Parmi les diverses méthodes d’imagerie médicales, les méthodes d’imagerie optique connaissent depuis une vingtaine d’années un développement significatif. Parmi les techniques d’imagerie optique récemment mises en œuvre, la Tomographie Optique Cohérente Plein Champ – ou OCT Plein Champ – présente des caractéristiques remarquables, en particulier en termes de résolution et de simplicité instrumentale, permettant d’envisager son application au domaine du diagnostic du cancer. Cette thèse décrit la conception et la mise en œuvre de dispositifs d’OCT Plein Champ pour utilisation en contexte clinique, afin d’évaluer la performance de la technique pour le diagnostic peropératoire du cancer, en vue de son amélioration et optimisation. Dans cet objectif nous avons réalisé des travaux regroupés en 2 axes : Une partie translationnelle, consistant à développer un dispositif de microscopie optique par OCT Plein Champ répondant au besoin clinique pour le diagnostic peropératoire du cancer sur biopsies, en vue de l’évaluation de ses performances de diagnostic sur plusieurs problématiques cliniques : le diagnostic peropératoire du tissu mammaire, de résection de cerveau, ainsi que la qualification préopératoire de greffons cornéens. Une partie exploratoire, principalement instrumentale, dédiée à l’amélioration des performances de diagnostic de la technique, proposant de nouvelles approches multimodales (contraste de fluorescence, contraste dynamique) et multi-échelles, ou encore la déclinaison du dispositif sous la forme d’un endoscope rigide portable utilisable en contexte clinique. / Among medical imaging techniques, optical imaging methods have been significantly developped during the past decades. More specifically, among recently proposed optical imaging techniques, Full-Field Optical Coherence Tomography – or FFOCT – provides unique capabilities, in particular regarding resolution and instrumental simplicity, which allows to consider its application to cancer diagnosis. This thesis demonstrates the design and implementation of new FFOCT devices for use in a clinical context, targeting improvement and optimization of the technique. Two major development parts have been realized : A translational part, comprising the development of a FFOCT microscope adapted to a clinical use for intraoperative diagnosis of cancer on tissue biopsies, and the assessment of its diagnosis performance for several clinical cases : the intraoperative diagnosis of breast tissue, of brain resections, and the preoperative qualification of corneal grafts. A research part - mainly instrumental - targeting the improvement of the diagnosis performance of the technique, based on new multimodal (fluorescence contrast, dynamic contrast) and multiscale approaches, or on the miniaturization of the device by developing a handheld rigid endoscope for clinical use.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Objetivos. Desenvolver um modelo experimental para identificaÃÃo de linfonodo sentinela (LS) da mama da cadela com uso de corante azul de metileno e comparÃ-lo com o azul patente, controlados por tecnÃcio. MÃtodos. O trabalho foi realizado em 23 cadelas, tendo-se observado a marcaÃÃo dos LS do primeiro par superior de mamas ao se injetarem 0,2 ml de TecnÃcio 99m ligado ao fitato (Tc 99m) e 0,5 ml de azul patente Guerbet V 2,5 % nos espaÃos subpapilares das mamas direitas e 0,2 ml de Tc-99m e 0,5 ml do azul de metileno 1 % nos mesmos espaÃos das mamas esquerdas. Resultados. Na mama direita, as tÃcnicas de biopsia de LS quando utilizados o Tc-99m e azul patente foram concordantes. Dos 23 LS estudados, somente um nÃo corou nem foi captante. O azul patente foi eficaz em 100 % quando comparado com os dois mÃtodos associados. Na mama esquerda, dos 23 LS estudados, somente dois nÃo coraram e um nÃo foi captante, sendo esta diferenÃa estatisticamente nÃo significante. A tÃcnica de biopsia do LS utilizando-se o azul de metileno apresentou-se com eficÃcia de 91,3 % quando utilizado isoladamente e de 100 % quando associado ao Tc-99m. ConclusÃo. O uso do azul de metileno associado ao radiofÃrmaco pode ser considerado como tÃcnica potencial na pesquisa transoperatÃria do LS das mamas, sendo uma opÃÃo menos onerosa e com menores efeitos alergÃnicos do que o azul patente / Objetivos. Desenvolver um modelo experimental para identificaÃÃo de linfonodo sentinela (LS) da mama da cadela com uso de corante azul de metileno e comparÃ-lo com o azul patente, controlados por tecnÃcio. MÃtodos. O trabalho foi realizado em 23 cadelas, tendo-se observado a marcaÃÃo dos LS do primeiro par superior de mamas ao se injetarem 0,2 ml de TecnÃcio 99m ligado ao fitato (Tc 99m) e 0,5 ml de azul patente Guerbet V 2,5 % nos espaÃos subpapilares das mamas direitas e 0,2 ml de Tc-99m e 0,5 ml do azul de metileno 1 % nos mesmos espaÃos das mamas esquerdas. Resultados. Na mama direita, as tÃcnicas de biopsia de LS quando utilizados o Tc-99m e azul patente foram concordantes. Dos 23 LS estudados, somente um nÃo corou nem foi captante. O azul patente foi eficaz em 100 % quando comparado com os dois mÃtodos associados. Na mama esquerda, dos 23 LS estudados, somente dois nÃo coraram e um nÃo foi captante, sendo esta diferenÃa estatisticamente nÃo significante. A tÃcnica de biopsia do LS utilizando-se o azul de metileno apresentou-se com eficÃcia de 91,3 % quando utilizado isoladamente e de 100 % quando associado ao Tc-99m. ConclusÃo. O uso do azul de metileno associado ao radiofÃrmaco pode ser considerado como tÃcnica potencial na pesquisa transoperatÃria do LS das mamas, sendo uma opÃÃo menos onerosa e com menores efeitos alergÃnicos do que o azul patente / Objectives. To develop an experimental model for identification of sentinel lymph node (SLN) of breast bitch with the use of methylene blue and compares it with the patent blue, both associated with technetium. Methods. 23 dogs, there was the marking of the SLN of the first upper pair of breasts to inject 0.2 ml of Tc-99m phytate bound to (99m) and 0.5 ml of patent blue Guerbet V 2,5 % in subpapilar spaces right breast and 0.2 ml of 99mTc and 0.5 ml of 1% methylene blue in the same spaces left breast. Results. In the right breast biopsy techniques using 99mTc SLN and blue dye are in agreement. Of the 23 SLN studied, only one was not flushed nor uptake. The patent blue was effective in 100% when compared with the two methods together. The left breast of 23 SLN studied, only two non-stained and one was not uptake, this difference was not statistically significant. The SLN biopsy technique using methylene blue appeared with a 91.3% effectiveness when used alone and 100% when associated with 99mTc. Conclusion: The use of methylene blue associated with the radiotracer technique can be considered as potential research intraoperative SLN of breast, suggesting a less costly and less allergenic effects that blue patent. / Objectives. To develop an experimental model for identification of sentinel lymph node (SLN) of breast bitch with the use of methylene blue and compares it with the patent blue, both associated with technetium. Methods. 23 dogs, there was the marking of the SLN of the first upper pair of breasts to inject 0.2 ml of Tc-99m phytate bound to (99m) and 0.5 ml of patent blue Guerbet V 2,5 % in subpapilar spaces right breast and 0.2 ml of 99mTc and 0.5 ml of 1% methylene blue in the same spaces left breast. Results. In the right breast biopsy techniques using 99mTc SLN and blue dye are in agreement. Of the 23 SLN studied, only one was not flushed nor uptake. The patent blue was effective in 100% when compared with the two methods together. The left breast of 23 SLN studied, only two non-stained and one was not uptake, this difference was not statistically significant. The SLN biopsy technique using methylene blue appeared with a 91.3% effectiveness when used alone and 100% when associated with 99mTc. Conclusion: The use of methylene blue associated with the radiotracer technique can be considered as potential research intraoperative SLN of breast, suggesting a less costly and less allergenic effects that blue patent.

Apesar do grande desenvolvimento das biotecnologias da reprodução animal, como a produção in vitro de embriões (PIV), o diagnóstico genético pré-implantacional (PGD) ainda é aplicado com restrição na rotina da transferência de embriões em animais. Os recentes avanços da genômica têm permitido associar características fenotípicas com informações moleculares, possibilitando a realização da seleção assistida por marcadores moleculares. O objetivo do presente estudo foi de realizar o PGD de embriões bovinos em plataforma de alta densidade de SNP (BeadChip/6.909 SNP). A pequena quantidade de DNA genômico (gDNA) obtida na biópsia embrionária é a principal limitação para a análise de grande número de SNP. Dessa forma, a metodologia de amplificação total do genoma (WGA) (Repli-g Mini Kit, Qiagen, Hilden, Alemanha) foi utilizada para aumentar a quantidade de gDNA da biópsia e permitir a análise de milhares de SNP simultaneamente. Foram utilizados 88 embriões bovinos PIV, submetidos à micromanipulação pela técnica de microaspiração, possibilitando a formação de 3 grupos com diferentes números de células biopsiadas: G1) 5-10 (n=28); G2) 10-20 (n=37); G3) >100 - blastocisto eclodido (n=23). Todas as amostras foram submetidas ao mesmo protocolo de WGA e 4&micro;L de cada amostra foram utilizados para a genotipagem em plataforma iScan/Illumina. A qualidade dos genótipos foi avaliada pela análise do Call Rate (CR), 10o percentil do GCScore (GC10), Alelle Drop In (ADI) e Alelle Drop Out (ADO). O teste de Kruskal-Wallis foi utilizado para investigar diferenças na distribuição das variáveis entre os grupos. O coeficiente de correlação de postos de Spearman revelou correlação significativa entre todas as variáveis. Os resultados apresentaram correlação positiva entre o CR e GC10 (0,99/P<0,001), enquanto as taxas de ADI e ADO apresentaram correlação negativa com o CR e CG10 (ADI/CR: - 0,87; ADI/GC10:-0,88; ADO/CR:-0,87; ADO/GC10:-0,86), com P<0,001 para todas as variáveis. O teste de Kruskal-Wallis apontou para diferença significativa em todas as variáveis analisadas (CR, GC10, ADI e ADO) entre os 3 grupos de biópsias (G1, G2 e G3). O CR médio foi de 59,26%, 78,47% e 95,97%, para G1, G2 e G3, respectivamente. Foi desenvolvido programa computacional (mendelFix) baseado na Lei da Segregação, para inferência dos genótipos não determinados baseado no genótipo do progenitores, aumentando o CR dos grupos 1, 2 e 3 para 79,69%, 88,20% e 97,28%, respectivamente. Os resultados do presente estudo permitem concluir que é possível realizar a genotipagem de embriões bovinos em plataforma de alta densidade de SNP com amostras submetidas ao protocolo WGA/MDA, mas o número de células obtidas na biópsia embrionária afeta a qualidade da genotipagem. A associação das biotecnologias descritas no presente trabalho permite a aplicação da seleção assistida por marcadores moleculares em embriões bovinos, contribuindo para acelerar ainda mais o processo de melhoramento genético animal. / Despite the great development of animal reproduction biotechnology, such as embryo in vitro production (IVP), preimplantation genetic diagnosis (PGD) is still applied with restraint in animals embryo transfer. Recent advances in genomics have associated phenotypic characteristics with molecular information, allowing the development of marker assisted selection. The aim of this study was to perform PGD in bovine embryos using high-throughput SNP platform (BeadChip/6,909 SNP). The small amount of genomic DNA (gDNA) obtained from embryo biopsy is the main limitation for the high-density SNP analysis. Thus, the Whole Genome Amplification (WGA) (Repli-g Mini Kit, Qiagen, Hilden, Germany) was used to increase the amount of gDNA from embryo biopsy and allow the analysis of thousands SNP simultaneously. Eighty-eight IVP bovine embryos were subjected to micromanipulation by microaspiration, allowing the formation of three groups with different numbers of biopsied cells: G1) 5-10 (n=28); G2) 10-20 (n=37); G3) > 100 - hatched blastocyst (n = 23). All samples were subjected to the same WGA protocol, and 4&micro;L of each sample were used for genotyping on iScan/Illumina platform. The genotyping quality was assessed using the Call Rate (CR), 10th percentile GCScore (GC10), Alelle Drop In (ADI) and Alelle Drop Out (ADO). Kruskal-Wallis test was applied to investigate differences in the distribution of variables among groups. Spearman`s rank correlation coefficient revealed a significant correlation between all variables. The results showed a positive correlation between CR and GC10 (0.99/P <0.001), while ADI and ADO rates were negatively correlated with CR and CG10 (ADI/CR: -0.87; ADI/GC10: - 0.88; ADO/CR: -0.87; ADO/GC10: -0.86), P<0.001 for all variables. Kruskal Wallis pointed to significant differences in all variables (CR, GC10, ADO and ADI) among the 3 groups of biopsies (G1, G2 and G3). The CR average was 59.26%, 78.47% and 95.97% for G1, G2 and G3, respectively. Was developed a script (mendellFix) based on the \"Law of Segregation\", for inference of not determined genotypes based on the parents genotypes, thus increasing the CR of group 1, 2 and 3 to 79.69%, 88.20% and 97 28%, respectively. The results of this study show that it is possible to perform the genotyping of bovine embryos in highthroughput SNP platform with samples subjected to WGA/MDA protocol, but the number of cells obtained by embryo biopsy affects the quality of genotyping. The association of biotechnologies described in this work allows the application of marker-assisted selection in bovine embryo, contributing to further accelerate the process of animal breeding.

O câncer da tireoide é a neoplasia endócrina mais comum, sendo responsável por cerca de 1 a 2% das neoplasias malignas da tireoide. Atualmente, a patogênese molecular do carcinoma papilífero da tireoide (CPT) tem sido relacionada à ativação aberrante da via de sinalização MAPK, desencadeada por mutações em diversos oncogenes. Destas, a mutação p.V600E do gene BRAF é a mais freqüente, sendo observada em 30%-80% dos casos. Numerosos estudos têm demonstrado que a presença dessa mutação está relacionada a uma maior agressividade do tumor e, conseqüentemente, a um prognóstico menos favorável, tornando-a um marcado importante no CPT. Contudo, poucos métodos utilizados na análise do gene BRAF em amostras de punção de nódulos tireoidianos foram satisfatórios em relação ao custo-tempo e sensibilidade do teste. Os objetivos deste estudo foram padronizar a extração de DNA a partir de amostras obtidas de PAAF guiada por ultrassom de nódulos tireoidianos; validar e determinar a eficiência e a relação custo-tempo da técnica de genotipagem por PCR em tempo real na detecção da mutação p.V600E do gene BRAF em amostras de PAAF de nódulos tireoidianos; analisar a prevalência da mutação p.V600E em pacientes com CPT; correlacionar à presença da mutação p.V600E com características clínicas e histopatológicas de maior agressividade e por fim analisar a sensibilidade, especificidade e acurácia do diagnóstico citológico em conjunto com a análise molecular da mutação p.V600E em material de PAAF. Nossa casuística foi composta por 224 pacientes, todos submetidos à tireoidectomia, cuja citologia pré-operatória foi indeterminada (Bethesda classes III a V) ou Bethesda VI (carcinoma papilífero). Foram avaliados dados clínicos e hormonais (TSH) e autoimunidade (anti-TPO e anti-TG), além das características ultrassonográficas (tamanho, estrutura, ecogenicidade, presença de microcalcificação e halo e vascularização). Os dados histológicos avaliados foram tamanho do tumor, variante histológica, invasão de cápsula, invasão vascular e linfática, extensão extratireoidiana, multicentricidade e presença de acometimento ganglionar à cirurgia. Os pacientes foram divididos em grupo benigno (n:122) e maligno (n:102), de acordo com o diagnóstico histológico final. O grupo maligno apresentou uma média de idade menor que o grupo benigno (48,9 vs 54,2 anos; p=0,008). Não observamos diferença entre os grupos com relação à dosagem sérica de TSH (p=0,467), anti-TPO (p=0,535) e anti-TG (p=0,730). Analisando as características ultrassonográficas, o tamanho e o volume dos nódulos foram maiores no grupo benigno (3,0 vs 2,6 cm e 12,38 vs 14,5 cm3; p=0,008 e p<0,001, respectivamente). Os nódulos que apresentaram hipoecogenicidade, assim como os nódulos de composição sólida, a presença de microcalcificações, ausência de halo hipoecogênico e presença de vascularização central apresentaram estatisticamente maior freqüência de malignidade. Em modelo de regressão logística, maior idade, nódulo sólido, sem halo hipoecogênico e com microcalcificações foram variáveis que influenciaram conjuntamente na presença de malignidade. No diagnóstico citológico 78,6% (176/224) dos nódulos avaliados foram classe III, IV e V, sendo que destes 35,8% (63/176) apresentaram diagnóstico histológico final maligno. Identificamos a mutação p.V600E no material de PAAF em 67,7% (69/102) dos pacientes do grupo maligno, estando presente em 70,3% (45/64) dos carcinomas papiliferos variante clássica e em 69,7% (23/33) dos carcinomas papilíferos variante folicular, sendo todos os achados confirmados em 100% das amostras através seqüenciamento automático do material obtido do tecido nodular a fresco ou parafinado dos pacientes. Nos pacientes com diagnóstico histológico de CPT (n:98), comparamos os pacientes com e sem a mutação p.V600E com relação aos dados clínicos, histológicos de pior prognóstico, presença de metástase linfonodal, classificação TNM e estádio de acordo com AJCC. Apenas a presença de idade mais avançada apresentou associação estatisticamente significativa com a presença da mutação p.V600E (p=0,041). Comparamos o diagnóstico citológico baseado na classificação de Bethesda e a análise da mutação p.V600E com o diagnóstico histológico considerado o padrão ouro para o diagnóstico de CPT. A sensibilidade, especificidade, acurácia, valor preditivo positivo e negativo do diagnóstico citológico foi de 67,4%, 94,4%, 79,8%, 93,3% e 71,2% respectivamente. Análise da mutação p.V600E isoladamente apresentou resultados similares ao do diagnóstico citológico, porém observamos que a combinação do diagnóstico citológico com análise da mutação melhorou significativamente todos os parâmetros analisados. A presença da mutação p.V600E em nossa casuística, não mostrou ser um fator isolado associado à pior prognóstico de CPT. Um maior número de pacientes e acompanhamento a longo prazo, somando-se cuidadosa avaliação clínica-morfológica com a detecção de mutação p.V600E e utilizando análises multivariadas, são necessários para esclarecer o significado prognóstico independente desta mutação. Estudos semelhantes também são necessários para encontrar uma maneira de combinar as características clínicas e ultrassonográficas, com a detecção da mutação p.V600E no material da PAAF para decidir a melhor abordagem cirúrgica / Thyroid cancer is the most common endocrine malignancy, accounting for 1- 2% of thyroid malignancies. Currently, the molecular pathogenesis of papillary thyroid carcinoma (PTC) has been linked to aberrant activation of the MAPK signaling pathway, triggered by mutations in several oncogenes. Of these, the p.V600E mutation of BRAF gene is the most frequent, being observed in 30%-80% of cases. Several studies have shown that the presence of this mutation is associated with an increased aggressiveness of the tumor and, consequently, a less favorable prognosis, making it an important set PTC. However, few methods used for analyzing samples from fine needle aspiration (FNA) of thyroid nodules were satisfactory regarding cost, time and sensitivity. The objectives of this study were to standardize the DNA extraction from samples obtained from ultrasound (US)-guided FNA of thyroid nodules; validate and determine the efficiency and cost-time of real-time PCR genotyping technique to detect p.V600E mutation from samples of FNA of thyroid nodules, to assess the prevalence of the mutation p.V600E mutation in patients with PTC, correlate the presence of the p.V600E mutation with clinical and histopathological features of higher aggressiveness and finally analyze the sensitivity, specificity and accuracy of cytological diagnosis in conjunction with molecular analysis of the p.V600E mutation in FNA material. Our series consisted of 224 patients, all underwent thyroidectomy, whose preoperative cytology was indeterminate (Bethesda classes III to V) or Bethesda VI (papillary carcinoma). We evaluated clinical data and hormone (TSH) and autoimmunity (anti-TPO and anti-TG), and the sonographic features (size, structure, echogenicity, presence of microcalcifications and halo and vasculature). The histological data were tumor size, histological variant, capsule invasion, lymphatic and vascular invasion, extrathyroidal extension, multicentricity and presence of malignant lymph nodes at surgery. Results: The patients were divided into benign (n:122) and malignant group (n:102), according to the final histological diagnosis. Malignant group had a mean age lower than the benign group (48.9 vs 54.2 years, p=0.008). There were no differences between groups regarding serum TSH (p=0.467), anti-TPO (p=0.535) and anti-TG (p=0.730). According to US characteristics, size and volume of the nodules were higher in the benign group (3.0 vs 2.6 cm and 12.38 cm 3 vs 14.5, p=0.008 and p<0.001, respectively). The nodules that showed hypoechogenicity, as well as the composition of solid nodules, the presence of microcalcifications, absence of hypoechoic halo and presence of central vascularization showed statistically higher frequency of malignancy. In the logistic regression model, older age, solid nodule without hypoechoic halo and microcalcifications were variables that influenced jointly in the presence of malignancy. In cytological diagnosis 78.6% (176/224) of nodules were evaluated as class III, IV and V, and of these 35.8% (63/176) had final histological diagnosis of malignant. The p.V600E mutation were identified in FNA material in 67.7% (69/102) of patients in malignant group, present in 70.3% (45/64) of papillary carcinoma classic variant and 69.7% (23/33) of follicular variant of papillary carcinoma, and all findings are confirmed in 100% of the samples through sequencing of the material obtained from the surgical tumor (fresh or paraffin). In patients with confirmed PTC (n:98), we compared patients with and without the mutation p.V600E according to clinical, histological poor prognosis, lymph node metastasis, and TNM stage according to AJCC. Only the presence of older age were significantly associated with the presence of the mutation p.V600E (p=0.041). We compared the cytological diagnosis based on the Bethesda classification and mutation analysis with the histological diagnosis p.V600E, the \"gold standard\" for diagnosis of PTC. Sensitivity, specificity, accuracy, positive and negative predictive value of cytological diagnosis was 67.4%, 94.4%, 79.8%, 93.3% and 71.2% respectively. Analysis of p.V600E mutation alone showed similar results to the cytological diagnosis, but we observed that the combination of cytological diagnosis with mutation analysis significantly improved all parameters analyzed. The presence of the mutation p.V600E in our series was not a single factor associated with worse prognosis of PTC. A larger number of patients and long term follow-up, adding to careful clinicalmorphological with p.V600E and mutation detection using multivariate analyzes are needed to clarify the independent prognostic significance of this mutation. Similar studies are also needed to find a combination among clinical and US, with p.V600E mutation detection in FNA material to decide the best surgical approach

Made available in DSpace on 2016-08-19T18:16:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Janeide.pdf: 1805392 bytes, checksum: 2720a3f24598c01180f7c7259186c12d (MD5) Previous issue date: 2012-07-31 / Introduction: Prevalence of glomerulopathies in a Teaching Hospital. Epidemiologic data on renal diseases based on populations are limited. A better view around the clinically significant glomerulonephritis can be acquired from diagnosis by renal biopsy. Objectives: To determine the prevalence of glomerulopathies, classify them according to the classification of the World Health Organization. Methods: Transversal descriptive study, based on medical records of biopsied patients as well as on their histopathological technical opinions of 409 renal biopsies, executed between january of 1999 and december of 2010 in Presidente Dutra School Medicine Hospital s Nephrology Service of the Universidade Federal do Maranhão (UFMA) Results: The most common glomerulopathy, both in adults and in patients under 20 years old, was segmental glomerulosclerosis and focal glomerulosclerosis (22%) and nephrotic syndrome was found as the most common glomerular syndrome at the moment of diagnosis, in patients of all ages. Most of the diagnoses occurred in patients between ages of 20 to 39 years old, corresponding to 42,05% of all biopsies, a number that decreases as patients are nearer to the extremities of life. There was a balance between sex distributions, but with a remarkable predominance of the female sex in lupus nephritis (88,60 %). Conclusion: The epidemiologic profile of glomerulopathies in a School Hospital in Maranhão resembled the ones found in national level. These data supply important bases to future studies on glomerulopathies in Maranhão. / Introdução: Prevalência das glomerulopatias em um Hospital Universitário. Dados epidemiológicos sobre as doenças renais com bases populacionais são limitados. Uma melhor percepção acerca do espectro das glomerulonefrites clinicamente significantes pode ser obtido através do diagnóstico por biópsia renal. Objetivos: Determinar a prevalência das glomerulopatias e classificá-las de acordo com Organização Mundial de saúde. Métodos: Estudo descritivo e transversal, com base nas informações dos prontuários dos pacientes biopsiados e dos respectivos laudos histopatológicos de 409 biópsias renais, realizadas entre janeiro de 1999 e dezembro de 2010 no Serviço de Nefrologia do Hospital Universitário da Universidade Federal do Maranhão (UFMA). Resultados: A glomerulopatia mais comum tanto em adultos quanto em menores de 20 anos foi a glomeruloesclerose segmentar e focal (22%) e a síndrome nefrótica apresentou-se como a síndrome glomerular mais comum no momento do diagnóstico, em todas as faixas etárias. A maior prevalência de diagnósticos ocorreu na faixa etária de 20 a 39 anos, correspondendo a 42,05% da biópsias, valor que decresce à medida que se aproxima dos extremos de vida. Houve um equilíbrio entre a distribuição por sexo, com predomínio do sexo feminino na nefrite lúpica (88,60%). Conclusão: O perfil epidemiológico das glomerulopatias em um Hospital Universitário no estado do Maranhão assemelhou-se aos demais achados nacionais. Esses dados fornecem bases importantes para futuros estudos sobre glomerulopatias no Maranhão.

Objetivo: avaliar a concordância da expressão imuno-histoquímica (IMH) da proteína p53 (p53) na amostra endometrial e na peça cirúrgica de histerectomia, associando-a a fatores como tipo histológico, grau tumoral e estadiamento, bem como analisar a concordância interobservador para expressão e intensidade de expressão da p53 entre biópsia diagnóstica e peça cirúrgica. Métodos: estudo transversal retrospectivo, no qual foram incluídas pacientes com carcinoma endometrial submetidas à biópsia de endométrio e tratamento cirúrgico primário na Unidade de Oncologia Genital do HCPA. As lâminas foram lidas por dois patologistas. O percentual de expressão da p53 foi avaliado em três categorias (<10%, 10-50% e >50%). A intensidade foi avaliada como fraca, média ou forte. Foram extraídos dados do prontuário eletrônico das pacientes. A concordância foi avaliada através do coeficiente Kappa ponderado. Resultados: 72 pacientes foram incluídas, com idade média de 65,5 anos. O percentual de expressão da p53 entre biópsia e peça cirúrgica apresentou uma taxa de concordância de 70,8%, com um índice de Kappa ponderado de 0,64 e a intensidade de expressão apresentou uma taxa de concordância de 69,4%, com Kappa ponderado de 0,65. A avaliação da concordância do percentual de expressão da p53 conforme tipo histológico e grau tumoral apresentou coeficientes de Kappa ponderado de 0,64 e 0,72, nos carcinomas não endometrioides e G3, respectivamente. Tais dados, com diferença estatística significativa. A concordância interobservador para a expressão e intensidade da p53 na biópsia apresentou índices de Kappa 9 ponderado de 0,77 e 0,75, respectivamente. Na peça cirúrgica, os índices de kappa ponderado foram de 0,85 e 0,88, para a expressão e intensidade, respectivamente. Conclusões: as taxas de concordância para a expressão e intensidade de expressão IMH da p53 entre biópsia endometrial e peça cirúrgica foram boas, podendo ser útil em tempo pré-operatório, para a seleção de pacientes candidatas a uma cirurgia mais extensa, principalmente quando os dados anatomopatológicos da biópsia forem insuficientes para tal decisão. Devemos, no entanto, levar em consideração que existem muitos outros marcadores moleculares para a neoplasia endometrial, sendo provável futuramente o estudo da concordância deles em associação ao da p53. / Objective: To evaluate the agreement of the immunohistochemical (IMH) expression of the p53 protein (p53) in preoperative endometrial tissues and in surgical specimens obtained during hysterectomy, to determine the association of this agreement with factors such as histological type, tumor grade and stage and to evaluate interobserver agreement for the expression and intensity of p53 between the diagnostic biopsy and the surgical specimen. Methods: Retrospective cross-sectional study. Patients with endometrial carcinoma who submitted to endometrial biopsy and primary surgical treatment at the HCPA Genital Oncology Unit were included. The slides were assessed by two pathologists. The percentage of p53 expression was evaluated and categorized into one of three groups (<10%, 10-50% and >50%). The intensity was evaluated as weak, medium or strong. The agreement was assessed by the weighted Kappa coefficient. Results: 72 patients with a mean age of 65.5 years were included. The percentage of p53 expression between the biopsy and the surgical specimen presented an agreement rate of 70.8%, with a weighted Kappa index of 0.64. The intensity of expression had an agreement rate of 69.4% with a weighted Kappa of 0.65. When evaluated according to histological type and tumor grade, the agreement for p53 expression showed weighted Kappa indexes of 0.64 and 0.72 in non-endometrioid and G3 carcinomas, respectively (p<0.001). With respect to the biopsy, the interobserver agreement for the expression and intensity of p53 had weighted Kappa indexes of 0.77 and 0.75, respectively. With respect to the surgical specimen, the weighted Kappa indexes were 0.85 and 0.88 for expression and intensity, respectively. 11 Conclusions: This study found good agreement rates for the expression and intensity of p53 IMH expression between the endometrial biopsy specimen and the surgical specimen, which may be useful in a preoperative setting for the selection of patients who are candidates for more extensive surgery, especially when anatomopathological biopsy data are insufficient for such a decision.

There is an urgent and unmet clinical need to improve accuracy and safety during needle-based interventional procedures including regional anaesthesia and cancer biopsy. In ultrasound guided percutaneous needle procedures, there is a universal problem of imaging the needle, particularly the tip, especially in dense tissues and steep insertion angles. Poor visualization of the needle tip can have serious consequences for the patients including nerve damage and internal bleeding in regional anaesthesia and, in the case of biopsy, mis-sampling, resulting in misdiagnosis or the need for repeat biopsy. The aim of the work was to design and develop an ergonomic ultrasound device to actuate standard, unmodified needles such that the visibility of needle can be enhanced when observed under colour Doppler mode of ultrasound imaging. This will make the needle procedures efficient through accurate needle placement while reducing the overall procedure duration. The research reported in this thesis provides an insight into the new breed of piezoelectric materials. A methodology is proposed and implemented to characterize the new piezocrystals under ambient and extreme practical conditions. For the first time, the IEEE standard method (1987) was applied to an investigation of this type with binary (PMN-PT) and ternary (PIN-PMN-PT) compositions of piezocrystals. Using the existing data and the data obtained through characterization, finite element analysis (FEA) were carried to adequately design the ultrasound device. Various configurations of the device were modelled and fabricated, using both piezoceramic and piezocrystal materials, in order to assess the dependency of device’s performance on the configuration and type of piezoelectric material used. In order to prove the design concept and to measure the benefits of the device, pre-clinical trials were carried out on a range of specimens including the soft embalmed Thiel cadavers. Furthermore, an ultrasound planar cutting tool with various configurations was also designed and developed as an alternative to the existing cumbersome ultrasonic scalpels. These configurations were based on new piezocrystals including the Mn-doped ternary (Mn:PIN-PMN-PT) material. It is concluded that the needle actuating device can significantly enhance the visibility of standard needles and additionally benefits in reducing the penetration force. However, in order to make it clinically viable, further work is required to make it compliant with the medical environment. The piezocrystals tested under practical conditions although offer extraordinary piezoelectric properties, are vulnerable to extreme temperature and drive conditions. However, it is observed that newer piezocrystals, especially Mn:PIN-PMN-PT have shown the potential to replace the conventional piezoceramics in high power and actuator applications. Moreover, the d31-mode based planar cutting tool contrasts with the cumbersome design of mass-spring transducer structure and has the potential to be used in surgical procedures.

O objetivo do trabalho foi avaliar o uso de minerais orgânicos na alimentação de potros, avaliando a deposição óssea de Cálcio e Fósforo, através de biopsia e densitometria óssea, além das medidas de crescimento, de altura da cernelha e da garupa, perímetro torácico, joelho, canela e ganho de peso. Foram utilizados dez potros com idade entre 10 e 13 meses e peso aproximado de 221 kg, distribuídos aleatoriamente em dois tratamentos: dieta formulada com minerais orgânicos e dieta formulada com minerais inorgânicos, com cinco repetições por tratamento. A dieta foi composta de 40% de volumoso, feno de gramínea e 60% de concentrado, a qual foi adicionada 3% da mistura mineral orgânico ou inorgânico. Não foi observada diferença entre os tratamentos em relação ao consumo da deita, medidas de crescimento, e deposição óssea de cálcio e fósforo. No entanto, a deposição óssea dos animais do tratamento orgânico foram maiores quando comparada com as médias do tratamento inorgânico. Entretanto para a variável densitometria, a deposição óssea dos potros alimentados com fonte orgânica foi maior aos 90 dias, quando comparado com todos os animais do tratamento com fonte inorgânica. Os animais do tratamento orgânico apresentaram melhor ganho de peso médio e diário em relação aos animais que receberam mineral inorgânico. / The aim of this study was to evaluate the effects of mineral organic in the diet of foals, evaluating the bone mineral deposit of calcium and phosphorus, throughout biopsy and bone mineral density, measures of growing was also did measuring height withers and croup, thoracic circumference, knee, cannon and weight gain. Ten foals which approximated 10 and 13 months and almost 221 Kg weight each one were spread randomly into two treatments: diet with organic mineral and diet with inorganic mineral both with five repetitions for treatments. The diet were composed by 40% of roughage and 60% for concentrate, with was addition 3% of mixed mineral organic or inorganic. It was not detected any for consumption of diet, either for measures of growing and bone mineral concentration of calcium and phosphorus. Nevertheless, the average bone mineral concentration for organic treatment was better than mineral inorganic supplementation. However, the concentration in bone mineral was greater for organic treatment which was better for bone mineral density and weight. The bone deposition was better in 90 days of treatment. Therefore, the diet with organic mineral for foals probably better for bone mineral density and weight gain.

O câncer da tireoide é a neoplasia endócrina mais comum, sendo responsável por cerca de 1 a 2% das neoplasias malignas da tireoide. Atualmente, a patogênese molecular do carcinoma papilífero da tireoide (CPT) tem sido relacionada à ativação aberrante da via de sinalização MAPK, desencadeada por mutações em diversos oncogenes. Destas, a mutação p.V600E do gene BRAF é a mais freqüente, sendo observada em 30%-80% dos casos. Numerosos estudos têm demonstrado que a presença dessa mutação está relacionada a uma maior agressividade do tumor e, conseqüentemente, a um prognóstico menos favorável, tornando-a um marcado importante no CPT. Contudo, poucos métodos utilizados na análise do gene BRAF em amostras de punção de nódulos tireoidianos foram satisfatórios em relação ao custo-tempo e sensibilidade do teste. Os objetivos deste estudo foram padronizar a extração de DNA a partir de amostras obtidas de PAAF guiada por ultrassom de nódulos tireoidianos; validar e determinar a eficiência e a relação custo-tempo da técnica de genotipagem por PCR em tempo real na detecção da mutação p.V600E do gene BRAF em amostras de PAAF de nódulos tireoidianos; analisar a prevalência da mutação p.V600E em pacientes com CPT; correlacionar à presença da mutação p.V600E com características clínicas e histopatológicas de maior agressividade e por fim analisar a sensibilidade, especificidade e acurácia do diagnóstico citológico em conjunto com a análise molecular da mutação p.V600E em material de PAAF. Nossa casuística foi composta por 224 pacientes, todos submetidos à tireoidectomia, cuja citologia pré-operatória foi indeterminada (Bethesda classes III a V) ou Bethesda VI (carcinoma papilífero). Foram avaliados dados clínicos e hormonais (TSH) e autoimunidade (anti-TPO e anti-TG), além das características ultrassonográficas (tamanho, estrutura, ecogenicidade, presença de microcalcificação e halo e vascularização). Os dados histológicos avaliados foram tamanho do tumor, variante histológica, invasão de cápsula, invasão vascular e linfática, extensão extratireoidiana, multicentricidade e presença de acometimento ganglionar à cirurgia. Os pacientes foram divididos em grupo benigno (n:122) e maligno (n:102), de acordo com o diagnóstico histológico final. O grupo maligno apresentou uma média de idade menor que o grupo benigno (48,9 vs 54,2 anos; p=0,008). Não observamos diferença entre os grupos com relação à dosagem sérica de TSH (p=0,467), anti-TPO (p=0,535) e anti-TG (p=0,730). Analisando as características ultrassonográficas, o tamanho e o volume dos nódulos foram maiores no grupo benigno (3,0 vs 2,6 cm e 12,38 vs 14,5 cm3; p=0,008 e p<0,001, respectivamente). Os nódulos que apresentaram hipoecogenicidade, assim como os nódulos de composição sólida, a presença de microcalcificações, ausência de halo hipoecogênico e presença de vascularização central apresentaram estatisticamente maior freqüência de malignidade. Em modelo de regressão logística, maior idade, nódulo sólido, sem halo hipoecogênico e com microcalcificações foram variáveis que influenciaram conjuntamente na presença de malignidade. No diagnóstico citológico 78,6% (176/224) dos nódulos avaliados foram classe III, IV e V, sendo que destes 35,8% (63/176) apresentaram diagnóstico histológico final maligno. Identificamos a mutação p.V600E no material de PAAF em 67,7% (69/102) dos pacientes do grupo maligno, estando presente em 70,3% (45/64) dos carcinomas papiliferos variante clássica e em 69,7% (23/33) dos carcinomas papilíferos variante folicular, sendo todos os achados confirmados em 100% das amostras através seqüenciamento automático do material obtido do tecido nodular a fresco ou parafinado dos pacientes. Nos pacientes com diagnóstico histológico de CPT (n:98), comparamos os pacientes com e sem a mutação p.V600E com relação aos dados clínicos, histológicos de pior prognóstico, presença de metástase linfonodal, classificação TNM e estádio de acordo com AJCC. Apenas a presença de idade mais avançada apresentou associação estatisticamente significativa com a presença da mutação p.V600E (p=0,041). Comparamos o diagnóstico citológico baseado na classificação de Bethesda e a análise da mutação p.V600E com o diagnóstico histológico considerado o padrão ouro para o diagnóstico de CPT. A sensibilidade, especificidade, acurácia, valor preditivo positivo e negativo do diagnóstico citológico foi de 67,4%, 94,4%, 79,8%, 93,3% e 71,2% respectivamente. Análise da mutação p.V600E isoladamente apresentou resultados similares ao do diagnóstico citológico, porém observamos que a combinação do diagnóstico citológico com análise da mutação melhorou significativamente todos os parâmetros analisados. A presença da mutação p.V600E em nossa casuística, não mostrou ser um fator isolado associado à pior prognóstico de CPT. Um maior número de pacientes e acompanhamento a longo prazo, somando-se cuidadosa avaliação clínica-morfológica com a detecção de mutação p.V600E e utilizando análises multivariadas, são necessários para esclarecer o significado prognóstico independente desta mutação. Estudos semelhantes também são necessários para encontrar uma maneira de combinar as características clínicas e ultrassonográficas, com a detecção da mutação p.V600E no material da PAAF para decidir a melhor abordagem cirúrgica / Thyroid cancer is the most common endocrine malignancy, accounting for 1- 2% of thyroid malignancies. Currently, the molecular pathogenesis of papillary thyroid carcinoma (PTC) has been linked to aberrant activation of the MAPK signaling pathway, triggered by mutations in several oncogenes. Of these, the p.V600E mutation of BRAF gene is the most frequent, being observed in 30%-80% of cases. Several studies have shown that the presence of this mutation is associated with an increased aggressiveness of the tumor and, consequently, a less favorable prognosis, making it an important set PTC. However, few methods used for analyzing samples from fine needle aspiration (FNA) of thyroid nodules were satisfactory regarding cost, time and sensitivity. The objectives of this study were to standardize the DNA extraction from samples obtained from ultrasound (US)-guided FNA of thyroid nodules; validate and determine the efficiency and cost-time of real-time PCR genotyping technique to detect p.V600E mutation from samples of FNA of thyroid nodules, to assess the prevalence of the mutation p.V600E mutation in patients with PTC, correlate the presence of the p.V600E mutation with clinical and histopathological features of higher aggressiveness and finally analyze the sensitivity, specificity and accuracy of cytological diagnosis in conjunction with molecular analysis of the p.V600E mutation in FNA material. Our series consisted of 224 patients, all underwent thyroidectomy, whose preoperative cytology was indeterminate (Bethesda classes III to V) or Bethesda VI (papillary carcinoma). We evaluated clinical data and hormone (TSH) and autoimmunity (anti-TPO and anti-TG), and the sonographic features (size, structure, echogenicity, presence of microcalcifications and halo and vasculature). The histological data were tumor size, histological variant, capsule invasion, lymphatic and vascular invasion, extrathyroidal extension, multicentricity and presence of malignant lymph nodes at surgery. Results: The patients were divided into benign (n:122) and malignant group (n:102), according to the final histological diagnosis. Malignant group had a mean age lower than the benign group (48.9 vs 54.2 years, p=0.008). There were no differences between groups regarding serum TSH (p=0.467), anti-TPO (p=0.535) and anti-TG (p=0.730). According to US characteristics, size and volume of the nodules were higher in the benign group (3.0 vs 2.6 cm and 12.38 cm 3 vs 14.5, p=0.008 and p<0.001, respectively). The nodules that showed hypoechogenicity, as well as the composition of solid nodules, the presence of microcalcifications, absence of hypoechoic halo and presence of central vascularization showed statistically higher frequency of malignancy. In the logistic regression model, older age, solid nodule without hypoechoic halo and microcalcifications were variables that influenced jointly in the presence of malignancy. In cytological diagnosis 78.6% (176/224) of nodules were evaluated as class III, IV and V, and of these 35.8% (63/176) had final histological diagnosis of malignant. The p.V600E mutation were identified in FNA material in 67.7% (69/102) of patients in malignant group, present in 70.3% (45/64) of papillary carcinoma classic variant and 69.7% (23/33) of follicular variant of papillary carcinoma, and all findings are confirmed in 100% of the samples through sequencing of the material obtained from the surgical tumor (fresh or paraffin). In patients with confirmed PTC (n:98), we compared patients with and without the mutation p.V600E according to clinical, histological poor prognosis, lymph node metastasis, and TNM stage according to AJCC. Only the presence of older age were significantly associated with the presence of the mutation p.V600E (p=0.041). We compared the cytological diagnosis based on the Bethesda classification and mutation analysis with the histological diagnosis p.V600E, the \"gold standard\" for diagnosis of PTC. Sensitivity, specificity, accuracy, positive and negative predictive value of cytological diagnosis was 67.4%, 94.4%, 79.8%, 93.3% and 71.2% respectively. Analysis of p.V600E mutation alone showed similar results to the cytological diagnosis, but we observed that the combination of cytological diagnosis with mutation analysis significantly improved all parameters analyzed. The presence of the mutation p.V600E in our series was not a single factor associated with worse prognosis of PTC. A larger number of patients and long term follow-up, adding to careful clinicalmorphological with p.V600E and mutation detection using multivariate analyzes are needed to clarify the independent prognostic significance of this mutation. Similar studies are also needed to find a combination among clinical and US, with p.V600E mutation detection in FNA material to decide the best surgical approach

Orientador: Márjorie de Assis Golim / Resumo: O vírus da hepatite C (VHC) é responsável por causar hepatite C nas formas aguda ou crônica, sendo a fibrose hepática uma possível consequência da evolução da lesão. Na avaliação da fibrose o método considerado padrão ouro é a biópsia hepática. Com a necessidade de se desenvolver metodologias alternativas à biópsia hepática, escores utilizando biomarcadores séricos têm sido validados, de modo que possam servir para o acompanhamento de indivíduos infectados pelo vírus da hepatite C. Realizou-se estudo retrospectivo, incluindo 94 pacientes portadores crônicos do VHC, genótipo 1, pré-tratamento (naive) ou retratados. Os pacientes foram separados em grupos conforme os resultados da classificação METAVIR dos graus de fibrose (F0 à F4), seja por biópsia hepática ou por elastografia hepática por quantificação de ponto. Além disso, os pacientes foram classificados em grupos de fibrose leve G1 (F1-F2) e fibrose avançada G2 (F3-F4). Metodologias não-invasivas como FIB-4 e APRI foram comparadas ao método denominado FibMaster desenvolvido neste estudo através de análises multivariadas e aprendizado de máquina para elaborar um modelo preditivo de fibrose hepática baseado em variáveis sanguíneas possivelmente associadas ao dano hepático. Os parâmetros estatisticamente mais significantes foram alfa-fetoproteína (AFP), apresentando AUROC de 0.890 para a classificação de fibrose F3-F4 e 0.772 para classificação dos grupos G1-G2, ureia com AUROC de 0.723 para fibrose F2-F3, FIB-4 (AUROC de 0.8... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hepatitis C virus (HCV) is responsible for causing both acute hepatitis C and chronic form, where the last is commonly associated with liver fibrosis. The evaluation of fibrosis is currently performed mainly through liver biopsy, which is the methodology considered as gold standard in the classification of fibrosis stages. With the necessity of developing new alternative methodologies to hepatic biopsy, scores using serum biomarkers have been validated, thus they can be used to monitor infected individuals with the hepatitis C virus. A retrospective study was carried out including 94 chronic HCV, genotype 1, pre-treatment (naive) or retreated patients. Patients were separated into groups according to the METAVIR classification of degrees of fibrosis (F0 to F4), either by hepatic biopsy or point shear wave-elastography exam. Moreover, patients were classified into groups of mild fibrosis G1 (F1-F2) and advanced fibrosis G2 (F3- F4). Non-invasive methodologies such as FIB-4 and APRI were compared to the method named FibMaster, which was proposed in this study through multivariate analyzes and machine learning, in order to elaborate a predictive model for hepatic fibrosis based on blood biomarkers possibly associated with hepatic injury. The most statistically significant parameters were alpha-fetoprotein (AFP), presenting AUROC of 0.890 for fibrosis classification F3-F4 and 0.772 for the classification of groups G1- G2, urea with an AUROC of 0.723 for fibrosis F2-F3, FIB-4 (AUR... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre