A busca por embalagens flexíveis rapidamente degradáveis tem sido intensa nos anos mais recentes. Amidos de variadas fontes têm sido avaliados para a produção de filmes, sendo que a maioria destes apresenta boas características mecânicas e de barreira ao oxigênio, entretanto, uma série de limitações é observada com relação às suas características hidrofílicas e permeabilidade ao vapor d´água. O amido de ervilha normalmente apresenta teores mais elevados de amilose, o que pode melhorar a obtenção da rede formadora de filmes. Além disto, as associações amido-goma podem modificar a gelatinização e retrogradação do amido, processos que interferem na formação de filmes. O acréscimo de plastificantes também tem se mostrado de importância para melhorar as propriedades mecânicas dos filmes. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito da adição de goma xantana e de glicerol ao amido de ervilha verde de alto teor de amilose (cv. Utrillo) na elaboração de filmes e em suas características. Soluções filmogênicas (SF) com diferentes teores de amido de ervilha (3, 4 e 5%), de goma xantana (0, 0,05 e 0,1%) e de glicerol (proporção glicerol-amido de 1:5 p/p) foram estudadas. As SF foram obtidas por ebulição (5 min.), seguida de autoclavagem por 1h. a 120°C. Os filmes foram prepa rados segundo a técnica de casting. O aumento da concentração de amido na solução filmogênica aumentou a espessura, fator de ruptura, resistência à perfuração e solubilidade dos filmes em água. O aumento da concentração da goma xantana interferiu apenas nas propriedades associadas à cor dos filmes, aumentando os valores da tonalidade e decrescendo o croma a* e a transparência. O aumento da concentração do glicerol interferiu nas propriedades mecânicas dos filmes, gerando redução dos valores de resistência máxima à tração, tensão na ruptura, resistência à perfuração e fator de ruptura. O plastificante também gerou aumento do alongamento na ruptura, redução da transparência e aumento da espessura e da solubilidade do filme em água. / In the past few years, the attempt to obtain degradable flexible packaging has increased considerably. In this sense, starches obtained from different botanical sources have been evaluated to produce films. Most of these films present good mechanical characteristics and provide a good barrier to oxygen. Nevertheless, some limitations have been observed in relation to their hydrophilic properties and permeability to water vapor. Studies using starch from green peas with high levels of amylose to produce films were not found in the literature. The higher levels of amylose can improve the achievement of the matrix that forms films. In addition, starch-gum associations can modify starch gelatinization and retrogradation, processes which interfere with film formation. The addition of plasticizers has also been considered important to improve the mechanical properties of films. The aim of this study was to evaluate the effect of the addition of xanthan gum and glycerol to the starch of green peas with high content of amylose (cv. Utrillo) in the preparation of films and in their features. Filmogenic solution (FS) with different levels of pea starch (3, 4 and 5%), xanthan gum (0, 0.05 and 0.1%) and glycerol (glycerol-starch ratio of 1:5 p/p) were tested. The FS was obtained by boiling (5 min.), followed by autoclaving for 1h. at 120°C. The films were prepared by casting. The increased concentration of starch in the solution increased the thickness, factor of rupture, puncture force and solubility of films in water. Increasing amounts of xanthan affected only the properties associated with the color of the films, increasing the values of hue angle and decreasing the chroma a* and transparency. The increased concentration of glycerol interfered in the mechanical properties of the films, causing reduction of the maximum values of tensile strength, strain at break, puncture force and factor of rupture. The plasticizer also caused an increase of elongation at break, reduced transparency and increased thickness of the film and the solubility in water.

O Bacillus cereus é um patógeno amplamente distribuído na natureza, relacionado a intoxicações alimentares e causador da coagulação doce do leite. A intoxicação pode ocorrer após a ingestão de alimentos nos quais a bactéria produziu a toxina. Em laticínios, o B. cereus é problemático por sua habilidade de formar esporos resistentes ao calor e sobreviver aos tratamentos térmicos, como a pasteurização e UHT. As espécies de Bacillus são freqüentemente isoladas de leite pasteurizado e UHT e evidências indicam que os biofilmes formados nas superfícies dos equipamentos de processamento são uma das principais fontes de contaminação. No biofilme, as células ou esporos aderidos, têm aumentada sua resistência e podem resistir ao processo de sanificação, se tornando focos de disseminação de bactérias no processo. A matriz polimérica do biofilme reage e neutraliza os agentes sanificantes, expondo as bactérias em seu interior a doses subletais, podendo levar a aquisição de resistência. Neste estudo, biofilmes de células vegetativas B. cereus foram desenvolvidos na superfície de aço inoxidável, tipo 304, com filme de condicionamento de leite. A adesão média das células foi de 1,4 x 105UFC/cm2. Também foram desenvolvidos biofilmes de esporos, com adesão média em aço inoxidável de 1,4 x 104UFC/cm2. Foi avaliada a resistência das células vegetativas e esporos de B. cereus em biofilmes, ao processo simulado de higienização por clean in place (CIP) realizado em laticínios. Após a limpeza a adesão das células vegetativas em aço inoxidável foi reduzida a aproximadamente 1CFU/cm2. Após a sanificação, os resultados permaneceram inalterados. A contaminação remanescente foi relacionada com a maior resistência das células nos biofilmes formados. Após a limpeza e sanificação a adesão média dos esporos foi de 8,9 x 101 UFC/cm2 e 3,3 x 101 UFC/cm2, respectivamente. Tendo em vista este resultado, foi observado que esporos de B. cereus são mais difíceis de remover de superfícies de aço inoxidável do que células vegetativas, com procedimentos CIP. Finalmente, foi realizada a exposição de células vegetativas de B. cereus a três concentrações subletais (3,9; 1,8 e 0,9µg/mL) de cloreto de alquil amidopropil dimetil benzil amônio para avaliação da adaptação pelo método da concentração inibitória mínima (CIM). A aquisição de resistência foi avaliada pela comparação do valor inicial de CIM (7,4µg/mL), com os valores finais, após 28 dias de exposição. Após o período de adaptação, o valor de CIM encontrado foi o dobro do original (14,9µg/mL) indicando aquisição de resistência ao sanificante pela cepa. Foi constatado ainda que o cultivo da cepa na menor concentração subletal apresentou resultados mais coerentes, sugerindo que exposição a doses subletais mais brandas resulta em uma maior resposta adaptativa. / Bacillus cereus is a pathogen widely distributed in the environment and a serious problem in the dairy industry because of its ability to form heat-resistant spores that can survive pasteurization and UHT treatments. This bacteria is responsible for foodborne diseases in man due to production of toxins that may cause gastroenteritis, diarrhoea and vomiting. In addition, B. cereus is responsible for spoilage of pasteurized milk and cream referred to as \"sweet curdling\". Bacillus strains are frequently isolated from pasteurized and UHT treated milk and evidence indicates that biofilm formed on processing equipment surfaces are major sources of milk contamination. In biofilms, adherent cells and spores acquire increased resistance and persist to the sanitization process, becoming sources of bacteria dissemination in food processing. The extracellular polymeric matrix neutralizes the sanitizing agents and exposing the bacteria in biofilms to sublethal concentrations can lead to an increased resistance. In this study, biofilms of B. cereus vegetative cells were developed in a 304 stainless steel (SS) surface with a milk conditioning film. The mean adhesion of cells on SS surface was 1.4 x 105CFU/cm2. Biofilms of B. cereus spores were also developed, and the mean adhesion found was 1.4 x 104CFU/cm2. The resistance of B. cereus vegetative cells and spores in biofilms to a simulated clean-in-place (CIP) procedure used in dairy industry was evaluated. After cleaning procedure, the population of vegetative cells in the SS surface was reduced to approximated 1 CFU/cm2. After sanitizing procedure, the cell count remained unaltered. The remaining contamination was related with the increased resistance of cells in the developed biofilms. After cleaning and sanitizing procedures, the mean of spore adhesion found was 8.9 x 101 CFU/cm2 and 3.3 x 101 CFU/cm2, respectively. These results show that B. cereus spores are more difficult to remove from SS surfaces than vegetative cells using CIP procedures. Finally, B. cereus vegetative cells were exposed to three different sublethal concentrations (3.9; 1.8 and 0.9µg/mL) of alkyl amidopropyl dimethyl benzyl ammoniun cloride, for evaluation of adaptation, using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) test. The acquired resistance was evaluated by comparing the initial MIC value (7.4µg/mL) with final MICs, after 28 days of exposure. After the adaptation period, with exception of an experiment where the MIC was threefold the original value (29.8µg/mL), in the other experiments the MICs found was double (14.9µg/mL) of the original MIC, indicating acquisition of resistance by the B. cereus strain. It was observed that the growth of cells in the mildest sublethal concentration (0.9µg/mL) resulted in more consistent effects, suggesting that the exposure to mildest sublethal concentrations results in higher adaptive responses.

Após a exposição da raiz do dente na cavidade bucal, causada por recessão gengival, há uma mudança na microflora existente na região. Micro-organismos se depositam nessa região e formam um biofilme, que se exposto a carboidratos fermentáveis pode levar a uma queda de pH do meio, selecionando micro-organismos ácido-tolerantes e causando uma dissolução dos tecidos minerais e ativação de mecanismos de degradação da matriz orgânica da dentina. A presença de Candida albicans em lesões radiculares vem sendo relatada na literatura de forma controversa, alguns estudos sugerem que a cariogenicidade do biofilme aumenta na presença desse fungo, embora outros sugerem que o fungo levaria a uma neutralização do pH do biofilme por meio de secreção de metabólitos e consumo de ácido lático liberado na matriz do biofilme como resultado da metabolização de carboidratos. Frente ao exposto, o objetivo desse estudo foi avaliar o potencial cariogênico de biofilmes contendo Candida albicans em relação à dentina radicular. Discos de dentina radicular foram obtidos de raízes de dentes bovinos e tiveram sua microdureza de superfície inicial determinada. Foi realizado então um experimento in vitro nos quais os blocos de dentina foram aleatorizados em 3 grupos para cultivo de biofilme como se segue: Grupo 1 – biofilme monoespécie de S. mutans (SM); Grupo 2 – biofilme monoespécie de C. albicans (CA); e Grupo 3 – biofilme dualespécies de S. mutans + C. albicans (MIX). Os biofilmes foram cultivados na superfície dos blocos de dentina durante 24, 48 e 72 horas. pH do meio de cultura dos biofilmes foi aferido a cada 24 horas. Biofilmes foram coletados da superfície de seis blocos de dentina após cada um dos tempos acima descritos e a contagem de células viáveis foi determinada. Além disso, após cada período de formação de biofilme, os mesmos blocos de dentina tiveram sua microdureza de superfície medida novamente para determinação da porcentagem de perda de dureza de superfície (%PDS) e duas amostras de cada grupo/tempo foram submetidas a coloração histológica PicroSirius Red para determinação da porcentagem de colágeno estruturado na matriz orgânica da dentina desmineralizada. Os experimentos foram realizados em triplicata e os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido de teste de Bonferroni ao nível de significância de 5%. Em relação aos resultados, independentemente da composição microbiana do biofilme, houve maior %PDS em biofilmes formados durante 48 e 72h em comparação aos biofilmes formados por 24 horas. Em relação à composição microbiana do biofilme, observou-se que a %PDS no biofilme de SM foi estatisticamente maior que na presença do biofilme MIX, que por sua vez foi maior que aquela encontrada na presença de biofilme CA. Os resultados mostraram ainda que os valores de pH do meio de cultivo dos biofilmes MIX foram estatisticamente maiores do que os valores encontrados na presença de biofilme SM nos tempos de 48 e 72 horas (p<0,05). Em relação à análise orgânica da dentina, os resultados sugerem que há uma maior tendência para manutenção de colágeno estruturado em biofilmes contendo CA do que em relação aos biofilmes de SM e de MIX. Nossos resultados sugerem que embora a C. albicans apresente potencial cariogênico para dentina radicular, o biofilme contendo C. albicans associada ao S. mutans parece apresentar um menor potencial cariogênico quando comparado aos biofilmes cultivados na ausência deste fungo. / After root exposure on the oral cavity, caused by gingival recession, a shift in the site microflora occurs. Deposits of microorganisms turn in to a biofilm in the root surface, which if exposed frequently to fermentable carbohydrates may lead to a pH drop on the biofilm matrix, selecting acid tolerant microorganisms causing solubilization of the mineralized tissues and the activation of dentin organic matrix degrading system. Candida albicans presence in root caries has been debated on the literature, some studies suggest that the cariogenicity of the biofilm increases on the fungus presence, although some others have said that the fungus would lead to a biofilm pH neutralization by releasing some metabolites and lactic acid consumption, the acid released on the biofilm matrix as a product of the carbohydrates metabolization. Therefore, the aim of this present study was to evaluate the cariogenic potential of biofilms containing C. albicans in relation to root dentin. Dentin root slabs were obtained from root of bovine teeth and its surface microhardness was accessed. An in vitro trial was performed, by randomizing the slabs in 3 groups: Group 1 – mono-species S. mutans biofilm (SM), Group 2 – monospecies C. albicans biofilm (CA) and Group 3 - dual-species S. mutans and C. albicans biofilm (MIX). The biofilms were grown at the dentin slab surface in 24, 48 and 72. The pH of the culture medium was checked every 24 hours. Biofilms were collected from the surface of six dentin slabs after each time as described above and the CFU/mL counts were determined. Additionally, after each time of biofilm growth, the surface microhardness of the samples was measured again to calculate the surface hardness loss percentage (%SHL) and, also, two samples of each group/time were sent to histological stain by PicroSirius Red to determine the percentage of structured collagen on the organic demineralized dentin. Each trial was performed three times and the data was analysed by Two-Way ANOVA, followed by Bonferroni test, with a significance level of 5%. As related to the results, irrespective from the microbial composition of the biofilm, a higher %SHL was observed in biofilms growth in 48 and 72 hours when compared to the biofilms growth in 24 hours. Regarding the microbial composition of the biofilm, it was observed that the %SHL at the SM biofilm was statistically higher than in the presence of the MIX biofilm, which was also higher than the one found at the CA biofilm. The results also show that the pH values of the culture medium in MIX biofilms were statistically higher than those found in the presence of SM biofilms at 48 and 72 hours (p<0,05). Related to the organic analysis of the dentin, the results suggest that there is a higher tendency to structured collagen maintenance in CA biofilms when compared to the SM and MIX biofilms. Our results suggest that, although C. albicans has a cariogenic potential related to root dentin, the biofilm containing C.albicans associated to S. mutans seems to present a lower cariogenic potential when compared to biofilms growth without this fungus.

Título na folha de aprovação: Microbiota de costões rochosos de Ubatuba (SP) : composição, diversidade e efeito da contaminação orgânica / Orientador: Ana Júlia Fernandes Cardoso de Oliveira / Coorientador: Marcelo Antônio Amaro Pinheiro / Banca: Dejanira de Franceschi de Angelis / Banca: Derlene Attili de Angelis / Banca: José Juan Barrera Alba / Banca: Andre Rodrigues / Resumo: O biofilme do entremarés constitui-se de uma estrutura tridimensional, sendo composto, principalmente, por bactérias, cianobactérias, diatomáceas, protozoários e esporos de macroalgas, embebidos em uma matriz mucopolissacarídea. Neste sentido, o biofilme é importante fonte de alimento para algumas espécies, influenciando diretamente a estrutura da comunidade dos costões rochosos, embora tenha recebido pouca atenção pelas dificuldades associadas à sua amostragem e quantificação. O presente trabalho teve por objetivos avaliar a influência da contaminação orgânica sobre a composição e diversidade da microbiota (cianobactérias, bactérias heterotróficas) e do microfitoplâncton (diatomáceas e nanoheterótrofos) de costões rochosos com diferentes condições de impacto por efluentes orgânicos, bem como a sazonalidade das espécies microbianas predominantes em função da zonação (meso e infralitoral) e o grau de exposição às ondas (semi exposto e abrigado). Para tanto foram efetuadas coletas em 4 costões rochosos (2 semi expostos e 2 abrigados), no Município de Ubatuba (SP), com obtenção de três fragmentos rochosos de cada um, durante a maré baixa, em pontos georeferenciados nas duas faixas de zonação supracitadas, visando o isolamento e quantificação dos micro-organismos. As amostras destinadas à quantificação por epifluorescência foram acondicionadas em frascos com formaldeído a 5% de concentração final, para a fixação dos micro-organismos; enquanto aquelas destinadas ao isolamento fora... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Intertidal rocky shores biofilm is a tridimensional structure composed, mainly, by bacteria, cyanobacteria, diatoms, protozoans and macroalgae spores immersed in a mucopolysaccharides matrix. Thus, biofilm is an important food source for some species and has direct influence on the community structure of rocky shores although, due to difficulties in its sampling and quantification, has being given little attention. The present study aimed to evaluate the influence of organic contamination on biofilm composition and diversity of microbiota (cyanobacteria, heterotrophic bacteria) and microphytoplancton (diatoms and nanoheterotrophs) from rocky shores under different conditions as well as differences according to zonation (meso and infralittoral) and wave impacts (moderately exposed and sheltered). Therefore, 4 rocky shores from Ubatuba city (Sao Paulo, Brazil) were sampled during low tide, in georeferenced points from meso and infralittoral. Samples destined to quantification by epifluorescence were placed in vials with formaldehyde at 5% final concentration, for fixation of microorganisms while those intended for the isolation were placed in vials with sterile and filtered seawater. At each sampling point were recorded temperature, dissolved oxygen (DO) and photosynthetic pigment (chlorophyll a). The results suggest that there are differences between the analyzed beaches and in relation to the parameters assessed within a beach which indicates that both zonation and wave impact on rocky shores influence the structure of microbial community present in its biofilm. The presence of faecal indicators both in water and biofilm samples shows an impact by domestic effluents in the evaluated beaches and that biofilms can act as a protective microenvironment for microorganisms in intertidal systems. Although this may offer advantages for ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Resumo: A terapia fotodinâmica (TFD) é uma técnica que combina um fotossensibilizador (FS) com luz visível e oxigênio molecular, podendo ser utilizada como agente antimicrobiano no controle de diversas doenças infecciosas, como a cárie dentária. A quitosana vem demonstrando atividade promissora quando associada à alguns fotossensibilizadores. Portanto, o objetivo desse trabalho foi investigar a associação da quitosana com o fotossensibilizador Photodithazine® (PDZ) na TFD sobre culturas planctônicas e biofilmes de S. mutans, bem como avaliar sua eficácia sobre biofilmes microcosmos orais. Inicialmente, foi preparada uma suspensão de S. mutans UA 159 padronizada em 106 células/mL. Para o estudo em culturas planctônicas, foi adicionada a suspensão de S. mutans em placas de 96 poços. Para o estudo em biofilmes, foram confeccionadas amostras de esmalte de dentes bovinos como substrato para a formação do biofilme em placas de 24 poços. As culturas planctônicas e os biofilmes foram tratados de acordo com os grupos experimentais, recebendo adição de PDZ, quitosana ou PBS, seguido pela irradiação ou pela manutenção em ambiente escuro (controle). Os efeitos dos tratamentos foram analisados por meio da contagem de UFC/mL de S. mutans em ágar Infusão Cérebro Coração (BHI) incubadas por 48h a 37°C (5% de CO2) e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Além disso, para confirmar a penetração do FS e da quitosana nas células de S. mutans foi realizado teste de absorbância. A seguir, foram estuda... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Taís Maria Bauab / Coorientadora: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Banca: Carlos Henrique Gomes Martins / Banca: Flávia Aparecida Resende Nogueira / Banca: Elfriede Marianne Bacchi / Banca: Mara Correa Lelles Nogueira / Resumo: A elevada incidência de casos infecciosos causada por C. albicans, tal como a candidíase vulvovaginal (CVV) expõe o ser humano a terapias agressivas, bem como implica no desenvolvimento da resistência aos antifúngicos disponíveis na terapêutica clínica. Neste sentido, diversos pesquisadores encontram na natureza, bem como em plataformas nanotecnológicas de liberação de fármacos, um novo horizonte para disponibilizar novos recursos que possibilitem compor o arsenal terapêutico das doenças fúngicas. Em vista disso, este trabalho visou avaliar o potencial antifúngico in vitro e in vivo de frações do extrato metanólico de escapos de Syngonanthus nitens, o qual vem se mostrando promissor no tratamento da CVV, não incorporado e incorporado em um sistema nanoestruturado de liberação de fármacos (nanoemulsão lipídica - NE) buscando aprimorar os parâmetros referentes à biodisponibilidade das mesmas. Os ensaios investigativos foram iniciados com o fracionamento do extrato bruto (extração em fase sólida) e caracterização química das frações (ensaios cromatográficos por CCD e CLAE-DAD), seguido para o desenvolvimento da NE, a qual foi composta por colesterol (fase oleosa), Brij 58 (tensoativo) e tampão fosfato pH 7,4 + 0,25% de dispersão de quitosana (fase aquosa). 12 frações foram obtidas e apresentaram perfis químicos e antimicrobianos distintos, dentre elas, a fração Fr3 foi a mais promissora e constatou-se que o flavonóide luteolina é o composto majoritário e o responsável pela ativi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The incidence incidence of infectious caused by C. albicans, such as vulvovaginal candidiasis (CVV) exposes humans to aggressive therapies, and to the development of resistance to antifungal agents available in clinical therapy, as well. In this sense, several researchers find in the nature, and in the nanotechnology platforms for drug delivery, a new horizon to make available new resources that allow to compose the therapeutic arsenal of fungal diseases. The aim of this study was to evaluate the in vitro and in vivo antifungal potential of fractions from the methanolic extract of Syngonanthus nitens, which has been shown to be promising in the treatment of CVV, not incorporated and incorporated in a nanostructured drug delivery system (lipid nanoemulsion - NE) aiming to improve the parameters related to the bioavailability. The investigations were initiated with the fractionation of the crude extract (solid phase extraction) and chemical characterization of the fractions (TLC and HPLC-DAD chromatographic analyzes), followed for the development of the NE, which was composed by cholesterol (oil phase), Brij 58 (surfactant) and phosphate buffer pH 7.4 + 0.25% chitosan dispersion (aqueous phase). 12 fractions were obtained and presented distinct chemical and antimicrobial profiles, among them, the Fr3 fraction was the most promising and it was verified that the flavonoid luteolin is the majoritarian compound and responsible for the antimicrobial activity. Pharmacotechnical experiments (phase diagram design, polarized light microscopy, dynamic light scattering, zeta potential, stability evaluations, continuous and oscillatory rheological... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Daniela Leal Zandim-Barcelos / Resumo: Peptídeos antimicrobianos (PAMs) são importantes componentes da resposta do hospedeiro contra patógenos invasores. Além da ação antimicrobiana direta, podem também participar na modulação do sistema imune. No entanto, o papel dos PAMs na etiopatogênese da doença periodontal e os fatores de risco que podem influenciar sua expressão na cavidade bucal ainda não se encontram totalmente elucidados. Dessa forma, os objetivos do presente estudo foram: (1) avaliar a influência do tabagismo nos níveis de LL-37 e HNP 1-3 no fluido crevicular gengival (FCG) de pacientes com periodontite e investigar a associação entre os níveis destes PAMs e de mediadores inflamatórios nos sítios com ausência e presença de doença periodontal; (2) investigar o impacto do tabagismo nos níveis de hBD1 e 2 em pacientes com periodontite e avaliar os efeitos da nicotina e cotinina na expressão destes PAMs por queratinócitos; (3) avaliar a atividade metabólica e enzimática durante a recolonização de biofilmes multi-espécies periodontopatogênicos após tratamento com peptídeos sintéticos derivados da catelicidina humana (LL31 e D-LL31). A quantificação dos PAMs e mediadores inflamatórios no FCG foi realizada por meio de ensaio ELISA sanduiche e Multiplex, repectivamente, enquanto a RT-qPCR em tempo real detectou a expressão gênica dos PAMs por queratinócitos. A produção de ácido láctico foi mensurada para determinar a atividade metabólica nos biofilmes pós-tratamento, enquanto a atividade enzimática foi analisad... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Antimicrobial peptides (AMPs) are important components of the host response against invading pathogens. In addition to the direct antimicrobial activity, they can also participate in the immune system modulation. However, the role of AMPs in the etiopathogenesis of periodontal disease and the risk factors that may influence their expression in the oral cavity are not yet fully understood. Thus, the purposes of the present study were: (1) to evaluate the influence of smoking on the levels of LL-37 and HNP 1-3 in the gingival crevicular fluid (GCF) of patients with periodontitis and to investigate the association between the levels of these AMPs and inflammatory mediators at sites with absence and presence of periodontal disease; (2) to investigate the impact of smoking on hBD1 and 2 levels in patients with periodontitis and to evaluate the effects of nicotine and cotinine on the expression of these AMPs by keratinocytes; (3) evaluate the metabolic and enzymatic activity during the recolonization of multi-species periodontopathogenic biofilms after treatment with synthetic peptides derived from human cathelicidin (LL31 and D-LL31). The quantification of AMPs and inflammatory mediators in the GCF was performed by sandwich ELISAs and Multiplex assay, respectively, while RT-qPCR in real time detected the gene expression of the AMPs by keratinocytes. The production of lactic acid was measured to determine the metabolic activity in post-treatment biofilms, while the enzymatic activi... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Este estudo clínico randomizado avaliou o efeito de soluções químicas, quanto à remoção de biofilme e ação antimicrobiana, na higienização das próteses totais superiores e escovas específicas. Quarenta e cinco participantes foram orientados a escovar suas próteses (escova específica para prótese e sabonete neutro) três vezes ao dia e imergí-las, uma vez ao dia, nas soluções: Grupo I- Solução salina (controle negativo); Grupo II- Hipoclorito de sódio 0,2% (controle positivo); Grupo III- Peróxido Alcalino (Efferdent® Power Clean Crystals); Grupo IV- Ricinus communis a 6,25%. Além disso, os participantes também foram randomizados para a imersão (n=23) ou não imersão (n=22) das escovas específicas nas soluções, juntamente às próteses, para avaliação das escovas quanto à ação antimicrobiana e degradação das cerdas. As avaliações foram realizadas antes (Baseline) e após os 7 dias de uso de cada solução. Para a remoção de biofilme, as próteses foram evidenciadas (vermelho neutro 1%), fotografadas e a área de biofilme foi mensurada (Image Tool 3.00). A ação antimicrobiana foi avaliada por meio da contagem de Candida spp. e Streptococcus mutans. Para coleta do biofilme das próteses, as mesmas foram escovadas (escova Tek e solução salina) por 2 minutos, sendo a suspensão transferida para tubos de ensaio. As escovas foram preparadas, colocadas em meio de cultura Letheen Broth (20 mL) e levadas para cuba ultrassônica, seguido de agitação mecânica e centrifugação (6000 rpm, por 7 minutos). Diluições decimais (100 até 10-3) com alíquotas (50 L) de cada diluição foram cultivadas em placas de Petri contendo meio de cultura adequado, para posterior incubação (aerobiose) por 48hs e contagem do número de colônias. As diferenças entre imersão ou não imersão da escova foram avaliadas pelo teste de Mann-Whitney (&alpha;=0,05). As propriedades de remoção de biofilme e ação antimicrobiana foram avaliadas pelo teste de Friedman, seguido pelo teste de Wilcoxon (&alpha;=0,05). Os resultados mostraram que, para a propriedade de remoção de biofilme, em ambos os grupos (com e sem imersão da escova), as soluções de hipoclorito de sódio a 0,2% [com imersão: posto-médio (PM)=1,41; sem imersão: PM=1,48], Efferdent® (com imersão: PM =2,41; sem imersão: PM =2,25) e Ricinus communis a 6,25% (com imersão: PM=2,48; sem imersão: PM=2,77) foram eficazes e semelhantes (p<0,001). Para as próteses, foi verificada ação antimicrobiana frente a Candida spp. para todas as soluções (hipoclorito de sódio a 0,2%: com imersão PM=2,22, sem imersão PM=2,09; Efferdent®: com imersão PM=2,24, sem imersão PM=2,57; Introdução | 22 Ricinus communis a 6,25%: com imersão PM=2,20, sem imersão PM=2,75). Frente a S. mutans, as soluções de hipoclorito de sódio a 0,2% (com imersão: PM=2,13, sem imersão: PM=1,96) e Efferdent® (com imersão: PM=2,26, sem imersão: PM=2,18) foram as mais eficazes e a solução de Ricinus communis a 6,25% (com imersão: PM=2,39, sem imersão: PM=2,75) apresentou valores intermediários (p<0,001). Não houve diferença significante na contagem UFC/mL de Candida spp. para as escovas, tanto para o grupo que não realizou a imersão das escovas (p=0,108), como para os que realizaram o procedimento (p=0,467). Para S. mutans, não houve diferença significante entre as soluções (p<0,001) para o grupo que não realizou a imersão das escovas, enquanto que para o grupo com imersão da escova o Efferdent e hipoclorito de sódio a 0,2% mostraram redução na contagem UFC/mL de S. mutans quando comparado ao grupo Controle (p=0,001). A solução de Ricinus communis a 6,25% apresentou valores intermediários. As imagens em microscopia eletrônica mostraram grande deterioração das cerdas após 7 dias de uso, e a solução de hipoclorito de sódio promoveu um maior número de ranhuras nas cerdas quando imersas. Concluiu-se que todas as soluções foram efetivas na remoção do biofilme e frente a Candida spp., no entanto, frente a S. mutans, as soluções de hipoclorito de sódio a 0,2% e Efferdent® foram efetivas, enquanto a solução de Ricinus communis a 6,25% promoveu ação intermediária. Em relação as escovas, não houve diferença entre os grupos em relação ao protocolo de imersão e na redução de UFC/mL de Candida spp. e S. mutans / This randomized clinical study evaluated the effect of chemical hygiene solutions on biofilm removal and antimicrobial action of denture and specific brushes. Forty-five participants were instructed to brush their dentures (specific brush and liquid soap) three times a day and to soak them, once a day, in the solutions: Group I- Saline solution (negative control); Group II - Sodium hypochlorite 0.2% (positive control); Group III - Alkaline Peroxide (Efferdent® Power Clean Crystals); Group IV Ricinus communis 6.25%. In addition, the participants were also randomized to immersion (n=23) or non-immersion (n=22) of the specific brushes in the solutions, with the dentures, to evaluate the brushes for antimicrobial action and bristle degradation. Evaluations were performed before (Baseline) and after 7 days of use of each solution. For the biofilm removal, the dentures were disclosed (1% neutral red), photographed and the biofilm area was measured (Image Tool 3.00). The antimicrobial action was evaluated by counting Candida spp. and Streptococcus mutans. To collect denture biofilm, dentures were brushed (Tek brush and saline solution) for 2 minutes, and the suspension transferred to test tubes. The brushes were prepared and placed at Letheen Broth (20 mL) and taken to ultrasonic vessel, followed by mechanical shaking and centrifugation (6000 rpm for 7 minutes). Decimal dilutions (100 to 10-3) with aliquots (50 L) of each dilution were grown in Petri dishes containing suitable culture medium, for further incubation (aerobiose) for 48 h and counting the number of colonies. The differences between brushes immersion or non-immersion by the Mann-Whitney test (&alpha;=0.05). The properties of biofilm removal and antimicrobial action were evaluated by Friedman test, followed by the Wilcoxon test ( &alpha;= 0.05). The results showed that, for the biofilm removal property, in both groups (brush immersion or non-immersion), 0.2% sodium hypochlorite [immersion: Mean-Rank (MR)=1.41; non-immersion: MR=1.48], Efferdent® (immersion: MR=2.41, non-immersion: MR=2.25) and 6.25% Ricinus communis (immersion: MR=2.48; non-immersion: MR=2.77) were effective and similar (p <0.001). For dentures, was founded antimicrobial action against Candida spp. for all solutions (0.2% sodium hypochlorite: immersion: MR=2.22, non-immersion: MR=2.09; Efferdent ®: immersion: MR=2.24, non-immersion: MR=2.57; 6.25% Ricinus communis: immersion: MR=2.20, non-immersion: MR=2.75). Against S. mutans, 0.2% sodium hypochlorite (immersion: MR=2.13, Introdução | 26 non-immersion MR=1.96) and Efferdent® (immersion: MR=2.26, non-immersion: MR=2.18) were the most effective and 6.25% Ricinus communis (immersion: MR=2.39, non-immersion: MR=2.75) showed intermediate values. There was no significant difference in the brushes CFU/mL of Candida spp. for group that did not perform brush immersion (p=0.108), as well as for those who performed the procedure (p=0.467). For S. mutans, there was no significant difference between the solutions (p <0.001) for the group that did not immerse the brushes, whereas for the brush-immersion group, Efferdent and 0.2% sodium hypochlorite showed a reduction in the UFC / mL count of S. mutans when compared to the Control group (p=0.001). 6.25% Ricinus communis presented intermediate values. The electron microscopy images showed a great deterioration of the bristles after 7 days of use, and the sodium hypochlorite solution promoted a greater number of grooves in the bristles. It was concluded that all solutions were effective for biofilm removal and Candida spp.. However, for S. mutans 0.2% sodium hypochlorite and Efferdent® were effective, whereas 6.25% Ricinus communis showed intermediate action. Regarding the brushes, there was no difference between the groups in relation to the immersion protocol and in the reduction of CFU/mL of Candida spp. and S. mutans

O objetivo desse estudo in vitro foi avaliar a efetividade antimicrobiana de higienizadores à base de peróxidos frente a biofilme multiespécies e o impacto dessas soluções na redução da carga microbiana, atividade metabólica e do biofilme agregado. A partir de matrizes circulares metálicas (15 x 3 mm), foram confeccionados corpos de prova de resina acrílica termopolimerizável os quais foram esterilizados em micro-ondas (650W, por 6 minutos) e inoculados com suspensão de 105 UFC/mL de Candida albicans (Ca) e 106 UFC/mL de Staphylococcus aureus (Sa) e de Pseudomonas aeruginosa (Pa). Após contaminação, os corpos de prova foram incubados a 37 ºC por 20 h e, em seguida, por meio de uma cesta de aço inoxidável, foram imersos em Béquer com as seguintes soluções, de acordo com as instruções do fabricante (n=9): Grupo CP (Controle positivo) - imersão em PBS (Phosphate-Buffered Saline); Grupo MI NitrAdine e Grupo FX Fixodent. Em seguida, foram lavados (PBS) e imersos em meio de cultura Letheen, para a avaliação da esterilidade e obtenção de diluições seriadas (100 a 10-3), as quais foram semeadas em meios de cultura específicos: CHROMagar Candida para C. albicans, Manitol Salt Agar para S. aureus e Agar Cetrimide para P. aeruginosa. Após incubação, de acordo com morfologia típica, o número de colônias características foi mensurado e o número de UFC/mL calculado. A avaliação da atividade metabólica foi realizada pelo método de redução do XTT e a viabilidade celular foi avaliada por microscopia de epifluorescência (n=2). Os dados obtidos para as variáveis de UFC/mL (Sa e Pa), Unidades de Absorbância e Percentual de Área, foram avaliados pelo teste de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Dunn (=0,05). Para comparação entre os dados vinculados (Percentual de área de células vivas e totais) empregou-se também o teste de Wilcoxon. Os dados da variável de UFC/mL para C. albicans foram avaliados pelo teste de ANOVA e pós-teste de Tukey, uma vez que apresentaram distribuição normal. Os resultados de UFC/mL mostraram diferença significativa entre os grupos (Ca p=0,002, Pa p<0,001e Sa p<0,001) havendo redução significante do número de UFC/mL de C. albicans [MI: 2,13 (1,17)], de P. aeruginosa [FX: 2,96 (1,76 4,17) e MI: 0,00 (-0,43 2,06)] e S. aureus [FX: 3,59 (2,97 4,31) e MI: 1,90 (0,40 3,01)], quando comparado aos grupos controles [CP:Ca: 4,02 (0,85), CP:Pa: 6,43 (6,02 6,61) e CP:Sa: 5,67 (5,41 6,31)]. Houve redução da atividade metabólica do biofilme multiespécies (p<0,001), em ambas as soluções higienizadoras [FX: 0,001 (-0,006 0,058) e MI: 0,000 (- 0,002 0,066)] quando comparadas ao Grupo Controle [CP: 0,068 (0,046 0,190)]. As imagens da microscopia de epifluorescência revelaram redução significativa da área de biofilme agregado sobre os corpos de prova após a imersão nos higienizadores [FX: 85,19 (77,23 86,42) e MI: 78,42 (70,91 81,65)] quando comparados ao grupo controle (p<0,001). Na comparação entre as áreas de biofilme vivo e total pode-se observar diferenças entre as áreas do biofilme multiespécies (p<0,001), após a imersão nos higienizadores avaliados. Conclui-se que os higienizadores de prótese conseguiram reduzir a atividade metabólica bem como o biofilme agregado, embora nenhum higienizador tenha conseguido remover completamente o biofilme multiespécies. O higienizador NitrAdine foi o mais efetivo na redução da carga microbiana do biofilme multiespécies. A P. aeruginosa foi mais suscetível a ação dos higienizadores do que o S. aurueus e C. albicans, quando associada em biofilme multiespécies / The objective of this in vitro study was to evaluate the peroxides soluions antimicrobial effectiveness of against the viability of multispecies biofilm and the impact of these solutions on the reduction of microbial load, metabolic activity and biofilm aggregate. Acrylic resin specimens were obtained by a circular metal matrix (15 × 3 mm), sterilized with microwave irradiation (650 W, 6 min) and contaminated with contaminated with 105 CFU/mL suspension of Candida albicans (Ca) and 106 CFU/mL suspensions of Staphylococcus aureus (Sa) and Pseudomonas aeruginosa (Pa). After contamination, the specimens were incubated at 37 ° C for 20 hours and then immersed in Becker through a stainless-steel basket, on the following solutions according to the manufacturer\'s instructions (n=9): Group CP (positive control) immersion in PBS (Phosphate-Buffered Saline); Group MI NitrAdine and Group FX - Fixodent. The specimens were washed (PBS) and immersed in Letheen culture medium, to evaluate sterility and obtain serial dilutions (100 to 10-3), that were seed into specific medium: CHROMagar Candida for C. albicans, Manitol Salt Agar for S. aureus and Agar Cetrimide for P. aeruginosa. After incubation, in accordance with characteristic morphology, the number of characteristic colonies was counted and the number of CFU/mL calculated. The evaluation of metabolic activity was performed by the XTT reduction assay and cell viability was evaluated by epifluorescence microscopy. The data obtained for the variables of CFU (Sa and Pa), Absorption Units and Area Percentage were evaluated by the Kruskal-Wallis test, followed by the Dunn test (=0.05). The Wilcoxon test was used to compare the paired data (percentage of live and total cell area). Data from the variable of UFC/mL for C. albicans were evaluated by the Anova test and Tukey\'s post-test, since they presented a normal distribution. The results of UFC/mL showed significant differences between groups (Ca p=0.002, Pa p<0.001e Sa p<0.001) with significant reduction in the number of CFU/mL of C. albicans [MI: 2.13 (1.17)], P. aeruginosa [FX: 2.96 (1.76 4.17); MI: 0.00 (-0.43 2.06)] and S. aureus [FX: 3.59 (2.97 4.31); MI: 1.90 (0.40 3.01)], when compared with control group [CP:Ca: 4.02 (0.85), CP:Pa: 6.43 (6.02 6.61) e CP:Sa: 5.67 (5.41 6.31)]. There was reduction in the metabolic activity of the multispecies biofilm in both denture cleanser [FX: 0.001 (-0.006 0.058) e MI: 0.000 (- 0.002 0.066)] when compared with control group [CP: 0.068 (0.046 0.190)]. The epifluorescence microscopy images revealed a significant reduction of the biofilm area on the specimens after immersion in the denture cleansers [FX: 85.19 (77.23 86.42) e MI: 78.42 (70.91 81.65)] when compared with control group (p<0.001). In live and total biofilm areas comparison it was possible to observe differences between the areas of the multispecies biofilm (p<0,001), after immersion in the denture cleansers evaluated. It was concluded that the denture cleansers were able to reduce metabolic activity as well as the aggregate biofilm, although none of the cleansers was able to completely remove the multispecies biofilm. NitrAdine was the most effective in reducing the microbial load of multispecies biofilm. P. aeruginosa was more susceptible to the action of denture clenasers than S. aureus and C. albicans, when associated with multispecies biofilms

Orientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Coorientador: Fernando Rogério Pavan / Banca: Katiany Rizzieri Caleffi Ferracioli / Banca: Luís Otávio Regasini / Banca: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Marlus Chorilli / Resumo: As infecções pulmonares são um problema global e estão classificadas em terceiro lugar entre as principais causas de morte. Entre as infecções pulmonares crônicas estão a tuberculose (TB) e a paracoccidioidomicose (PCM). A TB é uma doença cujo principal agente etiológico é o Mycobacterium tuberculosis e a PCM tem como agente etiológico o complexo Paracoccidioides spp. As duas doenças podem ocorrer na forma de coinfecção, com incidência aproximada de 2,8 a 5,5% dos casos nos países da América do Sul e 10% no Brasil. Ambos os microrganismos já foram descritos na forma de biofilme monoespécie e o tratamento de ambas as doenças tem merecido atenção, devido a casos de resistência e as poucas opções terapêuticas. Diante do exposto, este trabalho visa mostrar, pela primeira vez, a capacidade de M. tuberculosis e P. brasiliensis se associarem por meio do crescimento na forma de um biofilme misto in vitro, a fim de elaborar um novo protótipo de 3'chalcona carreada numa nanoemulsão com atividade para as formas planctônica e de biofilme. Para isso, inicialmente foi padronizada e caracterizada a formação dos biofilmes monoespécie da linhagem ATCC M. tuberculosis (H37Rv), da linhagem clínica (Rv40) e da linhagem de P. brasiliensis (Pb18) e dos biofilmes mistos das associações de H37Rv+Pb18 e Rv40+ Pb18 (nesta ordem de crescimento), ambas as associações mostraram um aparente sinergismo entre elas. Na formação do biofilme misto inverso denominado assim pela ordem de associação, onde primeir... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pulmonary infections are a global problem and rank third among the leading causes of death. Among the chronic lung infections are tuberculosis (TB) and paracoccidioidomycosis (PCM). The TB is a disease whose main etiologic agent is Mycobacterium tuberculosis and PCM has the etiological agent Paracoccidioides spp. The two diseases may occur in the form of coinfection, with an approximate incidence of 2.8 to 5.5% of the cases in the countries of South America and 10% in Brazil. Both microorganisms have already been described in the form of monospecies biofilm and the treatment of both diseases has deserved attention, due to cases of resistance and the few therapeutic options. In view of the above, this research aims to show, for the first time, the ability of M. tuberculosis and P. brasiliensis to associate by means of growth in the form of a mixed biofilm in vitro, in order to elaborate a new prototype in a nanoemulsion with activity for planktonic and biofilm forms. For this purpose, it was initially standardized and characterized the formation of monospecies biofilms of the ATCC strain M. tuberculosis (H37Rv), the clinical lineage (Rv40) and the P. brasiliensis (Pb18) lineage and the mixed biofilms of the associations of H37Rv + Pb18 and Rv40 + Pb18 (in this order of growth), both associations showed an apparent synergism between them. In order to establish the mixed biofilm (Pb18 + H37Rv), it was first proposed the association of P. brasiliensis (Pb18), followed by ATCC M. tuberculosis (H37Rv) with order of inverse growth, in this association a apparent competition between the microorganisms was observed. All biofilms, monospecies and mixed, were consolidated from 30 to 45 days... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor