Ce travail de thèse s'est axé autour de deux approches technologiques issues du domaine de la microfabrication pour la sélection et la capture de biomarqueurs circulants dans le sang. A l'échelle moléculaire, un module d'assemblage capillaire dirigé a été implémenté dans un automate de tamponnage moléculaire puis validé en utilisant un modèle simple, permettant l'isolement et l'étirement de biomolécules individuelles de manière entièrement contrôlée et automatisée à large échelle. Nous avons ensuite appliqué cette technologie à des biomarqueurs moléculaires d'intérêt tels que les ADN libres contenus dans du sang complet, démontrant la capacité de la technique à isoler des acides nucléiques dans un fluide complexe contenant de nombreux éléments cellulaires . A l'échelle cellulaire, une approche innovante pour la sélection et la capture de Cellules Tumorales Circulantes a été développée. Le microdispositif mis au point est fabriqué par écriture laser à 3 dimensions et permet le piégeage physique de ces cellules dans du sang complet non traité tout en les préservant pour une récupération et analyse ultérieure. Après adaptation du microdispositif pour maximiser son efficacité de capture in vitro, une première preuve de concept de capture sélective de cellules cancéreuses dans du sang complet non traité a été réalisée. U n premier prototype pour une utilisation in vivo a été mi s au point et validé in vitro sur la capture de cellules cancéreuses dans du milieu de culture. / This research project focused on two technological approaches emerging from microfabrication for the selection and capture of circulating biomarkers from blood. At the molecular scale, this work was based on the automation of a directed capillary assembly protocol. A dedicated module was implemented into an automate for molecular stampin g and validated using a simple molecular model, allowing the elongation and large-scale assembly of single biomolecules in a controlled and automatized manner. The developed technology was then used for the assembly of relevant molecular biomarkers such as cell -free DNA (cf DNA) from untreated whole blood , evidencing the capabilities of this technology to single out nucleic acids from complex fluids composed of other cellular elements. At the cellular scale, an innovative concept for Circulating Tumor Cell s (CTCs) selection and capture was developed . The developed microdevice is fabricated using 30 direct laser writing and allows for a physical capture of cell s from untreated whole blood while preserving them for further recovery and analysis. After having optimized the design in vitro to maximize the capture efficiency of the system, a selective capture of cancer cell s from untreated whole blood was achieved . A first prototype for the in vivo use of this system was also developed and validated in vitro with cancer cells spiked into culture medium.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DANIEL STROZZI.pdf: 3087099 bytes, checksum: 5e79518ff3a3226059b67489c81cecaf (MD5) Previous issue date: 2015-09-02 / Esophageal eosinophilia is a chronic inflammatory condition, present in both children and adults. Patients with symptoms of gastroesophageal diseases such as eosinophilic esophagitis, eosinophilic esophagitis responsive to proton pump inhibitors and gastroesophageal reflux disease are commonly diagnosed with esophageal eosinophilia. However, in Brazil, there is a lack of information on the frequency of this condition. Therefore, the objective of this study was to determine the frequency of esophageal eosinophilia in pediatric patients (0- 15 years) with symptoms of gastroesophageal diseases, in a tertiary care service in the central region of Brazil. The medical report of 2,425 patients that underwent gastroesophageal endoscopy with biopsy were analyzed. Esophageal eosinophilia was diagnosed in patients with ≥15 eosinophils per high powered field (400x). Subsequently, the frequency of esophageal eosinophilia was calculated, and compared with the variables sex, age and the endoscopic diagnostic. Finally, the frequency of esophageal eosinophilia was correlated with the fluctuations of monthly temperature over the diagnosis year. The frequency of esophageal eosinophilia was estimated at 5.2% (126 patients from 2,425 had ≥15 eosinophils per high powered field in esophageal biopsy). Furthermore, there was a significant difference between the male and female patients, where the percentage of male patients with esophageal eosinophilia was 2.5 times higher than the percentage of female patients (71.4 and 28.6% respectively). There was also a significant difference between the endoscopic diagnostics of patients with esophageal eosinophilia, where 73% had erosive esophagitis, 21.4% had nonerosive esophagitis and only 5.6% of the patients had a normal esophagus diagnostic. From these patients, the male patients had a higher percentage of erosive and non-erosive esophagitis than the female patients, while there was no sex difference for patients with a normal esophagus. The classification and regression tree (CART) analysis determined the endoscopic diagnostic as the most important independent variable (100%), followed by the sex (65%) and age (27.3%) of the patients with esophageal eosinophilia. Moreover, the CART analysis showed an interaction between all the independent variables. The majority of patients diagnosed with esophageal eosinophilia were older (7-15 years of age) males patients with erosive esophagitis, while the younger (0-6 years of age) female patients with non-erosive esophagitis or normal esophagus showed the lowest percentage of diagnosed cases. Furthermore, there was a moderate inverse relationship between the number of esophageal eosinophilia cases and the average monthly temperature in 2012 (Person s correlation R2 = - 0.6), with a slight increase of esophageal eosinophilia in the colder months of the year. In conclusion, this study shows, for the first time, that esophageal eosinophilia is relatively frequent in pediatric patients with symptoms of gastroesophageal diseases in the central region of Brazil. This study also confirms that for a reliable diagnosis of esophageal eosinophilia is necessary to consider the clinical signs and the histological analysis of esophageal biopsies. / A eosinofilia esofágica é uma condição inflamatória crônica do esôfago, presente tanto em crianças como adultos. Esta condição é encontrada em pacientes com sintomas de doenças gastroesofágicas, como a esofagite eosinofílica, a esofagite eosinofílica responsiva à inibidores de bomba de prótons e a doença do refluxo gastroesofágico. No entanto, a frequência desta condição em pacientes pediátricos no Brasil não é conhecida. Assim, o objetivo deste estudo foi de determinar a frequência da eosinofilia esofágica em pacientes pediátricos (0 15 anos) com sintomas de doenças gastroesofágicas, em um serviço terciário na região central do Brasil. Foram examinados os prontuários de 2.425 pacientes submetidos à endoscopia digestiva alta com biópsia. Para o diagnóstico da eosinofilia esofágica as biópsias foram histologicamente avaliadas para determinar o número de eosinófilos por campo de grande aumento (400 x). Subsequentemente, a frequência da eosinofilia esofágica foi calculada. A frequência foi então comparada com as variáveis sexo e idade e os diagnósticos endoscópicos encontrados. Finalmente, os casos de eosinofilia esofágica foram correlacionados à variação de temperatura nos meses do ano em que os pacientes foram diagnosticados. A prevalência da eosinofilia esofágica foi estimada em 5,2% (126 do total de 2.425 pacientes apresentaram ≥15 eosinófilos por campo de grande aumento na biópsia esofágica). A porcentagem de pacientes do sexo masculino diagnosticados foi 2,5 vezes maior do que o percentual de pacientes do sexo feminino (71,4 e 28,6%, respectivamente). No entanto, a idade dos pacientes não foi um fator significativo analisado isoladamente. Foi observada uma diferença significativa entre os diagnósticos endoscópicos dos pacientes com eosinofilia esofágica, onde 73% apresentaram esofagite erosiva, 21,4% apresentaram esofagite não-erosiva e apenas 5,6% apresentaram um esôfago normal. Além disso, entre os pacientes com esofagite erosiva e não-erosiva eram predominantemente do sexo masculino. Não houve diferenças entre o sexo dos pacientes com o esôfago normal. A análise CART (classification and regression trees) demonstrou que o diagnóstico endoscópico foi a variável independente mais importante (100%), seguido pelo sexo (65%) e idade (27,3%) dos pacientes com esofagite eosinofílica. A análise CART mostrou também que a maioria dos pacientes diagnosticados apresentavam esofagite erosiva, eram do sexo masculino com idade acima de 7 anos. Em contraste, os pacientes mais jovens (0-6 anos de idade), do sexo feminino com esofagite não-erosiva ou esôfago normal apresentaram o menor percentual de eosinofilia esofágica. A correlação dos casos de eosinofilia esofágica com a média de temperatura mensal foi moderada e inversamente proporcional (Pearson s correlation R2 = - 0.6) pois, em temperaturas mais baixas houve um aumento moderado de casos de eosinofilia esofágica. Concluindo, este estudo relata, pela primeira vez, que eosinofilia esofágica é uma condição relativamente frequente em pacientes pediátricos na região central do Brasil que apresentaram sintomas associados a doenças gastroesofágicas. Este estudo também confirma que o diagnóstico preciso da eosinofilia esofágica requer tanto a avaliação dos sinais clínicos quanto a análise histológica das biópsias para determinar o número de eosinófilos na mucosa esofágica.

A resposta imune desencadeada em pacientes com leishmaniose tegumentar Americana (LTA) é predominantemente celular. Assim, o estudo dos mecanismos imunológicos responsáveis pela formação, progressão e cura desta infecção é de grande importância, considerando a deformação que ela pode causar em indivíduos infectados. Este estudo investigou a expressão de mRNA de IFN-?, IL-10, IL-27, TNF-?, TGF-? e IL-6 em 40 biopsias de parafina (FFPE) fixadas em formalina de pacientes com diagnóstico clínico e laboratorial para LTA. Um grupo de 10 biópsias FFPE coletadas de pacientes com diagnóstico clínico de leishmaniose mucosa (LM) foi utilizado para o controle da evolução da infecção. Inicialmente, foi padronizado a extração de RNA, a síntese de cDNA e a escolha do gene endógeno em 9 biopsias frescas e 8 FFPE. Após essas padronizações, as moléculas de RNA de fragmentos de biopsias parafinadas, foram extraídas com kit específico, tratadas com DNase, quantificadas por fluorimetria e sintetizadas para cDNA. A expressão relativa de cada citocina foi determinada (em duplicata) por PCR em tempo real. As reações foram normalizadas frente ao padrão de expressão do gene endógeno GAPDH, que foi previamente padronizado. O padrão de expressão de cada gene alvo foram determinados segundo a fórmula do \"CT comparativo\" (2-??CT), na qual calcula-se quantas vezes mais ocorre a expressão do gene alvo em relação a indivíduos normais. Também incluído nesse estudo 5 amostras de biopsia de pele de indivíduos normais (grupo IV). Os resultados foram expressos em média de quantificação relativa, a análise estatística foi realizada utilizando foi determinada por Teste t não pareado e teste F para comparação de variâncias, onde três grupos de pacientes foram formados. Grupo I, 35 pacientes com LTA, cuja expressão relativa de IFN-? foi inferior a 100. Grupo II, 5 pacientes com LTA cuja expressão relativa de IFN-? foi superior a 100. Grupo III, 10 pacientes com leishmaniose mucosa. Os níveis de expressão para IFN-? foram 33,34; 214,1 e 129,6 vezes maiores para os Grupos I, II e III, respectivamente do que as amostras do controle normal. Para o TNF-? foram 11,22; 2,37 e 4,59 vezes superiores ao normal nos Grupos I, II e III, respectivamente. Para IL-10 foram 5,14; 11,54 e 2,51 vezes superiores aos valores normais nos Grupos I, II e III, respectivamente. Para IL-27 foram 15,81; 85,29 e 17,29 vezes superiores ao normal nos Grupos I, II e III, respectivamente. Para o TGF-? foram 5,38; 4,33 e 4,72 vezes superiores ao normal nos Grupos I, II e III, respectivamente. Para a IL-6 foram 5,92; 5,69 e 2,09 vezes superiores aos valores normais nos Grupos I, II e III, respectivamente. Estes resultados foram semelhantes a resultados de estudos que analisam a expressão de citocinas já sintetizadas. No geral, os resultados de expressão gênica das citocinas estudadas sugerem que a exacerbação da resposta imune do perfil Th1 (IFN-?) poderia levar ao surgimento de lesões mais graves nos pacientes dos Grupos II e III. Os níveis elevados de mRNA de IL-10, observado nos pacientes do Grupo II podem promover baixa ativação macrofágica, colaborando com a replicação do parasita e assim culminar com a progressão da doença. A expressão de mRNA de IL-27 não interferiu na expressão de mRNA de IFN-? nas células dos pacientes com leishmaiose tegumentar ou leishmaniose mucocutânea. Em conclusão, estes resultados podem sugerir que os pacientes do Grupo II podem desenvolver formas mais graves de LTA quando comparados aos do Grupo I. / The immune response triggered in patients with American cutaneous leishmaniasis (ACL) is predominantly cellular. Thus, the study of the immunological mechanisms responsible for the formation, progression and cure of this infection is of great importance, considering the deformation that it can cause in infected individuals. This study investigated the expression of IFN-?, IL-10, IL-27, TNF-?, TGF-? and IL-6 mRNA in 40 formalin-fixed paraffin-embedded paraffin biopsies (FFPE) from patients with clinical and laboratory diagnosis for LTA. A group of 10 FFPE biopsies collected from patients with clinical diagnosis of mucosal leishmaniasis (MCL) was used to control the evolution of the infection. Initially, RNA extraction, cDNA synthesis and the choice of the endogenous gene were standardized in 9 fresh biopsies and 8 FFPE. After these standardizations, the RNA molecules of fragments of paraffin-shaped biopsies were extracted with a specific kit, treated with DNase, quantified by fluorimetry and synthesized for cDNA. The relative expression of each cytokine was determined (in duplicate) by real-time PCR. Reactions were normalized against the expression pattern of the endogenous GAPDH gene, which was previously standardized. The expression pattern results for each target gene were determined by the \"comparative CT\" (2-??CT) formula, in which it is calculated how many times more the expression of the target gene occurs in relation to normal individuals. Also included in this study 5 skin biopsy samples from normal subjects (group IV). The results were expressed as mean relative quantification, statistical analysis was performed using was determined by unpaired t test and F test for comparison of variances, where three groups of patients were formed. Group I, 35 patients with ACL, whose relative expression of IFN-? was less than 100. Group II, 5 patients with ACL whose relative expression of IFN-? was greater than 100. Group III, 10 patients with mucosal leishmaniasis. The expression levels for IFN-? were 33,34; 214,1 and 129,6 times higher for Groups I, II and III, respectively than the samples from the normal control. For TNF-? were 11,22; 2,37 and 4,59 times higher than normal in Groups I, II and III, respectively. For IL-10 were 5,14; 11,54 and 2,51 times higher than the normal values in Groups I, II and III, respectively. For IL-27, 15,81; 85,29 and 17,29 times higher than normal in Groups I, II and III, respectively. For TGF-? were 5,38; 4,33 and 4,72 times higher than normal in Groups I, II and III, respectively. For IL-6 were 5,92; 5,69 and 2,09 times higher than the normal values in Groups I, II and III, respectively. These results were similar to the results of studies that analyze the expression of cytokines already synthesized. In general, the gene expression results of the cytokines studied suggest that the exacerbation of the Th1 profile (IFN-?) immune response could lead to more serious lesions in patients in Groups II and III. Elevated levels of IL-10 mRNA observed in Group II patients may promote low macrophage activation, assisting in the replication of the parasite and thus culminating in the progression of the disease. Expression of IL-27 mRNA did not interfere in the expression of IFN-? mRNA in the cells of patients with tegumentary leishmaiosis or mucocutaneous leishmaniasis. In conclusion, these results may suggest that patients in Group II may develop more severe forms of ACL when compared to those in Group I.

Santana, ANC. Estudo da trombose microvascular em biópsias pulmonares de pacientes com Granulomatose de Wegener. [tese]. São Paulo: Faculdade de Medicina, Universidade de São Paulo; 2008. A granulomatose de Wegener (GW) é associada com eventos trombo-embólicos. Neste trabalho, quantificamos os trombos em artérias pulmonares de pequeno/médio calibre de pacientes com GW (n:24), comparando com um grupo Controle normal (n:16). O resultado mostrou que a área total das artérias no grupo GW foi similar a do grupo Controle. Já a área do trombo foi significativamente maior no grupo GW em relação ao Controle. Em contrapartida, a área livre do lúmen do vaso foi significativamente menor no grupo GW em comparação ao Controle. Concluindo, este estudo demonstra uma obstrução da microcirculação pulmonar na GW, sugerindo um papel da trombose in situ na fisiopatologia desta doença / Wegeners granulomatosis (GW) is associated with thromboembolic events. In this work, we quantified the thrombus in small/medium-sized pulmonary arteries of patients with GW (n:24) compared to normal controls (n:16). The results showed that the GW and control arteries were similar regarding total area. The thrombus area was significantly increased in GW compared to controls; in contrast, the free lumen area was significantly decreased in GW compared to controls. In summary, this study shows obstruction of microvascular bed in GW, suggesting a possible role of thrombosis in situ in pathophysiology of this vasculitis

As doenças benignas da mama respondem pela maior parte dos diagnósticos em patologia mamária, por esse motivo têm se tornado um problema crescente na prática clínica pela limitação diagnóstica atual em identificar o subgrupo de lesões com maior potencial de risco par neoplasia invasora. O estudo das lesões proliferativas com marcadores prognósticos do câncer de mama mostrou que o estrogênio exerce papel importante na transformação dessas lesões, através do seu receptor nuclear, induzindo a transcrição de genes, mas também pelo receptor de membrana citoplasmática, estimulando a proliferação celular através da ativação das proteína-quinases ativadas por mitógenos. Trabalhos experimentais com culturas de células de diferentes linhagens, incluindo células mamárias, identificaram a proteína S100P, uma proteína ligante de cálcio, como participante da transformação neoplásica maligna e diferenciação celular. No presente trabalho, estudamos a expressão da S100P, do receptor de estrogênio e avaliamos a proliferação celular de 155 pacientes submetidas à biópsia mamária por agulha grossa assistida a vácuo, guiada por estereotaxia, população que corresponde à rotina diagnóstica em patologia mamária. Comprovamos a associação do receptor de estrogênio com as lesões pré-malígnas, classificadas segundo seu potencial de risco para neoplasia invasora, principalmente em mulheres abaixo dos 50 anos. Demonstramos haver forte associação entre a S100P e o receptor de estrogênio na distinção do potencial de risco das lesões histológicas, confirmando o papel importante da S100P no processo de transformação maligna. Observamos que a ausência da proteína torna praticamente nula a possibilidade de progressão tumoral, e mais ainda que sua ação depende também do receptor de estrogênio / The benign breast diseases represent the major diagnose in breast pathology, so they have became an increasing problem concerning the clinical practice for limited capability diagnosis to identify a subgroup in this category with greater risk to evolve to invasive breast cancer. Studies with proliferative breast lesions and prognostic markers of breast cancer have shown that estrogen plays an important roll in malignant transforming process through its nuclear receptor which activates the transcriptional process. Moreover, the surface estrogen receptor stimulates the cell proliferation as a result of activation of mitogen-activated protein-kinases cascade. In vitro experiments with differents cell lines, including breast cell ones, have identified a protein, called S100P, a calcium-binding protein, as participating of the malignant transforming process and cell differentiation. In the present work, we studied the immunoexpression expression of S100P, estrogen receptor and evaluated the cell proliferation of 155 patients submitted to vacuum assisted core biopsy with stereotactic guidance of breast, a population that corresponds to the routine diagnose in breast pathology. We have proved the association between estrogen receptor and premalignant lesions, stratified by the relative risk for developing invasive breast cancer, mainly among women under the 50 years. We also have demonstrated a strong association of S100P and estrogen receptor concerning the distinctive relative risk of breast histologic lesions; bring up the important contribution of S100P in the carcinogenetic process. Meanwhile, the presence of S100P rises up the transforming possibility. We finally have found that the action of S100P depends on the estrogen receptor status

Introdução: A história natural da insuficiência mitral associa-se a décadas de remodelação ventricular esquerda com fibrose intersticial. A fronteira entre o processo adaptativo e a miocardiopatia dilatada demanda avaliação clínico-histológica. Atualmente, sabe-se que o melhor método empregado para quantificar as alterações decorrentes do remodelamento que acomete o ventrículo esquerdo é a biópsia miocárdica, que analisa a doença, somente após a cirurgia ou no post mortem. O presente estudo visa avaliar a fibrose miocárdica associada à insuficiência mitral crônica, através de estudo pela Ressonância Magnética, de maneira não invasiva, precoce e rápida. Objetivos: Avaliar a capacidade e a aplicabilidade da ressonância magnética cardíaca de detectar a fibrose miocárdica na insuficiência mitral crônica importante, tendo como referência a biópsia miocárdica. Métodos: Foram selecionados 52 pacientes portadores de IM crônica pura ou associada a estenose mitral leve, com PVM e DR, e com indicação cirúrgica. Todos os pacientes foram reavaliados pelo EcoDopplercardiograma e realizaram ressonância magnética cardíaca para avaliação da função ventricular, volumes e índice de massa ventricular esquerda, através da cine-ressonância e pela técnica do realce tardio miocárdico, com injeção de 0,2 mmol/kg de contraste gadolínio para a detecção de FM, sendo submetidos a cirurgia de plástica ou troca de válvula mitral com bióspsias miocárdicas, retiradas de locais padrão, na parede lateral do ventrículo esquerdo. Todas foram coradas pela técnica do hematoxilinaeosina, e as positivas para FM, confirmadas pelo corante picrossirius, que cora colágeno, e quantificadas pelo aparelho do quantimet. Resultados: Os pacientes foram divididos em quatro grupos, conforme a RM e a biópsia. A RM diagnosticou FM em 18 pacientes, concordantes com a BM (RMC/BM +). A RM foi negativa para FM em 33 pacientes, sendo 28 concordantes com a BM (RMC/BM -). Observou-se discordância de RM com a BM, em 7 casos falsos negativos (RMC-/BM +). A sensibilidade da RMC à fibrose foi de 72%, especificidade de 100%, e acurácia de 86,3%. Nos grupos distintos estudados, a sensibilidade, especificidade e acurácia foram de 64,7%, 100% e 82,4%, respectivamente, na PVM, e de 97,5%, 100% e 92,9%, respectivamente, na DR. O índice Kappa foi de 0,724 (p<0,001) para o grupo total; 0,665 (p<0,001) para PVM e 0,857(p<0,001) na DR. VDF, VSF e IMVE tiveram correlação positiva e significativa com a porcentagem de fibrose, sendo que, quanto maiores esses valores, maior a porcentagem de fibrose. Conclusão: RMC teve boa concordância com a BM, em relação aos achados de FM / Introduction: The natural history of mitral insufficiency (MI) is associated to decades of left ventricular remodelation with intersticial fibrosis. The frontier between adaptative process and dilatade miocardiopaty needs clinic and histologic evaluation. Now a days , we know that the best method to quantify the alterations of remodelation in left ventricule is myocardial biopsies which analyses the illness only after surgery or post morten. This actual study aims to evaluate myocardial fibrosis associated with cronic MI, through the study with magnetic resonance (MR), in a not invasive, early and quickly way. Objectives: Evaluate capacity and applicability of the magnetic resonance in detection of myocardial fibrosis in chronic important mitral insufficiency in reference with myocardial biopsis. Methods: It was selected 52 patients with pure chronic MI or associated with mild mitral stenosis, with cirurgical indication. All of the patients were reevaluated by EcoDopplercardiogram and it was done cardiac MR to evaluate ventricular function, volumes and left ventricular mass rate through MR cine and myocardial late realce techinique with 0,2 mmol/Kg with gadoline contrast and myocardial fibrosis (MF) detection and being undergone plastic or mitral valvular changes surgery with myocardial biopsis (MB) were taken from the left ventricular lateral wall. All of them were colored with hematoxilin eosine and the positives were confirmated with picrossirius and quantified with quantimet device. Results: Patients were divided in four groups according to MR and biopsies. MR diagnosticated MF in 18 patients agreed with MB (MR / MB +). MR was negative for MF in 33 patients where 28 agreed with MB (MR / MB -). We observated discordance with MR and MB in 7 cases false negatives (MR- /MB+). The sensibility of MR to fibrosis was 72%, specificity was 100% and acurace was 86,3%. In the distinct groups studied, we see sensibility, specifity and acure were 64,7%, 100 % and 82,4% respectivity in PVM and 97,5%, 100% and 92,9% respectivity in reumathic disease. The Kappa indice is 0,714 (p<0,001) for the total group; 0,665 (p<0,001) for PMV and 0,857 (p<0,001) in RD. There is a positive correlation and significative between fibroses percentage with VDF, VSF, IMVE of the MR. So the higher the values, higher the fibrosis percentage. Conclusion: MR had a good concordance with MB in relation to found the MF in IMC

Introdução: o status dos linfonodos axilares permanece um dos mais importantes fatores prognósticos no carcinoma de mama em estágios iniciais, além de definir o uso de terapias complementares. A biópsia de linfonodo sentinela (BLNS) surgiu com a finalidade de estadiar a axila com o mínimo de morbidade, tendo como objetivo a identificação e o estudo patológico do primeiro linfonodo axilar proveniente da drenagem linfática da mama. Pacientes com axila clinicamente negativa têm indicação de biópsia de linfonodo sentinela como método de estadiamento da axila, e quando o resultado era positivo para metástase recomendava-se o esvaziamento axilar. Por recomendação do ACOSOG Z0011, o esvaziamento axilar (EA) após uma biópsia de linfonodo sentinela positivo não é necessário. Esse estudo demonstrou não haver benefício em realizar o EA na presença de LNS positivo na sobrevida global ou na sobrevida livre de doença. Objetivos: Avaliar a taxa de recidiva e morte em pacientes submetidas à cirurgia conservadora de mama e BLNS positiva com posterior esvaziamento axilar no Hospital de Clínicas de Porto Alegre; e, como objetivo secundário, avaliar as características clínicas e patológicas dessa população. Método: foi realizado um estudo de coorte retrospectiva, incluindo pacientes com diagnóstico de carcinoma de mama invasor submetidas à cirurgia conservadora da mama e BLNS, cujo resultado foi positivo para presença de metástases, e foram submetidas ao EA o período de janeiro de 2004 a dezembro de 2008. Resultados: foram incluídas 144 pacientes submetidas à biópsia de linfonodo sentinela e CCM; 33 tiveram o achado de biópsia de linfonodo sentinela positivo para metástase, e dessas 33 pacientes restaram 27 para análise dos dados. A taxa de sucesso na identificação do LNS foi de 0,96. A idade média das pacientes foi de 53,8 anos, o número de LNS ressecados foi de 1,6 por paciente; a média do tamanho tumoral foi de 2,3 cm. Seis pacientes apresentaram doença axilar residual correspondendo a 22,2% da amostra e tiveram um risco relativo de morte de 3 vezes mais para aquelas sem doença axilar residual e 50% a mais de desenvolvimento de metástases. Conclusão: O comprometimento axilar é importante fator no prognóstico das pacientes com câncer de mama, quanto maior o comprometimento da axilar pior será o desfecho de sobrevida livre de doença e de morte. Acreditamos que se pode aplicar a conduta do ACOSOG Z0011 também nas pacientes do HCPA devido à alta sensibilidade do método no nosso meio. / Introduction: The status of axillary lymph nodes remains one of the most important prognostic factors in breast carcinoma in the early stages, in addition it helps to defining the use of complementary therapies. Sentinel lymph node biopsy (SLNB) was developed with the purpose of staging the axilla with minimal morbidity, aiming at the identification and pathological study of the first axillary lymph node from the lymphatic drainage of the breast. Patients with clinically negative lymph node have indication of SLNB as a method of axillary staging, and with a positive finde for metastasis the axilar clereance was performed. Nowadays, due to the ACOSOG Z0011 Study, the axillary dissection (AD) after a positive SLNB for metastasis was put in check. This estudy have as a result no difference in global survive ou disease free survive if ALND was not performed in a positive SLNB. In the present study, we intend to evaluate the clinical and histopathological characteristics of patients submitted to breast conservative surgery and sentinel lymph node biopsy with a positive result for metastasis. Main objective: Evaluate the rate of recurrence and death in patients submitted to conservative breast surgery and BLNS with posterior axillary emptying at Hospital de Clínicas, Porto Alegre. It is a secondary objective to evaluate the clinical and pathological characteristics of this population. Material and Methods: A retrospective cohort study was performed, including 144 patients diagnosed with invasive breast carcinoma submitted to conservative breast surgery and SLNB, whose results were positive for metastases, and were submitted to AD, at the Mastology Unit of the Hospital de Clinicas de Porto Alegre (HCPA), from January 2004 to December 2008. Results: Of 144 patients submitted to SLNB and BCS, 33 had SLNB positive for metastasis, of these 33 patients remained 27 for data analysis. The success rate in LNS identification was 0.96. The mean age of the patients was 53.8 years, the number of resected SLN was 1.6 per patient; The mean tumor size was 2.3 cm. Six patients had residual axillary disease corresponding to 22.2% of the sample and had a relative risk of death of 3 times more for those without residual axillary disease and 50% more for the development of metastases. Conclusion: Axillary involvement is an important factor in the prognosis of patients with breast cancer, and the greater the axillary impairment, the worse the diseasefree survival outcome and death. We believe that the ACOSOG Z0011 trial can also be applied to HCPA patients who meet the inclusion criteria for this purpose, due to the high sensitivity of the method in our environment.

Dermatomiosite é doença idiopática inflamatória crônica que afeta musculatura estriada, pele e outros órgãos. Este trabalho tem o objetivo de caracterizar os pacientes com a doença encontrados no HC-FMUSP no período de janeiro de 1992 a dezembro de 2002, avaliando a classificação, as manifestações cutâneas e sistêmicas, achados laboratoriais, terapêuticos e evolutivos em relação à literatura. Este estudo foi baseado nos dados obtidos dos prontuários de 109 pacientes com critérios diagnósticos definidos por Bohan e Peter e modificados por Drake. Os pacientes foram divididos em cinco grupos: 23 dermatomiosites juvenis, 59 dermatomiosites primárias idiopáticas, 6 dermatomiosites amiopáticas, 7 dermatomiosites associada a neoplasias e 14 dermatomiosites associadas a outras doenças do tecido conectivo. Sessenta pacientes foram caracterizados como diagnóstico definido, 33 como possíveis, 4 como prováveis e 12 como amiopáticos. A maior representação foi do sexo feminino (85/109) e a idade média do diagnóstico da doença foi de 36 anos. Manifestações cutâneas foram observadas em todos os pacientes; em relação às alterações sistêmicas a manifestação muscular mais freqüente foi a perda de força proximal (88%); manifestação pulmonar mais comum foi a pneumopatia intersticial (16,5%) e a manifestação digestiva mais observada foi a gastrite (20,2%). Documentaram-se neoplasias durante o seguimento da doença em 6,42% dos casos, sendo mais freqüente nos pacientes acima de 60 anos (71,4%).A enzima muscular alterada na maioria dos casos foi a desidrogenase lática (78,6%). Realizou-se biópsia cutânea em 68 pacientes com alterações compatíveis ao exame anatomopatológico em 78% dos casos. Dentre os casos, 53 pacientes se submeteram à biópsia muscular e 96% deles apresentaram miosite ao exame anatomopatológico. Das 58 eletroneuromiografias efetuadas, mostrou-se padrão miopático compatível com a enfermidade em 81% dos casos. A terapia mais utilizada foram os esteróides e a mortalidade foi de 14,7%, sendo as causas de óbito mais freqüentes a neoplasia maligna, septisemia e infecção pulmonar. / Dermatomyositis is a chronic idiopathic inflammatory disorder which affects the striated skeletal muscles, the skin, and other organs. This present study aims at characterizing the patients who have been affected by this disease and were under treatment at HCFMUSP from January, 1992 to December, 2002 Its classification, the cutaneous and systemical manifestations, as well as laboratorial, therapeutical and evolutive findings were checked out in accordance with the literature. The base for this study was the data obtained from the analysis of 109 patients´records who met not only Bohan\'s and Peter\'s criteria for dermatomyositis diagnosis but also the ones modified by Drake. The patients were divided into five groups: 23 juvenile dermatomyositis, 59 idiopatic primary dermatomyositis, 6 amyopatic dermatomyositis, 7 dermatomyositis associated to malignancy and 14 dermatomyositis associated to connective tissue disorder Sixty of these patients were classified as definite diagnostic, 33 as possible, 4 as probable and 12 as amyopathic. Most patients were female (85/109) and the average age for the diagnosis of the illness was 36. Skin manifestations were observed in all patients, while regarding the systemical alterations, the most frequent was the loss of proximal strength (88%). As the lung manifestation, the most common was an interstitial pneumopathy (16,5%) and as the digestive manifestation, the one which was more commonly observed was gastritis (20,2%). Neoplasies were documented after the following up of the disease in 6,42% of the cases, which was more frequent in patients over 60 years of age (71,4%). The muscle enzyme modified in the majority of the cases was the lactic dehydrogenize (78,6%). Skin biopsy procedure was carried out in 68 patients who showed compatible changes to anatomo-pathological exam in 78% of the cases; 53 patients went under muscular biopsy and 96 % of them proved to have myositis after anatomo-pathological exams. From the fifty-eight electroneuromiographies that were carried out, 81% of the cases showed to have compatible myopathic patterns. Steroidal drugs were the most common therapy used. The mortality rate was 14,7% and the most usual causes of death were malignant neoplasm, sepsis and pulmonary infection.

INTRODUÇÃO: A utilização da ultra-sonografia (USG) como método de diagnóstico por imagem na avaliação das afecções abdominais, em particular para o acompanhamento de pacientes portadores de hepatite C crônica, vem sendo rotineiramente empregada. Neste trabalho, avaliamos a contribuição da USG na avaliação das alterações histopatológicas encontradas neste grupo de doentes, com ênfase para a esteatose hepática (EH), afecção bastante freqüente na hepatite causada pelo vírus C. MÉTODO: Comparamos os achados ultra-sonográficos de 192 pacientes consecutivos, portadores de hepatite crônica pelo vírus C, submetidos à biópsia hepática, com os achados histopatológicos dos fragmentos hepáticos obtidos. Todos os pacientes foram biopsiados sob orientação USG, sendo a ultra-sonografia assim como a biópsia hepática realizadas cada qual por um médico especialista e sempre o mesmo. Todos os exames ultra-sonográficos obedeceram a um mesmo protocolo, sendo analisados os seguintes parâmetros ultra-sonográficos: 1) com relação às características ecográficas do parênquima: ecogenicidade, ecotextura e atenuação; 2) com relação à utilização da USG para o diagnóstico da EH: biometria da parede abdominal, dimensões e contornos hepáticos. Posteriormente os pacientes estudados foram agrupados em: A) grupo com alterações ultra-sonográficas e B) sem alterações ultra-sonográficas, e comparados com as alterações histopatológicas presentes. Foram realizados também cálculos de regressão logística com os parâmetros USG avaliados para a avaliação da acurácia deste método de imagem para o diagnóstico da EH. RESULTADOS: Entre as alterações histopatológicas presentes, a alteração arquitetural e a EH apresentaram diferença estatística significante entre os grupos A (com alterações USG) e B (sem alterações USG). Observou-se também diferença estatística significante entre: a) espessura da parede abdominal e as dimensões hepáticas com relação à presença de EH, b) contornos hepáticos irregulares e a presença de EH. E dentre os componentes ultra-sonográficos avaliados, a atenuação foi o que apresentou melhor correlação com a EH. A utilização das variáveis idade, sexo, atenuação, espessura da parede abdominal e dimensões hepáticas, foram as que apresentaram melhores resultados nos cálculos de regressão logística, com sensibilidade de 60,5% e especificidade de 83,9% em diagnosticar EH. CONCLUSÕES: Neste trabalho, o estudo ultra-sonográfico do fígado de pacientes com hepatite C crônica apresentou correlação com as alterações arquiteturais e com a EH encontradas na histopatologia. A utilização da USG para o diagnóstico da EH apresentou relação estatística com a espessura da parede abdominal, dimensões e contornos hepáticos, e a atenuação foi o melhor componente ultra-sonográfico para o diagnóstico da EH. / INTRODUCTION: Ultrasonography is consistently utilized as the method of diagnostic imaging while evaluating abdominal infections particularly in patients with chronic hepatitis C. We studied the contribution of the ultrasonography in the evaluation of histopathologic alterations in this group of patients with emphasis in hepatic steatosis (HS), sufficiently frequent in hepatitis caused by the C virus. METHODS: We compared the findings from the ultrasounds of 192 carrying patients of chronic hepatitis C virus, who had undergone hepatic biopsy, with the histopathogical findings of the hepatic fragments obtained. All patients who have undergone liver biopsy guided by ultrasonography were always evaluated by the same medical specialist for both sonogram or hepatic biopsy. All ultrasound examinations followed the same protocol, analyzing the following parameters: 1) regarding to the echographic characteristics of parenchyma: echogenicity, echotexture and attenuation; 2) regarding to the use of the sonography for the diagnosis of the HS: biometry of the abdominal wall, hepatic dimensions and contours. Post results, patients had been grouped in: A) altered ultrasound group and B) ultrasound group without ultrasound alterations, both compared with present histopathological alterations. Calculations of logistic regression with ultrasonography parameters had also been performed to determine the accuracy of this method for the HS diagnosis. RESULTS: Of the histopathological alterations present, the architectural alteration and the HS had presented significant statistical difference between the groups (altered ultrasound group) and the B (without ultrasound alterations). We also noted significant statistical difference between: a) thickness of the abdominal wall and the hepatic dimensions with regard to presence of HS, b) irregular hepatic contours and the presence of HS. Amongst the evaluated ultrasound components, attenuation presented better correlation with the HS. The variables age, sex, attenuation, thickness of the abdominal wall and hepatic dimensions of the right lobe, presented better results in the calculations of logistic regression, with 60,5% sensitivity and specificity of 83,9% in diagnosing HS. CONCLUSIONS: In this research, the hepatic ultrasonography of patients with chronic hepatitis C presented correlation with the architectural alterations and the HS found at the histopathology. The utilization of the ultrasonography for the diagnosis of the HS presented statistical relationship with the thickness of the abdominal wall, hepatic dimensions and contours, and the sonographic attenuation was the best component for the diagnosis of ES.

INTRODUÇÃO: Pacientes com coinfecção HIV e hepatite C, em geral, apresentam rápida progressão da fibrose hepática. No entanto, a maior parte dos estudos, que avaliam essa questão, caracteriza a progressão da fibrose de forma indireta, utilizando para isso uma única biópsia hepática e tendo como base de cálculo o tempo estimado de infecção pelo vírus da hepatite C. OBJETIVO: Os objetivos do presente trabalho são: 1-Estimar a taxa de progressão da fibrose hepática de forma direta, através da análise de biópsias pareadas em pacientes coinfectados HIVhepatite C, não submetidos a tratamento prévio para hepatite C; 2- Avaliar a possível associação dessa progressão a determinadas variáveis clínicas. MÉTODOS: Trinta pacientes coinfectados com HIV e hepatite C, sem antecedente de tratamento prévio da hepatite C, submetidos a duas biópsias hepáticas pareadas foram avaliados. Calculou-se a taxa de progressão de fibrose direta e foram feitas determinações de progressão, estabilização e regressão da fibrose. Procedeu-se então à análise estatística, testando-se a associação entre progressão de fibrose e algumas variáveis clínicas e demográficas. RESULTADOS: A taxa de progressão média foi de 0,13 UF/ano, com 36,7% dos pacientes configurando-se como progressores. Em análise univariada, a progressão de fibrose hepática esteve associada a níveis de alanina aminotransferase (p<0,001) e aspartato aminotransferase (p<0,0340) acima de 3 vezes o limite superior da normalidade à época da primeira biópsia. Verificou-se também associação entre níveis de alanina aminotransferase (p=0,049) e aspartato aminotransferase (p=0,013) acima da normalidade e atividade necroinflamatória à primeira biópsia. CONCLUSÕES: Elevações de alanina aminotransferase e aspartato aminotransferase parecem estar associadas a uma maior atividade necroinflamatória em pacientes co-infectados pelo HIV e hepatite C e também a uma progressão mais acelerada da fibrose hepática nesse grupo de pacientes / INTRODUCTION: HIV and hepatitis C virus co-infected patients usually exhibit rapid liver fibrosis progression. However, most studies evaluating this issue indirectly characterize fibrosis progression via single liver biopsy, further using this as basis for calculating the estimated duration of hepatitis C infection. OBJECTIVE: Objectives of this study include: 1- Estimate the annual rate of direct liver fibrosis progression, using analyses of paired biopsy samples from HIVhepatitis C co-infected patients without prior treatment for hepatitis C; 2- Assess the possible association of fibrosis progression with certain clinical variables. METHODS: We evaluated 30 HIV-hepatitis C co-infected patients, with no history of prior treatment for hepatitis C, who underwent two paired liver biopsies. We calculated the annual rate of direct fibrosis progression and determined fibrosis progression, stabilization, and regression. We then performed statistical analysis, testing the association between fibrosis progression and several clinical and demographic variables. RESULTS: The average annual progression rate was 0.13 FU/year, with 36.7% of patients defined as progressors. In univariate analysis, liver fibrosis progression was associated with alanine aminotransferase (p<0.001) and aspartate aminotransferase (p<0.0340) levels over three times the upper limit of normal present at first biopsy. There was also an association between above-normal alanine aminotransferase (p=0.049) and aspartate aminotransferase (p=0.013) levels and necroinflammatory activity at first biopsy. CONCLUSION: Elevated alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase levels appear to be associated with higher necroinflammatory activity and more accelerated liver fibrosis progression among HIV-hepatitis C co-infected patients