O aumento da tolerância aos fungicidas convencionais, observado em diversos gêneros de fungos de interesse, e a preocupação crescente com o meio ambiente têm estimulado o desenvolvimento de novas alternativas para o controle de fitopatógenos. Dentre as novas estratégias antimicrobianas que têm sido avaliadas, o tratamento fotodinâmico antimicrobiano (TFA) é uma das mais promissoras. O TFA baseia-se no uso de um fotossensibilizador (FS) que se acumula seletivamente nas células do microrganismo alvo. A ativação do FS pela luz, na presença de oxigênio molecular, induz à formação de espécies reativas de oxigênio, como o oxigênio singlete, que provocam a morte do microrganismo alvo, com poucos danos ao hospedeiro. Apesar de muito promissor, o TFA ainda não foi explorado para o controle de fitopatógenos. No presente estudo, foi avaliada, in planta, a eficácia do TFA com o fotossensibilizador azul de metileno (MB) e radiação solar em conídios do fungo fitopatogênico Colletotrichum acutatum. Os experimentos foram conduzidos com MB de diferentes fabricantes, em duas concentrações (25 e 50 ?M) e em diferentes formulações, ao longo das diferentes estações do ano, em dias com e sem nebulosidade e em diferentes temperaturas. O TFA com MB e radiação solar foi extremamente eficaz, matando aproximadamente 100% dos conídios em todas as condições avaliadas. Os efeitos da aplicação do MB na planta hospedeira Citrus sinensis também foram avaliados. O FS foi aplicado repetidas vezes em folhas e em flores de mudas de laranjeira. Nenhum dano foi observado nas folhas ou nas pétalas após os tratamentos com o MB. Pela primeira vez, foi feito o estudo mecanístico dos efeitos do TFA com MB em conídios de C. acutatum. Foram avaliados os efeitos do TFA na permeabilidade da membrana plasmática dos conídios e na formação de espécies reativas de oxigênio tardias, por meio da utilização das sondas fluorescentes iodeto de propídio (PI) e dihidroetídio (DHE), respectivamente. O TFA com MB danificou a membrana plasmática, reduzindo a sua permeabilidade seletiva e induziu a formação de espécies reativas de oxigênio tardias nos conídios. Também foi conduzido um estudo de longa duração, no qual foi avaliada a tolerância dos conídios de C. acutatum ao TFA com o novo azul de metileno, após cada um de 45 ciclos sucessivos de TFA, seguido pela seleção dos sobreviventes. Foram observados aumentos gradativos na tolerância ao TFA a partir do 21° ciclo de seleção. Além do aumento na tolerância, também foi observado um aumento da pigmentação dos conídios, provavelmente decorrente da seleção de mutantes que acumulam mais carotenóides. / The increasing tolerance to conventional fungicides observed in several genera of pathogenic fungi and the growing concern about the environment have stimulated the development of new alternatives to control of plant pathogens. Among the new antimicrobial strategies that have been evaluated, antimicrobial photodynamic treatment (APDT) is one of the most promising. APDT is based on the use of a photosensitizer (PS) that selectively accumulates in the target microbial cells. Activation of the PS by light in the presence of molecular oxygen induces the formation of reactive oxygen species, such as singlet oxygen, which cause damages to the target microorganism without significant harm to the host. Although very promising, APDT has not yet been used to control plant-pathogenic fungi. In the present study, the effectiveness of the APDT with the photosensitizer methylene blue (MB) and solar radiation on conidia of the plant-pathogenic fungus Colletotricum acutatum was evaluated in planta. The experiments were conducted with MB from different brands, in two concentrations (25 and 50 ?M) and different formulations, throughout the different seasons of the year, on cloudy and sunny days and at different temperatures. APDT with MB and solar radiation was extremely effective, killing around 100% of conidia in all conditions evaluated. The effects of the MB on the host plant Citrus sinensis were also evaluated. The PS was applied repeatedly on the leaves and flowers of the plants. No damage was observed on the leaves or the petals after treatment with MB. For the first time the mechanistic study evaluating the effects of APDT on C. acutatum conidia was carried out. The effects of APDT on the permeability of the conidial plasma membrane and on the production of secondary reactive oxygen species were evaluated by using the fluorescent probes propidium iodide (PI) and dihydroethidium (DHE), respectively. APDT with MB damaged the plasma membrane, reducing its selective permeability and induced the formation of secondary reactive oxygen species in conidia. It was also conducted a long term study which assessed the tolerance of conidia of C. acutatum to APDT, after each of 45 successive cycles of APDT with new methylene blue followed by the selection of the survivors. A gradual increase in APDT tolerance was observed from the 21st cycle. Besides the increase in tolerance to APDT, it was also observed an increase in the pigmentation of conidia probably due to the selection of mutants that accumulate more carotenoids.

Atualmente há grande interesse no desenvolvimento de processos enzimáticos eficientes para a hidrólise da biomassa lignocelulósica. O objetivo deste trabalho foi a otimização da produção por fermentação em estado sólido e a caracterização bioquímica, no extrato bruto, das -glucosidases, -xilosidases e xilanases produzidas por Colletotrichum graminicola e das lacases produzidas por Pycnoporus sanguineus. Também foi avaliado o potencial de aplicação dos extratos obtidos em coquetéis enzimáticos para a sacarificação de resíduos agroindustriais. A otimização das condições de cultivo, empregando a Metodologia de Superfície de Resposta, levou à produção de 159,3 ± 12,7 U g-1, 125,88 ± 6,4 U g-1, 378,1 ± 23,3 U g-1 e 138,6 ± 6,4 U g-1 de -glucosidases, -xilosidases, xilanases e lacases, respectivamente. Os meios de cultivo empregados foram constituídos por farelo de trigo suplementado com resíduos agroindustriais. Todas as enzimas produzidas apresentaram pH e temperatura ótimos de reação de 4,5-5,0 e 65ºC, respectivamente, bem como boa estabilidade térmica e ao pH. O coquetel composto pelos extratos brutos obtidos em condições otimizadas para a produção de xilanases (ECg) e lacases (EPs), em mistura com um extrato bruto de Trichoderma reesei rico em celulases (ETr) foi muito eficiente na sacarificação de palha de cana e papelão, sem pré-tratamento, atingindo rendimentos de 41,4 e 71,1% em glicose, respectivamente. Além disso, este coquetel foi mais eficiente na sacarificação de bagaço de cana explodido e in natura bem como de palha de cana in natura, quando comparado a um coquetel contendo celulases comerciais (Celluclast®) em mistura com ECg e EPs. Visando estudos futuros da ação individual de cada enzima sobre a biomassa, foi purificada uma -glucosidase majoritária de C. graminicola. A enzima mostrou temperatura e pH ótimos de reação de 5,0 e 65ºC, respectivamente, boa estabilidade térmica e ao pH, além da estimulação por xilose, propriedade muito interessante para emprego em coquetéis mistos de celulases e xilanases. Os resultados encontrados sugerem que as enzimas produzidas por C. graminicola e P. sanguineus, assim como os coquetéis enzimáticos avaliados, apresentam características muito interessantes para aplicações biotecnológicas, particularmente em processos de sacarificação da biomassa para obtenção de etanol celulósico. / There is currently a great interest in developing efficient processes for the enzymatic hydrolysis of lignocellulosic biomass. The objective of this study was the optimization of the culture conditions for the production of -glucosidases, xylanases and -xylosidases by Colletotrichum graminicola and laccases by Pycnoporus sanguineus under solid state fermentation, followed by the biochemical characterization of the enzymes in the crude extracts. The potential of application of the extracts to compose enzyme cocktails for the saccharification of agroindustrial residues was also investigated. Optimization of the culture conditions using the Response Surface Methodology led to the production of 159.3 ± 12.7 U g - 1, 125.88 ± 6.4 U g- 1, 378.1 ± 23.3 U g - 1 and 138.6 ± 6.4 U g - 1 of -glucosidases, -xylosidases, xylanases and laccases, respectively. The culture media employed consisted mainly of wheat bran, supplemented with agroindustrial residues. All enzymes produced showed optimum pH and temperature of 4.5-5.0 and 65° C, respectively, as well as good thermal and pH stability. A cocktail composed of the crude extracts obtained under optimized conditions for the production of xylanases (ECg) and laccases (EPs), mixed with a Trichoderma reesei crude extract (ETr), rich in cellulases, was highly efficient for the saccharification of sugarcane trash and cardboard, without pretreatment, reaching yields of 41.4% and 71.1% in glucose, respectively. Moreover, this cocktail was more efficient than a cocktail composed of commercial cellulases (Celluclast ®) in combination with ECg and EPs for the saccharification of raw and steam exploded sugarcane bagasse, as well as raw sugarcane trash. Aiming future studies on the individual action of each enzyme on biomass, a majoritary -glucosidase from C. graminicola was purified. The enzyme showed optima of temperature and pH of 5.0 and 65° C, respectively, good thermal and pH stability, as well as stimulation by xylose, a very interesting property for its application in mixed cellulase-xylanase cocktails. The results suggested that the enzymes produced by C. graminicola and P. sanguineus, as well as the cocktails employed in this study, have good potential for biotechnological applications, particularly in biomass saccharification processes for cellulosic ethanol production.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-14T16:00:03Z No. of bitstreams: 1 Kesia Ferreira Alves.pdf: 466143 bytes, checksum: 66630edcc98b43dfb320ee8189581aa0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T16:00:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kesia Ferreira Alves.pdf: 466143 bytes, checksum: 66630edcc98b43dfb320ee8189581aa0 (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Anthracnose is considered an important disease of bell pepper (Capsicum annuum L.) in the state of Pernambuco and in various parts of the world, causing significant losses for fruit commercialization. Actions directed to preventive measures such as alternative control, are of great importance through the exploration of secondary compounds present in medicinal plants with antimicrobial activity. This study aimed to, assess the efficiency of crude extracts in the control of anthracnose in bell pepper, and analyze the control stability of promising treatments in relation to different extract, inoculum, temperature and pathogen isolates concentrations. In preliminary selection, 16 plant species were used in order to obtain aqueous and hidroalcoólico extracts. The aqueous extracts of garlic (Allium sativum L.), Mallow (Malva sp.), and ginger (Zingiber officinale Roscoe.) showed greater than 97% reductions in disease severity levels. The greatest value of CL75 was found for the garlic extract (3.5%), while the lowest value of CL75 was verified with the application of the ginger extract (2.1%). The lowest rate of efficiency reduction of the anthracnose control (TRE) with the pathogen inoculum increase occurred with garlic extract. With regard to different C. gloeosporioides isolates, significant interaction was found between the different extracts and isolates of the pathogen. The plant extracts were effective in controlling the disease in temperatures of 20, 25 and 30 ° C, while temperatures in the 10, 15and 35 ° C there was no disease. There were no differences in the efficiencies of garlic and ginger extracts, while the extract of hollyhock had the lower efficiency at 20 ° C, differing from the other temperatures, and other extracts at this temperature. The results obtained in this study indicate the great potential for use of the garlic extract (6%) in anthracnose control of bell pepper, considering its stability in different situations. / A antracnose é considerada uma importante doença do pimentão (Capsicum annuum L.) no Estado de Pernambuco e em várias partes do mundo, causando perdas significativas à produção de frutos para comercialização. Ações voltadas para medidas preventivas como o controle alternativo, são de grande relevância por meio da exploração de compostos secundários presentes em plantas medicinais com atividade antimicrobiana. O presente trabalho teve por objetivo, avaliar a eficiência de extratos vegetais brutos no controle da antracnose em pimentão, bem como analisar a estabilidade do controle dos tratamentos promissores em relação a.diferentes concentrações dos extratos, concentrações do inoculo e isolados do patógeno e, temperaturas. Na seleção preliminar foram utilizadas 16 espécies vegetais para obtenção de extratos aquosos e etanólicos. Os extratos aquosos de alho (Allium sativum L.), malva (Malva sp.) e gengibre (Zingiber officinale Roscoe.) propiciaram reduções superiores a 97% nos níveis de severidade. O maior valor de CL75 foi constatado para o extrato de alho (3,5%), enquanto o menor valor de CL75 foi verificado com a aplicação de extrato de gengibre (2,1%). A menor taxa de redução da eficiência do controle (TRE) da antracnose com o incremento do inóculo do patógeno ocorreu no extrato de alho. Com relação a diferentes isolados de C. gloeosporioides, foi constatada interação significativa entre os tipos de extratos e os isolados do patógeno. Os extratos vegetais foram eficientes no controle da doença nas temperaturas de 20, 25 e 30 oC, enquanto nas temperaturas 10, 15 e 35 °C não houve doença. Não houve diferenças nas eficiências dos extratos de alho e gengibre, enquanto o extrato de malva apresentou a menor eficiência a 20 oC, diferindo das outras temperaturas, bem como dos demais extratos nessa temperatura. Os resultados obtidos nesse estudo indicam o grande potencial de utilização do extrato de alho a 6% no controle da antracnose em pimentão, considerando sua estabilidade em diferentes situações.

Submitted by ANGELICA AUGUSTA GRIGOLI DOMINATO null (angelica@unoeste.br) on 2017-02-16T18:51:51Z No. of bitstreams: 1 Angélica A. Grigoli Dominato.pdf: 4485568 bytes, checksum: 4abc8fe39b8c64a5ed8be37f2be077de (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-20T20:26:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dominato_aag_dr_sjrp.pdf: 4485568 bytes, checksum: 4abc8fe39b8c64a5ed8be37f2be077de (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T20:26:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dominato_aag_dr_sjrp.pdf: 4485568 bytes, checksum: 4abc8fe39b8c64a5ed8be37f2be077de (MD5) Previous issue date: 2017-01-20 / A atividade metabólica fúngica, especialmente nos endofíticos, favorece a secreção de moléculas como antibióticos, pigmentos, enzimas e polissacarídeos, que podem ser aplicadas nas indústrias alimentícia, cosmética, farmacêutica, entre outras. A diversidade química dos exopolissacarídeos (EPS) bem como a possibilidade de sua utilização como substrato para diferentes modificações químicas (carboxilação, sulfatação e metilação) aumentam seu espectro de aplicação. Realizar o cultivo submerso dos fungos endofíticos Neofusicoccum parvum, Fusarium sp e Colletotrichum gloeosporioides para a produção de EPS foi o primeiro objetivo deste trabalho. Uma vez obtidos, os EPS foram purificados e quimicamente caracterizados. Sulfatação e ensaio da atividade anticoagulante foram realizados. Os parâmetros concentração de inóculo e tempo de cultivo foram estabelecidos para maior produção dos EPS, por fermentação submersa. Etapas de purificação, por centrifugação, foram efetuadas após análises por cromatografia de exclusão estérica a alta pressão, com detecção por índice de refração (HPSEC/RID). Os EPS purificados [precipitado do C. gloeosporioides (C. gloeosporioidesprec) e os três sobrenadantes] mostraram-se praticamente isentos de proteínas. A hidrólise ácida e subsequente análise dos hidrolisados por cromatografia de troca aniônica a alta pressão com detecção por amperometria pulsada (HPAEC/PAD) indicaram que apenas o C. gloeosporioidesprec era uma glucana. A análise por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC/MS) mostrou um único derivado, 1,3,5 tri-O-acetil, 2,4,6-tri-O-metil glucitol com fragmentos de massa (m/z 118, 161, 203, 234.1) condizente com uma glucana do tipo (1→3). Os espectros de FT-IR apresentaram sinais na região de impressão digital, 926 cm-1 e 820 cm-1, típicos de polissacarídeos em configuração . Esses resultados foram confirmados por ressonância magnética nuclear bidimensional (HSQC), com um único acoplamento C1/H1, em 99,3/5,18 ppm e um sinal deslocado para campo baixo, 82,8/3,74 ppm, característico de C-3 substituído, indicando que o EPS é uma α-(1→3)-glucana. A sulfatação desta molécula resultou em α-(1→3)-D-glucanasulf com DS de 0,75 que foi utilizada nos ensaios de atividade anticoagulante. O aumento do tempo para a coagulação, nos testes do APTT (Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada) e TT (Tempo de Trombina), foi concentração-dependente, indicando que [α-(1→3)-D-glucanasulf] pode atuar como um inibidor da via intrínseca da coagulação sanguínea e da conversão do fibrinogênio em fibrina, caracterizando-a como um potencial anticoagulante. / Fungal metabolic activity, especially in the endophytic, favors secretion of molecules such as antibiotics, pigments, enzymes and polysaccharides, which can be applicable by food, cosmetic and pharmaceutical industries, and others. The chemical diversity of the exopolysaccharides (EPS), as well as the possibility of their use as substrate for different chemical modifications (carboxylation, sulfation and methylation) increases their application spectrum. Submerged cultivation of the endophytic fungi Neofusicoccum parvum, Fusarium sp and Colletotrichum gloeosporioides for the production of EPS was the first aim of this study. Once the EPS were obtained, they were purified and chemically characterized. Chemical modification by sulfation and anticoagulant activity assays were performed. Cultivation to obtain EPS were performed in submerged fermentation. The inoculum concentration and incubation time parameters were set in order to obtain a higher amount of EPS. Purification by centrifugation was performed after analysis by high pressure steric exclusion chromatography with refractive index detection (HPSEC / RID). Purified EPS [precipitate of C. gloeosporioides (C. gloeosporioidesprec) and the three supernatants] proved to be virtually free of protein polysaccharides. Acid hydrolysis and subsequent analysis of the hydrolysates with high performance anionic exchange chromatography with amperometric detection (HPAEC/PAD) indicated that only the C. gloeosporioidesprec was a glucan. Analysis from gas chromatography and mass spectrometry showed a single derivative, 1,3,5-tri-Oacetyl, 2,4,6-tri-O-methyl glucitol with mass fragments (m/z 118, 161, 203, 234.1) consistent with a (1→3)-glucan. FT-IR spectra showed absorption bands typical from carbohydrate and signals in the digital region at 926 cm-1 and 820 cm-1, typical of polysaccharides in the α- configuration. These results were confirmed by two-dimensional nuclear magnetic resonance (HSQC), with a single C1/H1, in 99.2/4.98 ppm, typical of one α bonding, and low-field 82.6/3.55 ppm signal displacement, characteristic of substituted C-3, indicating that EPS is an α-(1→3)-glucan. Sulfation of this molecule resulted in α- (1→3)-glucansulf with DS of 0.75 which was used in the anticoagulant activity assays. The increase in coagulation reaction time in the APTT (Activated Partial Thromboplastin Time) and TT (Thrombin Time) tests was concentration-dependent, indicating that [α-(1→3)-D-glucansulf] might act as an inhibitor of the intrinsic via of blood clotting and conversion of fibrinogen into fibrin, characterizing it as a potential anticoagulant.

A citricultura brasileira se destaca no mercado global de citros, apresentando altos valores de produção e produtividade. Dentre as diversas doenças que afetam a cultura, a podridão floral dos citros (PFC) vem ganhando destaque com o deslocamento de áreas produtoras para regiões mais favoráveis à ocorrência desta doença. A PFC, causada por espécies dos complexos Colletotrichum acutatum e C. gloeosporioides, é especialmente problemática em anos de temperaturas amenas e alta umidade. Os citricultores realizam pulverizações preventivas para o controle da PFC todos os anos, embora condições climáticas favoráveis à doença ocorram apenas ocasionalmente. Além do impacto econômico, as frequentes pulverizações com fungicidas aumentam a pressão de seleção sobre isolados resistentes, o que pode interferir na eficiência do controle químico. A utilização de sistemas de previsão de epidemias pode evitar que pulverizações desnecessárias de fungicidas sejam realizadas caso não haja condições favoráveis à ocorrência da doença. Para o desenvolvimento destes sistemas, é imprescindível determinar um limiar de ação para a aplicação de fungicidas nos pomares. Dessa forma, o presente trabalho teve por objetivos: (i) estabelecer um limiar de ação para a aplicação de fungicidas com base na germinação de conídios de C. acutatum que permita o controle a doença igualmente ou de forma mais eficiente do que o sistema de pulverização adotado pelos citricultores do sudoeste paulista; (ii) caracterizar a sensibilidade de isolados dos complexos C. gloeosporioides e C. acutatum à trifloxistrobina e ao tebuconazol in vitro e molecularmente, para identificar possíveis mudanças de sensibilidade das espécies a estes fungicidas. Para a definição do limiar de ação, tratamentos baseados em índices de risco foram comparados ao tratamento testemunha e ao calendário fixo de aplicações, usualmente adotado pelos produtores. A aplicação de fungicidas quando limiar de 15% de germinação de conídios era atingido, foi eficiente em controlar a doença e reduzir o número de aplicações de fungicidas. Nos ensaios de sensibilidade a fungicidas dois métodos foram utilizados para a determinação da CE50: o da diluição em gradiente espiral para trifloxistrobina e tebuconazol e o da inibição da germinação de conídios para a trifloxistrobina. Foram utilizados isolados coletados entre 1999 e 2016. A CE50 média da coleção de isolados de acordo com o método da diluição em gradiente espiral variou de 0,158 a 0,297 μg/ml e 0,1 a 0,182 μg/ml para trifloxistrobina e tebuconazol, respectivamente. Para a trifloxistrobina, de acordo com o método da inibição da germinação, a CE50 média foi de 0,002 μg/ml. Não foram verificadas características moleculares nem valores de CE50 atrelados à mudança de sensibilidade dos isolados. / Brazilian citrus industry represents a significant share in the global citrus market. Amongst several diseases that affect the crop, postbloom fruit drop (PFD) has been gaining prominence in Sao Paulo with the displacement of citrus areas to regions in which weather conditions are more favorable to the occurrence of this disease. PFD, caused by species of the complexes Colletotrichum acutatum and C. gloeosporioides, is especially problematic in years of mild temperatures and high humidity. Citrus growers spray the orchards preventively for PFD control every year, although favorable climatic conditions do not occur regularly. In addition to the economic impact, this practice increases the selection pressure of fungicide resistant isolates, and may decrease the efficiency of chemical control in a long term. The use of disease forecasting systems is able to prevent unnecessary fungicide sprays. For the development of such systems, it is essential to determine an action threshold for the application of fungicides in the orchards. The objectives of this work were: (i) to establish an action threshold for fungicide sprays based on the germination of C. acutatum conidia; (ii) to characterize the sensitivity of C. gloeosporioides and C. acutatum isolates to trifloxystrobin and tebuconazole in vitro and molecularly. Regarding the definition of the action threshold, treatments based on risk indices were compared to the control treatments and calendar based sprays, usually adopted by growers. The 15% conidia germination threshold was efficient in controlling the disease and reducing the number of fungicide applications. In the fungicide sensitivity tests, two methods were used to determine the EC50, the spiral gradient dilution for trifloxystrobin and tebuconazole, and the method of conidial germination inhibition for trifloxystrobin. Isolates collected between 1999 and 2016 were used. The mean EC50 of the isolate collection determined by the spiral gradient dilution method ranged from 0.158 to 0.297 μg/ml and from 0.1 to 0.182 μg/ml for trifloxystrobin and tebuconazole, respectively. Mean EC50 of trifloxystrobin estimated by the conidial germination inhibition method was 0.002 μg/ml. No mutations or EC50 values indicated shifts of fungicide sensitivity on the isolates.

Striatin family proteins contain a caveolin binding domain, a coiled-coil motif, a calmodulin binding domain, and a WD-repeat domain. Homologs of striatin protein have been However, our knowledge of the function and the molecular mechanism of fungal striatin homologs is limited. Based on the conserved sequences of functional domains, I hypothesized that the fungal striatin orthologs also act as scaffolding proteins that are functionally conserved among fungal species and involved in multiple types of development in the diverse kingdom Mycota. I used reverse genetic strategies to study the function of the Aspergillus nidulans striatin ortholog (strA) and the Colletotrichum graminicola striatin ortholog (str1). In assays of sexual development, the strA deletion strain (ΔstrA) produces fewer ascospores with smaller cleistothecia, while the str1 deletion strain (Δstr1) is defective in perithecia development. The ΔstrA phenotypes indicate that StrA is associated with ascosporogenesis in cleistothecia. Both ΔstrA and Δstr1 are reduced in radial growth and in conidia production. The Δstr1 strain is also altered in its spiral growth pattern and morphology of conidia and hyphopodia, but it produces appressoria similar to wild type. The pairing of nitrate non-utilizing mutants demonstrates that Str1 is required for hyphal fusion. In pathogenicity, Δstr1 is less virulent in maize anthracnose leaf blight and stalk rot. The phenotypes of Δstr1 are complemented by the Fusarium verticillioides striatin ortholog (fsr1), indicating that Fsr1 and Str1 are functionally conserved. Over-expression of StrA reveals its positive role in conidiation and the sexual production. StrA::eGFP localizes mainly to the endoplasmic reticulum. After comparing the results from these two species and other studied fungal species, I suggest that fungal striatins are involved in five types of development including hyphal growth, hyphal fusion, conidiation, sexual development, and virulence, and propose a model of fungal striatin protein interactions to account for these diverse phenotypes.

Submitted by Cleber Casali (clebercasali@ufv.br) on 2017-06-01T18:39:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2869939 bytes, checksum: 08096f9e604c1fe651e880958476ddb4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-01T18:39:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2869939 bytes, checksum: 08096f9e604c1fe651e880958476ddb4 (MD5) Previous issue date: 2004-08-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O principal objetivo deste trabalho foi caracterizar, fenotipicamente, linhagens de feijão do cruzamento Ouro Negro x Pérola, quanto à reação a Colletotrichum lindemuthianum (raças 73, 81 e 89) e Uromyces appendiculatus (mistura das raças 15, 35, 45, 49, 50 e 59) e avaliar, em campo, o desempenho das linhagens que mostraram-se resistentes. Paralelamente, objetivou-se também avaliar a eficiência dos marcadores moleculares SCARF10 1050 (relacionado à resistência à antracnose e à ferrugem) e OPX11 550 (relacionado à resistência à ferrugem), identificados e mapeados em outras populações, com vistas à seleção assistida na população Ouro Negro x Pérola. Inicialmente, 400 linhagens (progênies F 7:8 ) do cruzamento Ouro Negro x Pérola foram inoculadas com a raça 89 de C. lindemuthianum. Dentre as linhagens resistentes, 68 com grãos de boa aceitação comercial foram inoculadas com as raças 73 e 81 de C. lindemuthianum e com a referida mistura de raças de U. appendiculatus. No experimento de campo, foram avaliadas 75 linhagens, que, sob inoculação artificial, mostraram-se resistentes à raça 89 de C. lindemuthianum. As testemunhas, constituídas pelos genitores (Pérola e Ouro Negro), o cultivar Talismã e as linhagens Vi 4899, VC4, e Rudá-Piramidado foram, também, avaliadas em campo. utilizou-se um látice quadrado triplo, com parcelas constituídas de duas linhas com 2m de comprimento cada uma. Na avaliação da eficiência dos marcadores moleculares, foram caracterizadas 150 linhagens do cruzamento Ouro Negro x Pérola, fenotipicamente, por meio de inoculação artificial de C. lindemuthianum (raça 89). Paralelamente, uma planta de cada linhagem foi genotipada, utilizando-se os marcadores SCARF10 1050 e OPX11 550 . A partir da inoculação artificial, foram identificadas 42 linhagens resistentes às raças de C. lindemuthianum e de U. appendiculatus, utilizadas no estudo. Considerando os resultados da caracterização fenotípica e da avaliação de campo, foram identificadas 10 linhagens que apresentaram grãos de bom aspecto comercial, iguais ou superiores àqueles do cultivar Pérola quanto à produtividade de grãos. Estas linhgens mostraram-se resistentes à antracnose e ferrugem, além de, moderadamente resistentes à mancha- angular. Das 150 linhagens avaliadas por meio de inoculação artificial, 61 mostraram-se resistentes às raças 73, 81 e 89 de C. lindemuthianum, sendo que, 42 destas foram resistentes a uma mistura de raças de U. appendiculatus. Vinte e cinco linhagens apresentaram as bandas correspondentes aos marcadores SCARF10 1050 e OPX11 550 . A eficiência de seleção para resistência à antracnose, com base na genotipagem de 150 linhagens utilizando o marcador SCARF10 1050 foi de 78%. Considerando que este marcador encontra-se a uma distância de 19,6 cM do gene de resistência, esperava-se uma eficiência de 72%, portanto, próxima àquela obtida no presente estudo. Para o marcador OPX11 550 , verificou-se uma eficiência de 85%. Esta maior eficiência era esperada, em razão de este marcador localizar-se mais próximo (11,6 cM) dos genes ou do bloco gênico, os quais conferem resistência à antracnose e ferrugem, presentes no cultivar Ouro Negro. Além disso, foi observado que o marcador OPX11 550 também pode ser utilizado no monitoramento do gene de resistência à antracnose. Embora estivessem a uma distância relativamente grande dos genes de resistência, esses marcadores proporcionaram boa eficiência de seleção. / The main objective of this study was to phenotypically characterize the common bean lines from the crossing Ouro Negro x Pérola for the reaction to Colletotrichum lindemuthianum (races 73, 81 and 89) and Uromyces appendiculatus (a mixture of races 15, 35, 45, 49, 50 and 59), as well as to evaluate the performance of the lines showing to be resistant ones. Another target was to evaluate the efficiency of the molecular markers SCARF10 1050 (related to the resistance against anthracnose and rust) and OPX11 550 (associated to the resistance against rust), which were identified and mapped in other populations and targeted to the assisted selection in the population Ouro Negro x Pérola. Initially, all 400 lines (progenies F 7:8 ) from the Ouro Negro x Pérola crossing were inoculated with the race 89 of C. lindemuthianum. Sixty eight lines of the resistant ones, from which the common beans are commercially well accepted, were inoculated with the races 73 and 81 from C. lindemuthianum and with the mixture of races from U. appendiculatus. In the field experiment, the evaluations were performed for 75 lines, which under artificial inoculation showed to be resistant to the race 89 of C. lindemuthianum. The controls constituted by genitors (Pérola and Ouro Negro), the Talisman cv. and the lines Vi 4899, VC4, and Rudá-Piramidado were also inoculated. The triple square lattice design was used with the plots consisting into two rows with 2m each one. When evaluating the efficiency of the molecular markers, 150 lines from the crossing Ouro Negro x Pérola were phenotypically characterized, by artificial inoculation of C. lindemuthianum (race 89). At the same time, one plant of each line was genotyped, by using the markers SCARF10 1050 and OPX11 550 . From the artificial inoculation, 42 lines which were resistant to either races of C. lindemuthianum and U. appendiculatus were identified. Taking into account the results of both the phenotypic characterization and field evaluation, ten 10 lines were identified which were provided with commercially good beans, that were equal or superior to the Pérola cv. for bean productivity. These lines showed to be resistant to either anthracnose and rust, and moderately resistant to the angular leaf spot. From those 150 lines evaluated by artificial inoculation, 61 were resistant to the races 73, 81 and 89 of C. lindemuthianum, and 42 lines from these ones showed to be resistant to the mixture of the U. appendiculatus races. Twenty-five lines exhibited the bands corresponding to the markers SCARF10 1050 and OPX 11550 . The selection efficiency for the resistance to anthracnose, based upon genotyping of 150 lines, using the marker SCARF10 1050 was 78%. By considering this marker is at 19.6 cM distance from the resistance gene, an efficiency of 72% was expected, therefore the obtained value was close to the expected one. An efficiency of 85% was found for the marker OPX11 550 . This higher efficiency was expected because this marker is located near (11.6 cM) the genes or the gene block that confers resistance to both anthracnose and rust in Ouro Negro cv. Moreover, it was shown what this marker can be made useful, in the targeted of the resistance gene to anthracnose. These markers provided good selection efficiency, although they were at a relatively long distance from the resistance genes.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-05-21Bitstream added on 2014-06-13T20:18:12Z : No. of bitstreams: 1 tassi_alw_me_jabo.pdf: 291726 bytes, checksum: 2976454134409b99ce44801f447b1a9b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O uso de procedimentos adequados para avaliar o vigor de semente é fundamental dentro do programa de controle de qualidade. No caso do teste de condutividade elétrica (CE) tem-se constatado efeito do patógeno sobre os resultados do mesmo. Assim, o trabalho teve como objetivo estudar a interferência dos fungos Phomopsis sojae e Colletotrichum dematium var. truncata nos resultados do teste em semente de soja. O trabalho foi conduzido usando-se sementes produzidas na safra 2005/2006. Estas foram inoculadas artificialmente com os fungos P. sojae e C. dematium var. truncata, utilizando-se meio de cultura BDA (batata, ágar e dextrose) acrescido de manitol (-1,0 MPa), por período de incubação de 20 horas, à temperatura de 25º C. Determinou-se o diâmetro de colônias, o índice de crescimento micelial; o teor de água da semente; a incidência de microorganismos (antes e após a inoculação) pelo teste de sanidade; o potencial fisiológico da semente pelos testes de germinação e de vigor (índice de velocidade de emergência, de frio, envelhecimento acelerado e condutividade elétrica) e a emergência de plântulas em campo. Determinou-se também a composição química da solução de embebição lixiviados (K+, CA+, Mg+ e Na+) e das sementes (K+, CA+, Mg+, Na+, P, C e N). Para análise estatística utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 2 x 4, (duas peneiras - 5,5 e 6,5 x quatro tratamentos - semente pura, semente em meio de cultura sem o fungo (- 1,0 MPa), semente inoculada com o fungo P. sojae(-1,0 Mpa) e semente inoculada com o fungo C. dematium var. truncata (-1,0 MPa), para as peneiras 5,5 e 6,5 mm, com oito e seis repetições respectivamente. Para o crescimento de colônias... / The use of adequate procedures to evaluate seed vigor is a very important tool within an assurance program of seed quality. Regarding the electrical conductivity test (EC) it has been verified the effect of some seedborn pathogens on the EC results. This research work was carried out in order to study the influence of the presence of Phomopsis sojae and Colletotrichum dematium var. truncata fungi on the EC results. The work was running using seeds produced in the agricultural year 2005/2006. The seeds were inoculated artificially with the fungi using the BDA (potato, agar and dextrose) medium with manitol (-1.0 MPa), incubated during 20 hours at temperature of 25o C. The colony diameter, index of micelial growth; seed water content; ocurrence of seedborn pathogens (before and after incubation); physiological potential of seeds using germination and vigor (speed germination index, cold test, accelerated aging and electrical conductivity) tests and seedling emergence in field were determined. Also, the composition of the soaked seed solution leachates (K+, Ca2+, Mg2+, Na+) and the seed (K+, Ca2+, Mg2+, Na+, P, C and N) were determined. A completely design in factorial 2 x 4 (two seed size 5.5 and 6.5 mm x four seed treatments purity seeds, seeds incubated in BDA without fungi, seeds incubated in BDA with Phomopsis and seeds incubated in BDA with Colletotrichum) arrangement, with eigth (5.5 mm) and six (6.5 mm) replications was used. The infection of soybean seeds with Phomopsis resulted on physiological seed quality reduction, but it did not xiii happen when the seeds were inoculated with Colletotrichum. There is no effect of seed inoculation in function of seed size. Based on the results is can be concluded that the occurrence of Phomopsis sojae fungi can interfere on the electrical conductivity results, but the same did not happen for the Colletotrichum dematium var. truncata fungi.

Submitted by Márcio Maia (marciokjmaia@gmail.com) on 2016-08-22T22:54:44Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2337497 bytes, checksum: 473736948ef4fcfacde11c7f7584c4a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-22T22:54:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2337497 bytes, checksum: 473736948ef4fcfacde11c7f7584c4a5 (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Financiadora de Estudos e Projetos - Finep / Fennel (Foeniculum vulgare Mill.) is an importante crop for family farms. Its seed is used in the culinary and has medicinal properties, also produces the essential oil, which has been widely used due to its high antioxidant, antimicrobial, and insecticidal activity. However, fennel plants are susceptible to attack by the aphid Hyadaphis foeniculi (Pass.) (Hemiptera: Aphididae), which can decrease seeds quality. The aim of this study was to characterize seed and essential oil of fennel, from plants non-attacked and attacked by aphids, and to assess the potential of each essential oil associated with jackfruit (Artocarpus heterophyllus L.) seed starch coatings as an antifungal agent against Colletotrichum gloeosporioides, common desease in postharvest mango (Mangifera indica). The differences between seeds non-attacked and attacked by aphids, it was evaluated the profile of total and free amino acids, total and soluble protein content, activities of peroxidase (POD), polyphenol oxidase (PPO), and phenylalanine ammonia lyase (PAL), inhibitory activity of protease, electrophoretic profile of protein, total extractable polyphenols (TEP), yellow flavonoids and total antioxidant activity (TAA) by free radical capture DPPH• and ABTS•+ radical, profile of phenolic compounds, total lipids and fatty acid profile. The essential oils from two seeds were differentiated by the volatile compounds profile. The potential of essential oils as antifungal agents was verified in vitro tests at six concentrations (0.0; 0.05; 0.1; 0.2; 0.3 and 0.5% v/v) for inhibition of C. gloeosporioides in order to determine the minimum inhibitory concentrations (MIC) and the use of the MIC of each essential oil associated with jackfruit seed starch coating applied on mango to evaluate its ability to protect against this fungus and the quality through the parameters: firmness, titratable acidity (TA), soluble solids (SS), SS/TA and pH. Non-attacked fennel seeds by aphid showed higher contents of free amino acids, soluble protein, activities of POD and PPO, TEP, yellow flavonoids and TAA, while the activity of PAL and inhibition of protease were higher in attacked seed. Significant differences were observed in the amino acid profile, electrophoretic profile of proteins and in the profile of phenolic compounds from these seeds, however the fatty acid profile was not affected. There was a significant difference to the profile of volatile compounds, with the highest amount of phenylpropanoids in attacked seeds by aphids. The MIC for two types of essential oils was at 0.5%. The combination of coatings with essential oils showed similar behavior to the quality in „Palmer‟ mangoes and the anthracnose prevention, coatings with essential oil from attacked seed by the aphids was more effective reducing the injury. The attack of aphid on fennel seeds compromises the nutritional quality for food use, however, the essential oil from this from seed can be used to inhibit the incidence and severity of anthracnose on the mango, providing an alternative use of attacked seeds that has low commercial value. / A erva-doce (Foeniculum vulgare Mill.) é uma cultura de grande importância na agricultura familiar. Sua semente é utilizada na culinária e possui propriedades medicinais, além de produzir óleo essencial, que tem sido utilizado devido sua atividade antioxidante, antimicrobiana e inseticida. Porém, a cultura da erva-doce é susceptível ao ataque do pulgão Hyadaphis foeniculi (Pass.) (Hemiptera:Aphididae), que pode prejudicar a qualidade das sementes. O objetivo deste estudo foi caracterizar a semente e o óleo essencial de erva-doce, oriundos de plantas não atacadas e atacadas pelo pulgão, bem como a avaliar a potencialidade de cada óleo essencial associado a recobrimentos a base de amido de semente de jaca (Artocarpus heterophyllus L.) como agente antifúngico contra o agente patógeno Colletotrichum gloeosporioides, comum na pós-colheita de manga (Mangifera indica). As diferenças entre as sementes não atacadas e atacadas pelo pulgão foram determinadas através do perfil de aminoácidos totais e livres, conteúdo de proteína total e solúvel, atividade das enzimas peroxidase (POD), polifenoloxidase (PPO) e fenilalanina amônio liase (PAL), inibição de protease, perfil eletroforético de proteínas, polifenóis extraíveis totais (PET), flavonoides amarelos, atividade antioxidante total (AAT) através da captura dos radicais livres DPPH• e ABTS•+, perfil de compostos fenólicos, lipídeos totais e perfil de ácidos graxos. Os óleos essenciais das duas sementes foram diferenciados através do perfil dos compostos voláteis. A potencialidade dos óleos essenciais como agentes antifúngicos foi verificada através de testes in vitro em seis concentrações (0,0; 0,05; 0,1; 0,2; 0,3 e 0,5 % v/v) para inibição do C. gloeosporioides, a fim de determinar as concentrações inibitórias mínimas (CIM) e a utilização da CIM de cada óleo essencial associada a recobrimento de amido de semente de jaca aplicado em manga para verificar sua capacidade de proteção contra este fungo e atuação nos parâmetros de qualidade: firmeza, acidez titulável (AT), sólidos solúveis (SS), relação SS/AT e pH. As sementes de erva-doce não atacadas por pulgão apresentaram maiores quantidades de aminoácidos livres, proteínas solúveis, atividade enzimática da POD e PPO, PET, flavonoides amarelos e AAT, enquanto a atividade enzimática da PAL e inibição de protease foram superiores em semente atacada. Foram observadas diferenças significativas no perfil de aminoácidos, perfil eletroforético de proteínas e perfil de compostos fenólicos entre estas sementes, entretanto o perfil de ácidos graxos das sementes não foi afetado. Houve diferença significativa para o perfil de compostos voláteis, que apresentou maior quantidade de fenilpropanóides na semente atacada pelo pulgão. A CIM para os dois tipos de óleos essenciais, foi verificada na concentração de 0,5%. A associação dos recobrimentos com os óleos essenciais apresentou comportamento semelhante para as características de qualidade em manga „Palmer‟ e em relação à prevenção da antracnose, o recobrimento com óleo essencial de semente de erva-doce atacada pelo pulgão foi mais efetivo na redução da gravidade da lesão. O ataque do pulgão em erva-doce compromete a qualidade nutricional das sementes para uso alimentar, porém, o óleo essencial desta semente pode ser utilizado para inibir a incidência e severidade da antracnose em manga, fornecendo uma alternativa para a utilização de sementes atacadas, que tem baixo valor comercial.

Submitted by JOÃO EMMANUEL RIBEIRO GUIMARÃES null (extensao@feituverava.com.br) on 2016-08-02T19:17:30Z No. of bitstreams: 1 TESE FINAL.docx: 2614804 bytes, checksum: a139a52a90fe92755ccac9e4b609eb0c (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A versão final da dissertação/tese deve ser submetida no formato PDF (Portable Document Format). O arquivo PDF não deve estar protegido e a dissertação/tese deve estar em um único arquivo, inclusive os apêndices e anexos, se houver. Por favor, corrija o formato do arquivo e realize uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2016-08-02T19:33:29Z (GMT) / Submitted by JOÃO EMMANUEL RIBEIRO GUIMARÃES (jerguimaraes@uol.com.br) on 2016-08-02T19:38:17Z No. of bitstreams: 1 TESE FINAL.pdf: 2357812 bytes, checksum: aa12a27f8cac4f4de61f6f2ccb80c925 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-03T17:17:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 guimaraes_jer_dr_jabo.pdf: 2357812 bytes, checksum: aa12a27f8cac4f4de61f6f2ccb80c925 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-03T17:17:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 guimaraes_jer_dr_jabo.pdf: 2357812 bytes, checksum: aa12a27f8cac4f4de61f6f2ccb80c925 (MD5) Previous issue date: 2016-07-01 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do trabalho foi avaliar produtos alternativos, considerados naturais, como o extrato de própolis verde e óleos essenciais, no controle pós-colheita da antracnose em mangas ‘Palmer’. Foram extraídos dez óleos essenciais de plantas e avaliados, inicialmente, quanto ao potencial antifúngico contra o Colletotrichum gloeosporioides in vitro. Dentre os óleos testados, os de Thymus vulgaris, Cymbopogon citratus e Eucalyptus globulus foram selecionados pelos seus destacados efeitos inibitórios. Na etapa in vitro foram realizados quatro experimentos, em que foram testadas concentrações de extrato de própolis verde e dos óleos, utilizando seis repetições por tratamento. Na etapa in vivo, foram realizados quatro experimentos em que mangas ‘Palmer, foram imersas em cera associada a diferentes concentrações de extrato de própolis verde e dos três óleos essenciais selecionados na etapa anterior. Após a secagem e formação dos revestimentos, os frutos tratados com própolis foram armazenados 12 ºC por 12 dias e mais 3 dias em temperatura de ambiente (22± 2 ºC e 65± 5% UR), e os tratados com óleos essenciais por 14 dias sob refrigeração, e por mais 3 dias a temperatura de ambiente. Os resultados foram submetidos à análise de variância e o efeito dos tratamentos, quando significativo, por meio do Teste F. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey (P≤0,05). O própolis verde a partir de 2%, o óleo de capim-limão a partir de 250 ppm e o de tomilho a partir de 10 ppm, se mostraram eficientes em controlar o crescimento do C. gloeosporioides in vitro. O óleo de eucalipto comum retardou, mas não inibiu o crescimento do C. gloeosporioides in vitro. Todos os óleos se mostraram eficientes em inibir a germinação de esporos de C. gloeosporioides. Os tratamentos com cera e cera associada aos óleos ou extrato de própolis reduziram o crescimento da lesão in vivo, sendo que a maior inibição (70%) do patógeno foi conseguida com o extrato de própolis verde na concentração de 2,5%. Todos os produtos testados se mostraram eficientes na manutenção da qualidade de frutos de mangas ‘Palmer’ inoculadas com C. gloeosporioides. / The objective was to evaluate alternative products, considered natural such as green propolis extract and essential oils, in the post-harvest control of anthracnose in 'Palmer' mangos. Ten essential oils from plants were extracted and evaluated, initially, for their potential as antifungal agents against Colletotrichum gloeosporioides in vitro. Among the oils tested, the Thymus vulgaris, Cymbopogon citratus and Eucalyptus globulus were selected for their outstanding inhibitory effects. In the in vitro stage four experiments were conducted, in which green propolis extract and oil concentrations were tested using six replicates per treatment. In the in vivo phase, four experiments were performed in which ‘Palmer’ mangos were dipped in wax associated with different concentrations of green propolis extract and the three essential oils selected in the previous step. After the drying process and formation of coatings, the fruits treated with propolis were stored at 12°C for 12 days and then another 3 days at room temperature (22 ± 2°C and 65 ± 5% RH), and those treated with essential oils were stored for 14 days under refrigeration and for 3 days at room temperature. The results were subjected to variance analysis and a review of the effect of treatments, when significant, by test F. Means were compared by Tukey test (p ≤ 0.05). The green propolis from 2%, lemongrass oil from 250 ppm and thyme from 10 ppm were effective in controlling the growth of C. gloeosporioides in vitro. Common eucalyptus oil was inhibited, but it did not inhibit the growth in vitro of C. gloeosporioides. The procedures with wax and associated wax with oil or propolis extract reduced the growth in vivo of the injury, and the greater inhibition (70%) of the pathogen was achieved with green propolis extract at 2,5% concentration. All products tested have proven effective in maintaining fruit quality of 'Palmer' mangos inoculated with C. gloeosporioides. / FAPESP: 2013/10397-5