Orientadores: Hernandes Faustino de Carvalho, Sebastião Roberto Taboga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T04:21:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Scortegagna_Eduardo_M.pdf: 5435777 bytes, checksum: f6a3837f18256c23bc06d3b5042554ba (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: As células musculares lisas da próstata humana foram estudadas ao microscópio eletrônico de transmissão, a partir de amostras obtidas por prostatectomia radical em casos de carcinoma da próstata. As células musculares lisas apresentam-se comumente formando feixes, nos quais elas aparecem intimamente associadas com as vizinhas, sendo que as membranas basais de células adjacentes mostram-se únicas. Com o desenvolvimento tumoral, nas áreas de proliferação epitelial em tumores com graus intermediários de diferenciação glandular, inicia-se um acúmulo de matriz extracelular entre as células vizinhas, sendo que as membranas basais tomam-se únicas para cada célula, refletindo a perda dos contatos homotípicos. Com a invasão tumoral, nos tumores altamente indiferenciados, as células musculares lisas apresentaram três fenótipos distintos: atrófico, ativado e degenerado. As células atróficas possuem uma proporção núcleo/citoplasma elevada, com notada diminuição do componente contrátil e com membrana basal menos desenvolvida e comumente interrompida. O fenótipo ativado mostra acúmulo de material vesicular nas regiões periféricas e intenso pregueamento da superfície celular em regiões de íntimo contato com elementos fibriJares da matriz extracelular. Em algumas células nota-se um aumento na proporção de organelas como retículo endoplasmático granular e Golgi, em detrimento do cito esqueleto. O fenótipo degenerado possui citoplasma bastante reduzido, com núcleo colapsado e com espaço perinuclear expandido, sendo que a membrana basal está interrompida. Uma série de prováveis conversões entre estes fenótipos das células musculares lisas é proposta. As modificações das células musculares lisas parecem decorrer da perda da sinalização proveniente do epitélio e também a partir da degradação da membrana basal por enzimas produzidas pelas células tumorais / Abstract: The smooth muscle cells of the human prostate were studied at the electron microscopy level from samples of radical prostatectomy in cases of prostate carcinomas. The smooth muscle cells are found in bundies, in which they are intimately associated to each other and with fused basement membrane. With the tumor progression, in the areas of glandular proliferation in the intermediary graded tumors, there is an accumulation of extra cellular matrix between the smooth muscle cells, which loose the homotypic contacts and acquire individualized basement membranes. With the stromal invasion by the epithelial cancer cells, the smooth muscle cells show three different phenotypes: atrophic, activated and degenerated cells. The atrophic cells show a diminished cytop1asmlnucleus ratio, with a marked loss of the contractile component and showing a reduced and frequently disrupted basement membrane. The activated phenotype shows an accumulation of vesicular material at the cell periphery and intense folding of the cell surface in regions of intimate contact with extracellular fibrillar components. Some cells had an increase in the amount of organelles such as the rough endoplasmic reticulum and Golgi while the cytoskeleton is diminished. The cells of the degenerated phenotype have a reduced cytoplasm, collapsed nuclei and expanded perinuclear spaces. The basement membrane around these cells is disrupted A series of conversions between these smooth muscle cell phenotypes is proposed. The modifications observed in this study seem to occur by the lack of a proper stimulation by the epithelium and or from the degradation of the basement membrane by proteolytic enzymes produced by the tumor cells / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Clarice Weis Arns / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T02:26:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Domingues_HelenaGallicchio_M.pdf: 3430595 bytes, checksum: ec59d99db25139771cd4d4d2b1ba15b4 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Neste trabalho foram adaptados e padronizados dois ensaios imunoenzimáticos (dot ELISA e S-ELISA), para auxiliar 110 diagnóstico do vírus respiratório sincicial bovino (BRSV). A amostra vira! padrão, BRSV -25-BR isolada 110 Brasil foi utilizada nos dois ensaios, tendo sido produzida em célula CER e processadas por ultracentrifugação em gradiente descontínuo de sacarose 30-55% (v/v). Foram analisadas 423 amostras de sorosco1etados nos principais centros de bovinocultura do país. as quais foram submetidas ao teste padrão de soroneutralização (SN). onde 67,8% das amostras foram positivas. A técnica de dot-EUSA, utjlizando O.7/µg de proteína purificada por disco, detectou 71,6% deamostras positivas, apresentando uma sensibilidade de 92.3% e especificidade de 71,3%. Oteste de S-EUSA, utilizando 3,0 µg de proteina bruta por poço, detectou 72.5% de amostras positivas, com sensibilidade de 91.6% e especificidade de 68,4%. Por meio dos dados coletados, valida-se os testes de S-ELISA e dot-ELISA para a detecção de anticorpos anti-BRSV como alternativa para o uso em laboratório e no campo / Abstract: Two Enzyme-Linked Immunosorbent Assay techniques (dot-ELISA e S-ELISA) were developed to detection of antibodies against Bovine Respiratory Syncytial Virus (BRSV). The antigen was produced in Chicken Embroyo Related (CER) continuous cell line, inoculated with virus strain , BRSV-25-BR, isolated in Brazil, and it was processed by centrifugation 1hrougb a discontinue sucrose gradient (30-55% p/v). Four hundred twenty three bovine serum samples were analised by the standard test of serum neutralization (SN), and 67,8% were positive. Dot-ELISA test was standardized, utilizing 0,7 .µg of purified BRSV protein per nitrocelulosis disc, anel 3,0 µg per well in the S-ELISA test. The dot-ELISA test detected 71,6% of positives serum samples, showing a sensitivity of 92,3% and a specificity of 71.3%. The S-ELlSA test, detected 72,5% of positive serum samples. with a sensitivity of 91,6% and specificity by 68,4%. These results show that dot-ELISA and S-ELISA tests may be an option to detect anti-BRSV antibodies in labarotory and field / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador : Giberto da Assunção Fernandes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T15:49:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ruocco_HeloisaHelena_D.pdf: 3955364 bytes, checksum: c05871913344ed857e9c81f61d86d467 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Centralmente aplicada, a Substância P (SP) interage com o sistema nervoso autônomo (SNA) e com o eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (IlliA). Sabendo-se que esses sistemas modulam a função imune inata e têm sido implicados na resposta inflamatória associada com doenças auto-imunes, os efeitos da administração de SP intracerebroventricular (i.c.v.) na quantificação de linfócitos e na atividade citotóxica"natural killer" (NK) de células esplênicas foram estudados na Encefalomielite Alérgica Experimental (EAE), um modelo de estresse inflamatório crônico. Neste trabalho investigou-se a influência da SP e do seu antagonista sobre as subpopulações celulares CD3+, CD4+, CD8+, CDJNKR-PI+, CD3~-PI+, quantificadas por citometria de fluxo e a atividade imunológica citotóxica NK, obtida por ensaio de liberação de cromo radioativo CrSI, no curso desse processo inflamatório. A possibilidade de avaliar a atividade do eixo IlliA nessa doença foi verificada pelas dosagens hormonais séricas do hormônio adrenocorticotrófico (ACTH) e corticosterona, e da arginina vasopressina (A VP), na eminência média. Os resultados mostraram que na EAE houve um aumento no baço nos subtipos celulares CD3+ (64,2 :!: 0,8 %), CD4+ (59,6 :!: 0,6 %), CD8+ (14,5 :!: 0,5 %) e CDTNKR-PI + (8,8 :!: 0,3 %) às custas de uma atividade esplênica citotóxica NK (5,2 :!: 0,6 %) significativamente menor que nos controles normais [CD3+ (47,8 :!: 2,2 %), CD4+ (45,6 :!: 1,3 %), CD8+ (10,7 :!: 0,4 %), CD3NKR-PI+ (4,9 :t 0,4 %), NKac (8,9 :!: 0,7 %), CD3~-PI+ (1,6:!: 0,2 %) , ACTH (10,2 :!: 1,4 pg/rnl), corticosterona (2,2 :!: O ng/rnl)]. Esses dados foram correlacionados a um aumento dos níveis plasmáticos de ACTH (92,2 :!: 38,5 pg/rnl) e corticosterona (152,1 :!: 42,5 ng/rnl). A administração de 20 nrnoles de SP aumentou a retenção de células CD4+ (5I,3:!: 1,7 %) e CD8+ (I5,0:!: 0,8 %) no baço, com um aumento da porcentagem de células CD3NKR-Pl+ (10,4 :!: 0,9 %) e conseqüente diminuição da citotoxicidade NKac (5,4 :!: 0,6 %) no pico dos sintomas clínicos, comparados aos controles salina [CD4+ (41,2 :!: 4 %), CD8+ (1I,8:!: 1,5 %), CD3NKR-PI+ (6,5:!: 1,7 %), NKac (7,6:!: 0,2 %), ACTH (47,1 :!: 6,1 pg/rnl), corticosterona (120,3 :!: 17,8 ng/rnl)]. Isto foi acompanhado por um decréscimo nos níveis dos hormônios adrenocorticotróficos (21,3 :f: 2,3 pg/rnl) e corticosterona (44,1 :f: 16,2 ng/mI). As células CD3~-P1+ [antagonista + salina (0,5 :f: 0,04 %) e antagonista + SP (0,6:f: 0,1 %)], um outro tipo celular implicado na auto-imunidade, foram reduzidas pela injeção do antagonista da SP, quando comparadas ao grupo salina (1,3 :f: 0,1 %), sugerindo um papel para a SP no fluxo migratório desse tipo celular no baço. Concluindo, os dados obtidos neste trabalho sugerem que a SP influencia o eixo HHA , podendo também modular o tráfego celular linfocitário e a resposta imune no baço e, portanto, deve ser um elemento importante nos processos de modulação da EAE / Abstract: Substance P centrally injected (ICV) in rats acts on the autonomic nervous system and the hypotha1amic-pituitary-adrenal axis (HPA) to moduJate innate llmnune function and iDf1ammatory response in autoimmune diseases. The effects of modulation in migration and in natural killer cell activity of splenocytes in these systems were studied in experimental allergic encephalomyelitis (EAE) a model of autoimmune disease which acts as a chronic inf1ammatory stress. The migration characteristics observed by flow citometry were ofthe CD3+, CD4+, CD8+, CD3+m<R-Pl+ and NKT splenocyte subpopulations. The innate llmnune function measured was that of the cytotoxic NK activity measured by CrSI liberation assay in the peak of the inflammatory processo The hypothaJamic-pituitaryadrenal axis alterations were measured by quanti.fying the plasma hormone levels of adrenocorticotropic hormone (ACTH) and corticosterone and the median eminence values of arginine vasopressin. In this chronic inflammatory model was observed an increased retention in the spleen ofCD3+ (64,2:J: 0,8 %), CD4+ (59,6:J: 0,6 %), CD8+ (14,5:J: 0,5 %) and CD3+m<R.-Pl+ (8,8:J: 0,3. %) cellular subtypes with a dimini~hed NK cytotoxic activity (5,2:J: 0,6 %) when compared to healthy control rats [CD3+ (47,8 :J: 2,2 %), CD4+ (45,6 :J: 1,3 %), CD8+ (10,7 :J: 0,4 %), CD3+m<R.-Pl+ (4,9 :J: 0,4 %), NK cytotoxic activity (8,9:J: 0,7 %), ACTH (10,2 :J: 1,4 pg/m1), corticosterone (2,2 :J: O ng/m1)].. There was a inverse correlation with high levels of ACTH (92,2 :J: 38,5 pg/ml) and corticosterone (152,1 :J: 42,5 ng/ml): Substance P 20 nanomols ICV injected also increased the retention ofCD4+ (51,3 :J: 1,7 %), CD8+ (15,0:J: 0,8 %) and CD3+m<R-~I+ (10,4:J: 0,9 %) in the spleen ofEAE rats with a lower NK cytotoxic activity (5,4 :J: 0,6 %) in the peak ofthe clínical symptoms and decreased levels of ACTH (21,3 :J: 2,3 pg/ml) and corticosterone (44,1 :J: 16,2 nglml) when compared to injected saline controls [CD4+ (41,2 :J: 4 %), CD8+ (11,8 :J: 1,5 %) and CD3-+m<R-Pl+ (6,5 :J: 1,7 %) NK cytotoxic activity (7,6:J: 0,2 %), ACTH (47,1 :J: 6 pglm1), corticosterone (120,3 :J: 17,8 ng/m1) ]. When treated with a substance P antagonist NKT cells presented a decreased splenic retention [antagonist + saline (0,5 :J: 0,04 %) e antagonist + SP (0,6 :J: 0,1 %)] when compared to saline-treated group (1,3 :J: 0,1 %), suggesting a role for substance P in the migration control ofthis type of cell. We can conc1ude that the results ofthis work suggest a role for substance P in the moduJation of the HP A axis, to the lymphocyte traffic control and to the innate immune response in chronic autoimmune inflammatory diseases / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Carlos Lenz Cesar / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Fisica "Gleb Wataghin" / Made available in DSpace on 2018-07-28T13:57:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fontes_Adriana_M.pdf: 2420460 bytes, checksum: da3f454caa671a391f2aa2aebc43f49e (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Neste trabalho usamos uma Pinça Óptica para quantificar propriedades essenciais responsáveis pelo bom desempenho da hemácia na corrente sangüínea. A Pinça Óptica consiste basicamente de um laser infravermelho que, quando focado no interior de uma partícula biológica de índice de refração maior do que o do meio onde está, é capaz de capturá - la e movimentá - la sem lhe causar danos. Usamos também essa microferramenta para medir forças da ordem de piconewtons em microesferas em função de seu deslocamento e dessa forma realizar uma calibração de um medidor de forças da ordem de piconewtons. Essas aplicações são feitas obrigando hemácias ou microesferas a se movimentarem em um fluido apropriado com velocidades controladas pelo computador. Finalmente apresentamos uma outra microferramenta chamada Bisturi Óptico. Ela é composta de um laser pulsado operando no verde com o qual podemos produzir cortem em paredes e membranas celulares por absorção de luz transformada em calor. Acoplando a Pinça Óptica ao Bisturi Óptico fizemos manipulações biológicas tais como cortes em paredes vegetais e transporte de organelas entre células / Abstract: In this work we used an Optical Tweezer to quantify essential properties responsible for the efficiency of red blood cells in the blood stream. The Optical Tweezer consists basically of a infrared laser that, when focussed inside a biological particle, is capable of capturing and moving this particle with no harm to it. We also used this microtool to measure forces of piconewton order in microspheres in function of their displacements. Both, the calibration of the piconewtometer and the elasticity of red blood cells, were done by moving the trapped object in a field of hidrodynamical forces in viscous liquids with computer controlled speeds. Finally we present another microtool, called Optical Scissors. It consists of a pulsed laser operating in the green range which allowed us to produce custs and punched holes in walls and membranes of cells by absorption of light tranformed into heat. By couping the Optical Tweezer to the Optical Scissors we succeed in making biological manipulations such as punch holes in vegetable cellular walls to transport organelles between two neigbouring cells / Mestrado / Física / Mestre em Física

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T15:43:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Siviero_MaristelaPretto_M.pdf: 4226497 bytes, checksum: eaef7b20c867dc6e48267758553fc51d (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Este trabalho examinou o comportamento das células musculares lisas durante o desenvolvimento de carcinomas da próstata humana. Amostras de material obtido por ressecção transuretral ou por prostatectomia radical foram analisados após coloração com o tricrômico de Masson ou após imunocitoquímica com anticorpos anti-a-actina de músculo liso, anti-colágeno tipo IV e anti-laminina. Tanto a coloração com o tricrômico de Masson, quanto a marcação imunocitoquímíca com o anticorpo anti- a-actina de músculo liso revelaram aspectos morfológicos das células musculares lisas. Nestas preparações, as células musculares lisas são, a princípio, segregadas para a periferia das áreas de proliferação epitelial, nos graus de diferenciação tumoral baixos (Gleason = 1 e 2). Progressivamente as células musculares lisas perdem as associações homotípicas, tornam-se mais curtas e atróficas, e são encontradas isoladas no estroma (Gleason = 2-4), sendo que os espaços entre elas são preenchidos por matriz extracelular. Com a invasão epitelial (Gleason 5), as células tumorais ocupam os espaços entre as células musculares lisas, que se tornam ainda menores e adotam um aspecto espinhoso. A membrana basal, identificada pelos anticorpos anti-colágeno IV ou anti-laminina. é fundida entre as células musculares lisas adjacentes, demonstrando a sua íntima associação na formação de feixes musculares, nas áreas não afetadas. Com o desenvolvimento tumoral, elas se tormam progressivamente individualizadas. Com a invasão tumoral, a membrana basal das células musculares lisas apresenta-se irregular e às vezes interrompida. A atrofia das células musculares lisas parece ser um padrão de comportamento durante o desenvolvimento dos carcinomas da próstata humana, sendo a degradação da membrana basal um evento marcante neste processo, embora ela possa ser uma resposta secundária, acompanhando as modificações gerais associadas com estas células / Abstract: This work has examined the behavior of the smooth muscle cells during the establishment and progression of prostate carcinoma. File material corresponding to transuretral ressections or radical prostatectomy were analysed after staining with Masson' s trichrome or afier immunocytochemistry against smooth muscle a-actin, type IV coUagen and laminin. Both Masson's trichrome staining and immunocytochemistry with the anti-smooth muscle a-actin antibody revealed similar morphological aspects of the smooth muscle cells. The pattem observed corresponded to a segregation of the smooth muscle cells out of the proliferating epithelial structures, in the low grade tumor areas (Gleason's score = I and 2). Progressively the smooth muscle cells loose the homotypic associations, become shorter and atrophic, and are isolated in the stroma (Gleason's score = 2-4). As the epithelial cancer cells invade the stroma, they occupy the spaces between the smooth muscle cells, which become shorter and adopt a spinous aspecto The basement membrane, identilled by the anti-type IV collagen and anti-laminin, is fused between adjacent smooth muscle cells in the non-affected areas, demonstrating the intimate association between them. With tumor progression, the basement membrane becomes progressively individualized, in accordance with the isolation observed morphologically. With the tumor invasion, the basement membrane of the smooth muscle cells are irreguJar, interrupted and less intensely stained. The atrophy of the smooth muscle cells seems to be a general phenomenon during carcinoma progression in the human prostate and the degradation of the basement membrane is a marked event of this process, even though it may be a secondary reaction, following the general modifications associated with these cells / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T06:06:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_ElianeAparecidadeAndrade_M.pdf: 3877752 bytes, checksum: 8e8fdcf07bdeab337b2c3cf008f23e49 (MD5) Previous issue date: 2002 / Mestrado

Orientador : Albina Messias Altemani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T04:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kulka_AnaClaudiaPenteadoBarbosa_M.pdf: 7325894 bytes, checksum: a9eb3d975e43a8ba2be504ee55bb51a3 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Os linfomas de células T/NK são altamente associados ao EBV e mais freqüentes na Ásia do que no Ocidente. Na América Central e do Sul há raros estudos sobre o linfoma TINK, os quais mostraram predominância acentuada deste fenótipo nos descendentes dos ameríndios, favorecendo a hipótese da predisposição racial para a doença. O presente trabalho estuda 25 linfomas não Hodgkin, que comprometiam a região medial da face. O linfoma de células T/NK (16/25) foi mais freqüentemente encontrado do que o linfoma de células B (9 casos, todos de grandes células B) e ocorreu predominantemente na cavidade nasal. Na análise imunoistoquímica, os linfomas de células T/NK foram positivos para CD3 e CD56 e apresentavam numerosas células linfóides EBER - 1 positivas. Embora a doença estivesse localizada em 61% dos casos no momento do diagnóstico, não foi observada nenhuma tendência para cura. A distribuição racial dos pacientes com linfoma de células T/NK foi semelhante àquela encontrada no linfoma de células B. Linfócitos EBV positivos foram encontrados mais freqüentemente na adenóide do que na amígdala, enquanto que as lesões inflamatórias do palato e nariz foram negativas. Na nossa amostra a freqüência relativa de linfoma sinonasal de células T/NK versus células B foi alta e semelhante àquela observada em outros países da América Latina. Entretanto, não encontramos qualquer associação racial com o fenótipo T/NK e o tumor apresentou comportamento agressivo semelhante ao que é descrito na Ásia. A alta freqüência de linfócitos EBV positivos no tecido linfóide da nasofaringe (adenóide) sugere que este tecido poderia servir de reservatório para o vírus / Abstract: Nasal TINK.-cell lymphomas are highly associated with Epstein-Barr virus (EBV). They are more frequent in Asia than in Westem countries. In Central and 80uth America there are few studies about nasal TINK.-celllymphoma and they have shown a strong predominance of this phenotype in Native American descents, supporting the hypothesis of a racial predisposition for the disease. We studied the lymphomas involving midline facial region at a brazilian institution. TINK. cell lymphomas (16/25) were more frequently found compared to B lymphomas (9 cases, all B large cell). TINK cell lymphomas involved predominantly the nasal region. Histologically they showed angioinvasion and necrosis. All of them were positive for CD3 and CD56 and showed umerous tumor cells labelled by EBER-l. Although disease was localized in 61% at diagnosis, there was no tendency to c~e. The racial distribution ofpatients with TINK-cell phenotype was similar to that found in B-celllymphomas. EBV was more frequently found in adenoids than in palatine tonsils. In inflammatory lesions ofthe nasal and palatal regions EBV was not found. In the present study the relative frequency of TINK versus B cell sinonasal lymphomas was high and similar to that observed in other Latin American countries. However, there was not any racial association with TINK-cell phenotype and the tumor showed an agressive behavior similar to that reported in Asia. The high frequency of EBV-positive lymphocytes in nasopharyngeal lymphoid tissue (adenoids) suggests that they could serve as a reservoir for the virus / Mestrado / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Shirlei Maria Recco-Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:07:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SiqueiraJunior_Sergio_M.pdf: 2850231 bytes, checksum: bd060ed8a07f649c5e90c0abc57110d4 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: No gênero Eleutherodactylus estão incluídas aproximadamente 700 espécies que dada a diversidade de espécies apresenta relações taxonômicas e filo genéticas confusas. A falta de estudos de espécies existentes na América do Sul dificulta a confirmação de hipóteses sobre o relacionamento de espécies desse gênero. Eleutherodactylus apresenta uma acentuada variação no número (2n=18 a 36) e na morfologia cromossômica, característica incomum em anuros que, em geral, possuem cariótipos bastante conservados dentro dos gêneros. No Brasil são registradas mais de 50 espécies, muitas destas simpátricas, sendo que os estudos citogenéticos existentes se restringem à descrição do cariótipo de doze espécies. As espécies do sul e sudeste do Brazil foram incluídas em três grupos: binotatus, lacteus and parvus. Posteriomente, E. guentheri e três outras espécies proximamente relacionadas foram excluídas do grupo de E. binotatus e incluídas no grupo guentheri. Neste trabalho, descrevemos o cariótipo de E. parvus pela primeira vez e re-analisamos os cromossomos de E. guentheri e E. binotatus, além de compararmos populações coletadas no continente e em ilha (Ilha Bela - separada do continente há aproximadamente 11.000 anos). As três espécies foram estudadas utilizando as técnicas de bandamento C para detecção de heterocromatina, impregnação por prata e hibridação in situ para localização de regiões organizadoras do nucléolo e DNAr, respectivamente, além da análise dos cromossomos em meiose. o cariótipo de E. guentheri apresentou sete pares de cromossomos metacêntricos (1, 5, 6, 8, 9, 10 e 11), dois pares submetacêntricos (2 e 3) e dois pares subtelocêntricos (4 e 7). Constrições secundárias foram observadas, adjacentes ao centrômero no braço curto dos pares 5 e 6 e no braço longo dos pares 2 e 6, e intersticiais nos braços curtos dos pares 5 e 9. O cariótipo de E. parvus é muito similar ao de E. guentheri, diferindo apenas pela morfologia do par 2, metacêntricos naquela espécie. Essa diferença se deve à presença de uma constrição secundária intersticial no braço curto desse par em E. parvus. Foram também observadas constrições secundárias nos dois braços do par 6 e da mesma maneira que em E. guentheri, a constrição secundária do braço longo do par 6 está associada à NOR e apresentou heteromorfismo entre os homólogos. O cariótipo de E. binotatus apresentou dois pares de cromossomos metacêntricos (4 e 7), quatro pares submetacêntricos (1, 2, 6 e 9), dois pares subtelocêntricos (3 e 5) e três pares telocêntricos (8, 10 e 11), e difere dos cariótipos de E. guentheri e E. parvus em morfologia e tamanho dos cromossomos, em número de braços cromossômicos, na localização da NOR, detectada no braço menor do par 1, e pelos padrões de heterocromatina. Estes dados citogenéticos indicam proximidade entre E. guentheri e E. parvus e corroboram a diferença entre E. guentheri e E. binotatus, podendo reforçar a existência de dois agrupamentos. Comparando-se os cariótipos de E. guentheri e E. parvus com os cariótipos de E. holti e E. lacteus - analisados por coloração convencional por outros autores - pode-se verificar maior semelhança entre os cariótipos dessas quatro espécies do que destas com E. binotatus. Além disso, pode-se sugerir que, possivelmente, a diferenciação cariotípica dessas quatro espécies ocorreu por rearranjos cromossômicos envolvendo principalmente o grupo de cromossomos menores, já que os seis cromossomos maiores são morfologicamente muito similares. Cinco indivíduos de E. binotatus apresentaram um dos homólogos dos pares 2 e 3 com tamanhos diferentes, tornando-os metacêntrico e submetacêntrico, respectivamente. Sugerimos que estes morfos possam ter surgido por translocação. Eleutherodactylus binotatus apresentou ainda anéis multivalentes na diacinese meiótica indicando a ocorrência de translocações múltiplas. Algumas metáfases mitóticas exibiram quebras cromossômicas espontâneas, sugerindo a existência de alguns sítios de fragilidade nesse cariótipo. Esses eventos podem ter levado a rearranjos cromossômicos que modificaram a morfologia dos cromossomos desse cariótipo. A hipótese de que o isolamento geográfico existente entre as populações de E. guentheri e E. binotatus analisadas poderia ser eficiente em promover diferenças citogenéticas não foi confirmada, já que não foram observadas diferenças entre os cariótipos de espécimes da ilha e do continente para essas duas espécies / Abstract: The genus Eleutherodactylus contains nearly 700 species and, due to the diversity of species it presents confused filogenetic and taxonomic relationships. The lack of biological data for the South American species of Eleutherodactylus hampers our undestanding on the relationship of the species of this genus. Eleutherodactylus species show considerable variation in their chromosomal number (2n=I8 to 36) and morphology. Such variation is uncommon in anurans, which, in general, have conserved karyotype within a genus. In Brazil more than 50 species are registered, many of these species are simpatrics, being the existing cytogenetic studies restricted to the karyotype description of 12 species. The species occurring in southern and southeastern Brazil were inc1uded in three species groups: binotatus, lacteus and parvus. Later, E. guentheri and three c1osely related species were excluded of the E. binotatus group and inc1uded in a E. guentheri group species. In this work, we describe the karyotype of E. parvus for the first time and re-ana1yze the chromosomes of E. guentheri and E. binotatus and also compare specimens from the continent and island. These three species were studied using the techniques of C-banding for heterochromatin detection, silver staining and in situ hybridization for the localization of nuc1eolar organizer regions and rDNA, respectively, beyond the ana1ysis of the chromosomes in meiosis. The karyotype of E. guentheri consisted of seven pairs of metacentric chromosomes (1, 5, 6, 8, 9, 10 and 11), two pairs of submetacentrics (2 and 3) and two pairs of subtelocentrics (4 and 7). Secondary constrictions were observed on the short arms of pairs 5 and 6, on the long arms of pairs 2 and 6 (a1l adjacent to the centromere) and on the short arms of pairs 5 and 9. The karyotype of E. parvus was very similar to that of E. guentheri, differing only in the morphology of pair 2, which was metacentric in the former species. This difference is related to the presence of an interstitial secondary constriction on the short arm of this pair in E. parvus. Secondary constrictions were a1so found in the two arms of pair 6 and, similarly to E. guentheri, the secondary constriction of the long arm of pair 6 is associate with the NOR and showed heteromorphism between the homologous. The karyotype of E. binotatus showed two pairs of metacentric chromosomes (4 and 7), four pairs of submetacentric (1, 2, 6 and 9), two pairs of subtelocentric (3 and 5) and three pairs of telocentric chromosomes (8, 10 and 11) and, it differed from the karyotypes of E. guentheri and E. parvus in morphology, size and number of chromosomic arms, in the localization of the NORs in the shorter arm of pair 1 and, finally, in the pattern of heterochromatin. These cytogenetic data indicate a greater proximity beetwen E. guentheri and E. parvus and, corroborate the difference between E. guentheri and E. binotatus, wich can reinforce the existence of two groups. Comparing the karyotypes of E. guentheri and E. parvus to those of E. holti and E. lacteus - analyzed by conventional staining by other authors - they were much more similar to each other than to E. binotatus. The divergence in the karyotypes of E. guentheri, E. parvus, E. lacteus and E. holti, appears to have involved chromosome rearrangements in the group of the smaller chromosomes, since the six largest pairs are morphologically very similar. Five specimens of E. binotatus showed size heteromorphism in one of the homologues of pairs 2 and 3, becoming metacentric and submetacentric, respectively. These morphs could have appeared by translocation. Eleutherodactylus binotatus also showed mutiple rings in the meiotic diakinesis, indicating the occurrence of multiple translocations. Some mitotic metaphases of E. binotatus showed spontaneous chromosome breaks, suggesting the existence of some fragility sites on this karyotype. These events could have resulted on the chromosomic rearrangements that modified the morphology of the chromosomes on this karyotipe. Our hypothesis that the geographic (sea) barrier, found between the E. guentheri and E. binotatus populations, would be efficient to promote cytogenetic differences was not confirmed, since no karyotypic variation was observed between continent and island populations ofthese species / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Elemir Macedo de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:51:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daldon_PatriciaEricaChristofoletti_D.pdf: 2506785 bytes, checksum: 2570df09df3bf90b34832861f353385f (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O lúpus eritematoso hipertrófico (LEH) é uma variante distinta e rara do lúpus eritematoso (LE) que se caracteriza por lesões verrucosas, crônicas e resistentes ao tratamento. Este trabalho tem por objetivo estudar as características clínicas e histopatológicas do LEH. Quatorze pacientes com LEH foram selecionados de um grupo de 220 pacientes com diferentes formas de LE, atendidos no Serviço de Dermatologia da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), no período de 1976 a 2002. Todos os pacientes apresentavam placas verrucosas concomitantes às lesões discóides. O sítio de predileção das lesões verrucosas foi a face e os membros superiores. A análise histológica das lesões de LEH revelou hiperplasia pseudo-epiteliomatosa da epiderme, envolvendo o material elastótico. As fibras elásticas foram observadas migrando pela epiderme. As características clássicas de LE estavam presentes em todos os casos. Três pacientes desenvolveram lesões papulosas com centro queratótico em locais prévios de lúpus. Essas lesões eram clínica e histopatologicamente semelhantes ao queratoacantoma. Em um único paciente, a lesão de LEH progrediu para carcinoma espinocelular (CEC), vinte e seis anos após o início da doença. A eliminação transepidérmica de material elastótico pode ser uma característica do LEH. Algumas lesões de LEH podem apresentar-se como queratoacantomas, mas as características clássicas de LE auxiliam no diagnóstico correto. O carcinoma espinocelular pode desenvolver-se em uma lesão de LEH após longa evolução; portanto, o LEH requer seguimento clínico e histopatológico / Abstract: Hypertrophic Lupus Erythematosus (HLE) is a distinct and rare subset of Lupus Erythematosus (LE). It is characterized by verrucous lesions, chronic in its course, and resistant to treatment. The purpose of this study was to identify clinical and histological characteristics of HLE. We review our experience with 14 cases of HLE identified in a group of 220 patients with different forms of LE, at the UNICAMP Hospital, between 1976 and 2002. All patients presented verrucous plaques concomitantly with discoid lesions. The most common sites of involvement were the face and the arms. Histology of HLE lesions revealed pseudoepitheliomatous hyperplasia engulfing elastotic material. Elastic fibers were seen in migration throughout the epidermis. Classic features of LE were noted in all cases. Three of the patients developed hyperkeratotic papules with central keratinous plug on their arms at the previous LE sites. These lesions resemble clinically and histopathologically keratoacanthomas. In one single patient, HLE lesion progressed to squamous cell carcinoma (SCC) twenty-six years after the onset of the disease. Transepithelial elimination of the elastotic material may be a feature of HLE. Some HLE-lesions may present as keratoacanthoma, but classical features of LE aid the correct diagnosis. Squamous cell carcinoma may arise on a long-standing HLE-lesion, therefore HLE requires clinical and histopathological follow-u / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Selma Candelaria Genari / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:12:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbieri_GrazieliNogueiraFarias_M.pdf: 1438246 bytes, checksum: be15c30fb4ec573590a0b5c9f593b5da (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O tamoxifeno é um agente anti-estrógeno não esteróide utilizado como adjuvante no tratamento do câncer de mama e atualmente também no tratamento preventivo de mulheres com elevado risco potencial para o desenvolvimento dessa doença. Tal medicamento, a despeito da comprovada ação antineoplásica no tecido mamário, está associado ao aumento da incidência de câncer endometrial nas pacientes tratadas, dentre outros efeitos colaterais. Portanto, existe a necessidade que as ações do tamoxifeno nas propriedades dos diferentes tipos celulares sejam amplamente investigadas para a melhor compreensão das mesmas. Células da linhagem Vero, consideradas não tumorais, foram utilizadas devido as suas características de crescimento e comportamento, sendo recomendadas para estudos de citotoxicidade e transformação celular. Portanto, este trabalho teve como objetivo analisar as ações do tamoxifeno in vitro, em cultura de células Vero, com maior enfoque na transformação celular. As células Vero foram expostas a diversas concentrações de tamoxifeno e este exerceu ações citotóxica e transformante, de forma dose dependente. Em resposta imediata ao tratamento com 5?M de TAM por 24 horas as células Vero apresentaram um aumento da proliferação celular enquanto um efeito citotóxico foi evidenciado em concentrações mais elevadas. O tratamento com 30?M / 24 horas demonstrou ser a menor dose transformante e a linhagem celular originada por esse tratamento, denominada Vero T30, foi estabelecida para os estudos subseqüentes. Essa concentração de tamoxifeno pode causar morte em células Vero por apoptose, sendo que células remanescentes apresentaram, diferentemente do controle, crescimento em múltiplas camadas, comportamento esse relacionado à transformação celular in vitro. O padrão de distribuição de fibronectina das células normais e transformadas é aparentemente semelhante, porém as diferenças nas taxas de apoptose, aliadas à perda de inibição de crescimento por contato podem indicar que realmente trata-se de duas populações celulares distintas. Portanto, o tamoxifeno por um processo relacionado à sua toxicidade pode causar transformação morfológica em células Vero in vitro, fenômeno este que pode estar relacionado ao desenvolvimento neoplásico in vivo / Abstract: Tamoxifen is a non-steroidal antiestrogen agent used as an adjuvant in the treatment of breast cancer and also in the preventive treatment of women with high potential risk to develop this disease. This medicament, despite its proved breast antineoplasic action, is associated to the increase of endometrial cancer, among others side effects. Therefore, there is the need of a wide investigation on the actions of the tamoxifen in the properties of different cellular types for a better comprehension of those actions. Vero cells line, which is non-tumoral, was used due to their growth and behavior pattern, being recommended for studies of cytotoxicity and cellular transformation. Hence, this work aimed to analyze the in vitro actions of the tamoxifen on Vero cells in culture, focusing cellular transformation. Vero cells were exposed at several tamoxifen concentrations, which has had cytotoxic and transformer actions, in a dose dependent manner. In immediate response to the treatment with 5?M tamoxifen / 24 hours Vero cells presented an increase in cellular proliferation whereas was observed a cytotoxic effect in more elevated concentrations. Treatment with 30?M tamoxifen/ 24 hours demonstrated to be the lower transformer dose and the cell line originated through this treatment, named Vero T30, was established for subsequent studies. This latter tamoxifen concentration can cause death by apoptosis in Vero cells but the remaining cells presented, differently from control, multi-layered growth; which is a behavior related to in vitro cellular transformation. The pattern of fibronectin distribution on normal and transformed cells was similar but the differences in the apoptosis rates, associated to the lost of contact inhibition can really indicate that there are two different cellular populations. Therefore, tamoxifen can cause in vitro morphological transformation, a phenomenon that can be related to in vivo neoplasic development by a process related to its toxicity / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural