os peixes. O nitrogênio amoniacal tende a se acumular na água de cultivo, pois é um importante produto de excreção dos organismos aquáticos e degradação da ração não consumida. Nestes filtros biológicos, os microorganismos responsáveis pelo tratamento da água residuária se encontram aderidos no meio de preenchimento, formando um biofilme. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar as comunidades microbianas presentes no biofilme associado ao filtro biológico de uma unidade experimental de tratamento de efluente de aquacultura. Durante o experimento, realizado em dois sistemas paralelos representando unidades de aquacultura com e sem recirculação de água, também foram monitorados parâmetros de qualidade da água. Os tanques experimentais foram povoados com juvenis de tilápias-do-Nilo (Oreochromis niloticus), que foram submetidos a pesagens a cada quinze dias para avaliar seu ganho de biomassa. As bactérias foram identificadas através da técnica de análise microbiológica da hibridização fluorescente in situ (FISH). A estrutura do biofilme foi avaliada através de microscopia eletrônica de varredura. Os resultados indicam que a nitrificação teve um papel mais importante no controle da qualidade da água no sistema com recirculação em relação ao tanque sem recirculação. A análise microbiológica do meio de preenchimento do filtro revelou uma presença marcante (com proporções de Cy3/DAPI variando entre 0,5% e 7,6%) de células ativas de organismos nitrificantes (oxidadores de amônia e de nitrito), pertencendo a gêneros distintos como Nitrobacter, Nitrococcus e Nitrosomonas, além de outros grupos de presença expressiva, como bactérias filamentosas (com proporções de 11,2% a 17,3% da contagem de células marcadas com DAPI). As imagens de Microscopia Eletrônica de Varredura revelaram a natureza do arranjo destas bactérias no meio filtrante, caracterizando um biofilme bem desenvolvido, composto por diversos morfotipos microbianos. O conhecimento das bactérias que compõe este biofilme pode tornar possível a geração de melhorias que podem ser implementadas para aumentar a eficiência do sistema. / In recirculating aquaculture, biological filters are used for treating the effluent before it returns to tanks. These treatment units are intended for transforming ammoniacal nitrogen into nitrate, since ammonia and nitrite are toxic to fish. Ammoniacal nitrogen tends to accumulate in culture water, because it is an important excretion product from aquatic organisms and also due to degradation of non consumed feed. In these biological filters, microorganisms responsible for the treatment of waste water adhere to the filler, forming a biofilm. The present work intended to characterize the microbial community present in the biofilm associated to the biological filter at an experimental aquaculture effluent treatment unit. During the experiment, conducted in two parallel systems representing aquaculture units with and without water recirculation, water quality parameters were also monitored. Experimental tanks were populated with juvenile Nile Tilapias (Oreochromis niloticus), which were subjected to weighing every 15 days in order to assess their biomass gain. Bacteria were identified through the microbiological analysis technique of Fluorescent In Situ Hybridization (FISH). The biofilm structure was assessed using scanning electron microscopy. The results indicate that nitrification had a more important role in the control of water quality in the system with recirculation compared with the tank without recirculation. The microbiological analysis of the filter media revealed a significant presence (with Cy3/DAPI range between 0.5% e 7.6%) of active cells from nitrifying organisms (ammonia and nitrite oxidizers), which belonged to different genera such as Nitrobacter, Nitrococcus and Nitrosomonas, in addition to groups that had an expressive presence, such as filamentous bacteria (representing 11.2% to 17.3% of the total DAPI stained cells). Scanning Electron Microscopy images revealed the nature of the arrangement of these bacteria in the filtering media, characterizing a well developed biofilm made up of diverse microbial morphotypes. The knowledge about the bacteria making up the biofilm may enable improvements that can be implemented to increase system effectiveness.

Foram avaliados 528 isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa de 131 pacientes fibrocísticos atendidos em um centro de referência em fibrose cística (FC) durante o período de 2005 a 2008. 135 isolados clínicos (25,6%) apresentaram subpopulação hipermutante (isolados com altas taxas de mutações) utilizando teste modificado de suscetibilidade aos antimicrobianos. Destes, 9 isolados (6,7%) de 7 pacientes foram classificados como hipermutantes (HPM) segundo estimativa da freqüência de mutação. Após seqüenciamento do gene mutS e análise de mutações relacionadas à inativação do sistema de reparo de erros no pareamento do DNA (Mismatch Repair System - MRS), foi possível observar este tipo de mutação em 5 isolados HPM de 4 pacientes. Avaliamos a formação de biofilme em 45 isolados NHPM, 9 HPM e suas respectivas subpopulações por duas metodologias. Segundo o primeiro método, 24 (53,3%) e 3 (21,4%) isolados NHPM e HPM, respectivamente, foram classificados como não-formadores de biofilme. Pelo segundo método, apenas 4 (8,9%) isolados NHPM e nenhum isolado HPM foram classificados nessa categoria. Os percentuais de resistência aos antibióticos ceftazidima, ciprofloxacino e tobramicina em condições de biofilme foram mais elevados que aqueles obtidos em crescimento plantônico e, em ambas as condições, foi possível evidenciar forte associação entre hipermutabilidade e aumento de resistência antibiótica. A associação dos macrolídeos azitromicina e claritromicina, em concentrações sub-inibidoras, com os antibióticos anti-pseudomonas, demonstrou ação inibitória sobre isolados clínicos de P. aeruginosa em condições de biofilme, o que sugere sua indicação no tratamento de infecções por P. aeruginosa pela sua ação anti-biofilme. / We evaluated 528 clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa in 131 CF patients attended at a referral center for cystic fibrosis (CF) during the period of 2005 to 2008. 135 clinical isolates (25.6%) presented hypermutable subpopulation (isolates with high mutation rates) using a modified antimicrobial susceptibility method. Of these, 9 isolates (6.7%) of 7 patients were classified as hypermutable (HPM) according to the estimate of mutation frequency. After gene sequencing and analysis of mutS mutations related to inactivation of the repair system errors in DNA pairing (Mismatch Repair System - MRS), we observed this type of mutation in 5 HPM isolates of 4 patients. We evaluated the biofilm formation in 45 isolates NHPM, 9 HPM and their subpopulations by two methods. According the first method, 24 (53.3%) and 3 (21.4%) isolates NHPM and HPM, respectively, were classified as non-biofilm formers. According the second method, only 4 (8.9%) isolates NHPM and none HPM were classified in this category. The percentages of resistance to antibiotics ceftazidime, ciprofloxacin and tobramycin in conditions of biofilm were higher than those obtained in planktonic growth, and in both conditions, it was observed a strong association between hypermutability and increased antibiotic resistance. The association of macrolides azithromycin and clarithromycin, in sub-inhibitory concentrations, with anti-pseudomonas antibiotics, has shown inhibitory activity on clinical isolates of P. aeruginosa in biofilm conditions, which should be recommended for treatment of CF P. aeruginosa infections due to its anti-biofilm action.

Objetivos: Comparar o efeito do controle estrito do biofilme supragengival (SUPRA), em comparação ao controle combinado dos biofilmes supra e subgengival (SUPRA+SUB), na microbiota subgengival de pacientes durante a fase de manutenção periódica preventiva (MPP), ao longo de 1 ano. Materiais e métodos: Sessenta e dois pacientes com periodontite moderada ou avançada (idade média 50.97 ± 9.26 anos, 40 mulheres, 24 fumantes) foram tratados de acordo com um protocolo não-cirúrgico. Finalizada a fase terapêutica, os pacientes iniciaram a fase de MPP e foram randomicamente alocados para receber a intervenção SUPRA ou SUPRA+SUB. Exames periodontais, instruções de higiene bucal, e as respectivas intervenções (SUPRA ou SUPRA+SUB) foram realizados em consultas trimestrais. Biofilme subgengival foi coletado ao baseline, 3, 6 e 12 meses. Técnica de PCR em Tempo Real foi utilizada para quantificar as espécies bacterianas Porphyromonas gingivalis (Pg), Treponema denticola (Td), Tannerella forsythia (Tf), e o domínio Eubacteria (Bactérias totais). Equações de estimação generalizadas foram usadas para se estimar os efeitos dos tratamentos considerando-se a avaliação longitudinal. Resultados: Não foram observadas diferenças significativas entre os grupos para as contagens de Pg, Td, Tf, e Bactérias totais ao longo de 1 ano. Contudo, a partir dos 3 meses, as contagens de Pg e Tf aumentaram significativamente em ambos os grupos. As contagens de Bactérias totais e Td foram mantidas longitudinalmente. Por outro lado, as contagens médias das espécies bacterianas alvo permaneceram em baixos níveis (≤ 103) durante todo o estudo. Paralelamente, os parâmetros clínicos foram mantidos sem alterações significativas. Conclusões: As intervenções de manutenção investigadas produziram resultados microbiológicos semelhantes ao longo do tempo, o que demonstra o grande e importante impacto do controle do biofilme supragengival durante a fase de MPP. / Aim: Compare the effects of supragingival scaling alone (SPG) against the combined supra and subgingival scaling (SPG+SBG), on subgingival microbiota from patients during periodontal maintenance period (PMP), along 1 year. Material and Methods: Sixty-two patients with moderate or severe periodontitis (mean age 50.97 ± 9.26, 40 females, 24 smokers) were treated according to a non-surgical protocol. Ended the therapy phase, they entered a PMP and were randomly allocated to receive SPG or SPG+SBG interventions. Periodontal exams, oral hygiene instructions, and the respective intervention (SPG or SPG+SBG) were performed at quarterly appointments. Subgingival biofilm was sampled at baseline, 3, 6 and 12 months. Real-time PCR technique was used to quantify the bacteria species Porphyromonas gingivalis (Pg), Treponema denticola (Td), Tannerella forsythia (Tf), and Eubacteria domain (Total bacteria). Generalized estimating equations were used to estimate treatment effects while accounting for longitudinal evaluation. Results: No significant inter-groups differences were observed to Pg, Td, Tf, and Total bacteria counts over 1 year. However, from 3 months onward, Pg and Tf counts increased significantly in both groups. Total bacteria and Td counts were maintained overtime. Still, the mean counts of target bacteria species remained at low levels (≤ 103) throughout the study. In parallel, the clinical parameters were maintained without significant changes. Conclusions: The PMP interventions yielded similar microbiological results along time, demonstrating the great impact and importance of supragingival biofilm control during PMP.

O peptídeo antimicrobiano P34, produzido por Bacillus sp. P34 é uma substância que vem sendo explorada por apresentar potencial antibacteriano e antiviral. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antibiofilme deste composto frente aos biofilmes formados por Staphylococcus aureus e Enterococcus faecalis provenientes de alimentos. Foram realizadas avaliações frente a células planctônicas e sésseis, bem como, sobre os biofilmes formados por estas bactérias. Os resultados obtidos demonstram que a substância antimicrobiana possui capacidade em reduzir o percentual de células microbianas aderidas à superfície, não sendo verificada completa inibição do biofilme. Observou-se um percentual de inibição metabólica das células dos biofilmes dos isolados de S. aureus, porém, as células de E. faecalis apresentaram-se metabolicamente estimuladas. A associação do peptídeo antimicrobiano P34 com a bacteriocina nisina não apresentou efeito sinérgico sobre células de S. aureus F4-1, no entanto, ao ser avaliado individualmente, foi observado efeito bacteriostático sobre este isolado. Na avaliação do efeito deste composto sobre o biofilme polimicrobiano formado por Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Candida tropicalis 72-A e S. aureus F4-1 em aço inoxidável tipo AISI 304, observou-se diferença na disposição celular e na arquitetura do biofilme, com diminuição da aderência de células leveduriformes. Na avaliação dos diferentes meios de cultura empregados, a presença de glicose mostra-se como um fator que promoveu um incremento na formação de biofilme de Staphylococcus sp. Os resultados obtidos indicam que a substância apresenta potencial antibiofilme para a espécie S. aureus, e fornecem informações para posteriores estudos sobre os biofilmes polimicrobianos. / The antimicrobial peptide P34, produced by Bacillus sp. P34 is a substance that has been explored by having antibacterial and antiviral potential. The objective of this study was to evaluate the antibiofilm potential of this compound compared to biofilms formed by Staphylococcus aureus and Enterococcus faecalis from food. Evaluations were carried out against planktonic and sessile cells, as well as on biofilms formed by these bacteria. The obtained results evidence that the antimicrobial substance has ability to reduce the percentage of adhered microbial cells to the surface, not being verified complete inhibition of the biofilm. Was observed a metabolic inhibition percentage of cells isolated in the biofilm of S. aureus, however, E. faecalis cells performed metabolically stimulated. The combination of antimicrobial peptide P34 with the nisin bacteriocin showed no synergistic effect on cells of S. aureus F4-1, however, when evaluated individually, bacteriostatic effect was observed on this isolated. In the evaluation of this compound effect on the polymicrobial biofilm formed by Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Candida tropicalis 72-A and S. aureus F4-1 on stainless steel AISI 304, difference was observed in the cell layout and biofilm architecture, with reduced adhesion of yeast cells. The evaluation of different culture media used, the presence of glucose is presented as a factor that promoted an increment in the formation of Staphylococcus sp biofilms. The obtained results indicate that the substance presents antibiofilm potential for the S. aureus species, and provide information for further studies about polymicrobial biofilms.

A presente pesquisa teve como objetivo a construção de microssensores amperométricos e potenciométricos para mensuração de oxigênio dissolvido (OD), gás sulfídrico (\'H IND.2\'S\'), íons amônio (\'NH IND.4\'POT.+\'), nitrato (\'NO IND.3\'POT.-\'), nitrito (\'NO IND.2\'POT.-\') e hidrogeniônicos (\'H POT.+\') em biofilmes aplicados a nitrificação de água residuária. Os biofilmes analisados por meio do uso dos microssensores construídos foram desenvolvidos sobre superfícies suportes de reatores de bancada do tipo célula de fluxo, as quais foram operadas sob diferentes condições operacionais em cinco experimentos distintos. Substrato sintético com concentrações de nitrogênio total Kjeldahl (NTK) de 40 ± 10 mg/L e demanda química de oxigênio (DQO) de 95 ± 5 mg/L foi utilizado para alimentação das células de fluxo no decorrer de todos os experimentos. Lodo aeróbio proveniente de reator de lodos ativados da Estação de Tratamento de Esgoto das Flores localizada em Rio Claro-SP foi usado como inóculo das células de fluxo. Análises físico-químicas de pH, alcalinidade, DQO, NTK, \'NO IND.3\'POT.-\', \'NO IND.2\'POT.-\' do afluente e do efluente das células de fluxo operadas foram realizadas para o monitoramento das condições de operação das mesmas. Concomitantemente às últimas, a obtenção de perfis de concentrações de oxigênio dissolvido, pH, íons nitrato e amônio foi realizada nos biofilmes formados sobre as superfícies inertes nas células. Os microssensores de OD se mostraram eficientes na mensuração de oxigênio dissolvido no interior de filmes biológicos que continham zonas aeróbias, anóxicas e anaeróbias. Os microeletrodos de pH e de íons amônio permitiram a verificação das variações de pH e das concentrações de \'NH IND.4\'POT.+\' (sentido meio líquido-biofilme) que se deram nas células de fluxo operadas. Os microssensores de íons nitrato construídos não apresentaram seletividade aos seus analitos (\'NO IND.3\'POT.-\') e foi constatado que os mesmos detectavam concentrações de íons nitrato e nitrito no meio, portanto esses passaram a ser denominados de microssensores para detecção de íons \'NO IND.X\'POT.-\'. A construção dos microeletrodos destinados a mensuração de íons nitrito não foi passível de realização visto que a membrana íon seletiva que seria aplicada nos mesmos não se encontrou disponível no mercado. Os microeletrodos de \'H IND.2\'S\' foram calibrados e, mediante as suas curvas de calibração verificou-se que os mesmos foram eficientes na medição da concentração do gás dissolvido em água, entretanto esses microssensores não foram empregados em biofilmes. / The goal of the current research was the construction of amperometric and potentiometric microsensors to measure dissolved oxygen (DO), hydrogen sulfide (\'H IND.2\'S\'), nitrite, nitrate, ammonium and pH in biofilms applied at wastewater treatment. The biofilms that were analyzed with the constructed microsensors were grown at the surface of flat-plate reactors, which were operated in five distinct experiments under different operational conditions. The growth media that had total Kjeldahl nitrogen (TNK) of 40 ± 10 mg/L and carbon oxygen demand (COD) of 90 ± 5 mg/L was used as feed of the flatplate reactors during the experiments. The reactors were inoculated with sludge originating from activated sludge reactor located in Rio Claro (SP). Alkalinity, pH, COD, \'NO IND.3\'POT.-\', \'NO IND.2\'POT.-\' analyses of the affluent and effluent of the reactors were carried out for the accompaniment of the operational conditions of the flat-plate reactors. Concomitantly to the last ones, microprofiles of DO, pH, nitrate and ammonium were obtained in the biofilms. The DO microsensors constructed showed a good performance when they were applied to measure oxygen concentrations in the microenvironments in biofilms. Ammonium and pH microelectrodes allowed the verification of the variations of pH and ammonium concentrations in the direction from the bulk liquid to the biofilm that occurred at the flatplate reactors. The nitrate microsensor has not presented selectivity for its primary ions (\'NO IND.3\'POT.-\') and it was evidenced that the same one detected the concentration of nitrate and nitrite (\'NO IND.X\'POT.-\'). The nitrite microsensor could not be constructed since the membrane that would be used was not available in the market. The \'H IND.2\'S\' microelectrodes had shown efficiency in measuring aqueous solutions with different concentrations of dissolved \'H IND.2\'S\'; however these devices were not applied in biofilms.

A própolis é um material resinoso coletado pelas abelhas de diversas partes das plantas como brotos, folhas jovens e exsudatos. É utilizado para embalsamar animais que tenham morrido dentro da colmeia, vedar as paredes e conferir proteção frente a doenças. O emprego desse produto natural com finalidade medicinal remonta a antiguidade, tendo iniciado junto com antigas civilizações como a Egípcia, Grega e Romana e perduram até os dias atuais com ampla utilização em múltiplas finalidades terapêuticas médicas e veterinárias. O objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial antifúngico, a capacidade de remover e inibir biofilmes de espécies de Candida não-albicans de diferentes tipos de própolis e analisar a composição química da própolis obtida do Rio Grande do Sul (RS). Foram realizadas macerações e extrações sequenciais com solventes em ordem crescente de polaridade a fim de purificar os extratos. Em seguida foi feita a determinação da atividade antifúngica pelo método da microdiluição em caldo e o ensaio de remoção e inibição de biofilmes através de teste em corpo de prova (utilizando cateter como material teste). Após, foi realizada a análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS. De modo geral, os extratos e frações de própolis vermelha e própolis nativa do RS demonstraram forte atividade anti-Candida frente às leveduras testadas e significativa capacidade de remoção de seu biofilme aderido em cateteres, como corpo de prova. A própolis verde apresentou baixo espectro de ação antifúngica. A análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS levou ao isolamento dos flavonoides pinocembrina, pinostrobina e pinostrobina chalcona. Os resultados evidenciam o potencial da própolis nativa do RS e da própolis vermelha para o desenvolvimento de novos agentes antifúngicos e desinfetantes contra Candida não-albicans. / Propolis is a resinous material collected by bees from various plant parts such as buds, young leaves and exudates. It is used to embalm animals that have died inside the hive, seal the walls and confer protection against the disease. The use of this natural product with medicinal purposes dates back to antiquity, having started with ancient civilizations as the Egyptian, Greek and Roman, and lasted to the present day with extensive use in multiple medical and veterinary therapeutic purposes. The aim of this study was to evaluate the antifungal potential, the ability to remove and inhibit biofilms of Candida non-albicans of different types of propolis and analyze the chemical composition of propolis obtained from Rio Grande do Sul (RS). Maceration and sequential extractions with solvents in order of increasing polarity were performed to purify the extracts. Then the antifungal activity was determined by the method of broth microdilution testing and removal and inhibition of biofilms through test of body of proof (catheter using as test material). After, the chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis obtained in RS was performed. In general, the extracts and fractions of propolis of RS demonstrated strong anti-Candida activity across the tested yeasts and significant capacity removal of biofilm attached in catheter, as test body. The green propolis had low action spectrum antifungal. Chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis native to RS led to the isolation of the flavonoids pinocembrin, chalcone pinostrobin and pinostrobin. The results show the potential of the RS native propolis and red propolis for the development of new antifungal agents and disinfectants against non-albicans Candida.

Staphylococcus aureus é reconhecidamente causador de infecções humanas e um dos principais patógenos alimentares. O regulador gene acessório (Agr) é um sistema central que controla a expressão de diversos fatores de virulência. O polimorfismo do locus agr divide S.aureus em grupos genéticos distintos associados a determinados perfis patogênicos. O objetivo deste estudo foi comparar fenotipicamente e genotipicamente isolados clínicos e alimentares de S.aureus. Um total de 63 S.aureus (34 isolados de cateter venoso central (CVC) e 29 de carne de frango) foram selecionados para o estudo. O gene sea foi encontrado em 44,1% (15/34), seb em 5,9% (2/34) e sec em 8,8% (3/34) dos isolados de CVC. Em isolados de frango, apenas o gene sea foi detectado e foi observado em 31% (9/29). Somente 6% (2/34) dos isolados de CVC formaram biofilme. Já, em isolados de frango, 93% (27/29) foram formadores de biofilme (P<0,01). Nos isolados de CVC, os genes icaA, atlA e sasG envolvidos com a formação de biofilme estiveram presentes em 100% (34/34), 97% (33/34) e 100% (34/34), das amostras respectivamente, enquanto que, em isolados de carne de frango os mesmos genes foram detectados em 93% (27/29), 52% (15/29) e 100% (29/29), respectivamente. Cepas resistentes à penicilina foram detectas em 86,2% dos isolados de carne de frangos e em 88,2%, dos isolados de CVC. Isolados de CVC foram resistentes a oxacilina e multirresistentes em 17,6% (6/34). Com relação ao polimorfismo do locus agr, os S.aureus isolados de CVC foram dividos em 3 grupos, onde 44% (15/34) tiveram o polimorfismo I, 38% (13/34) o II e 18% (6/34) o III. Os S.aureus isolados de carne de frangos, também foram divididos em 3 grupos, onde 86% (25/29) dos isolados tiveram o polimorfismo I, 10% (3/29) o II e 4%o III (1/29) (P<0,05). Entre os isolados de CVC, 88,2% (30/34) produziram a δ-hemolisina, ou seja, expressavam o sistema Agr, já entre os isolados de frangos, apenas 3,3% eram δ-hemoliticos (P<0,05). Conclui-se que os isolados diferiram quanto à capacidade de formação de biofilme, polimorfismo Agr e produção da δ-hemolisina. No entanto, resultados similares foram observados quanto à detecção dos genes das enterotoxinas e os envolvidos com formação de biofilme. A análise molecular mostrou uma elevada similaridade entre os grupos o que pode indicar uma mesma origem destes isolados. / Staphylococcus aureus is recognized as cause of human infections and a one of the important foodborne pathogens. The accessory gene regulator (Agr) is a central system that controls the expression of several virulence factors. The polymorphism of the agr locus divided S. aureus into distinct genetic group associated with determinats of pathogenic profiles. The aim of this study was to the phenotypic and genotypic patterns of S.aureus isolated from clinical and food samples. A total of 63 S. aureus (34 from central venous catheter (CVC) and 29 from poultry meat) were selected for the study. The sea gene was found in 44.1% (15/34), seb in 5.9% (2/34) and sec in 8.8% (3/34) of CVC isolates. In poultry meat isolates, only sea gene was detected and it was observed in 31% (9/29). Only 6% (2/34) of CVC isolates formed biofilm. Further, 93% (27/29) of poultry meat isolates were biofilm formers (P<0.01). In CVC isolates, the icaA, atlA and sasG genes involved in biofilm formation were present in 100% (34/34), 97% (33/34) and 100% (34/34) of the isolates respectively, while in poultry meat isolates the same genes were detected in 93% (27/29), 52% (15/29) and 100% (29/29), respectively.Strains penicillin resistant was detected in 86.2% of poultry meat and 88.2 % CVC isolates. CVC isolates were also oxacillin resistant and multiresistants in 17.6% (6/34). In regard to the polymorphism of agr locus, the CVC isolates were divided into 3 groups, where 44% (15/34) belong to polymorphism I, 38% (13/34) to II and 18% (6/34) to III. The S. aureus strains isolated from poutry meat were also divided into 3 groups, where 86% (25/29) showed the polymorphism I, 10% (3/29) the II and 4% (1/29) the III (P<0.05). Among the CVC isolates 88.2% (30/34) produced δ-hemolysin, i.e., expressed the Agr system, in addition among the poultry meat isolates, only 3.3% were δ-hemolytic (P<0.05). In conclusion, S.aures isolated from CVC and poultry meat showed differences in their ability to form biofilm, Agr polymorphism and production of δ-hemolysin. In conclusion, S.aures isolated from CVC and poultry meat showed differences in their ability to form biofilm, Agr polymorphism and production of δ-hemolysin. However, similar results were observed in relation to enterotoxin genes and those involved in biofilm formation.The molecular analysis show high genotypic similarity to S.aures isolated from CVC and poultry meat, suggesting a common origin of these isolates, possible the human microbiota.

Enterococcus faecalis estão entre as principais causas de infecções hospitalares em todo o mundo e é uma das mais importantes na área clínica devido à presença de inúmeros fatores de virulência que reforçam sua patogenicidade. Estudos mostram que concentrações subinibitórias de antimicrobianos podem alterar a resposta transcricional e fenotípica de bactérias, porém pouco se sabe sobre como a vancomicina pode afetar a expressão gênica nos microrganismos portadores de seus genes de resistência (genes van). Portanto, este trabalho objetivou avaliar presença e expressão de genes vanC em E. faecalis vancomicina-susceptíveis e avaliar o comportamento de isolados Enterococos Vancomicina-Resistentes (EVR) na ausência e presença de concentrações subinibitórias de vancomicina por PCR quantitativa. Identificamos a presença e a expressão de genes vanC em E. faecalis vancomicina-susceptíveis, sendo estes genes específicos para as espécies Enterococcus gallinarum e Enterococcus casseliflavus, sugere-se que o E. faecalis possa tê-los adquirido por transferência horizontal. Verificamos que a presença de vancomicina in vitro é capaz de interferir na modulação de genes de virulência em isolados EVR, porém não interfere na formação de biofilme destes isolados. Embora os dados aqui apresentados refiram-se a testes in vitro, podemos inferir que os genes vanC estão sendo transferidos para outras espécies e que a vancomicina pode estar contribuindo para o aumento na expressão de fatores de virulência in vivo, levando ao agravamento de quadros clínicos. / Enterococcus faecalis are among the leading causes of nosocomial infections worldwide and is one of the most important in the clinical area due to the presence of numerous virulence factors that enhance the pathogenicity. Studies show that sub-inhibitory concentrations of antibiotics can alter the transcriptional and phenotypic response of bacteria, but little is known about the effect of vancomycin in gene expression in microorganism bearers of their resistance genes (genes van). Therefore, this study aimed to evaluate the presence and expression of vanC genes in E. faecalis vancomycin susceptible and evaluate the behavior of vancomycin resistant enterococci (VRE) strains in the absence and presence of sub-inhibitory concentrations of vancomycin for Quantitative-PCR. We have identified the presence and expression of vanC genes in E. faecalis which are specific to Enterococcus gallinarum and Enterococcus casseliflavus species, it is suggested that the E. faecalis may have acquired these genes by horizontal gene transfer. We found that the presence of vancomycin in vitro is able of interfering with modulation of expression of virulence genes in VRE strains but does not interfere in the biofilm formation of these isolates. Although the data presented here were obtained from in vitro tests, we can infer that the vanC genes are being transferred to other species and that vancomycin may be contributing to the increase in the expression of virulence factors in vivo, leading to worseres clinical outcomes.

A qualidade e a segurança dos produtos fabricados pelas indústrias de alimentos ficam comprometidas quando bactérias aderem e se multiplicam nas superfícies dos equipamentos utilizados na produção de alimentos. O aço inoxidável AISI (American Iron and Steel Institute) 304 e AISI 316 são os mais utilizados na fabricação de diversos tipos de equipamentos e utensílios para as indústrias de alimentos, sendo que muitos deles contêm soldas entre as junções de suas diferentes partes. Alguns pesquisadores relacionam a presença destas soldas à rugosidade e à dificuldade de higienização e consequente adesão microbiana nestas estruturas. No entanto, atualmente, existem poucos trabalhos que estudam o processo de adesão microbiana em soldas. O presente trabalho teve como objetivo investigar a adesão de um patógeno alimentar Gram-negativo (Salmonella Enteritidis) e um Grampositivo (Listeria monocytogenes) em aços inoxidáveis e em soldas MIG (Metal Inert Gas) e TIG (Tungsten Inert Gas); avaliar a influência da topografia e rugosidade dos materiais e a hidrofobicidade das superfícies e das células no processo de adesão; determinar a energia livre de interação e a energia de adesão entre as células e as superfícies e, por fim; estudar o efeito da modificação da superfície dos aços inoxidáveis através de nitretação a plasma na adesão de S. Enteritidis e L. monocytogenes. Os resultados mostraram que não houve diferença significativa (p > 0,05) entre o número de células aderidas às superfícies dos dois tipos de soldas e dos dois aços inoxidáveis para ambas as bactérias e indicaram que não houve correlação entre a adesão e a hidrofobicidade e a rugosidade das superfícies. O tratamento de nitretação a plasma foi capaz de alterar as superfícies dos aços inoxidáveis, reduzir a adesão bacteriana e, portanto, mostra-se como uma promissora tecnologia para prevenção da adesão microbiana. / The quality and safety of products manufactured by food industry are threatened when bacteria attach to and grow on surfaces of equipment used in food production. The stainless steel AISI (American Iron and Steel Institute) 304 and AISI 316 are the most various types used in the manufacture of equipment and utensils for the food industries. Many of these equipments contain welds between its different parts. Some researchers related the presence of these welds to increase the roughness and the difficulty of cleaning, and consequently microbial adhesion occures in these structures. However, currently, there are few researchers that study the process of microbial adhesion in welds. The present study aimed to investigate the adhesion of a Gram-negative (Salmonella Enteritidis) and Gram-positive (Listeria monocytogenes) food pathogens in stainless steels and MIG (Metal Inert Gas) and TIG (Tungsten Inert Gas) welds; evaluate the influence of topography and roughness of the materials and the hydrophobicity of the material surfaces and cells in the attachment process and determine the free energy of interaction and adhesion energy between cells and surfaces; and finally, also to evaluate the effect of plasma nitriding surface modification of stainless steels on the adhesion of S. Enteritidis and L. monocytogenes. The results showed that there is no significant difference (p > 0.05) between the numbers of cells attached to the surfaces of welds and stainless steel for both bacteria and indicated that there was no correlation between adhesion and hydrophobicity and roughness of surfaces. The plasma nitriding treatment was able to modify the surfaces of the stainless steel reducing bacterial adhesion and therefore there is demonstrated a promising technology for preventing microbial adhesion.

Staphylococcus aureus destaca-se como principal micro-organismo associado à mastite bovina contagiosa, sendo que as infecções crônicas podem ser causadas pelo crescimento bacteriano na forma de biofilmes, o que pode estar associado à persistência desta bactéria na glândula mamária e à resistência a diversos antimicrobianos. Estudos epidemiológicos empregando técnicas como a macrorestrição seguida de eletroforese em campo pulsado (PFGE) têm sido realizados, com a finalidade de identificar clones e caracterizar as infecções por S. aureus. Os objetivos deste estudo foram: avaliar a frequência de isolamento de S. aureus em amostras de leite colhidas periodicamente em um grupo de propriedades leiteiras do Vale do Taquari, RS; avaliar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos dos isolados de S. aureus identificados; classificar esses isolados em grupos clonais; avaliar a distribuição e a permanência dos grupos clonais nas propriedades leiteiras ao longo do tempo, além de verificar a presença de genes relacionados à formação de biofilmes (icaA e icaD). Foram colhidas amostras de leite de todas as vacas em lactação de 21 propriedades, amostradas semestralmente durante dois anos, totalizando 1060 amostras. A presença de S. aureus nas amostras foi detectada por isolamento e a identificação foi realizada de acordo com o National Mastitis Council. Isolados confirmados foram testados, pela técnica de disco difusão em ágar, quanto à suscetibilidade frente a treze antimicrobianos. Os isolados também foram submetidos à macrorrestrição do DNA total – PFGE e posteriormente testados pela PCR para detecção dos genes icaA e icaD. Das 1060 amostras avaliadas, 395 não apresentaram crescimento bacteriano. Staphylococcus sp. coagulase negativa foram identificados em 262 amostras, seguido de 136 amostras em que identificou-se S. aureus. A frequência de isolamento de S. aureus variou de 3,45% a 70,59% nas 17 propriedades em que este agente estava presente. No teste de suscetibilidade aos antimicrobianos, a maioria (75,7%) dos 132 isolados testados apresentaram perfil de sensibilidade, sendo a resistência mais frequente à penicilina (18,2%) e ampicilina (14,4%). Em apenas 27,3% dos isolados detectou-se os genes associados à formação de biofilmes pesquisados, sendo o gene icaD o mais prevalente, seguido da presença de ambos os genes. Os 122 isolados clivados pela enzima SmaI e submetidos à PFGE foram classificados em 38 grupos clonais. Observaram-se poucos grupos clonais persistentes, pois somente seis foram descritos consecutivamente em pelo menos duas coletas. O grupo clonal 16 foi o mais prevantente, apresentando isolados em uma mesma propriedade ao longo de dois anos. Conclui-se que Staphylococcus aureus está presente na glândula mamária de bovinos em lactação em pequenas propriedades da região. Esses isolados apresentam baixa frequência de resistência aos antimicrobianos. Há uma grande variabilidade de pulsotipos entre os isolados presentes nessas propriedades, porém poucos grupos clonais persistem nas propriedades amostradas. Não foi possível associar a permanência dos grupos clonais nos rebanhos à presença dos genes icaA e icaD ou ao perfil de resistência a antimicrobianos. / Staphylococcus aureus stands out as the main microorganism associated with bovine contagious mastitis, whereas chronic infections can be caused by bacterial growth in the form of biofilms, which can be associated with the persistence of the bacteria in the mammary gland and resistance to various antibiotics. Epidemiological studies employing techniques such as macrorestriction followed by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) have been carried out, aiming to identify clones and characterize S. aureus infections. The objectives of this study were: to assess the frequency of S. aureus isolation in milk samples collected periodically in a group of dairy farms from Taquari Valley, RS; evaluate the profile of antimicrobial susceptibility of S. aureus identified isolates; classify these isolates in clonal groups; assess the distribution and retention of clonal groups in dairy herds over time and to verify the presence of genes related to biofilm formation (icaA and icaD). Milk samples were collected from all lactating cows from 21 properties that were sampled every six months for two years, totaling 1060 samples. The presence of S. aureus in the samples was detected by isolation and the identification was performed according to National Mastitis Council. Confirmed isolates were tested for susceptibility to thirteen antimicrobial by disk diffusion technique in agar. The isolates also underwent macro-restriction of total DNA - PFGE and were subsequently tested by PCR for detection of genes icaA and icaD. Of the 1060 samples tested, 395 showed no bacterial growth. Staphylococcus sp. coagulase-negative samples were identified at 262, followed by 136 samples in which S. aureus was identified. The frequency of isolation of S. aureus ranged from 3.45% to 70.59% in 17 properties wherein this agent was present. In antimicrobial susceptibility testing, the majority (75.7%) of the 132 isolates tested showed sensitivity profile, being most frequent resistance to penicillin (18.2%) and ampicillin (14.4%). In only 27.3% of the isolates were detected genes associated with biofilm formation surveyed and icaD was the most prevalent, followed by the presence of both genes. The 122 isolates cleaved by SmaI and submitted for PFGE were classified into 38 clonal groups. There were few persistent clonal groups, because only six groups were described consecutively in at least two collections. The clonal group 16 was the most prevalent, presenting isolates at the same property over two years. Is conclusive that Staphylococcus aureus is present in the mammary gland of lactating cattle on small farms in the region. These isolates have low frequency of antimicrobial resistance. There is great variability of pulsotypes among isolates in those properties, but few clonal groups persist in the sampled properties. It was not possible to associate the permanence of clonal groups in herds to the presence of icaA and icaD or to the profile of antimicrobial resistance.