Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T18:01:59Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_CamilaArlenDinizJardim (1).pdf: 1468207 bytes, checksum: 37dc5dc70e1bb0d55bc2bc4c6e49af52 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T18:02:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_CamilaArlenDinizJardim (1).pdf: 1468207 bytes, checksum: 37dc5dc70e1bb0d55bc2bc4c6e49af52 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-08T18:02:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_CamilaArlenDinizJardim (1).pdf: 1468207 bytes, checksum: 37dc5dc70e1bb0d55bc2bc4c6e49af52 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T18:02:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_CamilaArlenDinizJardim (1).pdf: 1468207 bytes, checksum: 37dc5dc70e1bb0d55bc2bc4c6e49af52 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / O Carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço acomete mucosas do trato aerodigestivo superior, incluindo cavidade oral, laringe e faringe e é caracterizado por elevada agressividade e radioresistência, apresentando, muitas vezes, recidivas após o tratamento. Em trabalho anterior, foi demonstrado pelo nosso grupo que o tamponamento do Ca2+ nuclear é capaz de reduzir a taxa proliferação do carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (células A431), bem como a sobrevida após a irradiação. Neste trabalho, investigamos quais genes estariam envolvidos na radiosensibilização observada mediante tamponamento do Ca2+nuclear, utilizando o protocolo RaSH (rapid subtraction hybridization), que permitiu a identificação de genes diferencialmente expressos nas células apenas irradiadas (RX) e nas células irradiadas em que o Ca2+ nuclear fora tamponado (RX/Ca2+ T). Foram sequenciados 91 clones, dos quais 8 mostraram elevada similaridade (93-100%) com sequências conhecidas depositadas no genebank (NCBI). Entre os clones selecionados, 3 foram escolhidos, sendo a Calpaína e a NLK selecionadas como mais expressas na condição RX/Ca2+T e a Kinesina, selecionada na condição RX. Estas proteínas são envolvidas em vias de sinalização críticas ao desenvolvimento tumoral, com base na análise por Blastn. Como a Kinesina foi identificada como superexpressa na condição RX, nós investigamos se seu silenciamento era capaz de produzir efeitos similares aos induzidos pelo tamponamento do Ca2+ nuclear. O silenciamento da Kinesina com siRNA promoveu a redução da formação de colônias e da sobrevida, em associação (90±2%) ou não (60±2%) com RX. Estes dados mostram que a Kinesina é um potencial alvo molecular a ser utilizado na radiosensibilização de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço. / Head and neck squamous cell carcinoma affects mucosal of the upper aerodigestive tract, comprising oral cavity, pharynx and larynx and is characterized by aggressiveness and radioresistance, showing high frequency of post-treatment recurrent tumors. Our group had previously demonstrated that nuclear Ca2+ buffering promote decreased head and neck squamous cell carcinoma (A431 cells) proliferation rate and colony formation after irradiation. Here, to investigate which genes are involved on radiosensitization observed upon nuclear Ca2+ buffering, we applied RaSH (rapid subtraction hybridization) protocol that allows identification of genes differentially expressed on irradiated cells alone (RX) or combined with nuclear Ca2+ buffering (RX/Ca2+T). 91 clones were sequenced and 8 had shown high similarity (93-100%) with known sequences deposited on genebank (NCBI). Among the selected clones, 3 were choose, Calpain and NLK, that showed increased expression on RX/Ca2+T and Kinesin, that showed increased expression on RX. These clones are involved in tumor development-related signaling pathways according to BLASTn analysis. Because Kinesin was overexpressed on RX, we investigated if its silencing was capable to promote similar effect to nuclear Ca2+ buffering. Kinesin knockdown by siRNA promoted decreased colony formation, and survival either alone (60±2%) or in association (90±2%) with RX. These data show that Kinesin is a potential molecular target to radiosensitize head and neck squamous cell carcinoma.