Made available in DSpace on 2016-08-10T10:53:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LEANDRO DOBRACHINSKI.pdf: 1309361 bytes, checksum: 9ed7a6a6c3ff40cb207d958b59532e76 (MD5) Previous issue date: 2012-03-13 / Venomous snakes have a real cocktail of pharmacological active substances and drugs that act powerfully against microorganisms. The objective of the present study was to evaluate in vitro the potential cytotoxic activity of Caudisona durissa terrificus venom in mononuclear cells (MNC) of peripheral human blood. After obtaining MNC for cell culture, the cytotoxic effect of different concentrations of crude venom was evaluated. The peripheral blood MNC were separated using a density gradient and were incubated (2x105 cells/well) with different venom concentrations (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL) for different times (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) and in different substrates (PHA, IL lly examining the plates after 24, 48 and 72 hours. Was also observed with different concentrations of crude venom induced ADN fragmentation in MNC. We observed that the toxicity of crude C. d. terrificus venom varies proportionally with concentration, i.e., the higher the concentration, the higher its cytotoxicity. For this reason the 0.0005µg/mL concentration of crude Caudisona durissa terrificus venom presented the lowest cytotoxic activity in peripheral human blood MNC and that the fragmentation of cellular ADN was not seen in this study. Thus, it is suggested to employ two or more different assays to confirm the induction of cell death is occurring through apoptosis. / Serpentes peçonhentas produzem uma variedade de toxinas altamente citotóxicas. Possuem um verdadeiro coquetel de substâncias farmacológicas, tornando-se uma , que atualmente vem sendo utilizados por inúmeros pesquisadores, para o desenvolvimento de novos fármacos com potente ação contra microorganismos. O presente estudo visou avaliar a potencial atividade citotóxica da peçonha de Caudisona durissa terrificus em células mononucleares (CMN) do sangue periférico humano, in vitro. Após a padronização da obtenção de CMN para cultivo celular, foi realizada a avaliação do efeito citotóxico de diferentes concentrações do veneno bruto. As CMN do sangue periférico foram separadas por meio gradiente de densidade e incubadas (2x105 células/poço) com diferentes concentrações do veneno (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL), em diferentes tempos (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) e substratos (PHA, IL 2). A avaliação da atividade citotóxica do veneno foi realizada, por meio da leitura das células em câmara de neubauer, após 24, 48 e 72 horas. Em conclusão, foi possível identificar que a citotoxicidade do veneno bruto de C. d. terrificus varia de forma proporcional à concentração, ou seja, quanto maior a concentração do veneno, maior a sua citotoxicidade. Com isso, a concentração de 0,0005µg/mL do veneno bruto de Caudisona durissa terrificus, neste experimento, apresentou uma baixa atividade citotóxica em CMN de sangue periférico humano e que a fragmentação do DNA celular não foi visualizada neste estudo. Desta forma, sugere-se empregar dois ou mais ensaios distintos para confirmar se a indução da morte celular está ocorrendo por meio de apoptose.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:53:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARILISSA MACIEL MAINERI.pdf: 1118474 bytes, checksum: eb4934dbea4478c904915745c3e64da5 (MD5) Previous issue date: 2012-03-22 / Venomous snakes have a real cocktail of pharmacological active substances and drugs that act powerfully against microorganisms. The objective of the present study was to evaluate in vitro the potential cytotoxic activity of Caudisona durissa collilineata venom in mononuclear cells (MNC) of peripheral human blood. After obtaining MNC for cell culture, the cytotoxic effect of different concentrations of crude venom was evaluated. The peripheral blood MNC were separated using a density gradient and were incubated (2x105 cells/well) with different venom concentrations (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL) for different times (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) and in different substrates (PHA, IL visually examining the plates after 24, 48 and 72 hours. Was also observed with different concentrations of crude venom induced ADN fragmentation in MNC. We observed that the toxicity of crude C. d. collilineata venom varies proportionally with concentration, i.e., the higher the concentration, the higher its cytotoxicity. For this reason the 0.0005µg/mL concentration of crude Caudisona durissa collilineata venom presented the lowest cytotoxic activity in peripheral human blood MNC and that the fragmentation of cellular ADN was not seen in this study. Thus, it is suggested to employ two or more different assays to confirm the induction of cell death is occurring through apoptosis. / Serpentes peçonhentas produzem uma variedade de toxinas altamente citotóxicas. Possuem um verdadeiro coquetel de substâncias farmacológicas, tornando-se uma , que atualmente vem sendo utilizados por inúmeros pesquisadores, para o desenvolvimento de novos fármacos com potente ação contra microorganismos. O presente estudo visou avaliar a potencial atividade citotóxica da peçonha de Caudisona durissa collilineata em células mononucleares (CMN) do sangue periférico humano, in vitro. Após a padronização da obtenção de CMN para cultivo celular, foi realizada a avaliação do efeito citotóxico de diferentes concentrações do veneno bruto. As CMN do sangue periférico foram separadas por meio gradiente de densidade e incubadas (2x105 células/poço) com diferentes concentrações do veneno (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL), em diferentes tempos (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) e substratos (PHA, IL 2). A avaliação da atividade citotóxica do veneno foi realizada, por meio da leitura das células em câmara de neubauer, após 24, 48 e 72 horas. Em conclusão, foi possível identificar que a citotoxicidade do veneno bruto de C. d. collilineata varia de forma proporcional à concentração, ou seja, quanto maior a concentração do veneno, maior a sua citotoxicidade. Com isso, a concentração de 0,0005µg/mL do veneno bruto de Caudisona durissa collilineata, neste experimento, apresentou uma baixa atividade citotóxica em CMN de sangue periférico humano e que a fragmentação do DNA celular não foi visualizada neste estudo. Desta forma, sugere-se empregar dois ou mais ensaios distintos para confirmar se a indução da morte celular está ocorrendo por meio de apoptose.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T11:41:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AspectosClinicoPatologicos.PDF: 942041 bytes, checksum: 2e6a13126363261f6fe7ff380c76ba77 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-17T11:23:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AspectosClinicoPatologicos.PDF: 942041 bytes, checksum: 2e6a13126363261f6fe7ff380c76ba77 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T11:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AspectosClinicoPatologicos.PDF: 942041 bytes, checksum: 2e6a13126363261f6fe7ff380c76ba77 (MD5) Previous issue date: 2012-09-28 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Descrevem-se os quadros clínico-patológicos e laboratoriais de equinos inoculados experimentalmente com a peçonha de Caudisona durissa terrificus (Crotalus durissus terrificus na antiga nomenclatura), com a finalidade de fornecer subsídios que favoreçam a compreensão desse tipo de acidente ofídico em equinos. O veneno liofilizado foi diluído em 1ml de solução salina a 0,9% e inoculado por via subcutânea em cinco equinos, na dose de 0,12 mg/kg (um animal), 0,066 mg/kg (dois animais) e 0,03 mg/kg (dois animais). O veneno causou a morte do equino que recebeu a dose de 0,12mg/kg e de um dos dois que receberam a dose de 0,066mg/kg, com evolução de 27h27min e 52h29min, respectivamente. O segundo animal que recebeu a dose de 0,066mg/kg também adoeceu, mas recuperou-se após 12 dias da inoculação. A dose de 0,03 mg/kg determinou quadros não fatais do envenenamento, com período de evolução que variou entre 6 e 10 dias. O quadro clínico caracterizou-se por considerável aumento de volume no local de inoculação (omoplata) que se estendeu por todo o membro, apatia, cabeça baixa, alterações locomotoras evidenciadas pelo arrastar das pinças no solo, decúbito e dificuldade para levantar, redução dos reflexos auricular, palatal, do lábio superior e de ameaça, aumento das frequências cardíaca e respiratória. Os exames laboratoriais revelaram leucocitose por neutrofilia e linfocitose em apenas dois animais. Houve aumento das enzimas creatina-quinase (CK), dehidrogenase láctica (DHL) e da uréia; redução nos níveis séricos de cálcio, fósforo e magnésio. O tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) aumentou nos equinos que morreram. Os achados de necropsia foram edema do tecido subcutâneo em todo o membro em que foi aplicado o veneno, sufusões no epicárdio dos ventrículos cardíacos esquerdo e direito, bexiga repleta de urina com áreas hemorrágicas em grande parte da mucosa. Ao exame observaram-se fígado com vacuolização moderada difusa, afetando mais a zona intermediária do lóbulo hepático, dilatação dos sinusóides hepáticos leve e rim com dilatação leve dos túbulos uriníferos, principalmente no córtex. / The clinic-pathological picture and laboratory findings in horses experimentally inoculated with the venom of Caudisona durissa terrificus (Crotalus durissus terrificus, according to the former nomenclature) are described. The purpose of this study was to contribute to the understanding of this type of snake accident in horses. The lyophilized venom was diluted into 1ml of a 0.9% saline solution and was inoculated subcutaneously into five horses, at the doses of 0.12mg/kg (one horse), 0.066mg/kg (two horses) and 0.03mg/kg (two horses). The venom caused death of the horse that had received 0.12mg/kg, and of one horse of the two that had received the dose of 0.066mg/kg. The clinical course varied from 27h27min to 52h29min. The second horse inoculated with 0.066mg/kg recovered within 12 days after inoculation. The dose of 0.03mg/kg had a course of 6 to 10 days but did not cause fatal envenomation. The clinical picture in the horses was characterized by swelling of the inoculation site and adjacent areas, by apathy and lowered head, locomotory alterations shown by dragging of the hoves on the ground, decubitus and difficulty to get up, reduction of auricular, palatal, upperlip and threat reflexes, and increase of heart and breathing frequency. The laboratory examination revealed leukocytosis and lymphocytosis in two horses. There was increase of the creatine-kinase (CK), lactic dehydrogenase (DHL) and ureia; reduction in the seric levels of calcium, phosphorus and magnesium. The time of activated partial tromboplastina (TTPA) increased in the horses that died. Post mortem findings were edema of the subcutaneous tissue at the inoculated shoulder, suffusions in the epicard of left and right heart ventricles, bladder replete with urine containing a white-yellowish sediment, and hemorrhagic areas in its mucosa. Histopatologic examination revealed the liver parenchyma with diffuse moderate vacuolation affecting predominantly the intermediate area of the hepatic lobe, and slight dilation of the sinusoides in some areas; in the kidney slight dilation of the uriniferous tubules mainly in the cortex.