Orientador : Maria Lucia Furlan Wada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T15:35:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Genari_SelmaCandelaria_M.pdf: 6856770 bytes, checksum: 3e91bf35ab302c4fe543a457fd235046 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Alinhagem celular Vero estabelecida a partir de célulãs renais de macaco verde da Africa (CercoDithecus aethioDs), apresenta crescimento caracterlstico em cultura sendo considerada normal. Essas células possuem morfologia alongada crescendo em monocamadas quando em cultivo. Mantidas em cultura as células Vero passaram a apresentar alterações morfológicas, comportamenta e de crescimento em relação ao padrão normal inicial. A população Vero alterada apresentou células com morfologia mais arredondada que crescem em múltiplas camadas formando grumos celulares. Os grumos celulares apresentaram em sua superflcie células achatadas ecélulas globosas e material extracelular no seu interior. As células da população alterada aderiram mais rapidamente ao substrato em meio contendo soro fetal bovino, além disso, podiam se dividir em suspensão em meio semi-sólido de ágar com menor concentração de nutrientes. As células da população alterada apresentaram número modal de cromossomos igual a 56 enquanto a população inicial apresentou 54 cromossomos, sendo que os cromossomos extras presentes na população alterada referem-se a um homólogo do par 8 e um do par 27. O indice de células polipl6ides na população alterada foi de 19% enquanto na população inicial este indice era de 5%. Quando submetidas a reações citoqulmicas com Xilidine Ponceau - pH 2,5 e a rea_ão de P.A.S. a camada celular da população normal apresentou padrão de coloração homogêneo enquanto que a população alterada apresentou regiões mais intensamente coradas. As células alteradas apresentaram citoplasma e núcleo fracamente corados e nucléolos proeminentes pela coloração com Xilidine Ponceau e citoplasma com aspecto granular intensamente corado indicando regiões de maior concentração de glicoprotelnas pela reação de P.A.S.. Em análise eletroforética em gel de polia crilamida com SDS observou-se a presença de uma protelna de 3_kDa bastante evidenciada na popula_ão alterada e ausente na PC'_F,'lação inicial. Assim, as análises efetuadas demonstraram qu(:"", t. populaçao alterada é realmente transformada, podendo ser usada como um modelo para estudo de células tumorais / Abstract: The Vero cell linage eatabliahed from kidney cella of the Africa green monkey (Cerco_ithecua aethio_a) normally haa a characteriatic growth pathern. The cella are elonged and grow in monolayera. Maintained in culture. the Vero cella began to alter their morphology, behavior and growth in relation to their inicial characteriatica. Theae altered Vero population made up rounded. cella which grew into layered cellular aggregation. The aggregations consist of rounded cells and extracellular matrix covered by a flattened cellular layer. Theae altered cells. Grow in medium with bovine fetal serum. adhered quick and divided in soft agar medium that contained lesa concentrated nutrienta than normal cella require. A modal number of chromoaomea equal to 56 waa determined for the altered cella while the inicial population had 54 chromoaomea. The additional chromoaomea were an homologue to the 8 pair and another to the 27 pairo The polyploidy index in altered cella was 19%. while it waa only 5% in the inicial population. Xylidine Ponce_u:at pH 2,5 and the P.A.S. reaction attained uniformly the normal cella while altered onec ahowed intencely atained regiona. The nuclei and cytoplaam waa slightly attained while the nucleoli waa deeply attained with ylidine Ponceau in altered cells. They had granular cytoplasm after P.A.S. reaction, indicating glycoprotein rich region. Electrophoretic analysis in polyacrilamide gel with SDS revealed a36 kDa protein that was proeminent in the altered populationa and lacking in the inicial group. Thus, the analysis demonstrated that the altered cells constitute a tranaformed population and it can be used as a model for tumor cell atudiea / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

O preocupante cenário energético atual protagonizado pelas fontes de combustíveis fósseis justifica todas as iniciativas para o desenvolvimento de materiais e processos que possam transformar os recursos renováveis em energia útil. Hoje em dia, as células solares de perovskita (PSCs) estão atraindo muita atenção da comunidade científica. Estes semicondutores híbridos (orgânico-inorgânicos) podem ser processados a partir de soluções químicas e apresentar propriedades ópticas e eletrônicas comparáveis com as dos semicondutores de alta cristalinidade, como o GaAs. Essas vantagens colocam as PSCs no topo dos tópicos mais investigados no campo fotovoltaico. Geralmente, as camadas transportadoras de elétrons (ETL) nestas células solares compreendem um óxido metálico de largo band gap, cujo modelo típico e amplamente usado é o óxido de titânio TiO2. Nesta pesquisa são apresentados resultados dos estudos da inclusão em PSCs de novas camadas ETLs baseadas em óxido de nióbio (Nb2O5). As camadas de Nb2O5 foram obtidas por meio da deposição por sputtering de filmes finos de nióbio sobre vidros condutores e subsequente oxidação térmica (OT). Uma eficiência de conversão de potência (PCE) máxima de 2,8% em estado estacionário foi obtida usando Nb2O5 resultado da OT de um filme de Nb de 90 nm Este resultado se deve às propriedades intrínsecas da perovskita e a um equilíbrio adequado entre a cobertura superficial e a extração de carga do filme de Nb2O5. Os estudos de espectroscopia de impedância (IS) obtidos suportam e estendem a validade do modelo de circuito equivalente de Bisquert, onde processos dinâmicos em altas frequências descrevem o transporte de carga na perovskita e na ETL e transferência de carga nessa interface. Também são apresentados os estudos da incorporação direta de cátions alcalinos em camadas compactas de TiO2 formadas por anodização em eletrólito aquoso baseado em ácido fosfórico contendo perclorato de lítio. As medidas usando a técnica de Análise por Detecção de Recuo Elástico (ERDA) mostram que acontece incorporação de íons de lítio durante a anodização, enquanto que os transientes da voltagem de célula permitem evidenciar as diferentes propriedades eletrônicas das camadas de TiO2 dopadas com Li. Como parte final desta pesquisa é proposto e discutido um mecanismo da incorporação in situ do Li durante a obtenção das camadas de TiO2 anódico.

La hormona paratiroidea (PTH) es un importante mediador de la remodelación ósea y actúa como regulador esencial de la homeostasis del calcio. Dependiendo del tipo y del contexto celular, PTH puede también inhibir o promover la apoptosis. La apoptosis, una forma de muerte celular programada, es un proceso fundamental para el crecimiento y desarrollo normal, la respuesta inmune, la remodelación de los tejidos, y la homeostasis del epitelio intestinal. En este trabajo de tesis se demostró, por primera vez, la localización y expresión del receptor de PTH tipo 1 (RPTH1) en las células epiteliales Caco-2, derivadas de adenocarcinoma de colon humano. El receptor, se localiza en la membrana plasmática, el citoplasma y el núcleo de estas células intestinales. Se comprobó que en las células Caco-2 el tratamiento con PTH disminuye el número de células viables e induce cambios morfológicos consistentes con la apoptosis: alteración de los filamentos de actina y consecuentemente de la forma celular, pérdida de las uniones intercelulares, externalización de la fosfatidilserina de membrana, distribución perinuclear de las mitocondrias, condensación nuclear y fragmentación del ADN. Además, el tratamiento con PTH en estas células resultó en la desfosforilación de la proteína pro-apoptótica Bad, su disociación de la proteína 14-3-3 y su translocación a las mitocondrias con la consecuente liberación de los factores pro-apoptóticos citocromo c y Smac/Diablo desde las mitocondrias al citosol resultando finalmente en la activación de la enzima pro-apoptótica caspasa-3 y el clivaje de su sustrato PARP. En estas células, la hormona provocó la desfosforilación de Akt (quinasa que controla el balance entre la supervivencia celular y la apoptosis e induce la fosforilación de Bad) mediante la serina/treonina fosfatasa PP2A. PTH además indujo la asociación de Akt con la subunidad catalítica de PP2A (PP2Ac), promovió la translocación de PP2Ac del citosol a las mitocondrias e incrementó la actividad de esta fosfatasa vía el AMPC. PP2A también participó en la regulación de la viabilidad de las células Caco-2 dependiente de PTH y en el clivaje del sustrato de caspasa-3, PARP. PTH no modificó los niveles de expresión proteica de p53, sugiriendo que, en estas células, la hormona es un estímulo apoptótico que induce la muerte celular por un mecanismo independiente de la expresión de p53. PTH aumentó los niveles de la proteína 14-3-3 en el citosol y no se detectó la asociación entre 14-3-3 y RPTH1 en condiciones basales ni luego del tratamiento hormonal, sugiriendo que 14-3-3 no regularía la localización subcelular del RPTH1 en las células Caco-2. Los resultados de este trabajo de tesis demuestran que PTH desencadena efectos pro-apoptóticos en las células Caco-2, y aportan información sobre los mecanismos moleculares de señalización que son estimulados por la hormona en estas células intestinales. / Parathyroid hormone (PTH) functions as a major mediator of bone remodeling and as an essential regulator of calcium homeostasis. Depending on the cell type involved, PTH also inhibits or promotes the apoptosis. Apoptosis, a form of programmed cell death, is a fundamental process to normal growth and development, immune response, tissue remodeling, and homeostasis of the intestinal epithelium. In this thesis work, we demonstrated, for the first time, the localization and expression of the PTH receptor type 1 (PTHR1) in the epithelial Caco-2 cells, a cell line derived from human colorectal adenocarcinoma. The receptor is present in plasma membrane, cytoplasm and nucleus of these intestinal cells. In Caco-2 cells, PTH treatment diminished the number of viable cells. Moreover, the hormone induced disruption of actin filaments with changes to cellular shape, alteration of cell-to-cell junctions, externalization of membrane phosphatidylserine, mitochondrial cellular distribution to the perinuclear region, chromatin condensation and DNA fragmentation of the nucleus, which are morphological features consistent with apoptosis. In addition, the treatment with PTH in these cells resulted in Bad dephosphorylation, its dissociation of 14-3-3 protein and its translocation to the mitochondria with the subsequent release of cytochrome c and Smac/Diablo to the cytosol which resulted in activation of downstream caspase-3 and degradation of its substrate PARP. The hormone also decreased the phosphorylation of Akt (a kinase which controls the balance between cell survival and apoptosis and induces the phosphorylation of Bad) via the serine/threonine phosphatase PP2A. PTH also induced an association of Akt with the catalytic subunit of PP2A (PP2Ac), promoted the translocation of PP2Ac from the cytosol to the mitochondria and increased its phosphatase activity via the AMPc pathway. Furthermore, PP2A plays a role in hormone-dependent Caco-2 cells viability and in the cleavage of caspase-3 substrate PARP. PTH did not modify the protein levels of p53, suggesting that the hormone is an apoptotic stimulus that induces cell death by a p53-expression independent mechanism in these cells. PTH increased the amount 14-3-3 protein in the cytosol. However, the association of 14-3-3 with PTHR1 was not detectable under basal conditions or after PTH treatment, suggesting that 14-3-3 does not regulate the subcellular localization of PTHR1 in Caco-2 cells. The results of this tesis provide, for the first time, evidence of pro-apoptotic effects of PTH in Caco-2 cells and information about the molecular mechanisms of PTH-mediated signaling pathway in these intestinal cells.

El receptor de acetilcolina nicotínico (AChR) es un canal iónico de la familia de canales iónicos activados por ligando (LGIC) que está presente en el sistema nervioso central y en la unión neuromuscular (UNM). Su estabilidad en la membrana celular es importante, ya que determina el nivel de respuesta colinérgica y puede ser alterada ante diversas situaciones fisiológicas y patológicas. Se ha propuesto que la endocitosis del AChR es el mecanismo más importante de neuromodulación de la UNM y de sinapsis centrales, tanto en condiciones fisiológicas como en diversas patologías. En este trabajo estudiamos la endocitosis del AChR heterólogamente expresado en células CHO-K1. Demostramos que la unión del antagonista competitivo α-bungarotoxina (αBTX) o el entrecruzamiento con anticuerpos induce la internalización de los AChR de la superficie celular. Este proceso ocurre en dos etapas: primero los complejos AChR-αBTX son secuestrados en un compartimiento tubular conectado con la superficie, como lo demuestra la diferente accesibilidad de la αBTX fluorescente unida al AChR a sondas de alto y bajo peso molecular. Subsecuentemente el AChR es internalizado a través de un mecanismo independiente de clatrina, de dinamina y de caveolina. La desorganización de la actina inhibe estos dos procesos, lo que indica que ambos requieren la integridad del citoesqueleto. La función del AChR depende de la composición de los lípidos que lo rodean en la membrana y entre éstos el colesterol (Col) parece ser necesario para mantener la estructura del AChR (revisión en Barrantes, 2007). El Col también es necesario para la formación y estabilización de los agregados del AChR en la membrana de células C2C12. Debido a la importancia de este lípido sobre distintos aspectos del AChR estudiamos su influencia en la estabilidad del receptor en la membrana de las células CHO-K1/A5. Descubrimos que la depleción de Col (Col-) mediada por ciclodextrinas acelera la internalización del AChR en una forma dependiente de la dosis (Borroni et al., 2007). Experimentos realizados con una proteína dominante negativa de dinamina (dinK44AHA) y una forma truncada de Eps15 (Eps15 95G295) indicaron que la internalización del AChR en células Col- es independiente de clatrina y de dinamina. El bloqueo de la funcionalidad de la GTPasa Arf6 por la expresión de una versión dominante negativa de dicha proteína (Arf6 T27N-HA) demostró que la depleción de Col vuelve la internalización del AChR sensible a la actividad de Arf6. La inhibición de la formación de ácido fosfatídico con alcoholes primarios también disminuyó la endocitosis del AChR en células Col- indicando la importancia de este lípido. Al igual que en células con niveles normales de Col, la internalización del AChR en células Col- depende de la actividad de la pequeña GTPasa Rac1. Sin embargo, ni el secuestro del PI4,5P2 a través de la sobre expresión de la proteína de fusión del dominio PH de la fosfolipasa Cδ, PH-PLCδ-GFP, ni la desorganización del citoesqueleto a través de agentes farmacológicos afectaron la internalización del AChR en condiciones de depleción de Col celular. Estos resultados resaltan la importancia del Col como modulador de la estabilidad del AChR en la membrana. / The nicotinic acetylcholine receptor (AChR) is an integral membrane protein belonging to the superfamily of the ligand-gated ion channel. present at the neuromuscular junction and central nervous synapses. Its stability at the cell membrane is important in determining cholinergic responses and can be altered under pathological conditions. El receptor de acetilcolina nicotínico (AChR) es una proteína integral de membrana de la superfamilia de canales iónicos activados por ligando (LGIC). Está presente en el sistema nervioso central y en la unión neuromuscular (UNM). Su estabilidad en la membrana celular es importante, ya que determina el nivel de respuesta colinérgica y puede ser alterada ante diversas situaciones fisiológicas y patológicas. Endocytosis of the AChR is proposed to be a major mechanism of neuromodulation at neuromuscular junctions and in the pathology of synapses in the central nervous system. Here we have studied the endocytosis of AChR heterologously in CHO-K1 fibroblasts. Binding of the competitive antagonist α-bungarotoxin (αBTX) or antibody-mediated crosslinking induces the internalization of cell-surface AChR to late endosomes. Internalization occurs via sequestration of AChR-αBTX complexes in narrow, tubular, surface-connected compartments, as indicated by differential surfaceaccessibility of fluorescently-tagged αBTX-AChR complexes to small and large molecules. Internalization takes place by a clathrin and caveolin-independent pathway, and does not require the function of dynamin. However the integrity of the actin cytoskeleton is required for AChR sequestration and internalization since perturbation of actin polymerization inhibits these processes. This pathway resembles a recently elucidated dynamin-independent internalization mechanism employed for downregulation of long-term resident plasma membrane proteins, and may provide insights into AChR dynamics at ligand-gated synapses and in pathological conditions such as the autoimmune disease mysthenia gravis.

Ingeniero Civil Electricista / En búsqueda de aplicaciones vehiculares más eficientes que además estén en la línea de incorporar energías limpias y renovables, la Universidad de Chile ha sido pionera a nivel nacional con dos ediciones de Eolian, proyecto basado en el desarrollo de autos eléctricos usando energía solar fotovoltaica como principal fuente energética. En este contexto, el objetivo de esta memoria de título es contribuir a optimizar el desempeño solar-eléctrico del vehículo Eolian conociendo el rendimiento de las celdas fotovoltaicas seleccionadas, estudiando el efecto de la disposición de los arreglos de celdas, optimizando la operación en paralelo de múltiples adaptadores de impedancia y manejando las situaciones de sombreado. Dentro de la revisión bibliográfica destaca la forma constructiva de las celdas solares, los modelos usados para los análisis y la incorporación del estándar IEC 60904 para mediciones en celdas fotovoltaicas. El material recopilado es una guía para la tarea de medición y ayuda a precisar el enfoque de las propuestas, pero también es un punto de partida para fijar conceptos necesarios en cualquier labor sobre energía fotovoltaica. Por otro lado, el uso del estándar permite validar la metodología de trabajo y los resultados posteriores frente a la comunidad, como asimismo la comparación con otros estudios que se relacionan con esta tecnología. En una primera etapa se desarrolla la evaluación detallada de un módulo encapsulado compuesto por 16 celdas C-60 Sunpower y la obtención de su curva V-I y eficiencia. Se continúa con la recopilación de datos para una disposición de 6 módulos usando cargas resistivas y adaptadores de impedancia, en un diseño experimental propuesto en el marco del proyecto. Estos módulos se someten a diferentes configuraciones de sombra, para proporcionar una variedad de puntos de operación, útiles para la evaluación y entrega de propuestas. Con esta información se puede inferir las condiciones en que operan normalmente las celdas solares, la potencia alcanzada por el sistema y la influencia de sombras en él. Con los datos recopilados, la labor se enfoca en determinar los factores que impiden la obtención del desempeño esperado para las celdas en condiciones normales de operación y posibles mejoras. En primer lugar, el efecto de conectar celdas de distintas curvas características disminuye la eficiencia conjunta porque cada una de ellas no proporciona la potencia máxima posible, siendo aún peor cuando la calidad del encapsulado se ve reducida por efecto de manchas sobre él. A esto se suma los efectos que genera la influencia de sombra sobre el panel. A partir de estos resultados se logra diagnosticar el fenómeno de avalancha en el semiconductor gracias a la mejora del modelo convencional utilizado. Con esto se cuantifica el efecto de la sombra y de cómo ésta modifica el punto de máxima potencia. En segundo lugar, se demuestra que los diodos de bypass no operan cuando la sombra corresponde al área de una sola celda, perdiendo un 18 [%] de la potencia máxima en las pruebas realizadas. Se propone la instalación de un actuador, que permita la anulación del módulo sombreado vía interruptores. Por último, se verifica que no hay interferencia entre los adaptadores de impedancia cuando operan en paralelo. La principal deficiencia es que operan en una zona estrecha de la curva V-I, alejándose de los puntos de máxima potencia durante las horas de menor radiación; y el efecto Doorsill producido por el aumento gradual de la sombra sobre el panel, no ubicándose en el máximo global posible. Como trabajo futuro se proponen distintas mejoras en el diseño del panel entre las que destaca la cuantificación detallada de los distintos factores que disminuyen la eficiencia de las celdas en el vehículo solar y optimizar la estrategia de bypass.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de distintas concentraciones de Suero Fetal Bovino (SFB) y Ácido Ascórbico (AA) sobre la diferenciación osteogénica de Células Madre Mesenquimales (CMM) bovinas. Las CMM fueron aisladas desde médula ósea de fetos bovinos, mediante adherencia al plástico y posteriormente cultivadas en los distintos tratamientos. El medio DMEM fue suplementado con dexametasona (100 nM), β-glicerofosfato (10 mM), más concentraciones variables de AA y SFB; 0 mM AA - 0% SFB (T1); 0,1 mM AA - 10% SFB (T2); 0,01 mM AA - 10% SFB (T3); 0,001 mM AA - 10% SFB (T4); 0,1 mM AA - 5% SFB (T5); 0,1 mM AA - 2% SFB (T6). La diferenciación fue analizada al día 21 de cultivo mediante cuantificación de la expresión de los genes osteo-específico Osteocalcina (OCN), pluripotencia (NANOG) y del control endógeno gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) utilizando PCR cuantitativo. La actividad de Fosfatasa Alcalina (FA) fue cuantificada mediante espectrofotometría. El depósito de minerales fue evaluado mediante tinción Von Kossa. En T2 se expresaron los mayores (P<0,05) niveles de ARNm de OCN (33,7 veces la expresión del T1). Los niveles de ARNm de NANOG disminuyeron (P<0,05) en todos los tratamientos suplementados con AA y SFB. La actividad de FA aumentó en CMM suplementadas con SFB y AA a excepción de T4. Se observó una alta intensidad en la tinción Von Kossa en T2. En conclusión, el SFB participa parcialmente en la diferenciación osteogénica, mientras que la suplementación de una alta concentración de AA aumenta la capacidad de diferenciación de las CMM bovinas hacia el linaje osteogénico / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 11100205

Objetivos: Avaliar o potencial terapêutico e a segurança do uso intravítreo de (FMMO) contendo células CD34+ em pacientes portadores de degeneração macular relacionada com a idade na forma atrófica. Casuística e Métodos: Foram avaliados 10 pacientes com degeneração macular relacionada à idade (DMRI) seca e acuidade visual no pior olho <=20/100. Foi obtido aspirado da medula óssea de todos os pacientes, e após o processamento do material no hemocentro, foi injetado 0,1 ml da suspensão de FMMO intravítreo no olho com pior acuidade. Os pacientes foram avaliados no baseline, 1, 3, 6, 9 e 12 meses após a injeção. Todos realizaram medida da melhor acuidade visual corrigida (MAVC), microperimetria, eletrorretinografia multifocal (ERGmf), autofluorescência, Tomografia de coerência óptica (OCT) e responderam o questionário VFQ-25 em todos seguimentos. Também foi realizada angiografia fluoresceínica antes da injeção, seis e doze meses após. Resultados: Todos os pacientes completaram o seguimento de seis meses, e seis finalizaram os doze meses. Antes da injeção, a média da MAVC foi de 1,18 logMAR (20/320-1); variando de 20/125 a 20/640-2. Aos doze meses, a média foi de 1,0 logMAR (20/200), com melhora significativa em todos os meses de seguimento. A média do limiar de sensibilidade na microperimetria mostrou melhora significativa a partir do sexto mês (p=0,009). Ao se dividirem os pacientes com área de atrofia maior e menor, por meio da medida da hipoautofluorescência, observou-se que a melhora foi significativa apenas no grupo de menor atrofia. Não houve diferença significativa na ERGmf. A angiofluoresceinografia não apresentou crescimento de neovasos ou tumores. O questionário de qualidade de vida mostrou diferença significativa na saúde mental (p=0,003) e na visão de cores (p=0,005) e forte tendência à significância na análise que abordou a visão geral (p=0,05) e dependência (p=0,067). Houve declínio em relação à saúde geral (p=0,77). Conclusões: Os resultados indicam que o uso de FMMO intravítreo em pacientes com DMRI é seguro e está associado à melhora da acuidade visual e microperimetria. Pacientes com área menor de atrofia têm melhor resposta. Não é possível afirmar, mas acredita-se no resgate funcional das células em sofrimento, que ainda não se degeneraram. / Objectives: To assess the therapeutic potential and safety of the intraviteral use of a bone marrow mononuclear fraction (BMMF) containing CD 34+ cells in patients with the atrophic form of age-related macular degeneration (AMD). Casuistic and Methods: The study was conducted on 10 patients with the atrophic form of ARMD with worse eye visual acuity <=20/100. Bone marrow was aspirated from each patient under local anesthesia. After processing and separation of mononuclear cells, 0.1 ml of the suspension was injected intravitreally into the eye of lower acuity. The patients were evaluated at baseline and 1, 3, 6, 9 and 12 months after the injection. All were submitted to measurement of best corrected visual acuity (BCVA), microperimetry, multifocal electroretinography (ERGmf), autofluorescence, and optical coherence tomography (OCT) and all responded to the VFQ-25 questionnaire at all follow-up visits. Fluorescein angiography was performed before the injection and six and 12 months later. Results: All patients completed the six month follow-up and six completed the 12 month follow-up after the injection. Before the injection, mean BCVA was 1.18 logMAR (20/320-1), ranging from 20/125 to 20/640-2 and at 12 months it was 1.0 logMAR (20/200), with a significant improvement over all followup months. Mean perimetric threshold sensitivity improved significantly starting at the sixth month (p=0.009). When the patients with a larger area of atrophy measured by hypoautofluorescence were considered separately, a significant improvement was observed only in the group with lower atrophy. There was no significant difference in electroretinography. Angiofluoresceinography did not reveal neovessel or tumor growth. The quality of life questionnaire showed a significant difference in mental health (p=0.003) and color vision (p=0.005), and a strong tendency in the analysis of general vision (p=0.05) and dependence (p=0.067). There was a decline in general health (p=0.77). Conclusions: The results indicate that the use of intravitreal BMMF in patients with AMD is safe and is associated with improved visual acuity and microperimetry. Patients with a smaller atrophy area obtained a better response. The paracrine effect of these cells may explain the functional improvement observed in the present study; however, a larger series should be study to confirm these clinical findings.

Objetivos: Avaliar o potencial terapêutico e a segurança do uso intravítreo de (FMMO) contendo células CD34+ em pacientes portadores de degeneração macular relacionada com a idade na forma atrófica. Casuística e Métodos: Foram avaliados 10 pacientes com degeneração macular relacionada à idade (DMRI) seca e acuidade visual no pior olho <=20/100. Foi obtido aspirado da medula óssea de todos os pacientes, e após o processamento do material no hemocentro, foi injetado 0,1 ml da suspensão de FMMO intravítreo no olho com pior acuidade. Os pacientes foram avaliados no baseline, 1, 3, 6, 9 e 12 meses após a injeção. Todos realizaram medida da melhor acuidade visual corrigida (MAVC), microperimetria, eletrorretinografia multifocal (ERGmf), autofluorescência, Tomografia de coerência óptica (OCT) e responderam o questionário VFQ-25 em todos seguimentos. Também foi realizada angiografia fluoresceínica antes da injeção, seis e doze meses após. Resultados: Todos os pacientes completaram o seguimento de seis meses, e seis finalizaram os doze meses. Antes da injeção, a média da MAVC foi de 1,18 logMAR (20/320-1); variando de 20/125 a 20/640-2. Aos doze meses, a média foi de 1,0 logMAR (20/200), com melhora significativa em todos os meses de seguimento. A média do limiar de sensibilidade na microperimetria mostrou melhora significativa a partir do sexto mês (p=0,009). Ao se dividirem os pacientes com área de atrofia maior e menor, por meio da medida da hipoautofluorescência, observou-se que a melhora foi significativa apenas no grupo de menor atrofia. Não houve diferença significativa na ERGmf. A angiofluoresceinografia não apresentou crescimento de neovasos ou tumores. O questionário de qualidade de vida mostrou diferença significativa na saúde mental (p=0,003) e na visão de cores (p=0,005) e forte tendência à significância na análise que abordou a visão geral (p=0,05) e dependência (p=0,067). Houve declínio em relação à saúde geral (p=0,77). Conclusões: Os resultados indicam que o uso de FMMO intravítreo em pacientes com DMRI é seguro e está associado à melhora da acuidade visual e microperimetria. Pacientes com área menor de atrofia têm melhor resposta. Não é possível afirmar, mas acredita-se no resgate funcional das células em sofrimento, que ainda não se degeneraram. / Objectives: To assess the therapeutic potential and safety of the intraviteral use of a bone marrow mononuclear fraction (BMMF) containing CD 34+ cells in patients with the atrophic form of age-related macular degeneration (AMD). Casuistic and Methods: The study was conducted on 10 patients with the atrophic form of ARMD with worse eye visual acuity <=20/100. Bone marrow was aspirated from each patient under local anesthesia. After processing and separation of mononuclear cells, 0.1 ml of the suspension was injected intravitreally into the eye of lower acuity. The patients were evaluated at baseline and 1, 3, 6, 9 and 12 months after the injection. All were submitted to measurement of best corrected visual acuity (BCVA), microperimetry, multifocal electroretinography (ERGmf), autofluorescence, and optical coherence tomography (OCT) and all responded to the VFQ-25 questionnaire at all follow-up visits. Fluorescein angiography was performed before the injection and six and 12 months later. Results: All patients completed the six month follow-up and six completed the 12 month follow-up after the injection. Before the injection, mean BCVA was 1.18 logMAR (20/320-1), ranging from 20/125 to 20/640-2 and at 12 months it was 1.0 logMAR (20/200), with a significant improvement over all followup months. Mean perimetric threshold sensitivity improved significantly starting at the sixth month (p=0.009). When the patients with a larger area of atrophy measured by hypoautofluorescence were considered separately, a significant improvement was observed only in the group with lower atrophy. There was no significant difference in electroretinography. Angiofluoresceinography did not reveal neovessel or tumor growth. The quality of life questionnaire showed a significant difference in mental health (p=0.003) and color vision (p=0.005), and a strong tendency in the analysis of general vision (p=0.05) and dependence (p=0.067). There was a decline in general health (p=0.77). Conclusions: The results indicate that the use of intravitreal BMMF in patients with AMD is safe and is associated with improved visual acuity and microperimetry. Patients with a smaller atrophy area obtained a better response. The paracrine effect of these cells may explain the functional improvement observed in the present study; however, a larger series should be study to confirm these clinical findings.

Tese de Mestrado Integrado. Bioengenharia. Área de Especialização de Biotecnologia Molecular. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2012

Tese de doutoramento. Ciências de Engenharia. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2007