Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-05-03T14:54:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4334538 bytes, checksum: 8b68b0035b83d763aadc2d8775cd8836 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-03T14:54:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4334538 bytes, checksum: 8b68b0035b83d763aadc2d8775cd8836 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho descreve a síntese e o estudo da atividade antifúngica e antibacteriana de quatorze complexos de Ni(II) com fosfinas e N-arilsulfonilditiocarbimatos, e de dez sais derivados de complexos aniônicos bis(N-arilsulfonilditiocarbimato)niquelato(II). Os complexos neutros apresentam a fórmula geral [Ni(S 2C=NSO2R)(Fosfina)], sendo R= C6H5, 4-CH3C6H5, 2-CH3C6H5, 4-FC6H5,4-ClC6H5,4-BrC6H5,4-IC6H5, e Fosfina = cis-1,2- bis(difenilfosfina)eteno(dppet) ou trifenilfosfina (PPh3). Destes, oito são inéditos. Os sais apresentam a fórmula geral: [A]2[Ni(S2C=NSO2R)2], sendo A = (PPh3Me+), (PPh3Et+), (PPh3Bu+), (PPh4+) e (C4H9N+) e R= C6H5 , 4-FC6H5. Destes, seis são inéditos. Para a caracterização dos compostos foram utilizadas medidas de condutividade, medidas de pontos de fusão, espectroscopia eletrônica (UV-vis), espectroscopia vibracional (IV), espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN de 1H e 13 C), e espectrometria de massas de alta resolução. Os dados físico-químicos obtidos estão consistentes com as fórmulas propostas. Os resultados dos experimentos de espectrometria de massas de alta resolução estão consistentes com as composições esperadas. Os espectros vibracionais indicaram a presença dos ligantes nas substâncias sintetizadas e os espectros de UV-vis e RMN confirmaram uma geometria quadrática em torno do átomo de níquel. A atividade dos compostos foi testada frente o fungo Colletotrichum acutatum e as bactérias Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Para os compostos neutros com a fosfina dppet, o método Poison Food não se mostrou eficiente para avaliar a atividade antifúngica devido à baixa solubilidade em água dessas substâncias. Já os compostos neutros contendo trifenilfosfina se mostraram muito ativos contra essa espécie de fungo, com os valores de IC50 de modo geral menores que bis(dietilditiocarbamato)zinco, princípio ativo do fungicida Ziram. Não foi possível a obtenção dos valores de IC50 para os compostos iônicos, pois houve a precipitação dos compostos no meio de cultura, mesmo assim foi observada uma atividade de 20 a 45% de inibição para esses compostos a 1,0 mmol.L-1. Somente os compostos com trifenilfosfina apresentaram atividade contra a bactéria E.coli, os demais compostos não mostraram difusão no meio de cultura. Nenhum composto avaliado se mostrou ativo contra a bactéria S.aureus. / The neutral complexes present the general formula [Ni(S2C=NSO2R)(Phosphine)], where R = C6H5, 4-CH3C6H5, 2-CH3C6H5, 4-FC6H5, 4-ClC6H5, 4-BrC6H5, 4-IC6H5, and Phosphine = cis- 1,2-bis(diphenylphosphine)ethylene (dppet) or triphenylphosphine (PPh3). Eight of them are new complexes. The salts have the general formula: [A] 2[Ni(S2C=NSO2R)2], where A = (PPh3Me+), (PPh3Et+), (PPh3Bu+), (PPh4+), (C4H9N+) and R= C6H5 or 4-FC6H5. Six of them are new compounds. Experiments of conductivity, melting points, electronic spectroscopy (UV-vis), vibrational spectroscopy (IR), nuclear magnetic resonance spectroscopy ( 1H and 13 C NMR), and high-resolution mass spectrometry were performed for the characterization of the compounds. The physico-chemical data are consistent with the proposed formulae. The high-resolution mass spectrometry experiment results are consistent with the expected compositions. The vibrational spectra indicate the presence of the dithiocarbimate and/or phosphine ligands. UV-vis and NMR spectra confirmed a quadratic geometry around the nickel atom. The activity of the compounds against the fungus Colletotrichum acutatum was tested using the Poison Food method. The neutral compounds containing PPh3 were very active, with lower IC50 values than bis(diethyldithiocarbamato)zinc, the active ingredient of the fungicide Ziram. The Poison Food method was not efficient to evaluate the antifungal activity of the compounds containing dppet, due to their low solubility in the aqueous medium. The salts inhibited the fungus growth from 20 to 45% at 1,0 mmol.L-1. It was not possible to obtain their IC50 values, due to precipitation of the compounds in the culture medium above this concentration. The activities against the bacteria Escherichia coli and Staphylococcus aureus was tested using the disc diffusion method. The compounds containing PPh3 were active against E. coli and were inactive against the S. aureus. As the other compounds showed no diffusion in the culture medium, their tests were inconclusive.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais. / Made available in DSpace on 2012-10-26T11:57:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 304591.pdf: 3524501 bytes, checksum: 46bc9ee542bb9cb82d90d469646914c1 (MD5) / A maçã é a segunda fruta de maior importância econômica no Brasil, e Santa Catarina é o principal Estado produtor com 53% nacional da produção total do Brasil. A sua maçã se concentra principalmente em duas cultivares, Gala e Fuji, que representam em torno de 95% da produção. Esta concentração em poucas variedades predispõe à ocorrência de várias doenças, dentre elas aquelas conhecidas como "podridão amarga" e "mancha foliar da Glomerella" (MFG), as quais causam elevadas perdas na produção. Estas doenças são ocasionadas pelo ataque do patógeno fúngico Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., responsável pela doença nos frutos e nas folhas da macieira, respectivamente. A MFG é uma doença típica de verão, podendo provocar desfolhamento superior a 75% e, como consequência, reduzir drasticamente a produção das plantas no ano seguinte. Esta doença ocorre principalmente na cv. Gala, enquanto que a cv. Fuji mostra-se resistente a ela. Recomendam-se várias medidas para controlar esta moléstia nas cvs. suscetíveis, medidas estas majoritariamente associadas ao controle com produtos químicos. Os resultados, contudo, são variáveis e pouco animadores. A incorporação de resistência nas cultivares suscetíveis para estas e outras moléstias poderá reduzir o uso de fungicidas em mais de 80%. O presente trabalho objetivou analisar o patossistema C. gloeosporioides - M. Domestica desde uma perspectiva microscópica, a qual visa analisar a dinâmica de crescimento do C. gloeosporioides ao longo do tempo (até 48 horas após a inoculação do patógeno sobre folhas de macieira cvs. Fuji e Gala) e as diferenças que apresentam os tecidos foliares das cvs, Fuji e Gala em resposta ao ataque pelo patógeno, até 48 horas da inoculação, mediante observações ao microscópio óptico e microscópio eletrônico de varredura (MEV). O trabalho objetivou também empregar metodologias associadas à proteômica, visando identificar as diferenças na expressão proteica que apresenta o tecido foliar das cvs. Fuji e Gala em resposta ao ataque pelo C. gloeosporioides, e identificar a estrutura primaria das proteínas expressadas exclusivamente em cada tratamento, para cada cultivar, até 48 horas da inoculação com o patógeno / The apple is the second most economically important fruit in Brazil, and Santa Catarina State is the main producing region with 53% of the total national production. The apple production is concentrated mainly in two cultivars Gala and Fuji, wich represent around 95% of production. This concentration in a few varieties predisposes to several diseases, among them those known as "bitter rot" and "Glomerella leaf spot" (GLS), wich cause high yield losses. These diseases are caused by the attack of the fungal pathogen Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., responsible for the disease on fruits and leaves of apple trees, respectively. Bitter rot and MFG are typically summer diseases, when they can cause defoliation above 75% and, consequently, dramatically reduce the production plant next year. The MFG occurs mainly in cv. Gala, while cv. Fuji is resistant to it. It is recommended several measures to control this disease in the cvs. suscetible, mostly associated with these measures to control with chemicals. The results, however, are variable and not very encouraging. The incorporation of resistance in cultivars susceptible to these and other diseases may reduce the use of fungicides in over 80%. This study aimed at to analyze the pathosystem C.gloeosporioides - M. domestica from a structural perspective, which aimed to evaluate the growth dynamics of C. gleosporioides over time up to 48 hours after inoculation of the pathogen on leaves of apple cvs. Fuji and Gala and the differences in the the leaf tissue of cvs. Fuji and Gala in response to pathogen attack by up to 48 hours after inoculations, by optical microscopy and scanning electron microscope (SEM). The work also aimed to employ methodologies associated with proteomics, to identify differences in protein expression that has the leaf tissue of cvs. Fuji and Gala in response to the attack of C. gloeosporioides, and to identify the primary structure of proteins ocurring exclusively in each treatment in each cultivar 48 hours after inoculation with the pathogen

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-graduação em Recursos Genéticos Vegetais / Made available in DSpace on 2013-07-16T00:34:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 260989.pdf: 556735 bytes, checksum: d4e21055c33e628d5e6ec0a6b64fcd4a (MD5) / Realizou-se bioprospecção de espécies de macroalgas marinhas e plantas aquáticas com o objetivo de encontrar pelo menos um extrato eficiente para o controle da antracnose (Colletotrichum lindemuthianum) do feijoeiro. Para tanto, foram coletadas e identificadas 17 espécies de macroalgas marinhas: Acanthophora spicifera, Bostrychia sp., Bryothamnion seaforthii, Bryothamnion triquetrum, Centroceras clavulatum, Cheilosporum sagittatum, Codium isthmocladum, Codium sp., Enteromorpha sp., Enteromorpha lingulata, Gracilaria tepocensis, Hypnea spinella, Lithophyllum sp., Petalonia sp., Sargassum stenophyllum, Ulva lactuca, Ulva fasciata; e duas espécies de plantas aquáticas: Lemna sp. e Spartina juncea. Posteriormente, o material foi seco em estufa e os compostos foram extraídos em etanol e concentrados por evaporação. Os extratos foram testados in vitro, avaliando a influência sobre o índice de velocidade de crescimento micelial (IVCM) em meio de cultura, sobre a germinação de conídios e o padrão de germinação conidial (PGC) de C. lindemuthianum, em lâminas escavadas. Em ambos os testes, a concentração utilizada foi de 50 mg peso seco/ mL. Realizaram-se também testes em casa-devegetação onde os extratos foram testados por meio de pulverizações preventivas em plantas de feijoeiro cv. Uirapuru com posterior inoculação dessas plantas com uma suspensão de C. lindemuthianum (1,2x106 conídios/ mL). Para a verificação do efeito local e residual, plantas tratadas foram inoculadas 4 horas e 7 dias após o tratamento, respectivamente, e foram avaliadas as plantas inteiras. Para a verificação do efeito sistêmico, plantas tratadas foram inoculadas 7 dias após o tratamento e somente o trifólio não tratado foi avaliado. A severidade da antracnose foi avaliada aos 5 e 11 dias após inoculação. O extrato de H. spinella apresentou forte ação sobre o crescimento vegetativo de C. lindemuthianum, reduzindo o IVCM em 74% comparado à testemunha. Os extratos de Lemna sp. e S. stenophyllum inibiram a germinação de conídios de C. lindemuthianum em 100% e 99%, respectivamente. Nos testes in vivo, verificou-se que sob efeito local o extrato de B. seaforthii reduziu 35% a severidade da antracnose aos 11 d.a.i.. Embora sem apresentar efeito local, o extrato de Ulva fasciata reduziu 24% a severidade da antracnose aos 11 d.a.i. sob efeito residual e 42% a severidade da antracnose aos 5 d.a.i. sob efeito sistêmico. A indução de resistência foi considerada para explicar a redução de doença pelo extrato de Ulva fasciata. Dados de avaliações in vitro não correlacionaram com os dados obtidos nos experimentos com plantas. bioprospecting work was performed with species of marine macroalgae and aquatic plants, in order to screen at least an extract able to control the bean anthracnose. For that, it was collected and identified 17 marine macroalgae species, i.e. Acanthophora spicifera, Bostrychia sp., Bryothamnion seaforthii, Bryothamnion triquetrum, Centroceras clavulatum, Cheilosporum sagittatum, Codium isthmocladum, Codium sp., Enteromorpha sp., Enteromorpha lingulata, Gracilaria tepocensis, Hypnea spinella, Lithophyllum sp., Petalonia sp., Sargassum stenophyllum, Ulva lactuca, Ulva fasciata as well as two aquatic plant species, i.e. Lemna sp. and Spartina juncea. Thereafter, these species were dried in a chamber and, their compounds were extracted with ethanol and concentrated by solvent evaporating. The extracts were tested in vitro for evaluating the effect of them on the mycelial growth velocity index (IVCM) in culture medium and the conidial germination as well as the pattern of conidial germination (PGC) of C. lindemuthianum in well slides. The extract concentration used in both tests was always 50 mg dry wheight/ mL. Experiments were also carried out under greenhouse conditions where bean plants cv. Uirapuru were previously sprayed with the extracts and inoculated with a conidial suspension of C. lindemuthianum (1,2x106 conidia/ mL). To verify the presence of local effect and residual effect, treated plants were inoculated 4 hours and 7 days after treatment, respectively, and whole plants were evaluated. To investigate the systemic effect, treated plants were treated 7 days after treatment, but the disease was evaluated only on the non-treated uppermost three-leaflet leaf. Anthracnose severity was determined on 5th and 11th day after inoculation (dai). The extract of H. spinella presented a strong action towards the mycelial growth of C. lindemuthianum, reducing the IVCM by 74% when compared to the control. The extracts of Lemna sp. and S. stenophyllum inhibited the fungus conidial germination by 100% and 99%, respectively. In greenhouse tests the B. seaforthii revealed local effect, reducing the disease severity by 35% on the 11 dai. Although without showing local effect, the extract of Ulva fasciata reduced the anthracnose severity on the 11th dai by 24% in whole plants and on the 5th dai systemically by 42% as well. The induction of resistance was taken in consideration to explain the disease severity reduction by the extract of Ulva fasciata. In vitro data did not correlate with those obtained from greenhouse experiments.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:01:11Z : No. of bitstreams: 1 000859885_20160831.pdf: 501569 bytes, checksum: a0cc408425c296c55fc943e16b14c561 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-09-01T14:08:38Z: 000859885_20160831.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-01T14:09:16Z : No. of bitstreams: 1 000859885.pdf: 1928998 bytes, checksum: 219f6bfbc443d17c19585615178fda23 (MD5) / O Brasil é o terceiro maior produtor mundial de frutas, com mais de 40 milhões de toneladas anuais, e uma área plantada em torno de três milhões de hectares. Entretanto, esse setor ressente-se de problemas complexos, de natureza diversa, como os de ordem fitossanitária, dentre eles, destaca-se a antracnose, causada por fungos do gênero Colletotrichum. As perdas resultantes desta doença dão-se em pré e pós-colheita, podendo chegar a 90% de prejuízo dependendo das condições ambientais e do manejo adotado. Nas frutíferas tropicais o Colletotrichum gloeosporioides é descrito com maior frequência, como agente causal da antracnose, porem estudos recentes demonstram que nem sempre apenas essa espécie é a responsável pela doença. De um modo geral, os patógenos descritos em associação com o complexo de sintomas de antracnose em frutas são classificados Colletotrichum gloeosporioides e Colletotrichum acutatum. Estudos recentes demonstram que nem sempre os critérios adotados para a classificação da espécie do patógeno associado aos sintomas são os adequados. Com isso, para maior precisão e clareza é fundamental o estudo completo desses patógenos, envolvendo analises simultâneas das caracteristicas morfoculturais e moleculares / Brazil ranks third among the largest fruit producers in the world with more than 40 million tons per year and a planted area of about three million hectares. However, this sector has complex problems of different nature, such as plant diseases and among them, anthracnose. This disease is caused by fungi of the Colletotrichum genus. Losses resulting from this disease happen pre- and post-harvest, reaching 90% of damage depending on environmental conditions and management adopted. Colletotrichum gloeosporioides is described most often as the causal agent of anthracnose in tropical fruits; however, recent studies have shown that this is not always the case. In general, the pathogens described in connection with the complex symptoms of anthracnose in fruits are classified either as Colletotrichum gloeosporioides or Colletotrichum acutatum. But, recent studies have shown that the criteria adopted to classify the pathogen species associated with the symptoms are not always the most appropriate. Thus, simultaneous analysis of morphocultural and molecular characteristics are necessary to classify these pathogen species more accurately

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:35:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6545.pdf: 4887269 bytes, checksum: 9f56f6adbfb0cee1dfc910d155e230f0 (MD5) Previous issue date: 2014-11-06 / Financiadora de Estudos e Projetos / Brazil remains the world's largest orange producer, accounting for 32% of the total production of oranges and 50% orange juice. The State of São Paulo holds 97% of Brazilian exports of orange juice, possessing one of the largest citrus producing areas of the world. Citrus plants can be affected by various pathogenic agents which highlights the fungus Colletotrichum acutatum, causal agent of citrus post-bloom fruit dropwhich under certain environmental conditions, is in a limiting factor in many citrus production areas. Given the above and seen the importance of disease in the cultivation of citrus, realizes the need for information related to the chemical study of C. acutatum. Thus, this study presents the chemical study of fungal plant pathogen, in addition, discusses the study of plant-microbe interactions, identifying volatiles by HS-SPME-GC-MS as well as characteristic signals compounds produced by plants when infected. Chemical studies of C. acutatum to the isolation of certain diketopiperazines, phenolic compounds, steroids, nucleosides and glycerides. In order to encourage the production of metabolites by the fungus and understand more your metabolism, some modulators (chemical and epigenetic) were used, in addition to the growth of microorganisms in mixed cultures, where it was possible to isolate some metabolites such as 2,5-dihidroximetilfurano and IAA. Aiming to observe the behavior of the flowers as the production of metabolites when infected, the study of plant-fungus interaction, where the pathogen was inoculated in flowers of Citrus sinensis, and these were collected at 2, 4 and 7 days. The volatile components of infected flowers were identified by HS-SPME-GC-MS and compared with the healthy flowers. A methodology for biological assays as mycelial growth, spore germination and appressorium formation was implemented. / O Brasil mantém-se como maior produtor mundial de laranja, sendo responsável por 32% da produção total de laranja e 50% de suco de laranja. O Estado de São Paulo detém 97% das exportações brasileiras de suco de laranja, possuindo uma das maiores áreas citrícolas do mundo. As plantas cítricas podem ser afetadas por vários agentes fitopatogênicos onde se destaca o fungo Colletotrichum acutatum, agente causal da Podridão Floral dos Citros (PFC), que sob determinadas condições ambientais, constitui-se em um fator limitante à produção em várias áreas citrícolas. Diante do exposto e visto a importância da PFC no cultivo de citros, percebe-se a necessidade de informações relacionadas ao estudo químico de C. acutatum. Assim, o presente trabalho apresenta o estudo químico do fungo C. acutatum, além disso, aborda o estudo da interação planta-microrganismo, identificando compostos voláteis por HS-SPME-GC-MS, bem como sinais característicos de compostos produzidos pela planta quando infectada. O estudo químico de C. acutatum, proporcionou o isolamento de algumas dicetopiperazinas, compostos fenólicos, esteroides, nucleosideos e glicerídeos. Com a finalidade de incentivar a produção de metabolitos pelo fungo e entender mais o seu metabolismo, foram utilizados alguns moduladores (químicos e epigenéticos), além do crescimento do microrganismo em culturas mistas, onde foi possível isolar alguns metabolitos como o 2,5-dihidroximetilfurano e o IAA. Visando observar o comportamento das flores quanto a produção de metabolitos quando infectadas, foi realizado o estudo de interação fungo-planta, onde o patógeno foi inoculado em flores de Citrus sinensis, e estas foram coletadas com 2, 4 e 7 dias. Os componentes voláteis das flores infectadas foram identificados por HS-SPME-GC-MS e comparados com as flores sadias. Uma metodologia para ensaios biológicos como crescimento micelial, germinação de esporos e formação de apressórios foi implantada.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-16. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:30Z : No. of bitstreams: 1 000826579.pdf: 368217 bytes, checksum: 8e4e91ae5f9afdf71e55913e7b8beac1 (MD5) / A podridão floral dos citros (PFC) é uma importante doença dessa cultura, responsável por elevadas perdas de produção. Normalmente, essa doença mostra-se limitante quando ocorrem prolongados períodos chuvosos durante o florescimento das plantas ou quando existe intenso molhamento foliar. Duas espécies de Colletotrichum estão associadas à doença: C. acutatum e C. gloeosporioides. Entretanto, recentemente tem-se verificado que, mesmo sob condições não tão propícias, a doença tem ocorrido com relativa frequência; suspeitando-se do envolvimento de outras espécies de Colletotrichum ou de novas condições de adaptação das espécies descritas. Esse trabalho teve como objetivo determinar se há ou não outra espécie de Colletotrichum associada a PFC e avaliar a viabilidade do emprego de marcadores moleculares ISSR na caracterização taxonômica de isolados de Colletotrichum spp. associados a sintomas de PFC em flores, assim como de tecidos foliares e frutos cítricos assintomáticos. Para tanto, foi empregada uma combinação de iniciadores específicos, levando em conta a região ITS e marcadores moleculares ISSR. Os marcadores ISSR mostraram-se eficientes na caracterização taxonômica dos isolados de Colletotrichum analisados. A população avaliada foi constituída apenas por C. acutatum e C. gloeosporioides, descartando o envolvimento de uma espécie adicional, o que converge com os registros na literatura. Foi constatada alta diversidade genética entre os isolados analisados, o que também se mostra convergente quanto às diferenças fenotípicas observadas sob condições de campo. Entretanto, não foi encontrada relação quanto à origem e as espécies de Colletotrichum spp. associadas. De modo inédito, ainda que assintomaticamente, foi detectada a presença de um isolado de C. acutatum associado a frutos cítricos / Postbloom fruit drop of citrus (PFD) is a serious disease of this crop, accounting for high yield losses. Usually, this disease shows to be limiting when there are prolonged rainy periods during plant flowering or when there is intense leaf wetness. Two Colletotrichum species are associated with the disease: C. acutatum and C. gloeosporioides. However, recently, it has been found that, even under not so favorable conditions, the disease has occurred with some frequency; one suspects the involvement of other Colletotrichum species or new adaptation conditions of the described species. This study aimed to determine whether there is another Colletotrichum species associated with PFD and it assess the viability of using molecular markers ISSR for taxonomic characterization of Colletotrichum spp. isolates associated with PFD symptoms in flowers, as well as of leaf tissues and asymptomatic citrus fruits. For this purpose, we used a combination of specific primers, taking into account the ITS region and ISSR molecular markers. ISSR markers have proven to be effective for taxonomic characterization of the Colletotrichum isolates analyzed. The population assessed consisted only of C. acutatum and C. gloeosporioides, discarding the involvement of an additional species, something which converges with records in the literature. We found high genetic diversity among the isolates analyzed, and this also shows to converge as for the phenotypic differences observed under field conditions. However, no relation was found regarding the origin and associated Colletotrichum spp. species. In an unprecedented way, although asymptomatically, we detected the presence of a C. acutatum isolate associated with citrus fruits

Orientador: Maria de Lourdes Corradi da Silva / Coorientador: Ana Flora Dalberto Vasconcelos / Banca: Eliana Gertrudes Macedo Lemos / Banca: Roberto da Silva / Banca: Maria Antônia P. Colabone Celligoi / Banca: Luis Octavio Regasini / Resumo: A atividade metabólica fúngica, especialmente nos endofíticos, favorece a secreção de moléculas como antibióticos, pigmentos, enzimas e polissacarídeos, que podem ser aplicadas nas indústrias alimentícia, cosmética, farmacêutica, entre outras. A diversidade química dos exopolissacarídeos (EPS) bem como a possibilidade de sua utilização como substrato para diferentes modificações químicas (carboxilação, sulfatação e metilação) aumentam seu espectro de aplicação. Realizar o cultivo submerso dos fungos endofíticos Neofusicoccum parvum, Fusarium sp e Colletotrichum gloeosporioides para a produção de EPS foi o primeiro objetivo deste trabalho. Uma vez obtidos, os EPS foram purificados e quimicamente caracterizados. Sulfatação e ensaio da atividade anticoagulante foram realizados. Os parâmetros concentração de inóculo e tempo de cultivo foram estabelecidos para maior produção dos EPS, por fermentação submersa. Etapas de purificação, por centrifugação, foram efetuadas após análises por cromatografia de exclusão estérica a alta pressão, com detecção por índice de refração (HPSEC/RID). Os EPS purificados [precipitado do C. gloeosporioides (C. gloeosporioidesprec) e os três sobrenadantes] mostraram-se praticamente isentos de proteínas. A hidrólise ácida e subsequente análise dos hidrolisados por cromatografia de troca aniônica a alta pressão com detecção por amperometria pulsada (HPAEC/PAD) indicaram que apenas o C. gloeosporioidesprec era uma glucana. A análise por cromatografia... / Abstract: Fungal metabolic activity, especially in the endophytic, favors secretion of molecules such as antibiotics, pigments, enzymes and polysaccharides, which can be applicable by food, cosmetic and pharmaceutical industries, and others. The chemical diversity of the exopolysaccharides (EPS), as well as the possibility of their use as substrate for different chemical modifications (carboxylation, sulfation and methylation) increases their application spectrum. Submerged cultivation of the endophytic fungi Neofusicoccum parvum, Fusarium sp and Colletotrichum gloeosporioides for the production of EPS was the first aim of this study. Once the EPS were obtained, they were purified and chemically characterized. Chemical modification by sulfation and anticoagulant activity assays were performed. Cultivation to obtain EPS were performed in submerged fermentation. The inoculum concentration and incubation time parameters were set in order to obtain a higher amount of EPS. Purification by centrifugation was performed after analysis by high pressure steric exclusion chromatography with refractive index detection (HPSEC / RID). Purified EPS [precipitate of C. gloeosporioides (C. gloeosporioidesprec) and the three supernatants] proved to be virtually free of protein polysaccharides. Acid hydrolysis and subsequent analysis of the hydrolysates with high performance anionic exchange chromatography with amperometric detection (HPAEC/PAD) indicated that only the C. gloeosporioidesprec was a glucan. Analysis from gas chromatography and mass spectrometry showed a single derivative, 1,3,5-tri-Oacetyl, 2,4,6-tri-O-methyl glucitol with mass fragments (m/z 118, 161, 203, 234.1) consistent with a (1→3)-glucan. FT-IR spectra showed absorption bands typical from carbohydrate and signals in the digital region at 926 cm-1 and 820 cm-1, typical of polysaccharides in the α- configuration. These results were... / Doutor

Submitted by Carolina Rabal Biasetto null (carolinarabal@yahoo.com.br) on 2016-05-18T19:36:08Z No. of bitstreams: 1 Tese_Doutorado_Carolina_Rabal_Biasetto_2016.pdf: 15348096 bytes, checksum: 59245cf961f6aaf1a999156f53853b5d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-05-20T18:01:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 biasetto_cr_dr_araiq_par.pdf: 1896284 bytes, checksum: 8b4dcb25761fe239f657abc24e10c1e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-20T18:01:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 biasetto_cr_dr_araiq_par.pdf: 1896284 bytes, checksum: 8b4dcb25761fe239f657abc24e10c1e7 (MD5) Previous issue date: 2016-04-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A capacidade biossintética dos fungos endofíticos, aliado aos estudos químico e biológicos relatados para Eugenia brasiliensis, motivou a idealização do projeto, a prospecção química, biológica e enzimática em fungos endofíticos associados a folhas, caules e frutos saudáveis de Eugenia brasiliensis e a avaliação do co-cultivo e epigenética em Xylaria cubensis, Diaporthe sp. e Colletotrichum sp., na obtenção de novas substâncias. O isolamento dos fungos endofíticos, resultou em dezessete linhagens de fungos endofíticos, sendo estes cultivados em escala reduzida em meio líquido de batata e dextrose (PDB) e Czapek, a 25 oC, sob modo estático para obtenção dos respectivos extratos brutos em AcOEt. A avaliação metabólica destes extratos foi realizada por CCDC, HPLC-DAD e RMN de 1H, como também a potencialidade enzimática e biológica pela avaliação das atividades antifúngica, anticolinesterásica e citotóxica, sendo que estes extratos demonstraram ser promissores. A prospecção inicial conduziu a seleção de três fungos endofíticos identificados como Xylaria cubensis (Eb_caH_5), Diaporthe sp. (Eb_caS_4), e Colletotrichum sp. (Eb_frmH_1), os quais foram cultivados (escala ampliada) em PDB para isolamento e determinação/elucidação estrutural dos metabólitos secundários. O estudo de Xylaria cubensis, resultou no isolamento de 8 substâncias, sendo da classe dos nucleosídeos, dicetopirazinas, isocumarinas e citocalasinas. De Diaporthe sp. foi isolado e identificado 8 substâncias: duas dicetopiperazinas, ácido nitropropiônico, uracila, tirosol, zygosporina D, pirrolidona (inédita) e alternariol. Colletotrichum sp. resultou no isolamento de 6 substâncias, sendo três dicetopiperazinas, além das substâncias N-(2-feniletil)acetamida, N-acetiltriptamina e metanoato de 2-hidroxibutila 3-indol (inédita). Todas as classes de substâncias produzidas por estes fungos endofíticos apresentam diversas atividades biológicas relatadas na literatura. Destaca-se a atividade fitotóxica da citocalasina D frente a coleóptilos de trigo superior ao herbicida comercial GOAL®. Para verificar a influência na produção metabólica de Xylaria cubensis, Diaporthe sp. e Colletotrichum sp., utilizou-se estratégias como o co-cultivo em meio sólido (PDA) e líquido (PDB) e a epigenética (escala reduzida), nas quais os endófitos mostraram produção metabólica diferente em relação à produção das monoculturas e na ausência do modulador epigenético ácido hidroxâmico suberoilanilida (SAHA), respectivamente. As ferramentas estatísticas, como PCA (Análise de componentes principais) e PLS-DA (Análise discriminante com calibração multivariada por mínimos quadrados parciais) permitiram uma rápida identificação e localização dos perfis metabólicos dos co-cultivos comparados às monoculturas. Estes dados contribuem para o conhecimento dos perfis metabólicos, biológicos e enzimáticos dos fungos endofíticos isolados de Eugenia brasiliensis, bem como suas interações com o hospedeiro. / The biosynthetic capacity of endophytic fungi, allied chemical and biological studies reported to Eugenia brasiliensis motivated the idealization of the project, prospection chemical, biological and enzymatic in endophytic fungi associated with healthy leaves, stems and fruits from Eugenia brasiliensis and evaluation co-culture and epigenetic in Xylaria cubensis, Diaporthe sp. and Colletotrichum sp., in obtaining new substances. The isolation of endophytic fungi resulted in seventeen endophytics fungi, these being cultivated in small scale on potato dextrose broth (PDB) and Czapek at 25 °C under static mode to obtain the corresponding crude extracts in AcOEt. The metabolic evaluation of these extracts was performed by CCDC, HPLC-DAD and 1H NMR, also enzymatic and biological potential were performed by antifungal, cytotoxic, and anticholinesterase activities, and these extracts have shown promise. The preliminary prospection led to the selection of three endophytic fungi identified as Xylaria cubensis (Eb_caH_5), Diaporthe sp. (Eb_caS_4) and Colletotrichum sp. (Eb_frmad_1) which were cultivated (larger scale) in PDB for isolation and determination or structural elucidation of secondary metabolites. The study of Xylaria cubensis resulted in the isolation of eight substances, as follows: nucleoside, diketopiperazines, isocoumarins and cytochalasins class. From Diaporthe sp. was isolated and identified eight substances, as follows: two diketopiperazines, nitropropionic acid, uracil, tyrosol, zygosporin D, pyrrolidone (unpublished) and alternariol. Colletotrichum sp. resulted in the isolation of six substances, three diketopiperazines, besides the substances N-(2-phenylethyl) acetamide, Nβ-acetyltryptamine and 3-hydroxybutan-2-yl-1H-indol-3-ylacetate (unpublished). All classes of substances produced by these endophytic fungi present several biological activities reported in the literature. Noteworthy is the phytotoxic activity of cytochalasin D against wheat coleoptile higher than commercial herbicide GOAL®. To verify the influence on the metabolic production of Xylaria cubensis, Diaporthe sp. and Colletotrichum sp., used strategies such as the co-culture on solid (PDA) and liquid medium (PDB) and epigenetic (small scale), in which endophytes showed an interesting and different metabolic production when compared with the production of monocultures and the absence of epigenetic modulator SAHA, respectively. The statistical tools, such as PCA (Principal component analysis) and PLS-DA (discriminant analysis with multivariate calibration partial least squares) allowed quick identification and location of the metabolic profiles of the co-culture compared monocultures. These data will contribute to the knowledge of the metabolic profiles, biological and enzymatic of endophytic fungi isolated from Eugenia brasiliensis and their interactions with host. / CNPq: 140980/2012-1

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-06-19Bitstream added on 2014-06-13T20:37:29Z : No. of bitstreams: 1 lopes_mv_me_jabo_prot.pdf: 799999 bytes, checksum: a3da99204a58afdd2f525f466e3bf214 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Funep/Oxiquimica / O objetivo do presente trabalho foi analisar as condições climáticas do Estado de São Paulo e desenvolver mapas de zonas de risco de epidemias de cancro cítrico, podridão floral e pinta preta do citros. Foram utilizados dados meteorológicos referentes aos anos de 2002, 2003, 2004 e 2005, os quais foram utilizados os modelos de previsão. Para o cancro cítrico desenvolvido por Campbell e Madden (1990) e Hau e Kranz (1990); podridão floral dos citros desenvolvido por Timmer e Zitko (1993) e Timmer e Brown (2000); pinta preta desenvolvido por Hau e Kranz (1990) e Bergamin Filho (1995. Após a contabilização dos índices, foram calculadas as porcentagens de dias favoráveis à ocorrência das doenças durante o ano e em períodos pré-definidos. A partir destas informações, foram gerados os mapas temáticos do Estado de São Paulo, com a distribuição espacial da porcentagem de dias favoráveis à ocorrência das doenças. A região Noroeste do Estado foi a que apresentou a maior porcentagem de dias favoráveis à ocorrência de cancro cítrico. As regiões Sul e Leste foram as que apresentaram maior favorabilidade de ocorrência da podridão floral do s citros. Para a pinta preta a região Sul com pontos no centro do Estado foi a que apresentou maior porcentagem de dias favoráveis a ocorrência da doença. / The objective of the present work was to analyze the climatic conditions of the State of São Paulo and to develop maps of zones of risk of epidemics of citrus canker, postbloom fruit drop of citrus and citrus black spot. They had been used given meteorological referring to the years of 2002, 2003, 2004 and 2005, which had been used the forecast models. For the citrus canker developed by Campbell and Madden (1990) and Hau and Kranz (1990); postbloom fruit drop of citrus developed by Timmer and Zitko (1993) and Timmer and Brown (2000); it citrus black spot developed for Hau and Kranz (1990) and Bergamin Filho (1995). The frequency of the data was hourly and when some station presented imperfection in the series of data, these had been surpassed of the station next. After the accounting of the indices, had been calculated the percentages of days favorable to the occurrence of the diseases in the year and in the periods. From these information, the thematic maps of the State of São Paulo had been generated, with the space distribution of the percentage of days favorable to the occurrence of the diseases. The region the Northwest of the State was the one that presented the biggest percentage of days favorable to the occurrence of citrus canker. The regions South and East had been the ones that had presented greater favorable of occurrence of the postbloom fruit drop of citrus. For the citrus black spot the South region with points in the center of the State was the one that presented greater percentage of favorable days the occurrence of the diseases.

Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-10-26T16:49:22Z No. of bitstreams: 1 TeseRMDA.pdf: 4251540 bytes, checksum: 7f125ff1cf0456ee6c35cc31853e3ee2 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-11-08T18:22:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseRMDA.pdf: 4251540 bytes, checksum: 7f125ff1cf0456ee6c35cc31853e3ee2 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-11-08T18:23:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseRMDA.pdf: 4251540 bytes, checksum: 7f125ff1cf0456ee6c35cc31853e3ee2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-08T18:23:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseRMDA.pdf: 4251540 bytes, checksum: 7f125ff1cf0456ee6c35cc31853e3ee2 (MD5) Previous issue date: 2016-07-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Several aromatic polyketide derivatives from Ginger (Zingiber officinale), like zingerone, 6-gingerol and 6-shogaol were obtained by biocatalytic reactions and semi-synthesis and both their antifungal and cysteine-proteinase inhibitory properties were investigated. The derivatives obtained by semi-synthesis were evaluated in the form of a first screening for inhibition property of growth of phytopathogenic fungi Colletotrichum gloesporioides and Fusararium oxysparum. The biotransformation of four compounds: zingerone purchased from Sigma Aldrich, 6-gingerol isolated from ginger and its derivatives 4-methyl-6-gingerol and 6-shogaol was investigated using whole cells of C. gloesporioides and showed recognition of the fungal pool of enzymes capable of using such compounds as substrates. All experiments were conducted in sterile liquid medium BD (Potato and Dextrose) under agitation (120 rpm) and constant temperature (30° C ), obtaining the methanol extract of mycelial mass (MM), the aqueous extract (Aq) and the ethyl acetate extract (Ac) of culture fluid. The ethyl acetate extract was analyzed by GC-MS and ESI-MS/MS using LC-MS techniques. The fungus C. gloesporioides proved able to promote a reaction of aromatic oxidative coupling of zingerone, forming a dimer of this molecule. This product was isolated, identified by NMR spectroscopy and high resolution mass spectrometry. The biotransformation experiment was also made with isotopically labeled zingerone with deuterium. Analysis of the ethyl acetate extract (Ac) by (-) ESI-MS / MS using LC-IT-MS showed that dimer formation since the first day once the isotopically labeled fragments were detected. The aromatic oxidative coupling reaction also occurs in the biotransformation to phenolic compound 6-gingerol by C. gloesporioides. It is probable that side chain of 6-gingerol was used as carbon source forming an alcohol with molecular mass 168 Da. The dimer of the alcohol appears as biotransformation product. Among the proposed semi-synthesis reactions, the insertion of an oxime ether subunit from zingerone as starting material was obtained. Despite the molecular modeling indicates good complementarity with the catalytic site model cysteinyl preoteases, the product obtained does not show inhibitory activity against the enzymes L and V to 25 uM. The oximine derivative of 8-gingerol, presented halo of inhibition against the proliferation of fungus C.gloesporioides in disk diffusion test on PDA (Potato Dextrose Agar) in a Petri dish. The ethyl acetate extract (Ac) from the tenth day showed a good result of inhibition of cathepsin V (80%). There are studies that investigate the relationship between the antifungal activity of compounds of the property of inhibiting cysteine-preoteases as papain and cathepsin B and L. / A obtenção de novos derivados de policetídeos aromáticos encontrados no gengibre (Zingiber officinale), como a zingerona, o 6-gingerol e o 6-shogaol, empregando-se reações de biocatálise e semi-síntese foram alcançados, bem como a avaliação frente à cisteíno-proteases. Os derivados obtidos por semi-síntese foram avaliados na forma de um primeiro screening quanto à capacidade de inibição do crescimento dos fungos fitopatogênicos como Colletotrichum gloesporioides e Fusararium oxysparum. A biotransformação de quatro compostos: a zingerona, obtida comercialmente, a biotransformação do 6-gingerol, isolado do gengibre e de seus derivados 4-metil-6- gingerol e 6-shogaol por células totais de C. gloesporioides foi investigada tendo-se o reconhecimento do pool enzimático do fungo capaz de utilizar tais compostos como substrato. Todos os experimentos foram conduzidos em meio líquido estéril BD (Batata e Dextrose) sob a agitação de 120 rpm e temperatura de 30°C, obtendo-se o extrato metanólico da massa micelial (MM), o extrato aquoso (Aq), sendo o sobrenadante após obtenção do extrato em acetato de etila (Ac) do fluido da cultura. Os extratos Ac foram analisados por GC-MS e ESI-MS/MS usando técnicas de LC-MS. O fungo C. gloesporioides mostrou ser capaz em promover uma reação de acoplamento oxidativo aromático da zingerona, formando um dímero desta molécula, tal produto foi isolado e a estrutura química proposta com as análises dos espectros de RMN obtidos bem como por espectrometria de massas de alta resolução; o experimento de biotransformação também foi realizado com a zingerona marcada com deutério. A análise do extrato Ac por (-) ESI-MS/MS usando LC-IT-MS mostrou que desde o primeiro dia há formação do dímero o que foi confirmado pela formação de fragmentos isotopicamente marcados. A reação de acoplamento oxidativo aromático também ocorre na biotransformação para o composto fenólico 6-gingerol pelo C. gloesporioides, sendo que, provavelmente há consumo da cadeia lateral pelo fungo como fonte de carbono formando um álcool com a massa molecular de 168 Da, sendo o dímero desse álcool que aparece como produto de biotransformação. Dentre a proposta de reação de semi-síntese, o produto da reação de inserção da subunidade éter de oxima, tendo zingerona como material de partida foi obtido e apesar da modelagem molecular indicar boa complementariedade com o modelo de sítio catalítico de cisteinil-preoteases, o produto obtido não apresentou atividade de inibição contra as enzimas L e V a 25 μM. O derivado oximínico do 8-gingerol, apresentou halo de inibição contra a proliferação do fungo C.gloesporioides em teste de difusão em disco em meio BDA (Batata-Dextrose-Ágar) em placa de Petri, sendo que existem trabalhos que investigam a relação entre a atividade antifúngica de compostos com a propriedade de inibição de cisteínopreoteases como papaína e catepsina B e L. O extrato acetato de etila (Ac) do décimo dia mostrou um bom resultado de inibição da catepsina V (80%).