Köln, Univ., Diss., 2005. / Computerdatei im Fernzugriff.

Zugl.: Düsseldorf, Univ., Diss., 2008

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Thesis (Ph. D.)--University of Texas at Austin, 1998. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 143-169). Available also in a digital version from Dissertation Abstracts.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La proteína quinasa CK2 es una quinasa ubicua que fosforila serinas y treoninas de un gran grupo número de proteínas celulares. La holoenzima CK2 existe como un tetrámero (CK2a2b2) donde CK2a es la subunidad catalítica con actividad proteína quinasa y CK2b es la subunidad regulatoria que modula la actividad y confiere estabilidad a CK2a. CK2 es una enzima muy conservada en diferentes especies, es esencial para la viabilidad celular y está presente en distintos compartimientos y organelos celulares. Además, CK2 ha sido encontrada unida a la cara externa de la membrana plasmática, actuando como ectoquinasa, catalizando la fosforilación de distintas proteínas extracelulares y regulando distintos procesos como migración, adhesión y proliferación celular. Estudios previos utilizando la transfección de células HEK293T en cultivo, han demostrado que es necesaria la expresión de ambas subunidades a y b para la aparición de actividad ectoquinasa en la superficie celular. La ectoquinasa se libera de la membrana en la presencia de sustratos específicos. El presente trabajo exploró la posibilidad de que la subunidad regulatoria CK2b pudiera exportar al medio extracelular otra proteína unida covalentemente a su cadena polipeptídica. El modelo experimental consistía en la cotransfección de células HEK293T en cultivo celular, con DNAs que codifican para las proteínas de fusión a CK2b y la CK2a. Se utilizó dos tipos de de proteínas de fusión: la glutathion S-transferasa unida a CK2b (GST-CK2b) y la proteína fluorescente verde también unida a CK2b (GFP-CK2b), en ambos casos la unión fue al extremo amino-terminal de CK2b. Se observó que estas proteínas de fusión se expresan, junto con CK2a, a niveles de actividad catalítica parecidos, pero siempre menores a los observados con la expresión de CK2b no modificada. Los resultados mostraron consistentemente a la proteína de fusión en los lisados celulares, pero no fue posible de detectarlas en el medio extracelular. Para estos análisis se utilizaron técnicas muy sensibles como inmunoprecipitación específica, ensayos de actividad catalítica e inmunoblot (western blot). Se concluye que la fusión de CK2b con otra proteína no altera per se el proceso de expresión de la proteína ectópica, pero si inhibe su traspaso por la membrana plasmática hacia el medio extracelular, posiblemente debido a la orientación estérica de las moléculas recombinantes usadas

La protéine FADD (Fas associated death domain) est l’adaptateur clé de la voie de signalisation apoptotique dépendante des récepteurs de mort de la famille du TNF (tumor necrosis factor). Au cours des dix dernières années, il est apparu évident qu’au-delà de son rôle majeur dans la mort cellulaire, FADD est impliqué dans d’autres processus biologiques comme le développement embryonnaire, la réponse immunitaire innée ou encore la progression du cycle cellulaire. De même, il est devenu clair que la localisation subcellulaire de FADD est déterminante pour sa fonction. Identifier les voies de régulation de l’expression de la protéine est donc d’une importance capitale. En 2008, notre équipe a mis en évidence, dans un modèle murin de la thyroϊde, un nouveau mécanisme de régulation de l’expression de la protéine via la sécrétion. En parallèle, le laboratoire a rapporté que la présence de FADD dans le sérum de patients cancéreux était corrélée à l’agressivité des tumeurs et l’inflammation. (Tourneur et al, 2012). L’objectif de ce travail de thèse était de comprendre le mécanisme par lequel FADD était sécrété, et de déterminer, le cas échéant, les modalités de sa régulation. Un troisième objectif est apparu au cours de la thèse : identifier de nouveaux modes de régulation de l’expression de FADD. Au moyen d’une lignée modèle humaine, nous avons montré que l’expression de la protéine humaine pouvait être régulée via une voie non-conventionnelle de sécrétion, tout comme dans le modèle murin. En parallèle de la caractérisation de cette sécrétion, nous avons montré que celle-ci pouvait être régulée par la kinase anti-apoptotique CK2 (casein kinase 2). Enfin, nous montrons que la CK2 régule la localisation nucléaire de FADD via une phosphorylation dépendante de la sous-unité régulatrice de la kinase et que la CK2 pourrait interagir directement avec FADD. Ces résultats constituent la première démonstration de la régulation de FADD par sécrétion par des cellules humaines et les premiers à rapporter un nouveau mode de régulation de la localisation subcellulaire de FADD par la CK2. Les conséquences de ces résultats en regard des fonctions connus de FADD sont discutées / The FADD protein (Fas associated death domain) is the key adaptor molecule of the apoptotic signaling pathway triggered by death receptors of the TNF (Tumor necrosis factor) superfamily. During the last decade, it became obvious that, in addition to its major role in cell death, the protein was also involved in other biological processes like the embryonic development, the immune response or even cell cycle progression. Evidence also showed that the protein sub-cellular localization was a key determinant to its functions. Therefore, the identification of underlying regulatory mechanisms dictating FADD expression was of significant importance. In 2008 our laboratory identified, in a thyroid murine model, a new mechanism controlling FADD expression, namely via secretion. We discovered that the loss of FADD expression from tumor cells, by secretion, could be correlated to cancer aggressiveness as well as inflammation (Tourneur 2012). The goal of this thesis work was to apprehend the mechanism by which FADD was secreted and determine, in that case, the modalities of this regulation. A third objective of this work was to identify new potential regulatory pathways of FADD expression. By means of a human cell line model, we showed that, similarly to the mouse model, the expression of human FADD could be regulated via unconventional secretion. In parallel to the characterization of the secretory process itself, we demonstrated that secretion could be negatively regulated by the anti-apoptotic kinase CK2 (casein kinase 2). Finally, we showed that CK2 could regulate FADD nuclear localization via a regulatory sub-unit-dependent phosphorylation and that FADD and CK2 could directly interact. These results are the first to demonstrate that human FADD expression could be regulated via secretion and that FADD sub-cellular localization could be modulated by CK2. The consequences of such regulation with regards to known FADD functions are discussed

Les rétrotransposons LTR sont des éléments transposables très répandus chez les eucaryotes. Comme les rétrovirus, ils se répliquent par transcription inverse de leur ARN en ADNc, qui est intégré dans le génome hôte par leur propre intégrase (IN). Des études de séquençage à haut débit ont clairement établi que l'intégration ne se fait pas de façon aléatoire dans l'ensemble du génome de la cellule hôte. Des connaissances approfondies sur la biologie rétrovirale ont été acquises grâce à leur étude sur la levure utilisant le Ty1 LTR-retrotransposon comme modèle de travail. Le rétrotransposon Ty1 de la levure Saccharomyces cerevisiae intègre en amont des gènes de classe III, les gènes transcrits par l'ARN polymérase III (Pol III). Des données récentes ont révélé l'importance de l'AC40, une sous-unité de Pol III dans ce ciblage. Une interaction entre le Ty1 IN et l'AC40 est nécessaire pour le choix du site d'intégration des gènes Pol III. Néanmoins, le mécanisme moléculaire reste largement inconnu. Afin d'obtenir une vision globale de l'ensemble du phénomène qui se produit sur le site d'intégration, nous aimerions déterminer de manière exhaustive les protéines qui interagissent avec Ty1 IN et analyser leur rôle dans l'intégration de Ty1 et la transcription de l'ARN Pol III. Pour atteindre cet objectif, nous avons développé des approches protéomiques pour identifier de nouveaux partenaires cellulaires Ty1 intégraux. Nous avons identifié plusieurs nouveaux partenaires Ty1 IN qui semblent intéressants et leur rôle moléculaire dans la rétrotransposition de Ty1 sera étudié. Cependant, dans le cadre de mon doctorat, j'ai particulièrement travaillé à déchiffrer le rôle moléculaire de la protéine caséine kinase II dans la rétrotransposition de Ty1. / LTR-retrotransposons are widespread transposable elements in eukaryotes. Like retroviruses, they replicate by reverse transcription of their RNA into cDNA, which is integrated into the host genome by their own integrase (IN). High-throughput sequencing studies clearly established that integration does not occur randomly throughout the host-cell genome. Deep insights on retroviral biology have been gained by their study in yeast using the Ty1 LTR-retrotransposon as a working model. The Ty1 retrotransposon of the yeast Saccharomyces cerevisiae integrates upstream of class III genes, the genes transcribed by RNA polymerase III (Pol III). Recent data revealed the importance of AC40, a Pol III subunit in this targeting. An interaction between the Ty1 IN and AC40 is necessary for integration site choice at the Pol III genes. Nevertheless, the molecular mechanism remains largely unknown. To obtain a global view of the entire phenomenon that occurs on the integration site we would like to exhaustively determine the proteins that interact with Ty1 IN and analyze their role in both Ty1 integration and RNA Pol III transcription. To achieve this goal, we have developed proteomic approaches to identify new Ty1 integrase cellular partners. We have identified several novel Ty1 IN partners that seem interesting and their molecular role in Ty1 retrotransposition will be studied. However, in the tenure of my PhD, I have particularly worked to decipher the molecular role of the casein kinase II protein in Ty1 retrotransposition.

Not available / text

Thesis (Ph. D.)--West Virginia University, 2005. / Title from document title page. Document formatted into pages; contains v, 129 p. : ill. (some col.). Includes abstract. Includes bibliographical references (p. 118-129).

Thesis (Ph. D.)--University of Texas at Austin, 2006. / Vita. Includes bibliographical references.