O câncer de mama apresenta-se como um dos maiores problemas de saúde pública no mundo por ser, entre as mulheres, o primeiro em incidência e o segundo em número de óbitos. Este tipo de câncer apresenta alto grau de recorrência devido a falha no tratamento do tumor primário e o aparecimento de metástases da doença é a principal causa de mortalidade. As estratégias de tratamento nesse estágio não são específicas e comprometem a qualidade de vida das pacientes. A terapia fotodinâmica (PDT) aparece como uma alternativa terapêutica promissora. No entanto, a eficácia da PDT para o tratamento de tumores da mama, bem como os mecanismos que conduzem à morte celular permanecem obscuros. Para este propósito, neste estudo, nos propusemos a investigar mais profundamente os mecanismos moleculares envolvidos na morte celular induzida MB-PDT. Observou-se que a MB-PDT induz massiva morte celular em células tumorais preferencialmente. As células não-tumorigênicas foram significativamente mais resistentes à terapia em comparação com as células malignas. Análises morfológicas e bioquímicas das células em processo de morte apontou para mecanismos alternativos à apoptose clássica. A autofagia induzida por MB-PDT resultou em citoproteção ou citotoxicidade, dependendo do modelo de célula utilizado. No entanto, o comprometimento de uma destas vias não impediu o destino fatal das células tratadas com MB-PDT. Ao analisar os mecanismos de necrose regulada, observamos que a necroptose desempenhou um papel importante na morte celular induzida por MB-PDT. Adicionalmente, nossos resultados mostraram uma localização preferencial do MB nos lisossomos, o que nos levou a analisar o comprometimento destas organelas. Nós demonstramos por meio da atividade de catepsinas no citosol das células tratadas com MB-PDT, evidências de que a permeabilização da membrana lisossomal é outro mecanismo de necrose regulada responsável pelos efeitos citotóxicos da MB-PDT. Além de resistência à morte celular, as células tumorais também desenvolvem mecanismos de evasão do sistema imune. Neste estudo, também demonstramos que a MB-PDT tem o potencial de aumentar o número de células de linfócitos T CD4+. Por fim, também mostramos a eficácia da terapia em induzir morte celular seletiva às células tumorais em um modelo que recapitula a morfologia do epitélio glandular. Em resumo, demonstramos que vários mecanismos de morte celular são ativados por MB-PDT, uma vez que o comprometimento de uma via de morte celular não impediu o destino fatal das células tratadas com MB-PDT. No geral, os resultados obtidos nesta tese apontam a MB-PDT como uma terapia alternativa e eficaz para o tratamento do câncer de mama, exibindo uma ação de amplo espectro em células com diferentes mecanismos de resistência a vias de morte celular clássica, uma propriedade fundamental para uma terapia contra o câncer. Finalmente, as nossas observações destacam o potencial de MB-PDT como uma estratégia altamente eficaz para tratar o câncer de mama com segurança e possivelmente outros tipos de tumores. / Breast cancer is the main cause of mortality among women presenting high recurrence due to primary treatment failure. Photodynamic therapy (PDT) appears as a promising therapeutic alternative. However, the efficacy of PDT to treat breast tumors as well as the mechanisms that lead to tumorigenic cell death remain unclear. For this purpose, in this study, we set out to deeper investigate the molecular mechanisms involved in MB-PDT induced cell death. We observed that MB-PDT differentially induces massive cell death of tumor cells. Non-malignant cells were significantly more resistant to the therapy compared to malignant cells. Morphological and biochemical analysis of dying cells pointed to alternative mechanisms rather than classical apoptosis. MB-PDT-induced autophagy resulted in either cytoprotection or cytotoxicity depending on the cell model used. However, impairment of one of these pathways did not prevent the fatal destination of MB-PDT treated cells. When analyzing regulated necrosis mechanisms, we observed that necroptosis played an important role in MB-PDT-induced cell death. Additionaly, our results have shown preferential lysosomal MB localization. Furthermore, we have also presented evidences that the lysosome membrane permeabilization is another regulated necrosis mechanism responsible for MB-PDT cytotoxic effects. It is known that in addition to resistance to tumor cell killing therapies, malignant cells develop molecular mechanisms in order to evade the immune system. In this study, we have also been able to show that the MB-PDT has the potential to increase the number of T lymphocytes CD4+. Additionally, when using a physiological 3D culture model that recapitulates relevant features of normal and tumor breast tissue morphology, we found that MB-PDT differential action in killing tumor cell was even higher than what was detected in 2D cultures. In summary, we demonstrated that different cell death mechanisms are being activated upon MB-PDT induction, since impairment of only one cell death pathway did not prevent the fatal destination of MB-PDT treated cells. Overall, our observations point MB-PDT as an alternative and effective therapy for breast cancer treatment, displaying a broad-spectrum action on tumors with different resistance mechanisms to classic cell death pathways, a desired property for improving an anticancer therapy. Finally, our observations underscore the potential of MB-PDT as a highly efficient strategy to safely treat breast cancer and possibly other types of tumors.

O diagnóstico do câncer de uma maneira geral, em particular do câncer de mama, tem o potencial de provocar desequilíbrio psicosocial não somente nas pessoas acometidas pela doença, mas também no contexto familiar. Assim, objetivou-se neste estudo identificar as percepções de familiares sobre a dinâmica familiar após o câncer de mama, bem como as diferenças quanto: composição familiar, gênero, idade, nível educacional e ocupação. O estudo seguiu as premissas da pesquisa tipo exploratória-descritiva. Participaram do estudo 23 familiares constituintes de 10 famílias de mulheres com câncer de mama. Utilizou-se como procedimento metodológico para coleta de dados, entrevistas individuais gravadas e transcritas na íntegra. Analisaram-se os dados por meio de análise de conteúdo, buscando identificar unidades temáticas relacionadas às dimensões da dinâmica familiar, conforme descrito por Barnhill. Os resultados revelaram que os familiares independente da idade, nível educacional e ocupação, mostraram aspectos positivos da dinâmica familiar. Quanto ao gênero feminino, este na visão dos maridos e filhos coloca-se em posição de destaque na reorganização da unidade familiar. Os achados mostraram que o câncer de mama em um membro familiar tem a capacidade de provocar alterações na dinâmica familiar; por outro lado, as famílias utilizaram potenciais de cada membro, em particular, na busca da estabilidade familiar. / The diagnosis of cancer, in general, and of breast cancer in particular has the potential to cause a psychosocial instability not only in the person with the disease, but also in the family context. Therefore, the author aimed at identifying the perceptions of family members about the family dynamics after breast cancer, as well as the differences regarding: family composition, gender, age, literacy level and occupation. This was an exploratory and descriptive research with 23 family members of 10 families of women with breast cancer. In order to collect data, the author used individual interviews that were recorded and transcribed. Data were analyzed through content analysis, aiming at identifying the thematic units related to the family dynamics as described by Barnhill. The results revealed that the family members, independently of their age, literacy level and occupation, showed positive aspects of the family dynamics. Regarding the feminine gender, this in the view of husband and children was placed in an important position in the reorganization of the family unit. The findings showed that the breast cancer in a family member causes alterations in the family dynamics and, on the other hand, the families use the potentials of each member, in particular, in the search for family stability.

Atualmente, os estudos Ômicos, principalmente no campo da metabolômica, têm tido grandes avanços contribuindo para a descoberta de novos biomarcadores e consequentemente aumentando a eficiência do tratamento do câncer. A lipidômica é um novo ramo da metabolômica que visa o estudo abrangente dos lipídeos presentes em um determinado organismo dando ênfase ao metabolismo dos lipídeos e como estão relacionados à progressão da doença. A utilização da espectrometria de massas aliada a abordagens bionalíticas tem progredido rapidamente nos últimos anos, possibilitando a análise e compreensão de pequenas moléculas no contexto biológico e de desenvolvimento do câncer. Dessa forma, para a obtenção de uma boa cobertura lipídica, o preparo de amostra, os parâmetros cromatográficos e o processamento de dados são de suma importância. Nesse trabalho foi avaliado o perfil lipídico de amostras de plasma advindas do modelo animal de Ehrlich, um adenocarcinoma mamário em camundongos fêmeas. Na primeira parte do estudo foi utilizado o método de extração de lipídeos por Bligh-Dyer e realizadas comparações entre plasma de camundongo com tumor de Ehrlich induzido e plasma de camundongo controle, além da comparação entre plasma de camundongo com tumor de Ehrlich e fluido tumoral ascítico de Ehrlich. Através dos modelos obtidos foi observado que no modo negativo de ionização foram obtidos ácidos graxos significativamente diferentes entre os grupos, através do modelo de PLS-DA, dando ênfase ao perfil de ácidos graxos saturados, que mostraram-se em maior quantidade no plasma de Ehrlich. No modo positivo, alterações nos níveis de fosfatidilcolinas (PCs) foram obtidos, indicando a fosfocolina como potencial biomarcador para o câncer de mama, destacando-se as vias metabólicas mais afetadas: metabolismo do ácido linoléico e dos glicerofosfolipídeos. Já a comparação entre fluido tumoral e plasma de Ehrlich foi obtido, através dos dados no modo negativo de ionização e pelo modelo de PLS-DA, que informações lipídicas do tumor podem ser refletidas no plasma, em especial para o conteúdo de ácidos graxos, fosfotidilcolinas e fosfatidiletanolaminas (PEs). Uma segunda abordagem utilizada nessa tese foi a utilização da amostragem in vivo por microextração em fase sólida (SPME) para avaliação metabólica. Os principais parâmetros de SPME que podem afetar a eficiência da extração foram avaliados: tempo de extração e tempo de dessorção. Por meio de um planejamento experimental foram obtidos 10 min e 20 min, respectivamente, para cada variável. Após processamento dos dados foram obtidos 142 e 78 features no modo positivo e negativo, respectivamente. Através dos dados obtidos no modo negativo, e do modelo de PLS-DA construído foi possível avaliar possíveis biomarcadores responsáveis pela diferenciação do fluido tumoral e do fluido presente no camundongo controle, destacando ácidos graxos saturados, o ácido lisofosfatídico (LPA 18:0), fosfatidilinositol (PI 36:0) e derivados de colesterol. O presente estudo apresentou resultados que devem ser melhor explorados e correlacionados com dados a partir de amostras de humanos, podendo ser um indicador para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos para câncer de mama. / Currently, the \"omics\" studies mainly in the field of metabolomics, have increasinly contributed to the discovery of new biomarkers and consequently increasing the efficiency of cancer therapy. Lipidomics is a new approach of the metabolomics that aims the comprehensive study of the lipids present in a given organism, emphasizing the metabolism of lipids and how they are associated to the progression of the disease. Mass spectrometry coupled to bionalytical tools has progressed rapidly in recent years, making it possible to analyze and to understand small molecules in the biological context in the development of cancer. Thus, to obtain a good lipid coverage, sample preparation, chromatographic parameters, and the data processing are important. In this work, the lipid profile of plasma samples from the Ehrlich animal model, a mammary adenocarcinoma in female mice, was evaluated. In the first part of the study the method of lipid extraction by Bligh-Dyer was used and comparisons were performed between mouse plasma with induced Ehrlich tumor and control mouse plasma. In addition, comparison between mouse plasma with Ehrlich tumor and Ehrlich ascitic tumor fluid was performed. Through multivariate models PLS-DA was observed that in the negative ionization mode fatty acids were significantly different between the groups, emphasizing the profile of saturated fatty acids in higher levels in the plasma of Ehrlich. In the positive mode of ionization changes in phosphatidylcholine (PCs) levels were obtained, indicating the phosphocholine group as potential biomarker for breast cancer, with metabolic pathways of the linoleic acid and glycerophospholipids metabolism the most affected. The comparison between tumor fluid and Ehrlich plasma was obtained through the negative mode dataset using the PLS-DA model, showing that the lipid information of tumor can be reflected in the plasma, especially for the fatty acid, phosphotidylcholine and phosphatidylethanolamine (PE). A second approach used in this thesis was the using of the in vivo sampling by solid phase microextraction (SPME). Times of extraction and desorption were the main parameters of SPME assessed using experimental design since they can affect the efficiency of extraction, where 10 and 20 min were the better times of extraction and desorption obtained, respectively. After processing the dataset, 142 and 78 features were obtained in the positive and negative modes of ionization, respectively. Through the data obtained in the negative mode, PLS-DA model was able to evaluate possible biomarkers responsible for the differentiation between tumor fluid and that fluid present in the control mouses, highlighting saturated fatty acids, lysophosphatidic acid (LPA 18:0), phosphatidylinositol (PI 36:0) and cholesterol derivatives. The present study showed results that should be better explored and correlated with data from human samples, and may be an indicator for the development of new therapeutic agents for breast cancer.

Introdução: A sexualidade é uma construção que envolve normas culturais, sexo, corporeidade e gênero. Ela faz interface com a imagem corporal e é produto e produtora da medicalização. Tais elementos interagem entre si e formam diferentes configurações no contexto social e individual, ao longo do tempo. Nesse sentido, o acometimento pelo câncer de mama transforma a sexualidade e a imagem corporal da mulher. Propomos com este estudo contribuir para a compreensão de aspectos psicossociais de mulheres, após o câncer de mama, para a atenção integral à saúde da mulher. Objetivo: Compreender as repercussões do processo diagnóstico e de tratamento, na sexualidade e na imagem corporal, da mulher com câncer de mama. Métodos utilizados: O estudo de abordagem qualitativa embasou-se na Teoria dos Scripts Sexuais que propõe explicar os processos pelos quais as pessoas organizam suas condutas sexuais pela interação entre cenários culturais, scripts interpessoais e scripts da subjetividade. Foram realizadas entrevistas individuais com roteiro semiestruturado; grupos focais e atividade grupal temática, que foram audiogravados e transcritos integralmente. O material foi categorizado, triangulado e analisado segundo conteúdo temático. Cada categoria foi relacionada a um determinado nível dos scripts sexuais. Resultados: 36 mulheres entre 36 e 76 anos participaram do estudo. A maioria mantinha um relacionamento, tinha filhos, tinha até oito anos de escolaridade, não exercia atividade profissional remunerada, era católica e utilizava o SUS. O diagnóstico da doença foi realizado entre 1992 e 2010. Pouco mais da metade foi submetida a cirurgias conservadoras da mama, e todas fizeram, ao menos, um tratamento (neo)adjuvante. Foram delimitadas seis categorias de análise. Cenários culturais: 1. O discurso sobre o câncer: etiologia da doença, opiniões sobre a pessoa com câncer e a percepção de si antes e após o adoecimento. 2. O discurso sobre sexualidade: definições de gênero, atratividade sexual e sexualidade. Scripts interpessoais: 3. Comunicação sobre sexualidade: com familiares, amigos e colegas; com o parceiro afetivo-sexual e com profissionais de saúde. 4. Relacionamento com o parceiro: relacionamentos anteriores e atuais. Scripts da subjetividade: 5. Mudanças corporais: preocupação com a aparência do corpo nu; preocupação com a aparência do corpo vestido; preocupação com a perda do potencial produtivo e preocupação com características corporais não relacionadas aos tratamentos. 6. Vida sexual: algumas mulheres afirmaram ter havido a melhora da vida sexual, após o câncer de mama, parte delas afirmou que a vida sexual permaneceu a mesma e outras referiram piora da vida sexual. Expectativas de melhora da vida sexual. As categorias permitiram a identificação de quatro scripts sexuais: 1. Script sexual que envolve uma sexualidade restrita ao ato sexual e relações tradicionais de gênero bem delimitadas. 2. Script sexual que abarca as relações de gênero de modo difuso com a valorização do bem- estar e prazer sexual feminino. 3. Script sexual de valorização exacerbada da vivência sexual. 4. Script sexual do envelhecimento. Considerações finais: Conhecer alguns scripts sexuais, disponíveis na sociedade brasileira, relacionados à sexualidade e à imagem corporal no câncer de mama pode auxiliar profissionais de saúde na atenção aos pacientes. / Introduction: Sexuality is constructed by a combination of cultural standards, sex, corporeality, gender. It interfaces with body image and it is a product and a producer of medicalization. Such elements interact with one another making different configurations in social and individual contexts over time. Therefore, women\'s sexuality and body image change after being affected by breast cancer. This study aims to contribute to the understanding of psychosocial aspects in women after having breast cancer in order to provide full attention to women\'s health. Objective: Comprehend the consequences of the processes of diagnosis and treatment in sexuality and body image of women with breast cancer. Methods: The study with qualitative approach was based on the Sexual Script Theory which intends to explain the processes through which people organize their sexual conduct by the interaction between cultural scenarios, interpersonal scripts and subjective scripts. Individual interviews with semi-structured guide, focus groups and thematic group activities were fully recorded and transcribed. The material was categorized, triangulated, and analyzed according to thematic content. Each category was related to a determined level of sexual scripts. Results: 36 women between 36 and 76 years old participated in this study. Most of them were in a fixed relationship, had children, completed at least eight years of schooling, were not engaged in remunerated activities, were catholic, and used the Brazilian public health system. The diagnosis of the disease was made between 1992 and 2010. Slightly more than a half of these women have undergone breast-conserving surgery and all of them have gone on, at least, a (neo) adjuvant treatment. 6 categories of analyses were determined. Cultural scenarios: 1. The speech on cancer: disease etiology, opinions about the person living with cancer and one\'s perception of oneself before and after the breast cancer. 2. The speech on sexuality: gender, sexual attractiveness and sexuality definitions. Interpersonal scripts: 3. Communication on sexuality: with relatives, friends and colleagues; with the sexual-affective partner and health-care providers. 4. Relationship with the partner: current and previous relationships. Subjectivity scripts: 5. Body changes: concern with the appearance of the naked body; concern with the appearance of the body in clothes; concern with the loss of productive potential, and concern with body features not related to the cancer treatments. 6. Sexual life: some women claimed to have had an improvement in their sexual life after breast cancer, some of them argued that their sexual life remained the same and others mentioned a worsening in their sexual life. The categories allowed the identification of four sexual scripts: 1. Sexual script that involves clearly defined traditional gender roles and the sexuality restricted to the sexual act. 2. Sexual script that embraces the gender roles in a diffusive way with the valorization of women\'s wellbeing and sexual pleasure. 3. Sexual script of exacerbated valorization of sexual life. 4. Sexual script of the elderness. Conclusions: Knowing some sexual scripts of the sexuality and body image in breast cancer experience available in the Brazilian society may aid health-care providers in patients care.

A realização de radioterapia adjuvante no tratamento do câncer de mama está comumente associada com complicações pulmonares em curto prazo, mas é questionável se essas alterações podem estar presentes também ao longo do tempo. Este trabalho teve como objetivo avaliar, em mulheres que foram diagnosticadas com câncer de mama, o comportamento da função pulmonar e a presença de dispnéia 18 meses após o término da radioterapia. Para tanto, foi realizado um estudo caso-controle em um grupo de 40 voluntárias não tabagistas e sem doenças cardiorrespiratórias que foram divididas em: irradiadas e controle. No grupo irradiado foram incluídas pacientes que realizaram tratamento conservador para o câncer de mama e que receberam radioterapia adjuvante. No grupo controle participaram voluntárias saudáveis com características físicas, etárias e antropométricas semelhantes ao grupo irradiado. Os parâmetros da função pulmonar como volumes (inclusive residual), capacidade vital forçada, fluxos expiratórios máximos e capacidade de difusão foram obtidos por meio do espirômetro GS Plus da Collins. O sintoma de dispnéia em pacientes irradiadas foi quantificado pela escala de dispnéia do Conselho Britânico de Pesquisas Médicas (MRC). As pacientes que realizaram radioterapia apresentaram valores de CPT, CV, CVF e VEF1 (em percentual do previsto) significativamente menores (p<0,05) que os valores correspondentes obtidos pelas voluntárias controle. Observamos ainda, uma tendência dos parâmetros da função pulmonar diminuírem à medida que o grau de dispnéia aumentava. As pacientes com dispnéia grau 2, apresentaram valores de CV, CVF e VEF1 (em percentual do previsto) significativamente menores que as pacientes que não relataram dispnéia. A detecção de alterações da função pulmonar em fases tardias de pacientes submetidas à radioterapia reforça a necessidade de seguimento longitudinal prolongado pré e pós-procedimento. / Adjuvant radiotherapy for breast cancer is commonly associated with short-term pulmonary complications. Long-term risks of this regimen are, however, still debated. The aim of this study was to evaluate dyspnea and pulmonary function 18 months after radiotherapy in breast cancer patients. The population studied consisted of 40 nonsmoking subjects free of cardiorespiratory disease separate divided in two groups: irradiated and control. In the irradiated group they were included patient that undergone breast-conserving surgery and adjuvant radiotherapy and in the group control healthy subjects with age, height and weight similar to the irradiated group. Pulmonary function parameters as volumes (including residual volume), forced vital capacity, maximum expiratory flow and lung capacity diffusion were obtained through GS Plus Collins spirometer. Dyspnea in the irradiated patients was quantitated by the Medical Research Council (MRC) dyspnea scale. Patients that undergone radiotherapy had values of TLC, VC, FVC and FEV1 (as percent predicted) that were significantly less (p <0,05) than corresponding values for the control subjects. Lung function parameters trended downward as the dyspnea score increased. Patients with level 2 dyspnea, had values of VC, FVC and FEV1 (as percent predicted) that were significantly less than corresponding values for the level 0 dyspnea patients. Changes in pulmonary function detected a long term after radiotherapy in breast cancer patients intensify the achievement follow-up study before and after long term treatment with radiotherapy.

Este trabalho apresenta a proposta de uma metodologia para classificação de nódulos mamários por contorno. O contorno do nódulo apresenta difícil interpretação pelos especialistas, devido à dificuldade de vizibilização e o baixo contraste das imagens mamográficas. As imagens utilizadas foram obtidas do banco de imagens mamograficas do LAPIMO, no total foram utilizadas 135 imagens contendo laudos por contorno. Através das imagens mamográficas digitalizadas são recortadas região de interesse (RI) de onde serão extraídos descritores de textura, intensidade e geométricos com o objetivo de caracterizar os padrões de contorno de nódulos. Após a extração desses descritores foram utilizados dois métodos de seleção de atributos, um utilizando rede neural self-organizing map (SOM) e Gaussianas e outro utilizando matriz de covariância. Os atributos extraídos serviram de entrada para duas redes neurais a multi-layer perceptron (MLP) e SOM, através do qual, foram realizados diversos treinamentos utilizando diferentes entradas, várias topologias e diferentes saídas, devido às várias combinações de classes. Dentre todos os treinamentos realizados, o treinamento escolhido para compor o classificador final foi o conjunto formado pelas 5 classes, obtido pela rede neural MLP com topologia de 20 neurônios de entrada, 40 neurônios na primeira camada intermediária, 20 neurônios na segunda cama intermediária e 5 neurônios na camada de saída, com taxa de aprendizagem igual a 0,9 e erro menor que 0,01, as 20 entradas foram selecionadas através da rede SOM e Gaussianas. O acerto obtido utilizando 135 RIs e pesos fixos foi de 89% de acerto total, Az igual a 0,98, falso negativo igual a 5% e falso positivo igual a 7%. O classificador apresentado nesse trabalho será acrescentado ao classificador já existente no esquema CAD em mamografia. / This work presents the proposal of a methodology for mammary nodules classification by their contour. The nodule bounder is had to interpret due to the low contrast of the mammographic images. Images used in the test obtained from the LAPIMO’s database a 135 of images, with information about the masses. From regions of interest (RÓIS) selected in such images texture, intensity and geometric features were extracted in order to characterize the patterns of nodules contour. After the features extraction two methods of features selection, were used: one using self-organizing map (SOM) neural networks together Gaussian distributions analysis and another using covariance matrix. The extracted features were the input for two neural networks, a multi-layer perceptron (MLP) and a SOM. Several trainings were accomplished using different inputs, several topologies and different exits, regarding several classes combinations. Among all of the trainings, the choice has corresponded to the group formed by 5 classes, obtained for the MLP neural networks in a topology of 20 input neurons, 40 neurons in the first intermediate layer, 20 neurons in the second intermediate layer and 5 neurons in the exit layer, with learning rate of 0.9 and error smaller than 0.01. The 20 inputs were selected by the SOM network together Gaussian distributions. The performance using 135 ROIs and fixed weights has registred 89% of right responses with Az = 0.98, false negative rate of 5% and false positive rate of 7%. The classifier presented in this work is being implemented in the general classifier as part of our group CAD scheme in mammography.

O câncer de mama é uma das principais causas de morte por câncer em mulheres em todo o mundo, apresentando-se como uma doença heterogênea composta por distintos subtipos associados a diferentes prognósticos clínicos, mas as bases moleculares que sustentam sua progressão tumoral ainda não estão completamente elucidadas. Evidências de estudos em larga escala apontam uma potencial participação da proteína EMC1 no desenvolvimento do câncer de mama, mas falham em avaliam seu papel específico na progressão e manutenção deste tipo de tumor. EMC1 faz parte de um complexo definido por dez proteínas presente no retículo endoplasmático denominado Endoplasmic Reticulum Membrane Complex, caracterizado recentemente com potencial papel no enovelamento e maturação de proteínas de membrana e na via secretória. Investimos deste modo na caracterização de EMC1 e no seu envolvimento com o câncer de mama. Utilizando um pequeno painel de linhagens tumorais de mama, mostramos por meio de qPCR que os níveis de RNAm de EMC1 estavam aumentados em linhagens consideradas mais agressivas. Duas linhagens tumorais de mama, MCF-7 e SKBR-3 foram utilizadas para expressão estável de EMC1 mediada pelo vetor plasmidial pcDNA3.1. Os efeitos foram notáveis apenas para a linhagem SKBR-3, que apresenta amplificação no locus HER-2, um receptor do tipo tirosina quinase da família EGFR envolvido em vias de invasão e proliferação celular. Observamos uma nítida alteração morfológica após a superexpressão de EMC1 nesta linhagem, sugerindo uma reprogramação para um fenótipo mesenquimal. As células adquiriram filopódios mais proeminentes e mostraram aumento em sua capacidade proliferativa e crescimento clonogênico, sob condições adesivas ou não, bem como aumento nas capacidades invasiva (transwell) e migratória (wound healing). Análises do ciclo celular por iodeto de propídeo indicaram um ligeiro aumento nas populações celulares nas fases S e G2/M em células superexpressando EMC1, corroborando os ensaios funcionais. Notamos também após a superexpressão de EMC1 um aumento na liberação de MMP-2, justificando o aumento na capacidade invasiva destas células. Os resultados dos ensaios funcionais comprovam as análises in silico realizadas nas quais identificamos uma correlação da expressão de EMC1 com proteínas envolvidas em funções no retículo endoplasmático e no processo de transição epitélio-mesenquimal. Avaliamos ainda o metabolismo celular quanto a funções mitocondriais como consumo de oxigênio utilizando um oxígrafo e quanto a geração de espécies reativas de oxigênio (EROs) através da marcação por DHE. A superexpressão de EMC1 levou à diminuição da respiração, ou seja, no consumo de oxigênio e também da produção de EROs, ao passo que os níveis de lactato foram aumentados, características associadas a maior malignidade de células tumorais de mama. Por fim, mostramos através de ensaio de tumorigênese in vivo utilizando camundongos nude que a superexpressão de EMC1 conduziu a formação de tumores mais agressivos e de maior volume. Em conjunto os dados sugerem um importante papel de EMC1 na progressão tumoral do câncer de mama, sobretudo na transição para estágios mais invasivos, servindo como potencial marcador diagnóstico e alvo para terapias futuras. / Breast cancer is a leading cause of cancer death in women worldwide. It presents as a heterogeneous disease composed of distinct subtypes associated with different clinical prognoses, but the molecular basis underlying their tumor progression are not yet fully comprehended. Evidence from large-scale studies suggests a potential involvement of EMC1 protein in the development of breast cancer, but fail to assess its specific role in the progression and maintenance of this type of tumor. EMC1 is part of a protein complex composed of ten different subunits associated to the endoplasmic reticulum (ER) and recently proposed to play a potential role in the folding and maturation of membrane proteins in the secretory pathway. Thus, our aim here was to do a functional characterization of EMC1 in breast cancer. Using a small panel of breast cancer cell lines, we showed higher EMC1 mRNA expression levels in the most aggressive cell lines, by qPCR. Two breast tumor cell lines, MCF - 7 and SKBR -3 were used for stable expression of EMC1 mediated by the plasmidial vector pcDNA3.1. The effects were remarkable only for the SKBR-3 cell line, which carries an amplification of the HER-2 locus, a tyrosine kinase receptor of the EGFR family, involved in cell proliferation and invasion. We observed a clear morphological change after overexpression of EMC1 in this cell line, suggesting a reprogramming to a mesenchymal phenotype. The cells acquired more prominent filopodia and showed an increase of their proliferative capacity and clonogenic growth upon adhesive and non-adhesive conditions, as well as an increase of invasive (collagen-coated transwell) and migratory (wound healing) properties. Analysis of the cell cycle by propidium iodide showed a slight increase in the cell population in S phase and G2/M for EMC1-overexpressing cells, corroborating other functional assays. Also, EMC1-overexpressing cells showed an increase in the release of MMP-2, which could explain the increase in the invasive capacity of these cells. The results of the functional assays confirm the in silico analysis performed in which we identified a correlation between the EMC1 expression with proteins involved in functions in the endoplasmic reticulum and in the epithelial-mesenchymal transition. We also evaluated the cellular metabolism and mitochondrial functions such as oxygen consumption using an oxygraph and the generation of reactive oxygen species (ROS) with DHE dye. Overexpression of EMC1 led to decreased respiration, i.e. oxygen consumption and also ROS production whereas lactate was increased, characteristics associated with increased malignancy of breast tumor cells. Finally, we show through in vivo tumorigenesis assay using nude mice that overexpression of EMC1 led to formation of more aggressive tumors. Together the data suggest an important role of EMC1 in tumor progression of breast cancer, especially in the transition to more invasive stages, serving as a potential prognostic marker and target for future therapies.

Submitted by Rosina Valeria Lanzellotti Mattiussi Teixeira (rosina.teixeira@unisantos.br) on 2016-02-20T13:58:02Z No. of bitstreams: 1 Katucha Rocha de Almeida.pdf: 1145204 bytes, checksum: 8da70f49b690eb6b7404c3f5f0a86b27 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-20T13:58:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Katucha Rocha de Almeida.pdf: 1145204 bytes, checksum: 8da70f49b690eb6b7404c3f5f0a86b27 (MD5) Previous issue date: 2015-12-10 / Introduction: Breast cancer is the most common type of cancer among women, in both developing and developed countries, represented by 25% of all types of diagnosed cancer. Mammography screening for breast cancer is a public health strategy in situations with high incidence numbers and mortality from cancer, as observed in Brazil. Objective: To analyze the performance of mammography screening in Praia Grande city female residents. Methods: A public survey in Praia Grande city, in the state of São Paulo. For the study on undergoing mammography screening exam among 50- to 69 year-old women, according to mammographic screening recommendations, a subsample of 257 women was used, with a non response rate of 0%. Results: Among the 50 to 69 female age-group (257), 70 (27%) underwent mammography screening in the 12 months prior to the survey, more than half (60%) used the public sector service. In the multivariate analysis, breast ultrasound was positively associated with mammography in the last 12 months. Conclusion: Women with recommended ages for tracking the Grand Beach County have low achievement of mammography. The awareness through implementation of public policies on the importance of this examination within what is recommended, to reduce the mortality from the disease, which is a leading cause of death among women in Brazil and worldwide. / Introdução: O câncer de mama é o tipo mais prevalente entre as mulheres, tanto em países em desenvolvimento quanto em países desenvolvidos, representado por 25% de todos os tipos de câncer diagnosticados. O exame de mamografia como rastreamento para o câncer de mama é uma estratégia de saúde pública em situações onde há elevados números de incidência e mortalidade pela neoplasia, como observado no Brasil. Objetivo: Analisar a realização do exame de mamografia em mulheres residentes do Município de Praia Grande. Métodos: Inquérito populacional no Município de Praia Grande, Estado de São Paulo. Para o estudo sobre realização do exame de mamografia entre mulheres de 50 a 69 anos, referente ao preconizado para realização de rastreamento mamográfico, foi utilizada para análise uma subamostra de 257 mulheres, com taxa de não respostas de 0%. Resultados: Das mulheres na faixa etária dos 50 aos 69 anos (257), 70 (27%) realizaram o exame de mamografia nos últimos doze meses que antecederam a pesquisa, sendo mais da metade (60%) pelo setor público. Na análise múltipla, manteve-se associada positivamente apenas a realização do ultrassom de mamas nos últimos doze meses. Conclusão: Mulheres com idades preconizadas para rastreamento do Município de Praia Grande apresentam baixa realização do exame mamográfico. A conscientização por meio de implementação de políticas públicas sobre a importância da realização deste exame dentro do que é preconizado, visa diminuir a mortalidade pela doença, que é uma das principais causas de morte entre as mulheres no Brasil e no mundo. Descritores: Mamografia; Rastreamento; Câncer

O câncer de mama ocupa o primeiro lugar em mortalidade dentre todos os tipos de câncer. O subtipo triplo-negativo (triple-negative breast cancer - TNBC) representa 15-20% de todos os tipos de câncer de mama com alta prevalência em mulheres pré-menopausa e destaca-se pelo seu grande tamanho tumoral e agressividade no estabelecimento de metástases, com impacto direto na redução da sobrevida dos pacientes. Apesar das evidências sobre os efeitos anti-tumorigênicos do exercício físico, tanto na prevenção como durante a carcinogênese, é comum que pacientes alterem sua rotina após o diagnóstico de câncer, frequentemente reduzindo as atividades físicas durante e após o tratamento. Em adição, os mecanismos pelos quais o exercício físico exerce papel anti-tumoral são pouco compreendidos. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do exercício físico aeróbico moderado em modelo experimental de câncer de mama de tipo triplo-negativo, com ênfase na modulação do metabolismo energético tumoral. Foram utilizados camundongos fêmeas BALB/c em desenho experimental de 12 semanas, cuja inoculação de 1x104 células 4T1 foi realizada após 8 semanas de treinamento. Após protocolo de exercício aeróbico moderado em esteira, foram realizadas análises do metabolismo mitocondrial tumoral, composição lipídica e expressão de genes relacionados à bioenergética e proliferação celular. Os resultados mostraram que o exercício aeróbico moderado reduziu 54,5% do volume e 42% da massa tumoral de animais que foram treinados antes e após a inoculação tumoral. Animais treinados apresentaram fosforilação oxidativa mais próxima ao seu limite máximo respiratório e menor respiração mitocondrial no tecido tumoral quando comparados ao grupo sedentário. O treinamento ocasionou redução no conteúdo de ácido fosfatídico e fosfatidilcolina. Enquanto a análise de expressão relativa de mRNA demonstrou aumento na expressão de genes relacionados à via metabólica glicolítica, como Hif1a, Glut-1, HKII, Ldha e Pdk, além dos supressores tumorais p53 e Lats2. Nossos resultados sugerem que a redução na velocidade de crescimento tumoral proporcionada pelo exercício físico aeróbico de carga moderada seja devida, pelo menos em parte, à modulação do metabolismo energético tumoral. Em conjunto, os dados do nosso estudo abrem novas perspectivas para a identificação de vias metabólicas sensíveis ao exercício físico, permitindo o melhor o entendimento de seus efeitos antitumorigênicos / Breast cancer ranks first in mortality among all types of cancer. The triple-negative breast cancer (TNBC) accounts for 15-20% of all types of breast cancer with a high prevalence in premenopausal women and is notable for its large tumor size and aggressiveness in the establishment of metastasis, with a direct impact on the reduction of patients\' survival. Altough evidence highlight the anti-tumorigenic effects of physical exercise both on the prevention as well as during carcinogenesis, patients commonly change their routine after cancer diagnostic, usually reducing physical activity during and after treatment. Moreover, the mechanisms underlying the anti-tumor role of physical exercise remain poorly understood. The objective of this study was to evaluate the effects of moderate aerobic physical exercise in an experimental model of triple-negative breast cancer, with emphasis on the modulation of tumor energy metabolism. Female BALB / c mice were used in a 12-week experimental design, whose inoculation of 1x104 4T1 cells was performed after 8 weeks of training. After the protocol of moderate aerobic exercise was carried out on the treadmill, analyzes of mitochondrial tumor metabolism, lipid content and qPCR of genes related to bioenergetics and tumorigenic process were performed. The results showed that moderate aerobic exercise reduced 54.5% of the volume and 42% the tumor mass of animals trained before and after tumor inoculation. Trained animals showed oxidative phosphorylation closest to the maximum respiratory limit and lower mitochondrial respiration in tumor tissue when compared to the sedentary group. The training resulted in a reduction in the content of phosphatidic acid and phosphatidylcholine. In the trained group, relative mRNA quantification analysis showed increased expression of genes related to the glycolytic metabolic pathway, such as Hif1a, Glut-1, HKII, Ldha, and Pdk, as well as of the tumor suppressors p53 and Lats2. Our results suggest that the reduction in tumor growth velocity provided by moderate-intensity aerobic physical exercise is due, at least in part, to the modulation of tumor energy metabolism. Together, data from our study open new perspectives for the identification of metabolic pathways sensitive to exercise, allowing better understanding of its anti-tumorigenic effects

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study had as objective to identify the pointed stressors by the nursing team in the care of woman with breast cancer, as well as knowing the confrontation strategies more used by them. It is a descriptive field research, with quantitative boarding, developed in the Tocogynecological Unit of the Hospital Universitário de Santa Maria, Rio Grande do Sul. Two instruments were used: Daily Activities in Tocogynecological Unit Survey Form, adapted from Bianchi, and Jalowiec Coping Inventory. After the collection, data had been organized in an electronic spread sheet, on Excel program (Office, 2007), creating a data base, in which the study variables had been distributed, so that, later, they could be analyzed electronically with SAS - 8.02 version and Statistica - version 7.1. The evaluation of Daily Activities in Tocogynecological Unit Survey Form trustworthiness was carried through by the analysis of the internal consistency of its items, by Cronbach s Alpha Method. Through the results it was verified that the studied population was composed by 26 women, married, with predominant age between the 41-50 years old, with children, working in the institution between 11-15 years and in the unit between 1-5 years. The subjective demands in the care had been identified as more stressing and interpersonal relationship as less stressing. It was observed that 46.15% of these women had gotten low level of stress, 30.77% average level, 15,38% stress alert and 7,70% with the highest level. The style of coping more used was the optimist for 40% of the population, confirming the formulated hypothesis. / Este estudo teve como objetivo identificar os estressores apontados pela equipe de enfermagem no cuidado à mulher com câncer de mama, assim como conhecer as estratégias de enfrentamento utilizadas pela mesma. Trata-se de uma pesquisa descritiva, de campo e com abordagem quantitativa desenvolvida na Unidade Tocoginecológica do Hospital Universitário de Santa Maria, Rio Grande do Sul. Foram utilizados dois instrumentos: Formulário para o Levantamento das Atividades Diárias em Unidade Tocoginecológica, adaptado de Bianchi, e Inventário de Coping de Jalowiec. Após a coleta, os dados foram organizados em uma planilha eletrônica, no programa Excel (Office, 2007), criando um banco de dados, no qual foram distribuídas as variáveis do estudo, para que, posteriormente, pudessem ser analisadas eletronicamente com o auxílio dos programas SAS versão 8.02 e Statistica versão 7.1. A avaliação da confiabilidade do instrumento Formulário para o Levantamento das Atividades Diárias em Unidade Tocoginecológica foi realizada pela análise da consistência interna dos itens que o compõem, pelo Método do Coeficiente Alfa de Cronbach. Pelos resultados verificou-se que a população estudada foi composta por 26 mulheres, casadas, com idade predominante entre 41 a 50 anos, com filhos, com tempo de serviço na instituição entre 11 a 15 anos e na unidade entre um e cinco anos. As demandas subjetivas no cuidado foram identificadas como as mais estressantes e o relacionamento interpessoal como menos estressante. Observou-se que 46,15% dessas mulheres apresentaram baixo nível de stress, 30,77% médio nível, 15,38% obtiveram estado de alerta para o nível de stress e 7,70% com stress altíssimo. O estilo de coping mais utilizado foi o otimista para 40% da população, confirmando a hipótese formulada.