Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Analiza el grado de diversidad genética de 24 aislados de B. melitensis obtenidas a partir de las muestras clínicas de pacientes mediante la aplicación de la técnica HOOF-Prints, mediante el análisis del número variable de repeticiones en tándem de 8 loci, un método rápido, de bajo costo y que permite determinar la diversidad alélica de la población siendo el locus 7 el más polimórfico (D = 0.8). / Tesis

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina los efectos del Malathion sobre el desarrollo embrionario post-implantacional usando como modelo biológico al ratón. Los efectos del Malathion sobre el desarrollo embrionario post-implantacional son evaluados usando ratonas albinas preñadas separadas en 4 grupos de tratamiento a las que se les administra intraperitonealmente diferentes dosis de Malathion de grado comercial (150, 100, 50 y 0 mg de Malathion/ Kg de peso del animal) desde el día 9 al día 17 de preñez. En el día 18 de preñez las ratonas son sacrificadas realizándose la evaluación sobre el desarrollo embrionario post-implantacional en los fetos. Los resultados encontrados muestran que Malathion produce toxicidad materna cuando son expuestas a la dosis más alta (150 mg de Malathion/ Kg de peso del animal). También se halla un aumento en la embriotoxicidad evidenciado por la mortalidad fetal y en la morfogénesis del sistema esquelético por retraso en la osificación. Se encuentran algunas malformaciones pero ninguna es significativamente diferente al grupo control (p≥0.05). / Tesis

Programa de Doctorado: Biotecnología en ciencias de la salud (Biotecnología y Bíomedicina)

Programa de Doctorado: Antropología Biológica y de la Salud, 2001-2003

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El síndrome de Lynch (SL) es una condición hereditaria que aumenta el riesgo de cáncer endometrial y otros tipos de cáncer. La identificación de pacientes de cáncer de endometrio (CE) con SL tiene el potencial de influir en intervenciones que alteran el curso de la enfermedad e incrementan la expectativa de vida del sujeto afectado. Nuestro objetivo fue estudiar la prevalencia de SL entre los pacientes de CE en nuestra población. MÉTODOS: El cribado universal para SL se realizó en una serie de casos consecutivos de CE. Para seleccionar los casos sospechosos de SL se analizaron la inestabilidad de microsatélites (IMS), la inmunohistoquímica (IHC) por la expresión de las proteínas (MMR) y cuando fue necesario, el análisis de metilación de MLH1. Se realizó la secuenciación de los correspondientes genes MMR en los casos sospechosos de SL. RESULTADOS: 173 casos de CE (edad promedio, 63 años) fueron seleccionados. 61 pacientes (35%) tuvieron resultados de IHQ o IMS anormales. Después del análisis de metilación MLH1, 27 casos fueron considerados sospechosos de SL. De éstos, 22 pacientes fueron contactadas y remitidas para asesoramiento genético. 19 de ellas continuaron con pruebas genéticas y 8 fueron diagnosticadas de SL. Las mutaciones fueron más frecuentes en pacientes más jóvenes (<50 años). Tres casos tuvieron IHQ o MSS intacto, lo cual refuerza la necesidad de implementar el cribado de CE con ambas técnicas. Del estudio de familiares 68% (17/25) eran portadores de mutación (edad promedio, 39.6 años) 4 con neoplasia asociada al SL. CONCLUSIÓN: La prevalencia de SL en pacientes con CE fue de 4,6% (8/173); Con una frecuencia predictiva de 6,6% en la población española. Recomendamos el cribado universal de CE para SL.

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Las distroglicanopatías (DGPs) constituyen un grupo heterogéneo de distrofias neuromusculares congénitas con herencia autosómica recesiva que afectan al músculo, cerebro y retina, y están originadas por deficiencias en la O-glicosilación del α-distroglicano (α-DG). Esta modificación postraduccional es esencial para el anclaje de las células musculares y nerviosas a la matriz extracelular, así como para la formación de las sinapsis en ‘cinta’ entre los fotorreceptores y las células bipolares y horizontales en la retina. Mutaciones en los genes POMT1, POMT2, POMGnT1, FKTN, FKRP y LARGE están asociadas a DGPs, originando una pérdida de función de las glicosiltransferasas que codifican y causando así una hipoglicosilación del α-DG. En esta Tesis Doctoral se demuestra que los genes POMT1, POMT2, POMGnT1, FKTN, FKRP y LARGE se expresan a nivel de ARNm mediante RT-PCR, y a nivel de proteína mediante Western blotting, en la retina neural ratón adulto y en fotorreceptores 661W en cultivo. Las proteínas codificadas por estos seis genes se localizan tanto en el citoplasma como en el núcleo de esta línea celular. Mediante microscopía confocal de inmunofluorescencia se ha determinado que POMT1, POMT2 y fukutina se localizan parcialmente en el retículo endoplásmico, mientras que POMGnT1 y FKRP están presentes en el aparato de Golgi de células 661W. En cuanto a LARGE, hemos observado que se encuentra disperso por todo el citoplasma, sin acumulación en ningún orgánulo en particular. Todas las proteínas estudiadas se acumulan en el núcleo de fotorreceptores 661W, aunque únicamente POMT1 y POMT2 se encuentran asociadas a las regiones de eucromatina, colocalizándose entre sí tanto en dicha fracción nuclear como en el citoplasma de estas células. También se ha demostrado en este trabajo mediante Western blotting que el factor de transcripción epigenético p38IP/FAM48A se expresa en la retina neural de ratón adulto y en la línea celular de fotorreceptores 661W, localizándose en la fracción nuclear. Esta proteína posee un dominio funcional denominado Spt20 y múltiples sitios potenciales de glicosilación y fosforilación, los cuales se encuentran muy conservados en todos los vertebrados analizados. En la retina de ratón p38IP/FAM48A se localiza en el núcleo de conos, células horizontales, bipolares, amacrinas y ganglionares, mientras que en el núcleo de las células 661W se localiza en la porción de eucromatina, donde se colocaliza con las proteínas POMT1 y POMT2. Dicho activador transcripcional interacciona físicamente con el heterodímero POMT1-POMT2 mediante su unión a la proteína POMT2. Estos resultados sugieren que dicho heterodímero podría ejercer una función como regulador indirecto de la expresión génica mediante la O-glicosilación de factores de transcripción y/o reguladores epigenéticos como p38IP/FAM48A en fotorreceptores de la línea 661W.

El cáncer de laringe sigue teniendo alta incidencia en nuestro medio a pesar de las medidas de salud pública que se han tomado en los últimos 10 años que han promovido la reducción del consumo de tabaco, factor causal conocido de múltiples tumores de entre ellos los del ámbito otorrinolaringológico. El hecho de que un paciente presente un factor pronóstico para una enfermedad aumenta la probabilidad de muerte y recidiva de dicha enfermedad. Proponemos la creación y desarrollo de un modelo pronóstico de recidiva y mortalidad para cáncer glótico a los 5 años, cuyas variables principales sean tiempo hasta la muerte o tiempo hasta la recidiva. Y otras secundarias: el estadio, la histología del tumor, el consumo de tabaco o alcohol y el tratamiento recibido. Para ello realizaremos un estudio de cohortes recogiendo todos los pacientes diagnosticados de cáncer glótico entre los años 2004 y 2014 en el Hospital General Universitario de Alicante. Se construirá un modelo de regresión de Cox y se adaptará a un sistema de puntos. El modelo será validado internamente por bootstrapping y se determinará el estadístico C, realizando una calibración de tal forma que las probabilidades observadas sean similares a las esperadas. Todo esto se integrará en una aplicación móvil del sistema de puntos para facilitar el manejo de la misma en la práctica clínica. Con los resultados obtenidos se conocerá el pronóstico de mortalidad y recidiva de los pacientes diagnosticados de cáncer glótico a los 5 años, dato que podrá ayudar y reforzar una decisión terapéutica de las propuestas en las guías clínicas oncológicas internacionales usadas en la actualidad.

La inflamación hepática crónica es un fenómeno crucial en la patogénesis del carcinoma hepatocelular (HCC). En los últimos años, el proceso inflamatorio desencadenado por la activación del complejo del inflamasoma se ha asociado con diferentes enfermedades hepáticas. Sin embargo, su papel en el desarrollo de HCC está prácticamente sin explorar. En esta tesis, se estudia y analiza el impacto de diferentes componentes del inflamasoma, incluyendo la proteína caspasa 1 y los receptores AIM2 (del inglés absent in melanoma 2) y NLRP3 (del inglés NOD-like receptor family pyrin domain containing 3), en el desarrollo de HCC inducido por dietilnitrosamina (DEN) en ratones. La inactivación genética de AIM2, pero no de NLRP3, reduce el daño hepático y el desarrollo de HCC en este modelo. La deficiencia de AIM2 está asociada a una disminución en la activación del inflamasoma, la inflamación hepática y la respuesta proliferativa durante la fase de iniciación del HCC. También se identificó que AIM2 está altamente expresado en células de Kupffer, y que la producción de interleucina (IL)-1β, mediada por AIM2, en estas células se ve aumentada tras el daño hepático inducido por DEN. Además, la inhibición de IL-1β resultó en menor daño hepático, inflamación y proliferación durante la fase inicial de hepatocarcinogénesis; sin embargo, esta inhibición no fue suficiente para frenar la progresión de tumores hepáticos ya establecidos. Así, los datos de esta tesis indican que AIM2 promueve el proceso inflamatorio durante el daño hepático carcinogénico, contribuyendo al desarrollo genotóxico de HCC en ratones y, por tanto, reconociendo AIM2 como una posible diana terapéutica en esta enfermedad.