Made available in DSpace on 2016-03-08T14:03:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 mariana_gandini_ioc_dout_2014.pdf: 15196987 bytes, checksum: 785cdc40cbdacbdb42278c64af49aee2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O vírus dengue é um flavivírus causador de síndrome febril hemorrágica, sendo alguns casos graves evidenciados pelo acúmulo de plasma nas cavidades. Sugerese que a intensa replicação viral na fase aguda resultaria na intensa produção de mediadores inflamatórios, levando ao extravasamento plasmático. A imunidade inata é uma importante barreira na limitação da dispersão viral. As células dendríticas plasmacitoides (PDCs) e as células NK são fundamentais durante a fase inicial das infecções por suas características antivirais e citotóxicas contra células infectadas. O fenótipo \201CKiller\201D das PDCs (IKPDCs) resultaria da ativação viral e é caracterizado pela expressão membranar do ligante indutor de apoptose relacionado ao fator de necrose tumoral (TRAIL) e pela produção de interferons do tipo I. As células NK podem ser diretamente ativadas reconhecendo as células alvo ou, indiretamente ativadas pelas citocinas (como os interferons) tornando-se citotóxica, expressando TRAIL membranar. Apesar do papel antiviral, pouco se sabe sobre os mecanismos de ação dessas populações celulares durante a febre do dengue (FD). Nosso objetivo foi estudar o envolvimento das PDCs e células NK ativadas na imunopatologia da FD. Analisando as células de pacientes ex vivo, observamos maior frequência de IKPDCs nos casos brandos de FD, assim como de células NK TRAIL+. Outros marcadores de ativação como o marcador de degranulação CD107a e o receptor de reconhecimento padrão TLR3 foram expressos em maiores níveis nos pacientes comparando aos controles saudáveis As citocinas relacionadas a ativação celular - IFN\03B1, TRAIL solúvel e IL12 - foram correlacionadas com os quadros brandos. Em modelos in vitro, o DENV induziu a transformação das PDCs em IKPDCs, em via dependente dos endossomos e da dose viral. Além disso, as IKPDCs reduziram a detecção de antígenos virais em modelos de cocultura com monócitos humanos infectados, em mecanismo dependente da via dos interferons do tipo I e independente de TRAIL. As células NK foram capazes de expressar TRAIL durante estimulação in vitro tanto estimuladas pelo DENV2 quanto pelo IFN\03B1, sugerindo mecanismos de ativação indireta da população. Assim, observamos que o DENV pode ativar ambas as populações. A relação entre a maior ativação das PDCs e células NK promoveria maior limitação da dispersão viral, contribuindo para diminuir a intensidade da resposta inflamatória. Sugerimos então que a ativação do eixo antiviral PDCs-Células NK contribuiria para proteção dos quadros graves durante a dengue / Dengue virus is a flavivirus that can cause a hemorrhagic febrile syndrome, in which some severe cases are characterized by plasma accumulation in cavities. It is suggested that a high viral burden in the acute phase would lead to an enhanced production of inflammatory mediators, leading to plasma leakage. Innate immunity is an important barrier limiting viral spread. Plasmacytoid dendritic cells (PDCs) and NK cells are main actors in the beginning of infection because of their antiviral and cytotoxic features against infected cells. PDC killer phenotype (IKPDCs) is induced by viral activation and main profile is membrane expression of TNF-related apoptosis-inducer ligand (TRAIL) and type I interferon production. NK cells can be activated directly, by target recognition, or indirectly, by cytokines (like interferons) and become cytotoxic, expressing membrane TRAIL. Despite its antiviral role, the function of those cell populations during dengue fever (DF) is not largely known. Our aim was to study activated PDCs and NK cells involvement in DF immunopathology. DF patients’ cells analysis ex vivo presented higher frequency of IKPDCs and also higher frequency of TRAIL+NK cells in mild DF cases. NK activation markers such as CD107a degranulation marker and pattern recognition receptor TLR3 were upregulated in patients’ cells compared to healthy donors. Cytokines – IFNα, soluble TRAIL, IL12 – related to cell activation were upregulated in mild DF cases. In vitro models show DENV induced transformation of PDCs into IKPDCs, in endosome and viral-dependent pathways. Besides, IKPDCs could reduce viral antigen detection on co-culture models with human infected monocytes, in a type I interferon-dependent, TRAIL-independent mechanism. DENV-stimulated and IFNα-stimulated NK cells were able to express TRAIL in vitro, suggesting an indirect activation of cells. Therefore, we observed DENV-induced activation of both populations studied. A higher activation of PDCs and NK cells would promote limited viral spread, resulting in dimished inflammatory response. Then, we suggest that activation of antiviral axis PDCs-NK cells would promote protection against severity during dengue

Made available in DSpace on 2016-04-07T13:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 carolinne_marques_ioc_dout_2014.pdf: 6884657 bytes, checksum: 1eac92fc38cd066689b127f6397b3b85 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A hanseníase é uma doença infecciosa causada pelo Mycobacterium leprae, uma bactéria intracelular obrigatória. Estudos demonstram que a genética do hospedeiro pode influenciar no desfecho da doença em pelo menos em três etapas distintas: na hanseníase per se, no desenvolvimento das formas clínicas e nos episódios reacionais. Genes que participam da via principal de ativação da resposta imune inata a micobactérias tais como TRL1/2 e NOD2, foram apontados como associados à hanseníase em diferentes populações, alguns desses estudos avaliando os episódios reacionais como desfecho. Entretanto, o efeito dessas associações na população brasileira merece maior investigação. Assim o objetivo geral desse projeto foi estudar a associação dos genes TRL1 e NOD2 na susceptibilidade à hanseníase per se, e a associação de sete genes candidatos da resposta imune nos episódios reacionais. Inicialmente foram realizados estudos caso-controle e em famílias, conduzidos em quatro populações de diferentes regiões do Brasil, para verificar o efeito de SNPs do TLR1 na hanseníase. Os resultados mostraram a associação entre o TLR1 +743A>G (equivalente à troca N248S) e risco à hanseníase per se, o que foi confirmado em todas as populações estudadas (ORGG= 1,51, p<0,001). Em seguida, a correlação genótipo-fenótipo foi avaliada, e o alelo +743G foi relacionado à redução da razão TNF/IL10, bem como à alteração no perfil eletrostático protéico (diminuição da eletronegatividade) em estudos in silico Na segunda etapa do trabalho, foi desenvolvido um estudo multicêntrico incluindo cinco populações brasileiras de regiões distintas, onde foram avaliados genes candidatos à associação com a hanseníase, escolhidos com base no primeiro estudo de associação do genoma completo conduzido em chineses. Dentre os 36 marcadores avaliados, os SNPs rs8057341 no gene NOD2 e rs4942254 no locus CCDC-LACC1 exibiram efeito protetor à doença, e a análise combinada confirma a associação com proteção na população brasileira (ORAA= 0,49, p<0,001; ORCC = 0,72, p = 0,003, respectivamente). Por fim, investigamos a associação dos genes TNF/LTA, IFNG, IL10, TLR1, NOD2 e IL6 com os episódios reacionais ou subtipos (tipo 1 e tipo 2) em uma amostra de pacientes do Rio de Janeiro. Como resultado, observamos a associação do gene IL6 com reação, indicando que os genótipos rs2069840-GG e rs2069845-AG conferem proteção (OR= 0.14, p= 0.001) e risco (OR= 1.78, p = 0.01), respectivamente, ao desfecho reação per se. Os resultados do presente estudo confirmam a associação dos genes TLR1 e NOD2 na hanseníase per se, bem como do gene IL6 nas reações hansênicas, indicando-os como possíveis marcadores de susceptibilidade a esses desfechos na população brasileira / Leprosy is an infectiou s disease caused by Mycobacterium leprae , an obligatory intracellular bacterium. Studies have shown that genes are able to influence the disease outcome in at least three distinct steps: leprosy per se, clinical forms development, and leprosy reactions. Ge nes in the major pathway of innate immune response against mycobacteria such as TRL1/2 and NOD2 , have been pinpointed as associated with leprosy in different populations , some studies including leprosy reaction as outcome . However, the effect of such assoc iations in Brazilian population deserves further investigation. Therefore, the aim of this project was to study the association of TRL1 and NOD2 genes in susceptibility to leprosy per se and also the association of seven immune response candidate genes in leprosy reactions. First, case - control and family - based studies were performed in four populations from different regions of Brazil, to investigate the effect of TLR1 SNPs in leprosy. The results indicated an association between +743A>G (amino acid exchang e N248S) and leprosy risk, which was confirmed in all populations used (OR GG = 1.51, p<0.001) . In addition, we evaluated the genotype - phenotype correlation, and found the +743 G allele related to lower TNF/IL10 ratio, and also modifying the electrostatic pr ofile (reducing the electronegativity) at TLR1 protein by in silico approach . In the second step of our work, we performed a multicentric study including five Brazilian populations, to evaluate the association of candidate genes with leprosy. These genes w ere selected from the first genome - wide association study in leprosy, performed in Chinese. Among the 36 markers evaluated , both rs8057341 at NOD2 gene and rs4942254 at CCDC122 - LACC1 gene showed protector effect to leprosy, and the combined analysis confir med the association with protection in Brazilians (OR AA = 0.49, p<0.001; OR CC = 0.72, p = 0.003, respectively). Finally, we investigated the association between TNF/LTA , IFNG , IL10 , TLR1 , NOD2 and IL6 genes and leprosy reacti ons or subtypes (type 1 and type 2), using a sample of patients from Rio de Janeiro. As result, we observed the association between IL6 gene and reaction, indicating a protective (OR= 0.14, p= 0.001) and risk (OR= 1.78, p = 0.01) effect of rs2069840 - GG and rs2069845 - AG genotypes, respectively. The results of our study confirm the association of TLR1 and NOD2 genes with leprosy per se , as well as the IL6 gene with leprosy reactions, indicating them as potential markers of susceptibility to these outcomes in Brazilians

Made available in DSpace on 2016-04-15T12:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 504.pdf: 2173150 bytes, checksum: abae2766ff91aefd467293045257eb6d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Nas últimas quatro décadas estudos mostram que inflamações e infecções modulam a expressão e atividade de enzimas citocromo P450 (CYP). A modulação negativa das atividades de CYPs hepáticas é o efeito mais frequente, mas a regulação positiva também tem sido relatada. Entretanto, os mecanismos pelos quais estímulos inflamatórios e infecções modulam a expressão e a atividade destas enzimas de biotransformação permanecem obscuros. Este estudo foi conduzido para ajudar a esclarecer os mecanismos pelo quais Cyp2a5, 1a1/2 e 2b9/10 são reguladas no tecido hepático quando a resposta imune é ativada. Na primeira parte do trabalho, avaliamos a expressão e atividade constitutiva e induzida de Cyp2a5 em camundongos fêmeas adultas de oito linhagens/colônias. Possíveis relações da indução de Cyp2a5 com a expressão aumentada da heme-oxigenase 1 (HO-1) e dano hepático também foram investigadas. Níveis de mRNA da Cyp2a4/5 e hmox-1 no tecido hepático foram determinados por qPCR, enquanto as atividades da COH (Cyp2a5), EROD (Cyp1a1/2) e BROD (Cyp2b9/10) foram avaliadas em microssomos hepáticos, e a toxicidade hepática provocada pelo tratamento com os indutores examinada medindo os níveis séricos de transaminase (ALT). Os resultados mostraram que os níveis constitutivos da atividade de Cyp2a5 variaram acentuadamente entre as linhagens, sendo a atividade mais elevada registrada em DBA-2, mas os níveis constitutivos de mRNA de Cyp2a4/5 e a expressão de HO-1 não apresentaram grandes variações. O pirazol (PIR) induziu a expressão e atividade de Cyp2a5 em todas as linhagens, o fenobarbital (FEN) apenas no DBA-2, enquanto a expressão de HO-1 não foi alterada pelos tratamentos. / Em contraste com o observado com Cyp2a5, as atividades constitutivas de Cyp1a1/2 e 2b9/10 exibiram apenas discretas variações entre as linhagens. O PIR praticamente não teve efeito sobre EROD e BROD, mas o FEN regulou positivamente as atividades de Cyp1a1/2 e 2b9/10. A hepatotoxina PIR induziu a expressão e atividade de Cyp2a5 em doses em que não provocou qualquer aumento de ALT. Na segunda parte do trabalho, avaliamos os efeitos do LPS sobre a atividade de Cyp2a5, 1a1/2 e 2b9/10 em fêmeas DBA-2, e investigamos se o bloqueio da resposta inflamatória, com a administração concomitante de pentoxifilina (PTX), atenuaria ou aboliria os efeitos do LPS. Os resultados mostraram que o LPS deprimiu as atividades de Cyp1a1/2 e 2b9/10 apenas em doses altas, mas o efeito sobre a atividade de Cyp2a5 seguiu uma curva dose-resposta não linear e não monotônica (forma de U , com depressão em doses baixas, retornando aos níveis basais com as doses mais altas). A atenuação do aumento da produção de citocinas e NO pelo co-tratamento LPS e PTX não alterou os efeitos da endotoxina sobre as atividades de Cyp1a1/2 e 2b9/10, sugerindo que a regulação negativa não depende do aumento dos níveis de NO e citocinas no sangue. O co-tratamento, todavia, modificou os efeitos relacionados à dose de LPS sobre a atividade de Cyp2a5: a depressão pelas doses baixas de LPS foi mantida, mas prolongou-se a extensão da faixa de doses em que o LPS causa depressão de COH, mostrando que o co-tratamento pareceu abolir a volta aos níveis quase basais de atividade de Cyp2a5 notado em doses altas. Por outro lado, o bloqueio da produção de NO pelo co-tratamento com LPS e aminoguanidina (Ag, inibidor seletivo de NOS2) mostrou que o retorno da atividade de Cyp2a5 aos níveis basais em doses altas de LPS foi abolido. A partir dos resultados aqui apresentados, é possível supor que os níveis aumentados de NO de alguma forma deflagram a transição da regulação negativa para a positiva da atividade de Cyp2a5.

Made available in DSpace on 2016-05-11T13:02:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 rafael_silva_ioc_dout_2015.pdf: 3184979 bytes, checksum: 424c613846e42fb4bb955e915c629888 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A doença de Chagas (DC) é causada pela infecção pelo Trypanosoma cruzi e consiste num importante problema de saúde pública nas Américas do Sul e Central. Embora não caracterizado, o acometimento do sistema nervoso central (SNC) na DC foi demonstrado na fase aguda em crianças e na reativação da infecção em pacientes crônicos imunossuprimidos. Porém, os alvos celulares do T. cruzi e a origem dos parasitos no SNC em episódios de reativação crônica não estão claros. Os astrócitos são as células gliais mais abundantes do SNC humano e sua participação na DC carece de informação, bem como o papel das citocinas Interferon-gama (IFN\03B3) e fator de necrose tumoral (TNF), duas importantes citocinas no contexto da infecção pelo T. cruzi, no processo de infecção do SNC. Estudos nesse sentido são importantes diante da crescente ocorrência de co-infecção T. cruzi/HIV, bem como acesso dos pacientes a transplantes e demais situações que causam imunossupressão. Assim, investigamos a infecção de astrócitos pelo T. cruzi e os efeitos de IFN\03B3 e TNF nesse processo. Mostramos que o T. cruzi persistiu no SNC de camundongos da linhagem C3H/He cronicamente infectados em paralelo à expressão de mRNA de IFN\03B3, e a maioria das células albergando o T. cruzi eram astrócitos frequentemente localizados próximo a células mononucleares IFN\03B3+, micrógliais, como mostrado por imunoistoquímica. Utilizamos cultivos primários de astrócitos de camundongos C3H/He e C57BL/6 tratados com IFN\03B3 ou TNF na presença de tripomastigotas da cepa Colombiana do T. cruzi e analisamos taxa de infecção, crescimento do parasito e produção de mediadores inflamatórios in vitro; e o efeito do bloqueio de TNF na infecção do SNC pelo T. cruzi Confirmamos que astrócitos de ambas as linhagens foram suscetíveis à infecção pelo T. cruzi, e que o pré-tratamento com IFN\03B3 ou TNF favoreceu a invasão dos astrócitos pelo parasito e aumentou o número de formas amastigotas nos astrócitos. Tanto o T. cruzi quanto o IFN\03B3 não foram capazes de induzir sozinhos produção de óxido nítrico (NO), que só foi induzido pela associação de ambos os estímulos. O tratamento com L-NAME (inibidor de síntese de NO) reduziu parcialmente o número de formas amastigotas do T. cruzi em astrócitos tratados com IFN\03B3, enquanto o tratamento com Infliximab (anticorpo neutralizante anti-TNF) preveniu completamente o efeito de IFN\03B3 no favorecimento à infecção de astrocitos pelo T. cruzi, indicando que IFN\03B3 favorece a infecção de astrócitos pelo T. cruzi via TNF. Somado a isso, a expressão de mRNA e a produção de TNF foram aumentadas nos cultivos de astrócitos infectados pelo T. cruzi, enquanto que o seu receptor TNFR1 teve expressão aumentada apenas quando a infecção ocorreu na presença de TNF. O inibidor de expressão de TNFR1 reduziu o número de amastigotas/célula e a porcentagem de células infectadas nos cultivos pré-tratados com TNF. Finalmente, a administração de anti-TNF a camundongos C3H/He agudamente infectados reduziu o número de áreas positivas para antígenos do T. cruzi no SNC Em conjunto, os nossos dados sugerem que IFN\03B3 e TNF são possíveis facilitadores da entrada do T. cruzi em astrócitos, contribuindo para a manutenção de um ambiente inflamatório no SNC, o que poderia levar à morte células neuronais, além de facilitar a persistência do T. cruzi nesse sítio, possivelmente albergado em astrócitos, os quais agiriam como fonte de parasitos em episódios de reativação crônica / Chagas disease (CD) is caused by Trypanosoma cruzi infection and is a major public health problem in South and Central America. Although not characterized, the involvement of the central nervous system (CNS) in DC was demonstrated in the acute phase in children and reactivation of infection in immunosuppressed chronic patients. However, the cellular targets of T. cruzi and the origin of the parasites in the CNS in episodes of chronic reactivation are not clear. Astrocytes are the most abundant glial cells in the human CNS and its involvement in AD lacks information as well as the role of the cytokines interferon-gamma (IFN\03B3) and tumor necrosis factor (TNF), two cytokines important in the context of T. cruzi, in the process CNS infection. Studies in this direction are important given the increasing occurrence of coinfection T. cruzi/HIV, as well as patient access to transplants and other situations that cause immunosuppression. Thus, we investigated the infection of astrocytes by T. cruzi and the effects of IFN\03B3 and TNF in the process. We show that the T. cruzi persisted in the CNS of mice C3H/He chronically infected parallel to IFN\03B3 mRNA expression, and most of the T. cruzi-cells were astrocytes frequently located near IFN\03B3+-mononuclear cells, microglia, as shown by immunohistochemistry. We used primary astrocytes C3H/He and C57BL/6 mices treated with IFN\03B3 or TNF in the presence of trypomastigotes of T. cruzi Colombian strain and analyzed rate of infection, parasite growth and production of inflammatory mediators in vitro; and the effect of TNF blockade in CNS infection with T. cruzi We confirm that astrocytes of both strains were susceptible to infection with T. cruzi, and that pretreatment with IFN\03B3 or TNF favored the invasion of astrocytes by the parasite and increased the number of amastigotes in astrocytes. Both the T. cruzi as IFN\03B3 was not alone capable of inducing nitric oxide (NO) production, which was induced just by combination of both stimuli. Treatment with L-NAME (NO synthase inhibitor) partially reduced the number of amastigotes of T. cruzi in astrocytes treated with IFN\03B3, while treatment with infliximab (anti-TNF-neutralizing antibody) completely prevented the effect of IFN\03B3 in favoring infection of astrocytes by T. cruzi, indicating that IFN\03B3 favors infection of astrocytes by T. cruzi via TNF. In addition to this, expression of mRNA and TNF production were increased in cultures of astrocytes infected with T. cruzi, while its TNFR1 receptor expression was increased only when the infection occurred in the presence of TNF. The TNFR1 expression inhibitor reduced the number of amastigotes/cell and the percentage of infected cells in cultures pretreated with TNF. Finally, the anti-TNF administration acutely infected C3H/He mice reduced the number of positive areas for T. cruzi antigens in the CNS. Together, our data suggest that IFN\03B3 and TNF are possible facilitating the entry of T. cruzi in astrocytes, thereby contributing to the maintenance of a CNS inflammatory environment, which could lead to neuronal cell death, and to facilitate the persistence of T. cruzi in that site, possibly housed in astrocytes, which would act as a source of parasites in episodes of chronic reactivation / 2100-08-17

NEVES, Maria Rosalba Moreira das. Caracterização fenotípica e resposta imune de caprinos naturalmente infectados por nematoides gastrintestinais. 2014. 79 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-22T17:32:51Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_mrmneves.pdf: 1424697 bytes, checksum: 48849ed684234f036cd33f0ce794f96c (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-27T17:45:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_mrmneves.pdf: 1424697 bytes, checksum: 48849ed684234f036cd33f0ce794f96c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T17:45:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_mrmneves.pdf: 1424697 bytes, checksum: 48849ed684234f036cd33f0ce794f96c (MD5) Previous issue date: 2014 / The aim of this study was to evaluate phenotypic, histologic, immunologic and molecular tools to characterize goat crossbred in resistant and susceptibily to gastrointestinal nematodes. For this purpose, we used 231 F2 animals of both genders, of ages between five and ten months, from four different kidding seasons. Stool and blood samples were collected weekly for eggs per gram of feces (EPG) determinations, fecal culture, packed cell volume (PCV), total plasma protein (TPP), blood eosinophils (EOS) and immunological tests. Famacha scores were obtained on the same sample collection days. The animals were ranked according to EPG values and the 12 animals with lowest means were considered resistant while the 12 animals with the highest means were considered susceptible. The animals in the experimental lot 4, presented the best phenotypic characterization and were chosen for, recovery of gastrointestinal nematodes and tissue samples for histological and gene expression determinations. EPG, PCV and TPP were effective in the identification of resistant and susceptible. In the other lots, the PCV, TPP, eosinophil count and Famacha were not as effective as EPG. IgG and IgA levels, particularly for Haemonchus contortus infection in both challenges, showed significant differences in some of the studied timepoints. Resistant animals presented higher eosinophil counts in the abomasum, indicating that these cells participate in the control of gastrointestinal infections. IL-5 and IL-10 gene expression levels were significantly higher in the susceptible group, showing that the expression of these cytokines in the fifth week of infection may have a role in mechanisms of susceptibility to gastrointestinal nematodes. / O objetivo deste estudo foi avaliar ferramentas fenotípicas, histológicas, imunológicas e moleculares para caracterizar caprinos mestiços quanto à resistência e susceptibilidade aos nematoides gastrintestinais. Para isso, foram utilizados 231 animais F2, de ambos os sexos, com idade variando de cinco a dez meses, provenientes de quatro lotes experimentais. Semanalmente, foram coletadas amostras de fezes e sangue para realização dos exames: contagem de ovos por grama de fezes (OPG), coprocultura, volume globular (VG), proteína plasmática total (PPT), eosinófilos sanguíneos (EOS) e determinação dos níveis de imunoglobulinas. Nos mesmos dias das coletas, também foi realizado o método Famacha. Os animais foram ordenados de acordo com os valores de OPG, os 12 animais que apresentaram as menores médias foram caracterizados como resistentes e os 12 animais que apresentaram as maiores médias foram caracterizados como susceptíveis. Os animais do lote experimental 4, como apresentaram a melhor caracterização fenotípica, foram necropsiados para a recuperação dos nematoides gastrintestinais e amostras de tecidos para análises histológicas e de expressão gênica. O OPG foi eficaz, nos quatro lotes, para a caracterização de caprinos resistentes e susceptíveis as parasitoses gastrintestinais nos dois desafios de infecção (P<0,05). No quarto lote, as variáveis: OPG, VG e PPT foram eficazes na identificação dos animais quanto a diferentes níveis de resistência. Nos demais lotes, o VG, a PPT, a contagem de eosinófilos e o Famacha não foram tão eficazes como o OPG, para diferenciar caprinos resistentes e susceptíveis às parasitoses gastrintestinais. Os níveis de IgA e IgG, em especial para Haemonchus contortus, nos dois desafios de infecção, e a contagem de eosinófilos no abomaso foram parâmetros eficazes na resposta imune, indicando que essas células de defesa apresentam um papel efetor no controle das infecções gastrintestinais. Na expressão gênica, a IL-5 e IL-10 apresentaram níveis superiores significativos no grupo susceptível, mostrando que a expressão destas citocinas na quinta semana de infecção pode ter papel em mecanismos de susceptibilidade a nematoides gastrintestinais.

Introdução: A obesidade infanto juvenil é considerada um grave problema de saúde pública nos países desenvolvidos e em desenvolvimento associando-se a fatores de risco cardiovascular incluindo deposição de gordura abdominal, resistência à insulina (RI), dislipidemia e hipertensão. O tecido adiposo não é mais considerado apenas como um regulador de temperatura corporal ou um protetor mecânico, mas um órgão endócrino que libera adipocinas de ação pró- inflamatória, formando um elo entre adiposidade, síndrome metabólica e doenças cardiovasculares e a inflamação é um estado conseqüente à obesidade. O objetivo deste trabalho foi demonstrar a evolução de adipocinas e do PCRus, ao longo de 12 meses, em crianças obesas usuárias do AmO. Metodologia: Foram acompanhadas crianças e adolescentes em tratamento clínico para obesidade ao longo de 12 meses, avaliados quanto à antropometria, pressão arterial, circunferência de cintura, perfil lipídico, glicemia e insulina jejum, IL6, TNF- α, adiponectina e PCRus em 2 momentos: inclusão e após 12 meses de acompanhamento no AmO. Resultados: Foram avaliadas 27 crianças e adolescentes com mediana de idade de 10,3 anos. Os valores médios do escore-z do IMC baixaram no período (p<0,01), o HDL-c aumentou seus níveis neste período (p= 0,025). As medianas das adipocinas não variaram ao longo de 12 meses: IL-6 (p=0,470), TNF- α (p= 0,753) e adiponectina (p=0,943). 45% da amostra aumentaram seus valores de adiponectina, sendo maior este aumento no sexo feminino. O PCRus baixou ao longo do período (inclusão: 1,67mg/L(IQ:0,53-3,99mg/L); 12 meses: 0,97mg/L(IQ:0,18-2,03mg/L), porém sem diferença estatisticamente significativa p=0,083. Conclusão: As crianças e adolescentes em tratamento clínico para obesidade, após um ano de seguimento, não melhoraram seu perfil de adipocinas, mas baixaram seus valores de mediana de PCRus, embora sem diferença estatisticamente significativa. / Introduction: Obesity in children and adolescents is considered a serious public health problem in developed and developing countries and is associated with cardiovascular risk factors including abdominal fat deposition, insulin resistance (IR), dyslipidemia, and hypertension. Adipose tissue is no longer considered only as a regulator of body temperature or shield mechanic, but an endocrine organ that releases pro-inflammatory adipokines action, forming a link between adiposity, metabolic syndrome and cardiovascular diseases and inflammation is a consequence of the obesity. The objective of this study was to demonstrate the evolution of adipokines and hsCRP over 12 months in obese children users of the AmO (Clinic for Obese Children and Adolescents). Methods: Children and adolescents in clinical treatment for obesity were followed for over 12 months and assessed for anthropometry, blood pressure, waist circumference, lipid profile, fasting glucose and insulin, IL6, TNFalpha, adiponectin, and hsCRP at 2 different times: at inclusion and after a 12-month followup in the AmO. Results: A total of 27 children and adolescents with a median age of 10.3 years old were evaluated. Mean values of BMI z-scores decreased in the period (p <0.01) and HDL-C levels increased during this period (p = 0.025). The median adipokines did not change over 12 months: IL-6 (p= 0.470), TNF-α (p= 0.753), and adiponectin (p = 0.943). 45% of the sample had their adiponectin values increased, being this increase higher in females. The hs CRP lowered over the period (inclusion: 1.67 mg/L (IQ:0.53-3.99m/L) and 12 months: 0.97 mg/L (IQ:0.18-2.03mg/L) but not statistically significant p = 0.083. Conclusion: After a one year follow-up period, children and adolescents in clinical treatment for obesity did not improve their adipokine profile, but lowered their median hsCRP values although there was no statistically significant difference.

Objetivo: Esta dissertação tem por objetivo avaliar as relações entre marcadores inflamatórios e o transtorno bipolar (TB), avaliando de forma prospectiva os níveis séricos de diversas citocinas de uma mesma amostra de pacientes com transtorno de humor bipolar em mania e após seu tratamento. Métodos: Para a avaliação dos níveis séricos de citocinas em diferentes fases do TB, foi acompanhado um grupo de vinte e três pacientes antes e após o tratamento de um episódio de mania. O diagnóstico foi definido conforme critérios da Entrevista Clínica Estruturada para DSM-IV, SCID-I. A análise das variáveis foi realizada através do teste de Wilcoxon para amostras pareadas. Resultados: Não foram observadas diferenças nos níveis de citocinas antes e após o tratamento dos pacientes em episódio maníaco. Conclusões: Estes achados devem ser interpretados com cautela. Devido ao pequeno tamanho amostral não é possível controlar possíveis fatores de confusão, como, por exemplo, índice de massa corpórea e fármacos utilizados para o episódio maníaco. Estudos maiores poderiam elucidar se o tratamento do episódio maníaco não está associado a alterações nos níveis de citocinas. / Objectives: This report aims to evaluate the relation between inflammatory markers and bipolar disorder, assessing prospectively cytokines serum levels of a group of bipolar patients in acute mania and after treatment. Methods: In order to assess changes in cytokines serum levels of BD patients during acute mania and after treatment, twenty three bipolar patients were prospectively compared during and after treatment of a manic episode. Diagnoses were made using the Structured Clinical Interview for DSM-IV, SCID-I. Analysis were made using paired samples Wilcoxon signed rank test. Results: No differences were found in cytokine serum levels before and after treatment for acute mania Conclusion: These findings should be interpreted with caution. Due to small sample size, it was not possible to control possible bias, such as body mass index and prescribed medications.

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-11. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:50:50Z : No. of bitstreams: 1 000739222.pdf: 1247459 bytes, checksum: ce9769f65e62a8c812aa390f8b3c1ce2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / O ambiente fetal tem sido apontado como possível fator causal de diabetes mellitus, pois há um fenômeno conhecido como programming, sugerindo que um estímulo ou agressão durante um período crítico da vida intra-uterina resulta em alterações na fisiologia e no metabolismo, na vida adulta. Estudos demonstraram que tanto a doença periodontal (DP) como o aumento do tecido adiposo elevam o nível de citocinas plasmáticas. Ademais, citocinas, como por exemplo, o TNF-, podem ocasionar alteração no sinal insulínico. Estudos anteriores do nosso laboratório demonstraram que proles de ratas com doença periodontal apresentaram resistência à insulina e diminuição no grau de fosforilação em tirosina no tecido adiposo branco periepididimal e muscular esquelético gastrocnêmio. Para averiguar quais mecanismos estão envolvidos nestas alterações, o objetivo do presente estudo foi avaliar: 1) o grau de fosforilação em serina do IRS-1, após o estímulo insulínico, em músculo esquelético gastrocnêmio (MG), tecido adiposo branco periepididimal (TAB) e fígado (F); 2) quantificação dos conteúdos de IRβ e de IRS-1 em MG, TAB e F; 3) colesterolemia e triacilgliceridemia; 4) concentração plasmática de TNF-α, IL-6, resistina e adiponectina; 5) frutosaminemia, 6) amilasemia e lipasemia. Para tanto, foram utilizados ratos e ratas Wistar (2 meses de idade). As ratas foram divididas em dois grupos: 1) grupo com doença periodontal (DP) induzida por meio da ligadura com fio de seda ao redor do 1º molar inferior; 2) grupo-controle (CN). Após 7 dias da colocação da ligadura, as ratas de ambos os grupos foram colocadas para acasalamento, verificando-se diariamente, por esfregaço vaginal, o dia da copulação. As ratas prenhas foram separadas em caixas individuais e, após o nascimento, os filhotes foram... / Fetal environment has been pointed out as being a possible causal factor of diabetes mellitus, because there is a phenomenon known as programming, which suggests that any stimulation or aggression during a critical period of intrauterine life results in physiological and metabolic alterations in adulthood. Studies have reported that both periodontal disease (PD) and increase in adipose tissue raise the cytokine plasma level. Cytokines such as TNF-α can cause alteration in insulin signaling. Previous studies from the authors' laboratory have demonstrated that offspring of rats with periodontal disease showed insulin resistance and decrease in tyrosine phosphorylation status in periepididymal white adipose tissue and gastrocnemius skeletal muscle. To investigate which mechanisms are involved in these alterations, the aim of present study was to evaluate: 1) IRS-1 serine phosphorylation status after insulin stimulation in gastrocnemius skeletal muscle (GM), periepididymal white adipose tissue (WAT) and liver (L); 2) quantification of IRβ and IRS-1 content in GM, WAT and L; 3) cholesterolemia and triacylglyceridemia; 4) TNF-α, IL-6, resistin and adiponectin plasma concentrations; 5) fructosaminemia; 6) amylasaemia and lipasaemia. Male and female rats (2-month-old) were used. Female rats were divided into two groups: 1) periodontal disease group (PD) - with periodontitis induced by silk thread placed in cervical region of mandibular first molars; 2) control group (CN). Seven days after ligature placement, animals from both groups mated and daily vaginal smears were taken to verify the presence of sperm. Pregnant rats were kept in individual cages. After birth, the numbers of offspring from CN and PD mothers were paired and they were divided into: control offspring...

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-03-26T12:03:49Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Aline Michelle Barbosa Bafica.pdf: 3028179 bytes, checksum: 666e7950c3b0e2cf32d5a4eddeb77dfe (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-26T12:03:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Aline Michelle Barbosa Bafica.pdf: 3028179 bytes, checksum: 666e7950c3b0e2cf32d5a4eddeb77dfe (MD5) / Introdução: Neste estudo, nós avaliamos os efeitos de alguns antígenos do S. mansoni sobre a resposta imune induzida pelo antígeno solúvel de Leishmania (SLA) em células de pacientes com LC. Métodos: CMSP foram estimuladas in vitro com SLA e cultivadas na presença ou ausência dos antígenos recombinantes do tegumento do S. mansoni, Sm29 e SmTSP-2 e também do PIII, uma fração do antígenos solúvel do verme adulto do S. mansoni. As citocinas do padrão Th1, Th2 e regulatória foram medidas nos sobrenadantes das culturas, utilizando-se a técnica de ELISA sanduíche. Adicionalmente, CMSP foram marcadas com anticorpos conjugados a fluorocromos para a avaliação do fenótipo destas células, utilizando-se os anticorpos para marcação de CD4, CD8, CD25, CD28, CTLA-4 e Foxp3 em linfócito T e CD14, CD16, HLA-DR, CD80 e CD86 em monócitos. Para tanto se utilizou a técnica de citometria de fluxo e as análises foram feitas pelo programa FlowJo. Resultados: A adição dos antígenos do S. mansoni às culturas de CMSP resultou na redução dos níveis de IFN-γ em 37 a 50% dos pacientes. Embora, em menor extensão, os antígenos também foram capazes de diminuir a produção de TNF. Comparando os grupos de pacientes que tiveram ou não redução na produção de IFN-γ e TNF em culturas estimuladas com SLA, pela presença dos antígenos de S. mansoni, observou-se que não houve diferença significativa no número e tamanho das lesões e nem nos níveis basais de IFN-γ e TNF. Não houve também diferença significativa nos níveis de IL-10 e IL-5 em resposta aos antígenos de S. mansoni entre os grupos que apresentaram ou não redução na produção de IFN-γ e TNF em resposta aos antígenos do S. mansoni. Adicionalmente, foi observado que o uso do rSm29 nas culturas de CMSP de pacientes com LC resultou em diminuição da expressão de HLA-DR em monócitos não-clássicos (CD14+CD16++), no entanto a adição de PIII diminuiu a expressão desta molécula em monócitos clássicos (CD14++CD16-) e intermediários (CD14++CD16+). A adição do PIII e do rSmTSP-2 resultou na regulação da expressão de CD80 em monócitos não-clássicos e da expressão de CD86 em monócitos intermediários, respectivamente. Os antígenos rSmTSP-2 e PIII aumentaram a expressão de CTLA-4 em células TCD4+ e também expandiram a frequência de células regulatórias TCD4+CD25highFoxp3+. Conclusão: Os antígenos usados neste estudo, modularam a resposta pro-inflamatória induzida pelo SLA in vitro em um grupo de pacientes com LC, e os antígenos rSmTSP-2 e PIII foram capazes de diminuir o estado de ativação de monócitos e também aumentar a expressão de moléculas moduladoras em linfócitos T.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-02-23T13:49:32Z No. of bitstreams: 1 tese-doutorado- Ângela Gomes de Vasconcellos.pdf: 1002243 bytes, checksum: e012a52c53b7825644e52816bc846571 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-02-25T14:08:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tese-doutorado- Ângela Gomes de Vasconcellos.pdf: 1002243 bytes, checksum: e012a52c53b7825644e52816bc846571 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T14:08:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese-doutorado- Ângela Gomes de Vasconcellos.pdf: 1002243 bytes, checksum: e012a52c53b7825644e52816bc846571 (MD5) / CAPES;FAPESB / PERFIL DE CITOCINAS E QUIMIOCINAS EM CRIANÇAS HOSPITALIZADAS COM PNEUMONIA ADQUIRIDA NA COMUNIDADE. Introdução: Pneumonia adquirida na comunidade (PAC) é a principal causa de óbito em crianças abaixo de 5 anos em todo o mundo. No entanto, o diagnóstico etiológico da PAC permanece um desafio em pediatria, além de existir uma escassez de estudos sobre a resposta inflamatória nesta doença. Objetivo: Descrever o perfil de citocinas e quimiocinas detectadas na admissão de crianças com PAC e avaliar se existe associação entre os níveis de citocinas e pneumonia pneumocócica em crianças. Metodologia: Estudo prospectivo realizado no pronto atendimento do Hospital da Universidade Federal da Bahia, em Salvador, Brasil. Crianças hospitalizadas com PAC com idade <5 anos foram avaliadas. Na admissão, dados clínicos e radiológicos foram coletados, assim como amostras biológicas para investigar 19 agentes etiológicos e dosar 14 citocinas/quimiocinas séricas (IL-8, IL-6, IL-10, IL-1β, IL-12, TNF-α, IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, CCL2, CCL5, CXCL9 e CXCL10). Resultados: Foram incluídas 166 crianças. As citocinas que apresentaram níveis detectáveis foram IL-8, IL-10 e IL-6; com as respectivas medianas (IQR): 78,0 (30,7-244,3) pg/ml, 10;6 (4,6-30,6) pg/ml e 3,6 (3,1-4,4) pg/ml. As quimiocinas detectadas foram CXCL10 e CCL2; as medianas (IQR) calculadas foram: 74,2 pg/ml (36,1-164,8) e 19,1 (10,8-22,8) pg/ml, respectivamente. Infecção pneumocócica foi detectada em 38 (22,9%) casos dentre os quais a mediana de IL-6 (pg/ml) foi 32.2 pg/ml (IIQ: 12,4-54,1 pg/ml). Outros agentes etiológicos (Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, bactérias atípicas e vírus) foram detectados em 128 (77,1%) casos com a mediana de concentração de IL-6 igual a 9,0 pg/ml (IIQ: 4,1–22,0 pg/ml). Na análise multivariada, com pneumonia pneumocócica 7 como variável dependente, IL-6 foi preditor independente para infecção pneumocócica (OR=5,6; IC95% = 2,4–12,7; ponto de corte 12,5 pg/ml). O valor preditivo negativo de IL-6 na concentração sérica abaixo de 12,5pg/ml para infecção pneumocócica foi de 90% (IC95% = 82%-95%). Conclusões: Citocinas e quimiocinas inflamatórias séricas são detectáveis na admissão de criança com PAC; a concentração sérica de IL-6 na admissão esta independentemente associada com infecção pneumocócica em crianças abaixo de 5 anos de idade e com PAC.