Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T15:14:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vilella_ConceicaoAparecida_D.pdf: 48895468 bytes, checksum: c4753d07008661a967f99ba5800aaf87 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: No modelo experimental referenteà linhagem de camundongos NOD (non obese diabetic) a manifestação do diabetes autoimune é espontâneo semelhante ao observado em humanos, o qual se desenvolve entre a 12a e 24a semana de vida com prevalência variável nas diversas colônias, entre 60-90% em fêmeas e 0-20% nos machos. Os estudos dos mecanismos autoimunes do diabetes sugerem o desequilíbrio entre as populações de linfócitos Th1 e Th2 com predomínio do fenótipo Th1 com mecanismos efetores que levam a apoptose da célula 'beta' produtora de insulina. Inúmeros trabalhos sugerem que a apoptose das células 'beta' esteja associada à manifestação do diabetes tanto em modelos experimentais como em humanos. Componentes apoptóticos como Fas/Fas-L, IL-1f3, IFN-y e. TNF-a tem sido associados aos mecanismos efetores da apoptosedas ilhotas. Gangliosídeos podem bloquear de forma seletiva a produção de citocinas próinflamatórias como IFN-ye TNF-a (Th1) inibindo desta forma, a proliferação de linfócitos T. Por outro lado, citocinas antiinflamatóriascomo IL-4 e TGF-f3 podem ter sua síntese estimulada por estes compostos. No presente trabalho, investigamos o efeito do tratamento de gangliosídeos (GM1, GD1a, GD1b, GT1b) sobre a incidência do diabetes mellitus e da insulite em camundongos NOD. Foram monitorados os níveis glicêmicos, os aspectos morfológicos (índice de infiltrado, imunoistoquímica para detecção de subpopulações de linfócitosTCD4+,CD8+e macrófagos-CD11), a expressão gênica de citocinas, moléculas apoptóticas e antiapoptóticas e níveis séricos de citocinas IL-12,IL-4,TGF-f3,TNF-a,IFN-V. Os resultados sugerem que a administração de gangliosídeos a partir da 4a semana de vida do animal impede a manifestação do diabetes, modula o infiltrado inflamatório preservando células f3,diminui a resposta Th1 em ilhotas e eleva os níveis séricos de citocinas antiinflamatóriascomo IL4 e TGFf3,além de induzir a morte celular em linfócitos. Assim, o desenvolvimento de estudos adicionais dirigidos aos mecanismos de ação de gangliosídeos na manifestação do diabetes autoimune, é relevante,e fundamental para estratégiasde tratamentos mais efetivos / Abstract: The 'beta' cells destruction on diabetes type 1 autoimmune knowledge was derivative from NOD (diabetic non obese) mouse as experimental model, which have demonstrated great potential for drugs or immunotherapy's study. In this model, the diabetes manifestation occurs spontaneously like the observed in human, among 128-248 week of life. The prevalence could be varied from 60-90% in females and 0-20% in males. The autoimmune mechanism study suggests the imbalance between Th1 and Th2 response with predominance Th1 phenotype (IL-1(3,TNF-a, IFN-y). Thus, it was necessary the study of the Th1 and Th2 cytokines related to autoimmunity of the diabetes in NOD mouse. Moreover, it believed that apoptosis of the 'beta' cells it was associated with the diabetes manifestation in both human and experimental models. In such studies FaslFas-L were related with IL-1(3,IFN-y and TNF-a as effectors molecules of the cell death pancreatic islets. Gangliosides can block, in a selective manner, the pro-inflammatory (Th1) cytokines preduction like IFN-y and TNF-a and inhibit the T cells proliferation. However, these compounds can stimulate the synthesis of anti-inflammatory cytokines, like IL-4 and TGF-'beta'. In the present wOrk,we analyze the effect of the gangliosides (GM1,GD1a,GD1b, GT1b) treatment on diabetes mellitus manifestation in NOD mice. The glucose levels, injury index, CD4, CDa and CD11 immunohistochemical labeling, cytokines and apoptotic related molecules gene expression analyses and IL-12, IL-4, TGF-'beta' - TNF-'alfa' and IFN-y detection by immunoassay, were monitored. Our results showed that the ganglioside treatment frem 4th week of life prevents the on set of autoimmune diabetes, the inflammatory infiltrate installation. Th1 response can be suppresses by these compounds by the increase anti-inflammatory cytokines and the T cell apoptosis induction, besides the 'beta' cells preservation. Therefore take together these results reinforce the immunomodulatory action of gangliosides treatment on the diabetes mellitus manifestation / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T20:34:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Malaguti_Carina_M.pdf: 3081251 bytes, checksum: 464b9eb4c3ea569832e54a9ac80854a6 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O camundongo NOD é utilizado como modelo experimental por desenvolver diabetes mellitus tipo 1 (DM-1) espontâneo similar ao diabetes mellitus humano resultando na destruição das ilhotas, orquestrada pelos linfócitos T que induzem a liberação de citocinas, entre elas a IL-1, promovendo o processo inflamatório. A diacereína possui propriedades antiinflamatórias, inibindo IL-1. Entretanto, os mecanismos envolvidos na modulação imunológica ainda estão incompletamente compreendidos. No presente estudo, soro, pâncreas, ilhotas e células mononucleares esplênicas de animais tratados com diferentes doses (5, 10 e 50mg/kg/dia) de diacereína e o grupo controle o qual recebeu solução salina, foram isolados para investigar a expressão de IL-1ß, IFN-?, IL-12 e TNF-a e a relação com o início do diabetes, aspectos morfológicos e a dose-dependência da diacereína. Os resultados mostraram o aumento do RNAm de células esplênicas e ilhotas e a diminuição da concentração no soro de IL-1 em 10mg/kg/dia de diacereína, comparado com os outros grupos e aumento da concentração de IFN-? no soro do grupo de 50mg/kg/dia. Esses resultados sugerem que a diacereína interfere na instalação do diabetes e a freqüência, pela modulação de citocinas pró-inflamatórias como IL-1ß, IFN-?, IL-12 e TNF-a. Além disso, os dados sugerem regulação pós-transcricional de IL-1ß pela diacereína / Abstract: The NOD mice is used as a experimental model of spontaneously develop type1 diabetes mellitus (DM1) similar to human disease resulting in the destruction of the islet, orchestrated by T lymphocytes that induce a cytokines release, among then the IL-1, promoting inflammatory process. Diacerhein has antiinflammatory properties, inhibiting IL-1. However, the mechanisms involved in immune modulation are still incompletely understood. In the present study, serum, pancreas islets and spleen mononuclear cells from animals treated by different doses (5, 10 and 50mg/kg/day) and the group control which received solution saline, were isolated to investigate the IL-1ß, IFN-?, IL-12 and TNF-a expression and relationship with diabetes onset, morphological aspects and diacerein dose dependence. The results demonstrate upregulation of mRNA spleen cells and islets and downregulation of serum concentration of IL-1 in 10mg/kg/day diacerein treated group compared with others groups and increase of IFN-? serum concentration for 50 mg/kg/day group. These results suggest that the diacerhein interfere with the diabetes onset and frequency by modulation of pro-inflammatory cytokines as IL-1ß, TNF-a, IFN -? and IL- 12. Furthermore, the data suggest a post-transcriptional downregulation for IL-1ß by diacerhein / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T16:26:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Colomeu_TalitaCristina_M.pdf: 1606110 bytes, checksum: ed843e2069440cf659e4ab7cc6c4c21f (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A linhagem NOD (non obese diabetic) é utilizada como modelo experimental de DM-1, pois desenvolve espontaneamente a doença com marcante similaridade ao observado em humanos. Vários são os mecanismos propostos para ruptura da tolerância imunológica no DM-1, como a predisposição genética do indivíduo, juntamente com fatores ambientais, tais como estresse e alimentação, parecem favorecer o desencadeamento de mecanismos auto imunes. Nos últimos anos o interesse por alimentos fitoterápicos pelos órgãos governamentais, com a finalidade de auxiliar no tratamento de doenças vem aumentando. A espécie Passiflora sp., é descrita pela farmacopeia Brasileira como fitoterápico e seu uso na medicina popular está relacionado ao tratamento de diversas doenças. Estudos sobre as propriedades das folhas do Passiflora alata Curtis no diabetes mellitus são escassos. Neste contexto, investigamos quais os melhores solventes (água, etanol e metanol/acetona) para extração de compostos bioativos da folha de P.alata, a atividade antioxidante dos solventes pelas técnicas DPPH, FRAP, ABTS e ORAC, fenóis totais, composição centesimal e investigação de quatro compostos fenólicos (vitexina, isovitexina e isoorientina) nas folhas. Além disso, avaliamos as propriedades do consumo crônico do extrato aquoso das folhas de P.alata sobre a incidência do DM-1, a insulite, os níveis de GSH no fígado/rim, a insulina sérica nos camundongos NOD e o estresse oxidativo, a apoptose e a imunofluorescência de infiltrados CD4+,CD8+ e CD11+ nas ilhotas pancreáticas desses animais. Nossos resultados sugerem que o extrato aquoso em comparação com o metanol/acetona e etanólico, apresenta atividade antioxidante e fenóis totais superiores e que seu consumo crônico é capaz de diminuir o índice de infiltrado inflamatório e consequentemente a expressão do diabetes, ajudar a manter os níveis de GSH no fígado/rim e reduzir o estresse oxidativo e apoptose nos camundongos NOD / Abstract: The strain of NOD mice (non obese diabetic) is common used for study with type 1 diabetes mellitus, because develops spontaneously the disease with strong similarity to the observed in humans. Several mechanisms are proposed to break immune tolerance in DM-1, such as genetic predisposition, environmental factors, as infections and dietetic, seem to favor the triggering of autoimmune mechanisms. In recent years the interest in herbal foods in order to prevent diseases is increasing in the population. The species Passiflora sp. is described by Brazilian Pharmacopoeia as herbal medicine and in folk medicine is related to the treatment of various diseases. Studies about properties of leaves of Passiflora alata Curtis related with diabetes mellitus are scarce. In this context, we investigate what the best solvent (water, ethanol and methanol/acetone) for the extraction of bioactive compounds from P.alata leaf, the antioxidant activity of the solvents by DPPH, FRAP, ABTS and ORAC, total phenols, composition and investigation of four phenolic compound (vetexin, isovitexin and isoorientin) in leaves. Furthemore, we evaluated the chronic consumption of aqueous extract on incidence of DM-1, insulits, GSH levels in liver/ kidney, serum insulin in NOD mice and oxidative stress, apoptosis and immunofluorescence of infiltrated CD4+,CD8+CD11+ in the pancreatic islets of these animals. Our results suggest that the aqueous extract shows higher values of antioxidant activity, total phenols and the chronic consumption can reduce the number of inflammatory infiltrate and consequently the expression of diabetes, help maintain the levels of GSH in the liver / kidney and reduce oxidative stress and apoptosis in NOD mice / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T03:38:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pedrosa_Denise_M.pdf: 2680300 bytes, checksum: 4372cb3695e33fb5ec7321200d7d6035 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Empregando a linhagem de camundongos NOD (non-obese diabetic) de desenvolvimento espontâneo do diabetes mellitus tipo 1 (DM-1) e a linhagem NOD.Scid como controle, foi realizada a análise da expressão dos genes de regeneração Reg1 e Reg2 e a sua relação com a expressão dos Receptores Toll-Like (TLRs), além da análise do estresse oxidativo em ilhotas pancreáticas. Foram avaliados animais durante o desenvolvimento do diabetes com 2, 8 e 24 semanas de vida, além de camundongos diabéticos e do controle NOD.Scid. Houve aumento progressivo da insulite e do estresse oxidativo em função do tempo, além da diminuição drástica do número de ilhotas verificado em camundongos diabéticos. Os genes Reg1 e Reg2 apresentaram aumento da expressão em ilhotas pancreáticas de camundongos com 2 semanas de vida e nos animais diabéticos, assim como no controle NOD.Scid. Os receptores TLR2, TLR4, TLR5 e TLR6 foram expressos, com aumento significativo em animais com 8 e 24 semanas de vida, exceto para o TLR2 que apresentou expressão gênica reduzida em camundongos de 24 semanas de vida, sugerindo envolvimento na indução da fase de insulite. O animal diabético apresentou expressão reduzida em todos os TLRs analisados e expressão elevada dos genes Reg1 e Reg2 em ilhotas pancreáticas. Além disso, foi possível verificar o contraste de expressão de Reg1 e Reg2 frente aos TLRs no período pré-diabético, em que Reg1 e Reg2 apresentaram expressão gênica reduzida, enquanto os TLRs apresentaram expressão elevada. Em conjunto, estes dados sugerem possível associação entre a ativação dos TLRs e a redução da expressão dos genes de regeneração Reg1 e Reg2 na fase de indução da insulite, tornando-se necessário avaliar se os fatores inflamatórios afetam o balanço dos sistemas biológicos com consequente controle da capacidade regenerativa celular ou se a falha no sistema biológico age como fator primário de indução ao dano tecidual / Abstract: Employing the lineage of NOD mice (non-obese diabetic) which presents spontaneous development of diabetes mellitus type 1 (T1D) and the lineage NOD.Scid as a control, gene expression of regenerating genes Reg1 and Reg2 and their relation with expression of Toll-Like Receptors (TLRs) was performed, in addition to oxidative stress analysis in pancreatic islets. Animals were assessed during the T1D development at 2, 8 and 24 weeks-old and also in diabetic animals and NOD.Scid control. The insulitis and the oxidative stress process increased progressively with age, beyond the drastically decreased of islets number in diabetic animals. Analysis of oxidative stress in islets has been shown progressive with age and may be related to the development of diabetes. Reg1 and Reg2 genes were high expressed in islets of NOD mice aged 2 weeks-old, diabetic animals and NOD.Scid control. Receptors TLR2, TLR4, TLR5 e TLR6 were expressed in all animals, however mice aged 8 and 24 weeks-old showed a significant increase expression, being TLR2 an exception where there was low expression in mice aged 24 weeks-old which suggests that their expression should be related to the induction phase of insulitis. Diabetic mice showed reduced expression in all TLRs analyzed and high expression of Reg1 and Reg2 in pancreatic islets. Furthermore, Reg1 and Reg2 showed a contrast of expression when related to TLRs at pre-diabetic stage, with low expression of Reg1 and Reg2 and high expression of TLRs. Taken together, these results suggest a possible correlation between the activation of TLRs and the reduced expression of regenerating genes Reg1 and Reg2 in the induction phase of insulitis. Thus, studies are needed to elucidate whether inflammatory factors affect the balance of biological systems with consequent regenerative cell control capacity or if the failure in the biological system acts as a primary factor inducing tissue damage / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica