Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-31Bitstream added on 2014-06-13T20:19:20Z : No. of bitstreams: 1 green_re_me_botfmvz.pdf: 227813 bytes, checksum: 81c65c7153ef1899ecd83611ad6f331f (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo do presente trabalho foi testar a viabilidade de embriões ovinos produzidos in vivo criopreservados pelo método de vitrificação em OPS (Open Pulled Straw) ou congelação tradicional, comparando dois métodos (direto e indireto) de transferência dos embriões pós-aquecimento. Ao mesmo tempo, foi avaliado o efeito da criopreservação em diferentes estadios de desenvolvimento embrionário. Um grupo de 137 embriões com qualidades boa ou excelente foram obtidos de ovelhas Ile de France superovuladas. Mórulas e blastocistos foram distribuídos em três grupos: embriões frescos (n=50), embriões congelados (n=44) e embriões vitrificados (n=43). Os embriões destinados ao congelamento foram primeiramente equilibrados em solução de etilenoglicol em três passos (0,5M, 1,0M e 1,5M) por 5 minutos em cada passo, e criopreservados em equipamento automático de congelação. Os embriões vitrificados foram equilibrados em solução de 10% EG e 10% DMSO poe 1 minuto e 45 segundos e depois transferidos a solução de vitrificação com 20% EG e 20% DMSO por 30 segundos. Os embriões foram inovulados em receptoras sincrônicas, sendo utilizado dois métodos de transferência para os embriões criopreservados: direto e indireto. A viabilidade dos embriões foi determinada pela taxa de prenhez aos 30 dias através de ultra-sonografia em tempo real. A taxa de prenhez em receptoras inovuladas com embriões a fresco foi de 50%, sendo similar as taxas encontradas para embriões congelados (38,6%) e vitrificados (55,8%). No entanto, embriões vitrificados e inovulados pela técnica direta (57,1%) resultaram em maior taxa de gestação que os embriões congelados (34,8%) (P=0,07). Adicionalmente, embriões vitrificados mostraram maior viabilidade em estadio de mórula em relação aos embriões congelados no mesmo estadio (64,0% versus 38,9%) (P=0,07). Conclui-se que a vitrificação de embriões ovinos produzidos in vivo é uma biotécnica eficaz... / The aim of this study was to evaluate the viability of sheep embryos cryopreserved using vitrification in OPS or traditional freezing after direct and indirect transfer. The effect of cryopreservation was evaluated on different embryos stage. A total of 137 in vivo produced sheep embryos, which were classified as good or excellent by morphological criteria, were obtained from adult Ile de France ewes. Morulae and blastocysts were distributed into three groups. In the first group, non-cryopreserved embryos were transfer to recipients as counterpart (n=50). In group 2, embryos were cryopreserved by slow freezing method (n=44). In the third group, embryos were vitrified using OPS (n=43). In a first set of experiments, embryos at morulae and blastocysts stage were frozen in an automatic freezer using three steps of equilibrium in ethylene glycol (0.5M, 1.0M and 1.5M) for 5 minutes in each step. A second group of embryos were loaded into open pulled straw (OPS) and plunged into liquid nitrogen after exposure at room temperature (20°C) in 10% EG + 10% dimethyl sulphoxide (DMSO) for 1 minute and 45 seconds, then in 20% EG + 20% DMSO + 0.5 M sucrose for 30 seconds. The cryopreserved embryos were transferred directly and indirectly into synchronized recipients. Pregnancy rates were recorded 30 days after transfer. No significant difference was observed among fresh, frozen or vitrified embryos on pregnancy rate (50.0%, 38.6% and 55.8%). However, the pregnancy rate after direct transfer of OPS vitrified embryos was significantly higher than direct transfer of frozen embryos (57.1% versus 34.8%) (P=0.07).In the same way, early cleavage stage embryos vitrified (morulae) had higher viability than that frozen embryos (64.0% versus 38.9%) (P=0.07). In conclusion, our results indicate that the OPS vitrification technique in association with direct transfer improves the viability of sheep embryos with potential applications to field conditions.

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Anneliese de Souza Traldi / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi testar a viabilidade de embriões ovinos produzidos in vivo criopreservados pelo método de vitrificação em OPS (Open Pulled Straw) ou congelação tradicional, comparando dois métodos (direto e indireto) de transferência dos embriões pós-aquecimento. Ao mesmo tempo, foi avaliado o efeito da criopreservação em diferentes estadios de desenvolvimento embrionário. Um grupo de 137 embriões com qualidades boa ou excelente foram obtidos de ovelhas Ile de France superovuladas. Mórulas e blastocistos foram distribuídos em três grupos: embriões frescos (n=50), embriões congelados (n=44) e embriões vitrificados (n=43). Os embriões destinados ao congelamento foram primeiramente equilibrados em solução de etilenoglicol em três passos (0,5M, 1,0M e 1,5M) por 5 minutos em cada passo, e criopreservados em equipamento automático de congelação. Os embriões vitrificados foram equilibrados em solução de 10% EG e 10% DMSO poe 1 minuto e 45 segundos e depois transferidos a solução de vitrificação com 20% EG e 20% DMSO por 30 segundos. Os embriões foram inovulados em receptoras sincrônicas, sendo utilizado dois métodos de transferência para os embriões criopreservados: direto e indireto. A viabilidade dos embriões foi determinada pela taxa de prenhez aos 30 dias através de ultra-sonografia em tempo real. A taxa de prenhez em receptoras inovuladas com embriões a fresco foi de 50%, sendo similar as taxas encontradas para embriões congelados (38,6%) e vitrificados (55,8%). No entanto, embriões vitrificados e inovulados pela técnica direta (57,1%) resultaram em maior taxa de gestação que os embriões congelados (34,8%) (P=0,07). Adicionalmente, embriões vitrificados mostraram maior viabilidade em estadio de mórula em relação aos embriões congelados no mesmo estadio (64,0% versus 38,9%) (P=0,07). Conclui-se que a vitrificação de embriões ovinos produzidos in vivo é uma biotécnica eficaz... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the viability of sheep embryos cryopreserved using vitrification in OPS or traditional freezing after direct and indirect transfer. The effect of cryopreservation was evaluated on different embryos stage. A total of 137 in vivo produced sheep embryos, which were classified as good or excellent by morphological criteria, were obtained from adult Ile de France ewes. Morulae and blastocysts were distributed into three groups. In the first group, non-cryopreserved embryos were transfer to recipients as counterpart (n=50). In group 2, embryos were cryopreserved by slow freezing method (n=44). In the third group, embryos were vitrified using OPS (n=43). In a first set of experiments, embryos at morulae and blastocysts stage were frozen in an automatic freezer using three steps of equilibrium in ethylene glycol (0.5M, 1.0M and 1.5M) for 5 minutes in each step. A second group of embryos were loaded into open pulled straw (OPS) and plunged into liquid nitrogen after exposure at room temperature (20°C) in 10% EG + 10% dimethyl sulphoxide (DMSO) for 1 minute and 45 seconds, then in 20% EG + 20% DMSO + 0.5 M sucrose for 30 seconds. The cryopreserved embryos were transferred directly and indirectly into synchronized recipients. Pregnancy rates were recorded 30 days after transfer. No significant difference was observed among fresh, frozen or vitrified embryos on pregnancy rate (50.0%, 38.6% and 55.8%). However, the pregnancy rate after direct transfer of OPS vitrified embryos was significantly higher than direct transfer of frozen embryos (57.1% versus 34.8%) (P=0.07).In the same way, early cleavage stage embryos vitrified (morulae) had higher viability than that frozen embryos (64.0% versus 38.9%) (P=0.07). In conclusion, our results indicate that the OPS vitrification technique in association with direct transfer improves the viability of sheep embryos with potential applications to field conditions. / Mestre

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-19. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:30:03Z : No. of bitstreams: 1 000850429.pdf: 596545 bytes, checksum: 6e5f34f97334f6e8b44f850f7ebd38bb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivou-se estudar comparativamente os efeitos da administração seriada de 100μg de deslorelina por via intramuscular frente ao implante de liberação continuada de deslorelina (4,7mg), sobre a supressão temporária do crescimento folicular ovariano em ovelhas Bergamácia, visando a aplicação em biotecnologias do controle da ovulação. Após um período de adaptação e monitoramento da ciclicidade, as ovelhas tiveram o estro sincronizado pelo emprego de dispositivo intravaginal Eazi-Breed CIDR®, (0,33g de progesterona) de segundo uso, por 12 dias e administração única, pela via intramuscular, de 350UI de eCG concomitantemente à retirada do dispositivo. Foram coletadas amostras de sangue para confirmação da ovulação e ciclicidade através da quantificação de progesterona no plasma sendo considerados animais com atividade lútea aqueles que apresentaram valores igual ou superior a 1ng/mL. Decorridos seis dias da ovulação, as fêmeas foram então divididas em quatro grupos: G0 (Controle): animais sem tratamento; G1 (DES 48h); animais submetidos a aplicações intramusculares de 100μg de deslorelina a cada 48 horas durante sete dias; G2 (DES 72h): animais submetidos a aplicações intramusculares de 100μg de deslorelina a cada 72 horas durante sete dias; e G3 (Implante): animais com implante subcutâneo contendo 4,7mg de deslorelina que permaneceu por sete dias. Durante o período de tratamento específico de cada um dos grupos (sete dias), os animais tiveram os ovários monitorados ultrassonograficamente uma vez ao dia para a constatação da supressão do crescimento folicular, sendo os folículos presentes nos ovários classificados em pequenos, com diâmetro de 2 a 2,9mm, médios, com diâmetro de 3 a 4,4mm e grandes, com diâmetro ≥4,5mm. O monitoramento ultrassonográfico ovariano foi mantido após o término dos tratamentos, até que 100% das ovelhas retomasse a atividade de crescimento folicular. A população... / The objective is to comparatively study the 100μg deslorelin serial administration effects front implantation of sustained release deslorelin (4.7 mg) on the temporary suppression of ovarian follicular growth in Bergamacia ewe aiming the application in biotechnology for the control of ovulation. After an adaptation period and monitoring of cyclicity, they had estrus synchronized with the second use intravaginal device Eazi-Breed CIDR® (0.33g progesterone) for 12 days and a single intramuscular injection, of eCG 350UI concurrently with the removal of the device. Blood samples were collected for confirmation of ovulation and cyclicality by measuring plasma progesterone being considered with luteal activity those animals with values equal or higher than 1 ng / mL. Elapsed six days of ovulation females was then be randomly divided into four groups: G0 (Control): untreated animals; G1 (DES 48h); animals subjected to intramuscular injections of 100μg deslorelin every 48 hours for seven days; G2 (DES 72h) animals subjected to intramuscular injections of 100μg deslorelin every 72 hours for seven days; and G3 (implant): animals with subcutaneous implant containing 4.7 mg deslorelin that remained for seven days. During the specific treatment period of each group (seven days), the animals ovaries was monitored by ultrasound to establish the suppression of follicular growth. And the follicles present in the ovaries classified into small, with a diameter of 2 to 2.9 mm, medium, with a diameter of 3 to 4.4 mm and large diameter ≥4.5mm. Ovarian ultrasound monitoring was maintained after completion of treatment, until 100% of the sheep retake the follicular activity. The follicular population was compared in the groups and between the groups during the treatment period. The G0 (Control) did not differ (p> 0.05) between the follicles classes wherein the post-synchronization elapsed time did not allow to characterize the typical pattern in ...

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Eunice Oba / Banca: André Luís Rios Rodrigues / Resumo: Objetivou-se estudar comparativamente os efeitos da administração seriada de 100μg de deslorelina por via intramuscular frente ao implante de liberação continuada de deslorelina (4,7mg), sobre a supressão temporária do crescimento folicular ovariano em ovelhas Bergamácia, visando a aplicação em biotecnologias do controle da ovulação. Após um período de adaptação e monitoramento da ciclicidade, as ovelhas tiveram o estro sincronizado pelo emprego de dispositivo intravaginal Eazi-Breed CIDR®, (0,33g de progesterona) de segundo uso, por 12 dias e administração única, pela via intramuscular, de 350UI de eCG concomitantemente à retirada do dispositivo. Foram coletadas amostras de sangue para confirmação da ovulação e ciclicidade através da quantificação de progesterona no plasma sendo considerados animais com atividade lútea aqueles que apresentaram valores igual ou superior a 1ng/mL. Decorridos seis dias da ovulação, as fêmeas foram então divididas em quatro grupos: G0 (Controle): animais sem tratamento; G1 (DES 48h); animais submetidos a aplicações intramusculares de 100μg de deslorelina a cada 48 horas durante sete dias; G2 (DES 72h): animais submetidos a aplicações intramusculares de 100μg de deslorelina a cada 72 horas durante sete dias; e G3 (Implante): animais com implante subcutâneo contendo 4,7mg de deslorelina que permaneceu por sete dias. Durante o período de tratamento específico de cada um dos grupos (sete dias), os animais tiveram os ovários monitorados ultrassonograficamente uma vez ao dia para a constatação da supressão do crescimento folicular, sendo os folículos presentes nos ovários classificados em pequenos, com diâmetro de 2 a 2,9mm, médios, com diâmetro de 3 a 4,4mm e grandes, com diâmetro ≥4,5mm. O monitoramento ultrassonográfico ovariano foi mantido após o término dos tratamentos, até que 100% das ovelhas retomasse a atividade de crescimento folicular. A população... / Abstract: The objective is to comparatively study the 100μg deslorelin serial administration effects front implantation of sustained release deslorelin (4.7 mg) on the temporary suppression of ovarian follicular growth in Bergamacia ewe aiming the application in biotechnology for the control of ovulation. After an adaptation period and monitoring of cyclicity, they had estrus synchronized with the second use intravaginal device Eazi-Breed CIDR® (0.33g progesterone) for 12 days and a single intramuscular injection, of eCG 350UI concurrently with the removal of the device. Blood samples were collected for confirmation of ovulation and cyclicality by measuring plasma progesterone being considered with luteal activity those animals with values equal or higher than 1 ng / mL. Elapsed six days of ovulation females was then be randomly divided into four groups: G0 (Control): untreated animals; G1 (DES 48h); animals subjected to intramuscular injections of 100μg deslorelin every 48 hours for seven days; G2 (DES 72h) animals subjected to intramuscular injections of 100μg deslorelin every 72 hours for seven days; and G3 (implant): animals with subcutaneous implant containing 4.7 mg deslorelin that remained for seven days. During the specific treatment period of each group (seven days), the animals ovaries was monitored by ultrasound to establish the suppression of follicular growth. And the follicles present in the ovaries classified into small, with a diameter of 2 to 2.9 mm, medium, with a diameter of 3 to 4.4 mm and large diameter ≥4.5mm. Ovarian ultrasound monitoring was maintained after completion of treatment, until 100% of the sheep retake the follicular activity. The follicular population was compared in the groups and between the groups during the treatment period. The G0 (Control) did not differ (p> 0.05) between the follicles classes wherein the post-synchronization elapsed time did not allow to characterize the typical pattern in ... / Mestre

Orientador: Carlos Augusto Araujo Valadão / Banca: Valentim Arabicano Gheller / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Renata Gebara Sampaio Dória / Banca: Paulo Aléscio Canola / Resumo: As técnicas de fertilização in vitro e transferência de embrião são amplamente utilizadas como multiplicadores genéticos em fêmeas de alto valor zootécnico. Para sua realização é mandatório o uso de anestesia epidural, porém sabe-se que a punção repetida do espaço epidural pode causar alterações inflamatórias e fibrose do canal, aos quais reduzem a eficácia da técnica. Objetivou-se, por meio deste estudo desenvolver uma técnica cirúrgica de implantação de cateter epidural com portal de acesso subcutâneo e avaliar a patência deste dispositivo para a realização de aspiração folicular em vacas, por um período de 510 dias. Para a realização deste estudo foram utilizadas doze vacas, com idade entre 3-5 anos e peso entre 308-518 kg, que foram alocadas em dois grupos, grupo A, animais da raça Nelore e B animais da raça Holandesa. Após contenção em tronco, foi realizada sedação com 0,04 mg/kg de acepromazina 1% associada a 0,01 mg/kg de xilazina 2% pela via intramuscular e bloqueio anestésico local da região sacrococcígea e sacral direita. Procedeu-se uma incisão de pele semicircular de dez centímetros (incisão-I), abrangendo o espaço sacrococcígeo e intercoccígeo. Após divulsão da tela subcutânea, a pele foi rebatida lateralmente. Através de uma agulha de Tuohy (16G) posicionada na articulação sacrococcígea ou intercoccígea, introduziu-se dez centímetros do cateter (17G) em sentido cranial, no canal epidural. Procedeu-se uma segunda incisão (incisão-II), de quatro centímetros, no te... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In vitro fertilization and embryo transfer are often used as genetic multipliers in cows of high zootechnical value. Epidural anesthesia is mandatory preceding these procedures, but repeated puncture of the epidural space may cause inflammation and fibrosis, which reduce the effectiveness of the technique in time. The objective of this study was to describe a surgical technique for implantation of an epidural catheter with subcutaneous access portal, and to evaluate the patency this device during eight follicular aspiration cycles in cows. Twelve cows, aged between 3-5 years, weighting 308-518 kg were used in this study. They were allocated in two groups, (A) Nellore and (B) Holstein. Following physical retrain in a hydraulic stock and sedation with 0.04 mg/kg of acepromazine 1% associated with 0.01 mg/Kg of xylazine 2%, administered intramuscularly, local anesthetic block of the sacrococcygeal and right sacral region was made. Then, a 10-cm semicircular followed by skin incision (I-incision), was performed over the sacrococcygeal space, after divulsion of the subcutaneous tissue. Through a Tuohy needle (16G) positioned within the sacrococcygeal joint, ten centimeters of the catheter (17G) were cranially inserted in the epidural space. A second incision (incision-II), four centimeters long, was made at the middle third of the right sacral region. The epidural catheter was transposed from the I-incision to the II-incision through the subcutaneous by using a metallic guide, and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: José Maurício Barbanti Duarte / Banca: Eveline dos Santos Zanetti / Banca: Maria Emília Franco Oliveira / Resumo: O cervo-do-pantanal (Blastocerus dichotomus) é uma espécie emblemática dentro dos cervídeos neotropicais. Nas últimas décadas, suas populações têm sofrido declínio notório devido, principalmente, à destruição do seu habitat. Isto causa a perda da diversidade genética, que junto à depressão endogâmica (pelo isolamento de pequenas populações) pode levar à espécie a extinções locais. Nesse contexto, as técnicas de reprodução assistida podem auxiliar no processo de manutenção da diversidade genética nestas populações isoladas. Desta forma, o objetivo deste estudo foi elaborar um protocolo de superovulação para cervo-do-pantanal em cativeiro. Assim, foram testados protocolos sucessivamente (A, B, C) até que fossem obtidos resultados satisfatórios. Para que se pudesse chegar a um protocolo viável, foram testadas três combinações farmacológicas. Tratamento A: CIDR® durante sete dias, seguido de 0,5 mg de BE e 0,11 mg de GnRH no dia 0, 800UI de eCG no dia 5 após inserção do CIDR®, 530 µg de PGF2α no dia 7 e 0,11 mg de GnRH logo após a detecção do estro, para a indução da ovulação. Tratamento B: CIDR® durante oito dias, seguido de 0,5 mg de BE e 0,11 mg de GnRH no dia 0, 1200UI de eCG no dia 5 após inserção do CIDR®, 530 µg de PGF2α no dia 8 e 0,11 mg de GnRH logo após a detecção do estro, para a indução da ovulação. Tratamento C: CIDR® durante oito dias, seguido de 0,5 mg de BE e 0,11 mg de GnRH no dia 0, 1200UI de eCG no dia 5 após inserção do CIDR®, 530 µg de PGF2α no dia 8 e 2,5 m... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The marsh deer (Blastocerus dichotomus) is an emblematic species within the neotropical deer. In the last decades, their populations have suffered a notable decline due, mainly, to the destruction of their habitat. This causes loss of genetic diversity, which together with inbreeding depression (by the isolation of many small populations) can lead this species to local extinctions. In this context, assisted reproduction techniques can help in the process of maintaining genetic diversity in these isolated populations. Thus, the aim of this study was to elaborate a superovulation protocol for captive marsh deer. Therefore, protocols were successively tested (A, B, C) until satisfactory results were obtained. To be able to achieve a viable protocol, three pharmacological combination were tested. Treatment A: CIDR® for 7 days, followed by 0.5 mg of EB and 0.11 mg of GnRH on D0, 800IU of eCG on day 5 after CIDR® insertion, 530 µg PGF2α on day 7, and 0.11 mg of GnRH soon after estrus detection, for ovulation induction. Treatment B: CIDR® for 8 days, followed by 0.5 mg of EB and 0.11 mg of GnRH on D0, 1200IU of eCG on day 5 after CIDR® insertion, 530 µg PGF2α on day 8, and 0.11 mg of GnRH soon after estrus detection, for ovulation induction. Treatment C: CIDR® for 8 days, followed by 0.5 mg of EB and 0.11 mg of GnRH on D0, 1200IU of eCG on day 5 after CIDR® insertion, 530 µg PGF2α on day 8, and 0.25 mg of LH, between 12-18 hours post estrus detection, for ovulation induction. Estrus detection was performed with the aid of a male, and copulation was allowed. Eight days after copulation, CL and anovulatory follicles were counted through median ventral laparotomy, as well as the collection of embryos. Treatment A resulted in 2 CL. Treatment B resul... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Carlos Alberto Hussni / Banca: Marcos Jun Watanabe / Banca: Cláudia Helena Pellizzon / Resumo: Foi realizada a avaliação morfológica e morfométrica da veia cefálica submetida à pinçamento de cinco equinos hígidos. Foram testadas as pinças hemostáticas: Diffenbach bulldog, De Bakey bulldog, Rochester reta e De Bakey com cremalheira. Após 15 minutos da aplicação das referidas pinças, foi realizada a flebectomia parcial e coletadas as amostras referentes a cada segmento do vaso pinçado e do segmento controle sem pinçamento. Das peças procedeu-se as preparações histológicas dos segmentos da veia nas colorações de Hematoxilina-Eosina e Tricrômio de Masson, os cortes histológicos foram avaliados por microscopia óptica. Foi realizada análise morfológica das veias, de forma qualitativa, utilizando para isto uma escala de avaliação de lesões vasculares após pinçamento; a avaliação morfométrica, quantificando em micrometros o achatamento produzido pelas pinças nas diferentes camadas vasculares. Em ambos os estudos, morfológico e morfométrico, as pinças com serrilhamento transversal e fechamento tipo cremalheira causaram as maiores alterações, observou se marcada vacuolização das células musculares e desarranjo na túnica media com perda marcada das células endoteliais da túnica intima do vaso estudado. / Abstract: Morphometric and morphologic evaluation of the cephalic vein of five healthy horses submitted to clamping was done. Hemostatic clamps tested were Dieffenbach bulldog, De Bakey bulldog, Rochester straight and De Bakey with ratchets. 15 minutes after mentioned clamps were applied partial phlebotomy was performed and histologic sections of the veins were prepared and stained with Hematoxylin-Eosin and Masson Trichrome, after the stained preparations were evaluated by light microscopy. A qualitative morphological analysis of the veins was performed using a rating scale of vascular lesions after clamping; the morphometric evaluation consisted in quantifying in micrometers the flattening produced by the hemostatic clamps in the different vascular beds. In both studies, morphologic and morphometric, hemostats with transverse serration and ratcheted mechanism caused major changes, pronounced vacuolization of the muscle cells, derangement of the medium tunic and marked loss of endothelial cells of the intima tunic was observed in the vessel studied. / Mestre

Orientador: Ciro Moraes de Barros / Coorientador: Anthony César de Souza Castilho / Banca: Mário Binelli / Banca: Luiz Gustavo de Almeida Chuffa / Resumo: O oviduto possui papel essencial na reprodução de mamíferos, promovendo um microambiente favorável para a maturação oocitária, estocagem e capacitação do espermatozoide, fertilização, transporte dos gametas e desenvolvimento inicial do embrião. Anatomicamente e funcionalmente, o oviduto é dividido em três regiões principais: infundíbulo, ampola e istmo. O oócito e o espermatozoide entram nos lados opostos do oviduto, respectivamente no infundíbulo e istmo, e são transportados até a ampola, local onde ocorre a fertilização. O sucesso reprodutivo está diretamente ligado a temporização apropriada do transporte dos gametas ao local da fertilização, bem como, a precisão no tempo de transporte do embrião até o útero, para a aquisição da capacidade de implantação. A coordenação e regulação das funções do oviduto são complexas e estão sob efeitos endócrinos, parácrinos e autócrinos, os quais alteram temporalmente e espacialmente a transcrição e tradução de diversos fatores. Diante disso, o presente trabalho visou avaliar o efeito de biotecnologias reprodutivas, especificamente da superestimulação ovariana, bem como de características genéticas e fisiológicas reprodutivas no perfil transcricional de diversos fatores no oviduto bovino. Para tanto, foram avaliados os efeitos da indução de múltiplas ovulações em vacas da raça Nelore (dados apresentados no primeiro manuscrito), bem como os efeitos da influência da seleção genética de animais com alta contagem folicular em novilhas da raça Nelore e Aberdeen Angus, no período inicial pós ovulação (dados apresentados no segundo manuscrito), na expressão de genes relacionados ao transporte de gametas e fertilização. Os resultados demonstram que a superestimulação ovariana modula a expressão de alguns genes relacionados à contratilidade do oviduto em vacas da raça Nelore e que a ovulação é principal fator responsável por controlar ... / Abstract: The oviduct has an important role in mammal reproduction, promoting a favorable microenvironment for oocyte maturation, sperm storage and capacitation, fertilization, transport of gametes and early embryo development. Anatomically and functionally, the oviduct is divided in three regions: infundibulum, ampulla and isthmus. The oocyte and the sperm enter in opposite sides of the oviduct, respectively infundibulum and isthmus, and are transported to the fertilization site, the ampulla. Reproductive success is directly related to appropriate timing of gamete transport to the fertilization site, as well as a precise time of embryo transport to the uterus, to obtain the capacity of implantation. The coordination and regulation of oviductal functions are complex and under endocrine, paracrine and autocrine effects, which temporally and spatially alter the transcription and translation of several factors. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of reproductive biotechnologies, specifically ovarian superstimulation, as well as genetic and physiological reproductive characteristics in the transcriptional profile of several factors in the bovine oviduct. To do so, we evaluated the effects of inducing multiple ovulation in Nelore cows (data presented in the first manuscript), and the effects of the influence of genetic selection of animals with high follicle count in Nellore and Aberdeen Angus heifers, in the initial period post-ovulation (data presented in the second manuscript), in gene expression related to gametes transport and fertilization. The results demonstrated that ovarian superstimulation modulates the expression of some genes related to oviductal contractility in Nelore cows and ovulation is the main factor responsible for transcriptional control in bovine oviduct, with less or no impact of breed and ovarian follicle count / Mestre

Orientador: Vânia Marai Vasconcelos Machado / Banca: Maria Cristina Ferrarini Nunes Soares Hage / Banca: Seizo Yamachita / Resumo: A imagem originada por ressonância magnética (MRI) revolucionou a medicina veterinária na área de diagnóstico por imagem. Tecnologia considerada atualmente como a metodologia mais sensível para análise de tecidos moles, como o encéfalo, ultrapassando os demais métodos diagnósticos. Essa tecnologia fundamenta-se no fenômeno da ressonância magnética nuclear que ocorre quando os núcleos atômicos com propriedades magnéticas presentes no corpo dos humanos e dos animais são submetidos a um campo magnético intenso. Suas vantagens na produção de imagens do encéfalo são método não invasivo, caracteriza-se por alta resolução, intenso contraste, plano bidimensional, em tons de cinza, produz menos artefatos e não utiliza formatos ionizantes de energia eletromagnética. Não apresenta riscos comprovados para o paciente e profissionais submetidos ao exame. Apesar da MRI ser a técnica de eleição para examinar o encéfalo, essas informações são escassas quando relacionadas com características anatômicas encefálicas em ruminantes domésticos. A finalidade deste estudo é descrever neuroanatomia encefálica bovina (Bos taurus domesticus) normal objetivando correlações com achados normais de ressonância magnética. Este trabalho reveste-se de importância pois, a definição neuroanatômica normal propiciará diagnósticos acurados de diferentes enfermidades traumáticas, vasculares, infecciosas, degenerativas ou neoplásicas, dentre outras Os cérebros foram cuidadosamente extraídos e fixados em formol para cortes anatômicos convencionais. Cortes transversais e sagitais de MRI foram obtidos de duas cabeças frescas de bovinos adultos pelo aparelho ESAOTE 0.25 T Vet-MR GRANDE através da bobina C-shaped coil nas sequências efetuadas no plano transversal T1 e T2 no plano sagital, T1 e T2 e no plano dorsal. Após a aquisição, imagens foram transferidas em formato DICON para o aplicativo... / Abstract: Magnetic resonance imaging (MRI) has revolutionized veterinary medicine in the field of diagnostic imaging. Technology currently considered as the most sensitive method for the analysis of soft tissues such as the brain, bypassing the other diagnostic methods. This technology is based on nuclear magnetic resonance phenomenon that occurs when atomic nuclei with magnetic properties present in the body of humans and animals are subjected to an intense magnetic field. Its advantages in the production of brain images are noninvasive, is characterized by high resolution, high contrast, two-dimensional plane, grayscale, produces less artifacts and does not use ionizing formats of electromagnetic energy. Presents no risk to the patient and proven professionals submitted to the examination. Although MRI is the preferred technique to examine the brain, this information is scarce when related brain anatomical features in domestic ruminants. The purpose of this study is to describe normal bovine brain neuroanatomy (Bos taurus domesticus) order correlations with normal magnetic resonance imaging findings. This research is of importance because, normal neuroanatomical definition will provide accurate diagnosis of different diseases traumatic, vascular, infectious, degenerative or neoplastic, among other. Brains were carefully extracted and fixed for conventional anatomical cuts. Transverse and sagittal MRI were obtained from two fresh heads of adult cattle at 0.25T ESAOTE Vet-MR GRANDE device through the coil C-shaped coil in the sequences performed in the transverse plane T1 and T2 sagittal, T1 and T2 and the plan dorsal. After the acquisition, images were transferred in DICON format for Synapse® PACS application and analyzed by an observer at ClearCanvas Workstation program. The most clinical interest neuroanatomical structures were set according to the methodology of Yokoshi & Rohen and named after neuroanatomy texts / Mestre

Resumo:O processo de desenvolvimento embrionário e placentário está sob controle epigenético intenso, com os diversos processos epigenéticos regulando a diferenciação de células pluripotentes em células especializadas. Um desenvolvimento placentário anormal é observado com frequência em gestações de clones, e está associado a uma alteração na reprogramação epigenética da célula doadora e do embrião formado. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão dos genes "imprinted" TSSC4 e PHLDA2 em tecido cotiledonário e intercotiledonário, aos 60 dias de gestação, de placentas produzidas por Transferência Embrionária (TE), Fecundação In Vitro (FIV) e Transferência Nuclear (TN) em bovinos, e também investigar o controle epigenético desses genes na placenta bovina, avaliando o perfil epigenético dos mesmos em tecidos cotiledonários dos grupos experimentais (TE, FIV e TN). A expressão do gene TSSC4 foi reduzida em 30% na região cotiledonária do grupo produzido por TN, no entanto a expressão do gene PHLDA2 aumentou em aproximadamente onze vezes nos grupos TN e FIV, quando comparados ao grupo TE. Análises de ChIP para a histona H3 na região promotora proximal dos genes TSSC4 e PHLDA2 mostraram um aumento para a marcação permissiva H3K4me2 e uma redução para a inibitória H3K9me2 em cotilédones de placentas clonadas em relação às placentas produzidas por TE. Interessantemente, ambas as marcações de histonas para o gene TSSC4 também estavam significativamente alteradas também em placentas produzidas por FIV, quando comparadas ao grupo TE. Esses resultados mostram que a expressão dos genes "imprinted" TSSC4 e PHLDA2 está alterada em placentas de gestações produzidas por transferência nuclear. Ainda, alterações na expressão do gene PHLDA2 e das modificações de histona no gene TSSC4, nos cotilédones produzidos por FIV, indicam que o cultivoo...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:The process of embryonic and placental development is under high epigenetic control, with different epigenetic processes regulating the differentiation of pluripotent cells into specialized cells. An abnormal placental development is observed frequently in pregnancies produced by nuclear transfer, and is associated with incomplete epigenetic reprogramming of the donor cell and formed embryo. The objective of this study was to evaluate the expression of the imprinted genes TSSC4 e PHLDA2 in cotiledonary and intercotiledonary tissues, after 60 days of pregnancy, in placentas produced by Embryo Transfer (ET) In Vitro Fertilization (IVF) and Nuclear Transfer (NT) in cattle, and also to investigate the epigenetic control of this gene in the bovine placenta evaluating the epigenetic profile of cotiledonary tissues of the experimental groups (ET, IVF and NT). The TSSC4 gene expression was reduced by 30% in the cotyledons in the NT group, however PHLDA2 expression of the gene was elevated by 11-fold in NT compared to ET. ChIP analysis for histone H3 at the proximal promoter region of TSSC4 and PHLDA2 genes showed an increase to the permissive mark H3K4me2 and a reduction for the inhibitory mark H3K9me2 in the cotyledons of cloned placentae, in relation to placentae produced by ET, for both genes. Interestingly, the inhibitory mark H3K9me2 for TSSC4 gene was also significantly reduced in placentae produced by IVF, compared to ET control group. These results show that expression of the "imprinted" genes TSSC4 and PHLDA2 is affected in placenta of pregnancies produced by nuclear transfer. Further, changes in expression of gene PHLDA2 and histone modifications in TSSC4 gene cotyledons produced by IVF indicate that the in vitro culture can contribute to the observed changes in NT group. / Orientador:Flavia Lombardi Lopes / Banca:Calie Castilho / Banca:Gisele Zoccal Mingoti / Mestre