Orientador: Jane Megid / Banca: Marcio Garcia Ribeiro / Banca: Silvio Arruda Vasconcellos / Resumo: A brucelose canina causada pela Brucella canis (B. canis) é uma das principais causas infecciosas de desordens reprodutivas em cães. O presente trabalho teve como objetivo comparar as técnicas de Cultivo Microbiológico e Soroaglutinação Rápida em Cartão (SAR) com e sem o emprego de 2-Mercaptoetanol (2-ME) no diagnóstico da brucelose canina. Adicionalmente foram avaliados sangue, urina, swab vaginal, prepucial e sêmen como materiais a serem processados no diagnóstico microbiológico. Foram avaliados 236 cães quanto à infecção por B. canis, muitos com histórico de problemas reprodutivos, dos quais 24,2% resultaram positivos na SAR, 10,2% na SAR-2ME, 28% na hemocultura, 9,2% na urocultura, 2,1% na cultura de swab vaginal, 13,6% na cultura dos swabs prepuciais e 28,6% no cultivo de sêmen. Dos 71 animais positivos no cultivo microbiológico, 92,9% apresentaram-se positivos na hemocultura. Nos demais materiais foram obtidos percentuais menores. A sensibilidade relativa da SAR resultou em 66,2% e a especificidade relativa 93,9%. A SAR-2ME apresentou sensibilidade relativa de 29,5% com ligeiro aumento na especificidade relativa 98,2%. Quando associados SAR e hemocultura foram observados 97,6% e 93,9% de sensibilidade e especificidade, respectivamente. Os resultados sugerem a utilização associada da SAR à hemocultura sem realização em paralelo com 2-ME. / Abstract: Canine brucellosis caused by Brucella canis (B. canis) is one of the major infectious causes of reproductive disorders in dogs. The present study aimed to compare the performance of bacteriological methods and Rapid Slide Agglutination Test (RSAT) with or without 2-Mercaptoethanol (2-ME) in canine brucellosis diagnosis. Additionally, blood, urine, vaginal and prepucial swabs and semen were evaluated regarding their use in bacteriological diagnostic. Two hundred thirty six dogs, many of them showing reproductive problems, were submitted to investigation for diagnosis of B. canis infection. Among them, 24.2% were positive in RSAT, 10.2% 2ME-RSAT, 28% blood culture, 9.2% urine culture, 2.1% vaginal swab culture, 13.6% prepucial swab culture and 28.6% semen culture. Among the 71 positive dogs in bacteriological culture, 92.9% were positive in blood culture. The percentage of positivity was variable in others samples. The relative sensitivity of RSAT was 66.2% and the relative specificity was 93.9%. The 2ME-RSAT presented lower sensitivity 29.5% and greater specificity 98.2%. The use of blood culture and RSAT associated presented 97.6% e 93.9% of sensibility and specificity, respectively. These results suggest that RSAT should be used with blood cultures independently of the use of 2ME-RSAT. / Mestre

Orientador: Luís Antonio Mathias / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Jane Megid / Resumo: O trabalho teve por objetivo avaliar a prova do antígeno acidificado tamponado após tratamento dos soros com rivanol (AAT-RIV), como teste confirmatório no diagnóstico sorológico da brucelose bovina. Foram selecionadas 1.061 amostras de soros bovinos, previamente analisadas pelos testes preconizados pelo Programa Nacional de Controle e Erradicação de Brucelose Tuberculose (PNCEBT): como teste de triagem, a prova do antígeno acidificado tamponado (AAT), e como testes confirmatórios, a combinação das provas de soroaglutinação lenta e 2-mercaptoetanol (SAL+2-Me), e a reação de fixação de complemento (RFC). O AAT-RIV foi realizado com o antígeno nas concentrações de 8% e 4% de volume celular, não tendo sido encontrada diferença nos resultados. Os dados foram analisados pelo indicador kappa e pelo χ2 de McNemar, adotando-se com ponto-de-corte o título 25 no 2-Me e 4 na RFC. O AAT-RIV apresentou concordância regular (kappa = 0,53) com o AAT e boa com os testes confirmatórios (kappa: 2-Me = 0,67; SAL+2-Me = 0,66; RFC = 0,76). O χ2 de McNemar apontou diferenças significativas entre os testes. A comparação entre os resultados do AAT-RIV e a condição verdadeira do animal, estabelecida pela combinação dos resultados das provas AAT, SAL+2-Me e RFC, resultou em uma sensibilidade relativa de 76,5%, com intervalo de confiança (95%) de 72,7% a 80,3%, e especificidade relativa de 100%. Conclui-se que o AAT-RIV poderia ser utilizado como teste confirmatório no diagnóstico sorológico da brucelose bovina, sendo os animais com resultado positivo considerados infectados e aqueles com resultado negativo submetidos a um dos dois testes confirmatórios adotados pelo PNCEBT. / Abstract: The purpose of the investigation was to evaluate the rose Bengal plate test in bovine serum after treatment with rivanol (RBPT-RIV) as a confirmatory test for brucellosis diagnosis. Serum samples from 1,061 bovine were analyzed by serological diagnostic techniques adopted by the Brazilian Program for Animal Brucellosis and Tuberculosis Control and Eradication: as screening test, the rose Bengal plate test (RBPT), and as confirmatory tests, the 2- mercaptoethanol plus standard tube agglutination test (STAT+2-Me), and the complement fixation test (CFT). RBPT-RIV was performed with 8% and 4% cellular concentration antigen, and there was no difference between the results. Data were analyzed by kappa statistic and McNemar χ2 (2-Me cut-off = titer 25, and CFT cutoff = titer 4). RBPT-RIV showed a moderate agreement (kappa = 0,53) with RBPT, and substantial agreement with the confirmatory tests (kappa: 2-Me = 0,67; STAT+2-Me = 0,66; CFT = 0,76). The McNemar χ2 showed significant difference among the tests. Comparing the RBPT-RIV results with the true condition of the animals, stablished by combining the results of RBPT, STAT+2-Me and CFT, the relative sensitivity was 76.5%, with a 95% confidence interval from 72,7% to 80.3%, and relative specificity of 100%. The results suggested that the RPBT-RIV is suitable to be used as a confirmatory test for brucellosis serological diagnosis; in this case, an animal testing positive should be classified as infected, and an animal testing negative should be tested by CFT or STAT+2-Me. / Mestre

Orientador: Luis Antonio Mathias / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Maria da Gloria Buzinaro / Banca: Fernando Padilha Poester / Banca: Luis Ernesto Samartino / Resumo: O objetivo deste trabalho foi analisar os aspectos epidemiológicos da brucelose suína, estudando a disseminação da enfermidade num surto detectado em julho de 2006, em um rebanho em Jaboticabal, no Estado de São Paulo, Brasil. De 271 matrizes examinadas, 254 (93,7%) foram positivas na reação de fixação de complemento (RFC), e de 62 animais da terminação testados, 17 (27,4%) foram positivos na mesma prova. Todos os 33 bovinos, 5 equinos, 126 ovinos e 25 gansos foram negativos no teste do antígeno acidificado tamponado (AAT), porém 3 (23,07%) dos 13 cães da propriedade foram positivos na RFC. Foram colhidas amostras de sangue dos 14 trabalhadores da granja; 3 (21,42%) deles apresentaram títulos de anticorpos contra brucelas lisas na prova de soroaglutinação em tubos, e apenas 1 (7,14%) apresentou sinais clínicos da doença. O biovar 1 de Brucella suis foi cultivado a partir de 14 fetos abortados e de 6 matrizes necropsiadas, e a identificação foi confirmada por provas de rotina. Não foram encontrados anticorpos específicos contra amostras lisas de Brucella em 1.100 amostras sanguíneas de suínos e em 24 de funcionários de um frigorífico do Estado de São Paulo. Foi avaliado o desempenho de 6 técnicas sorológicas, AAT, 2-mercaptoetanol realizado simultaneamente à soroaglutinação lenta (SAL+ME), RFC, antígeno acidificado tamponado após tratamento com rivanol (AAT-RIV), e teste de polarização fluorescente (TPF) no diagnóstico da brucelose suína a partir do soro sanguíneo colhidos de 333 suínos da fazenda do foco e de mais 1.100 animais abatidos no frigorífico. As informações relatadas neste trabalho indicaram que, apesar da redução da incidência da brucelose suína no Brasil, ainda ocorre infecção por B.suis, sendo um risco para a saúde animal e a saúde pública / Abstract: The purpose of this study was to analyze epidemiological aspects of swine brucellosis, studying an outbreak in a herd in Jaboticabal, State of São Paulo, Brazil, detected in July 2006. Of 271 sows, 254 (93.7%) tested positive by the complement fixation test (CFT), and among 62 randomly bled fattening animals, 17 (27.4%) tested positive. All the 33 cattle, 5 horses, 126 sheep and 25 geese tested negative by the rose Bengal test (RBPT), however, 3 of the 13 dogs in the farm tested positive by the CFT. Blood samples were taken from 14 farm workers; 3 (21.42%) of them had antibody titers to smooth Brucella by the slow agglutination test, and 1 (7.14%) presented clinical signs. B.suis biovar 1 was cultured from 14 aborted fetuses and 6 sows. Brucella identification was accomplished by routine methods. Blood samples were taken from 1,100 pigs and 24 abaittor workers in a slaughterhouse in the state of São Paulo; all the animal and human sera tested negative to smooth Brucella antibodies. The performance of 6 serological tests were evaluated, RBPT, standart tube agglutination test plus mercaptoethanol test (STAT+2-ME), CFT, rose Bengal plate test after serum treatment with rivanol (RBPT-RIV), and fluorescence polarization assay (FPA), for the diagnosis of swine brucellosis in serum samples of 333 pigs from the outbreak and 1,100 pigs from the slaughterhouse. The results showed that, in spite of the reduction of swine brucellosis prevalence in Brazil, B.suis infection still occurs, posing a risk to animal and human health / Doutor

Resumo: O estudo teve por objetivo determinar a prevalência da brucelose bovina entre fornecedores de leite de um laticínio situado no Município de Itirapuã, Estado de São Paulo, analisar fatores de risco eventualmente associados à ocorrência de brucelose nos rebanhos estudados e analisar o desempenho de testes sorológicos para detectar a infecção. De uma população de 942 bovinos adultos distribuídos em 55 rebanhos, situados nos municípios de Itirapuã e de Patrocínio Paulista, foi obtida uma amostra voluntária composta por 813 animais, distribuídos em 37 rebanhos cujos proprietários aceitaram participar do estudo. Foi aplicado um questionário, para a obtenção de informações sobre fatores que pudessem estar associados às taxas de prevalência. Foram colhidas amostras de soro sanguíneo de todos animais, as quais foram submetidas ao teste do antígeno acidificado tamponado (AAT), e as amostras positivas nesse teste foram submetidas à reação de fixação de complemento (RFC). Foram obtidas amostras de leite do conjunto de cada rebanho participante do estudo, que foram examinadas pelo teste do anel do leite (TAL). Das 813 amostras de soro sanguíneo colhidas, 26 (3,2%) resultaram positivas na aplicação em série dos testes de triagem (AAT) e confirmatório (RFC), e das 37 propriedades estudadas, 12 (32,4%) apresentaram pelo menos um animal positivo. Os fatores que se mostraram associados à ocorrência de brucelose foram número de animais no rebanho, não utilização da vacina B19 e compra frequente de animais. Não se observou boa concordância entre o TAL, que apontou resultado positivo em quatro (10,8%) dos 37 rebanhos, e os testes sorológicos individuais na detecção de rebanhos infectados / Abstract:The aim of this investigation was to verify the prevalence of bovine brucellosis among milk suppliers of a dairy industry located in the municipality of Itirapuã, state of São Paulo, Brazil, analyze risk factors eventually associated with the occurrence of brucellosis among the herds involved in the study, and compare the performance of serological tests in detecting infected herds. From a population of 942 adult cattle in 55 herds, in the municipalities of Itirapuã and Patrocínio Paulista, a voluntary sample of 813 animals was obtained in 37 herds whose owners agreed in participating in the study. A questionnaire about risk factors that could be associated to the prevalence rates was applied. Serum samples of all the 813 animals were collected and tested by the rose Bengal plate test (RBPT); positive samples were then tested by the complement fixation test (CFT). Milk samples were taken from each can at the industry and tested by the milk ring test (MRT). Of the 813 serum samples, 26 (3.2) tested positive in the serial application of RBPT and CFT, and of the 37 herds, 12 (32.4%) had at least one positive animal. Factors that showed association with the prevalence rate were number of animals in the herd, lack of vaccination with strain 19 and frequent introduction of animals. The agreement between individual serological tests and MRT to detect infected herds was not good, since MRT showed positive results in only four (10.8%) of the 37 herds / Orientador: Luis Antônio Mathias / Coorientador: Iucif Abraão Nascif Junior / Banca: Ângela Cleusa de Fátima Banzatto de Carvalho / Banca: Fernanda Senter Magajevski / Mestre