Abdominal aortic aneurysm (AAA) is a chronic inflammatory disease with no available pharmacological treatment. AAA formation reduces the structural integrity of the vessel and increases the susceptibility to rupture. The inflammatory response within human aneurysmal tissue is characterized by increased expression of cyclooxygenase-2 (COX-2). Similarly, in a mouse model of the disease induced by chronic Angiotensin II (AngII) infusion, we have shown that COX-2 expression in the abdominal aortic smooth muscle layer increases early in the development of the disease. Furthermore, genetic or pharmacological inactivation of COX-2 prior to disease initiation reduces AAA incidence. The current study utilized nonhyperlipidemic mice to determine the effectiveness of COX-2 inhibition initiated after AAA formation. COX-2 inhibitor treatment was initiated 5 days after beginning the AngII infusion, a time-point where significant aneurysmal pathology is observed. COX-2 inhibition with celecoxib significantly reduced the incidence as well as severity of AAAs as compared to the control group. Celecoxib treatment also protected the mice from aortic rupture and death. AAA development is characterized by degradation of the aortic smooth muscle layer with loss of the contractile phenotype. We found that the effectiveness of celecoxib was associated with significantly increased mRNA expression of alpha-actin, SM22alpha and desmin, all of which are markers of a differentiated smooth muscle cell phenotype. Celecoxib treatment also decreased mRNA expression of a marker of dedifferentiated smooth muscle (hyaluronic acid synthase 2). We also examined the role of altered expression of COX-2 in the increased susceptibility of the abdominal segment to AAA formation. We found a prolonged and greater induction of COX-2 in the abdominal aortic smooth muscle layer in contrast to a transient induction of COX-2 in the other regions of the aorta throughout disease progression. Overall, these findings suggest that COX-2 plays an important role in AAA development in mice, and COX-2 inhibition with celecoxib attenuates progression of aneurysm development by maintaining a differentiated phenotype in abdominal aortic smooth muscle cells.

Ziel dieser Studie war es, die Häufigkeit der Expression von EGFR, HER-2 sowie COX-2 im Zervixkarzinom zu eruieren. Dabei galt es herauszufinden, ob Unterschiede hinsichtlich des Nachweises dieser drei, möglicherweise therapeutisch relevanten Moleküle zwischen den primären, nicht vortherapierten und operierten Karzinomen und den multimodal vorbehandelten Rezidiven gab. In der vorliegenden retrospektiven Arbeit wurden 45 TMMR-operierte Primärtumoren und 28 LEER-operierte Rezidivtumoren der Universitätsfrauenklinik Leipzig (Triersches Institut) einbezogen und zusätzlich hinsichtlich der prognostischen Überlebensanalyse durch das Tumorstadium, Lymphknotenmetastasen und Rezidivauftreten sowie histologischer Charakteristika untersucht. Dazu wurden Tissue - Microarrays angefertigt mit anschließender immunhistochemischer Untersuchung dieser. Die Ergebnisse zeigten, dass die TMMR-Operation die Überlebensprognose signifikant verbessert, denn lediglich bei den LEER-therapierten Rezidivtumoren erlitten die Patientinnen sowohl Fernmetastasen als auch erneute Rezidive. Weder die Expression der drei untersuchten Moleküle noch die histopathologischen Parameter haben eine prognostische Relevanz. Es gibt keine signifikanten Zusammenhänge zwischen der Häufigkeit der Expression von EGFR, HER-2 sowie COX-2 und Primär-, bzw. Rezidivtumoren, sodass diese Moleküle keine Targets für eine individualisierte, zielgerichtete Therapie beim Zervixkarzinom darstellen.

O carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço (CECP) representa 6ª malignidade mais comum no mundo. Para melhor entender os mecanismos envolvidos na iniciação tumoral, progressão e metástase, é necessária a elucidação dos eventos moleculares que guiam esses processos. É também importante a investigação da interação e modulação das células tumorais e seu microambiente. A participação de agentes inflamatórios no desenvolvimento e manutenção do CECP pode ser resumida na superexpressão da cicloxigenase 2 (COX-2) e na secreção de prostaglandina E2 (PGE2) pelas células tumorais. A PGE2 ativa seus receptores EP1-4 que são ligados a proteínas G. As proteínas G ativam outras vias de sinalização responsáveis por processos celulares como proliferação e angiogênese. Embora a participação do EP2 no câncer de cólon seja bem estabelecida, o papel dos receptores de PGE2 no CECP ainda permanece incerto. Este trabalho teve como objetivo avaliar o papel da PGE2 e de seus receptores na proliferação celular em linhagens celulares de CECP, bem como a expressão dos receptores em tissue microarrays de CECP. Inicialmente as linhagens de CECP foram utilizadas para analisar o padrão de expressão da COX-2 e dos receptores EP1-4 por meio da técnica de western blotting. A inibição da secreção da PGE2 pelos inibidores de COX-2 foi mensurada por meio da técnica de ELISA. A expressão dos receptores EP1-3 e da COX-2 foi também avaliada por meio da imuno-histoquímica em dois diferentes tissue microarray. A fim de esclarecer a indução da proliferação celular pela PGE2 e de apontar um de seus receptores como responsável pelo processo, duas PGE2 sintéticas, um antagonista do EP2 e um antagonista do EP3 foram utilizados para estimular a proliferação celular. Foi realizado o bloqueio do receptor EP2 por meio da interferência de RNA. Seus efeitos sobre a proliferação foram avaliados por meio do ensaio de incorporação de timidina. Os resultados mostraram que o CECP expressa constitutivamente a COX-2, o EP1, o EP2 e o EP3; e que é capaz de secretar PGE2. Os inibidores de COX-2 inibiram a secreção de PGE2 em baixas concentrações, mas não foram capazes de inibir a proliferação. A COX-2 e os receptores EP1-3 foram amplamente expressos nos tissue microarrays. Foi observada correlação entre EP1 e EP2; EP1 e EP3; e EP2 e EP3 (p<0,05). Somente o EP1 mostrou correlação com a COX-2 (p<0,05). A PGE2 induziu a proliferação por meio da indução da síntese de DNA nas linhagens celulares de CECP. O agonista de EP3 também induziu a síntese de DNA, sugerindo sua participação na proliferação dos CECPs. Os efeitos do siRNA para EP2 sobre a síntese de DNA não foram conclusivos. As proteínas ativadas por segundos mensageiros do EP2 também não foram afetadas pelo bloqueio do mesmo. Este estudo indica três importantes achados: 1. a PGE2 é secretada por linhagens de CECP; 2. a COX-2 é superexpressa nos CECPs; 3. os receptores de PGE2 são constitutivamente expressos nos CECPs. No entanto, esse trabalho mostra que esta via inflamatória parece ser independente aos mecanismos indutores da proliferação nos CECPs. / Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is the 6th most common malignant lesion worldwide. To better understand the mechanisms of tumor initiation, progression, and metastasis a better understanding of the molecular networks that guides these process is needed. Towards this goal, it is important to investigate the interaction and modulation of cancer cells over its surrounding microenvironment. The involvement of inflammatory agents in HNSCC development and maintenance can be resumed in the overexpression of cycloxygenase 2 (COX-2) and secretion of prostaglandin E2 (PGE2) by tumor cells. Prostaglandin E2 activates its receptors EP1-4 which are coupled to G proteins. G protein activates other pathways responsible for cellular processes such as proliferation and angiogenesis. The participation of EP2 in colon cancer is well established however the role of PGE2 receptors in HNSCC is still poorly understood. This work aims to investigate the role of PGE2 and its receptors in cellular proliferation in HNSCC cell lines and the clinical relevant expression pattern in HNSCC tissue microarrays. HNSCC cell lines were initially used to access the expression pattern of COX-2 and EP1-4 by using western blotting technique. The ability of selective COX-2 inhibition to block PGE2 secretion was measured by ELISA antibody specific assay. Also, EP1, EP2, EP3 and COX-2 expression were evaluated by immuno-histochemistry in two different sets of HNSCC tissue microarrays. To address the question about PGE2 inducted cell proliferation and which PGE2 receptor are involved in the process, two synthetic PGE2, an EP2 agonist and an EP3 agonist were used to stimulate cell proliferation. Finally, the knockdown of EP2 receptor was performed by siRNA transfection assay and its effect was evaluated in cell proliferation by radioactive thymidine incorporation assay. The results presented here shows that HNSCC constitutively express COX-2, EP1, EP2 and EP3 and that they are able to secret PGE2. COX-2 selective inhibitors are able to suppress PGE2 secretion in lower concentrations but not to inhibit cell proliferation. Also, COX-2, EP1, E2 and EP3 are widely expressed in HNSCC tissue microarrays. A correlation between EP1 and EP2; EP1 and EP3; and EP2 and EP3 (p<0.05) was observed. Only EP1 showed correlation with COX-2 in tissue microarrays (p<0,05). PGE2 was able to induce cell proliferation as it induces DNA synthesis in HNSCC cell lines. EP3 agonist also induced DNA synthesis addressing its role in cell proliferation induction in HNSCC. The siRNA for EP2 effects in DNA synthesis was not conclusive and the downstream proteins activated by EP2 second messenger were not affected following its expression knockdown. This study indicates three important findings. First, PGE2 is secreted by HNSCC. Second, COX-2 is found to be overexpressed in HNSCC; and third, PGE2 receptors are found to be constitutively expressed in HNSCC. Most interesting, we show here that this inflammatory pathway seems to be independent of the mechanisms that induce HNSCC proliferation.

Pacientes com doença do refluxo não erosiva apresentam sintomas típicos causados pelo refluxo do conteúdo gástrico para o esôfago. Entretanto, estes pacientes não apresentam alterações de mucosa visualizadas à endoscopia. O objetivo deste estudo é caracterizar a expressão de moléculas relacionadas à junção celular (claudinas 1, 3 e 4), da proteína pró-inflamatória Cox-2, da população global de linfócitos (CD45), população de linfócitos T (CD3), linfócitos B (CD20) e natural killer (CD57) em portadores de esofagite de refluxo erosiva e não erosiva. O estudo verificou que quanto mais intensa e crônica a inflamação no epitélio escamoso esofágico, menor a expressão das proteínas juncionais (claudinas 1 e 4), não alterando a expressão da claudina 3. Em relação à Cox-2 o estudo mostra aumento de sua expressão na forma erosiva da doença. Em relação à população de linfócitos, não foi detectada diferença significativa / Patients with non-erosive reflux disease conditions show typical symptons caused by the reflux of the gastric content to the esophagus. However, these patients dont show any alteration on the mucous membrane visualized trhough endoscopy. The aim of this study is to characterize the molecule expression related to the cell junction (claudins 1 , 3 and 4)the Cox 2 pro-inflamatory protein, the general population of (CD45) lymphocytes ,the population of lymphocytes T (CD3),the B (CD20) lymphocytes and the(CD57) natural killer in patients with erosive and non-erosive reflux esophagitis. The study found that the more intense and chronic the inflamation is in the esophageal squamous epithelium, less junction protein expressios (claudins 1 and 4) were found, not altering the 3 expressions of claudin 3. Regarding Cox 2, the study shows increase in its expression in the erosive form of the disease. Regarding the population of lymphocytes, no significant difference was detected

O Celecoxib, antiinflamatório não esteroidal, inibidor seletivo da COX-2, tem se mostrado um importante agente anticarcinogênico, mas o seu papel no carcinoma epidermóide de boca (CEB) não é totalmente compreendido. Sabe-se que diversas alterações genéticas estão associadas à patogênese do CEB, a neoplasia maligna mais comum de cabeça e pescoço. Algumas dessas alterações comprometem proteínas pertencentes à via de sinalização do Akt, envolvida em diferentes fenômenos celulares. É sabido que Akt pode ativar o fator de transcrição NF-kB, o qual tem importante participação na fisiologia normal e no câncer. A proteína COX-2, descrita inicialmente em processos inflamatórios, está associada com a oncogênese e recentemente tem sido associada com a via de sinalização do Akt e com o NF-kB. Portanto, o objetivo deste estudo foi analisar o efeito do Celecoxib sobre linhagens celulares de carcinoma epidermóide de boca e verificar a localização intracelular e a expressão das proteínas pAkt, NF-kB e COX-2 em linhagens celulares de carcinoma epiermóide de boca após o tratamento com o Celecoxib.Através da técnica de imunofluorescência, foram analisados os padrões de expressão das proteínas pAkt, NFkB e COX-2 em quatro linhagens celulares de carcinoma epidermóide bucal submetidas ao tratamento com Celecoxib, cuja a dose e o tempo foram obtidos a partir de ensaios de viabilidade celular. Também se realizou ensaio de apoptose celular. Como controle utilizou-se células não tratadas com o medicamento. O Celecoxib na dose de 30 M por 24 horas causa apoptose.Na técnica de western blot, somente a linhagem SCC15 apresentou uma diminuição significativa para a COX-2. Entretanto, para p-Akt e NF-kB nenhuma alteração na expressão foi observada entre os grupos controle e tratado.Na imunofluorescência, houve alteração no padrão de expressão das proteínas pAkt, NF-kB e COX-2, quando se comparou os grupos contrele e tratado. Portanto, o Celecoxib pode ser um eficaz agente terapêutico, uma vez que demonstrou grande eficácia na inibição da proliferação celular de linhagens celulares de CEB. / Celecoxib, nonsteroidal anti-inflammatory COX-2 selective inhibitor, has proven to be an important anticancer agent. However its role in oral squamous cell carcinoma (OSCC) is not entirely understood. This is the most common malignancy of head and neck regionand it is known that various genetic alterations are associated with its pathogenesis. Some of these changes affect proteins belonging to the Akt signaling pathway, involved in different cellular processes. It is known that Akt can activate the transcription factor NF-kB, which has important role in normal physiology and cancer.The COX-2 proteinwas firstly described in the inflammatory processes, is associated with oncogenesis and has recently been related with the Akt signaling pathwayand with NF-kB. Therefore, the aim of this study was to analyze the effect of Celecoxib on squamous cell carcinoma cell lines and to determine pAkt, NF-kB and COX-2 intracellular localization and levels of expressionin this cell lines after treated with Celecoxib. By immunofluorescence, we analyzed the pAkt, NF-kB and COX-2 expression patterns in four oral squamous cell carcinoma cell lines treated with Celecoxib, which the dose and time were obtained from cell viability assays. Cellular apoptosis assay was also performed. As control the cells were not treated with this drug. Celecoxibcauses apoptosisin the dose of 30 M for 24 hours. In the western blottechnique, only the SCC15 cell line shows a significant decrease for COX-2. However, for p-Akt and NF-kB no change in expression was observed between control and treated groups. On immunofluorescence, there were changes in the pAkt, NFkB and COX-2protein expression pattern when the control group was compared with treated group. Therefore, the Celecoxib can be an effective therapeutic agent, since it has shown great efficacy in thecelular proliferation inhibition of the OSCC cell lines.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:39:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JANAINA STEGER DE OLIVEIRA COSTA PIRES.pdf: 1117981 bytes, checksum: f845b89570ca9e09aa37909b90cf688b (MD5) Previous issue date: 2013-06-28 / Thyroid câncer is the most common endocrine system malignant neoplasia. Although it is a relatively rare pathology, responsible for approximately 1% of new malignant disease cases, there has been recognized all over the world a tendency to increase its incidence. This study aimed to evaluate the expression of COX-2 and VEGF-C in patients diagnosed with Thyroid Papilary Carcinoma (TPC) in the city of Goiania, Goias State, Brazil, as well as the possible associations between this expression markers and the following factors: lymph node metastasis, distant metastasis, tumor size, age, adjacent tissue invasion and gender. In this regard, 165 thyroid papilary carcinoma cases diagnosed at the Araujo Jorge Hospital Patologic Anatomy Department in Goiania, Goias State, Brazil were analyzed. The molecular analysis was held by immunohistochemistry. Descriptive and comparative statistical analysis using Chi square test were held in this study. The study evaluated 165 patients who had documented histopathologic TPC diagnosis. The immunohistocemical analysis of the expression COX-2 e VEGF-C made possible to classify the expression COX-2 e VEGF-C in two groups, one of them with the expression &#8804; 50 % to COX-2 and VEGF-C (90 cases 54,5%; 102 cases 40,6%), and the other one with the expression > 50 % (50 cases 30,3%; 62 cases 37,6%). Significant statistical associations were observed between the size (p=0,0048; p<0,0001) and adjacent tissue invasion (p=0,0006; p<0,0001) with the expression of COX-2 and VEGF-C, and also between lymph node metastasis (p<0,0001) with expression VEGF-C. The collected data showed that the over expression COX-2 and VEGF-C in TPC cases can be important molecular biomarkers in thyroid papilary carcinoma prognosis. Our results corroborate to other studies that demonstrated the usability of these proteins to identify TPC patients, with a higher risk of disease progression because of its association with the presence of regional lymph node metastasis and with adjacent tissue invasion. / O câncer de tireóide é a neoplasia maligna mais comum do sistema endócrino. Embora seja uma patologia relativamente rara, responsável por aproximadamente 1% dos novos casos de doenças malignas, uma tendência no aumento de sua incidência tem sido reconhecida em várias partes do mundo. O objetivo desse estudo consistiu em avaliar a expressão de COX-2 e VEGF-C em pacientes diagnosticados com Carcinoma Papilífero da Tireóide (CPT) em Goiânia, bem como as possíveis associações entre a expressão desses marcadores e os seguintes fatores: metástase linfonodal, metástase à distância, tamanho do tumor, idade, extravasamento-invasão de tecidos adjacentes e gênero. Para isso foram analisados 165 casos de carcinomas papilíferos de tireoide diagnosticados no Setor de Anatomia Patológica do Hospital Araújo Jorge, em Goiânia, Goiás. A análise molecular foi feita por imuno-histoquímica. Análises estatísticas descritiva e comparativa com o teste Chi-quadrado foram usadas nesse estudo. O estudo avaliou 165 pacientes com diagnóstico histopatológico comprovado de CPT. A análise imuno-histoquímica da expressão de COX-2 e VEGF-C, possibilitou a classificação da expressão de COX-2 e VEGF-C em dois grupos, sendo um com expressão &#8804; 50 % para COX-2 e VEGF-C (90 casos 54,5%; 102 casos 40,6%), e outro com expressão > 50 % (50 casos 30,3%; 62 casos 37,6%). Associações estatisticamente significativas foram observadas entre o tamanho (p=0,0048; p<0,0001) e invasão de tecido adjacente (p=0,0006; p<0,0001) com a hiperexpressão de COX-2 e VEGF-C, e também entre metástase linfonodal (p<0,0001) com a expressão de VEGF-C. Os dados obtidos demonstraram que a superexpressão de COX-2 e VEGF-C nos CPT podem ser importantes biomarcadores moleculares no prognóstico do carcinoma papilífero de tireóide. Nossos resultados corroboram com outros estudos que demonstraram a utilidade dessas proteínas na identificação de pacientes com CPT, com maior risco de progressão da doença por sua associação com a presença de metástases para linfonodos regionais e com a invasão de tecido adjacente.

O Celecoxib, antiinflamatório não esteroidal, inibidor seletivo da COX-2, tem se mostrado um importante agente anticarcinogênico, mas o seu papel no carcinoma epidermóide de boca (CEB) não é totalmente compreendido. Sabe-se que diversas alterações genéticas estão associadas à patogênese do CEB, a neoplasia maligna mais comum de cabeça e pescoço. Algumas dessas alterações comprometem proteínas pertencentes à via de sinalização do Akt, envolvida em diferentes fenômenos celulares. É sabido que Akt pode ativar o fator de transcrição NF-kB, o qual tem importante participação na fisiologia normal e no câncer. A proteína COX-2, descrita inicialmente em processos inflamatórios, está associada com a oncogênese e recentemente tem sido associada com a via de sinalização do Akt e com o NF-kB. Portanto, o objetivo deste estudo foi analisar o efeito do Celecoxib sobre linhagens celulares de carcinoma epidermóide de boca e verificar a localização intracelular e a expressão das proteínas pAkt, NF-kB e COX-2 em linhagens celulares de carcinoma epiermóide de boca após o tratamento com o Celecoxib.Através da técnica de imunofluorescência, foram analisados os padrões de expressão das proteínas pAkt, NFkB e COX-2 em quatro linhagens celulares de carcinoma epidermóide bucal submetidas ao tratamento com Celecoxib, cuja a dose e o tempo foram obtidos a partir de ensaios de viabilidade celular. Também se realizou ensaio de apoptose celular. Como controle utilizou-se células não tratadas com o medicamento. O Celecoxib na dose de 30 M por 24 horas causa apoptose.Na técnica de western blot, somente a linhagem SCC15 apresentou uma diminuição significativa para a COX-2. Entretanto, para p-Akt e NF-kB nenhuma alteração na expressão foi observada entre os grupos controle e tratado.Na imunofluorescência, houve alteração no padrão de expressão das proteínas pAkt, NF-kB e COX-2, quando se comparou os grupos contrele e tratado. Portanto, o Celecoxib pode ser um eficaz agente terapêutico, uma vez que demonstrou grande eficácia na inibição da proliferação celular de linhagens celulares de CEB. / Celecoxib, nonsteroidal anti-inflammatory COX-2 selective inhibitor, has proven to be an important anticancer agent. However its role in oral squamous cell carcinoma (OSCC) is not entirely understood. This is the most common malignancy of head and neck regionand it is known that various genetic alterations are associated with its pathogenesis. Some of these changes affect proteins belonging to the Akt signaling pathway, involved in different cellular processes. It is known that Akt can activate the transcription factor NF-kB, which has important role in normal physiology and cancer.The COX-2 proteinwas firstly described in the inflammatory processes, is associated with oncogenesis and has recently been related with the Akt signaling pathwayand with NF-kB. Therefore, the aim of this study was to analyze the effect of Celecoxib on squamous cell carcinoma cell lines and to determine pAkt, NF-kB and COX-2 intracellular localization and levels of expressionin this cell lines after treated with Celecoxib. By immunofluorescence, we analyzed the pAkt, NF-kB and COX-2 expression patterns in four oral squamous cell carcinoma cell lines treated with Celecoxib, which the dose and time were obtained from cell viability assays. Cellular apoptosis assay was also performed. As control the cells were not treated with this drug. Celecoxibcauses apoptosisin the dose of 30 M for 24 hours. In the western blottechnique, only the SCC15 cell line shows a significant decrease for COX-2. However, for p-Akt and NF-kB no change in expression was observed between control and treated groups. On immunofluorescence, there were changes in the pAkt, NFkB and COX-2protein expression pattern when the control group was compared with treated group. Therefore, the Celecoxib can be an effective therapeutic agent, since it has shown great efficacy in thecelular proliferation inhibition of the OSCC cell lines.

O carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço (CECP) representa 6ª malignidade mais comum no mundo. Para melhor entender os mecanismos envolvidos na iniciação tumoral, progressão e metástase, é necessária a elucidação dos eventos moleculares que guiam esses processos. É também importante a investigação da interação e modulação das células tumorais e seu microambiente. A participação de agentes inflamatórios no desenvolvimento e manutenção do CECP pode ser resumida na superexpressão da cicloxigenase 2 (COX-2) e na secreção de prostaglandina E2 (PGE2) pelas células tumorais. A PGE2 ativa seus receptores EP1-4 que são ligados a proteínas G. As proteínas G ativam outras vias de sinalização responsáveis por processos celulares como proliferação e angiogênese. Embora a participação do EP2 no câncer de cólon seja bem estabelecida, o papel dos receptores de PGE2 no CECP ainda permanece incerto. Este trabalho teve como objetivo avaliar o papel da PGE2 e de seus receptores na proliferação celular em linhagens celulares de CECP, bem como a expressão dos receptores em tissue microarrays de CECP. Inicialmente as linhagens de CECP foram utilizadas para analisar o padrão de expressão da COX-2 e dos receptores EP1-4 por meio da técnica de western blotting. A inibição da secreção da PGE2 pelos inibidores de COX-2 foi mensurada por meio da técnica de ELISA. A expressão dos receptores EP1-3 e da COX-2 foi também avaliada por meio da imuno-histoquímica em dois diferentes tissue microarray. A fim de esclarecer a indução da proliferação celular pela PGE2 e de apontar um de seus receptores como responsável pelo processo, duas PGE2 sintéticas, um antagonista do EP2 e um antagonista do EP3 foram utilizados para estimular a proliferação celular. Foi realizado o bloqueio do receptor EP2 por meio da interferência de RNA. Seus efeitos sobre a proliferação foram avaliados por meio do ensaio de incorporação de timidina. Os resultados mostraram que o CECP expressa constitutivamente a COX-2, o EP1, o EP2 e o EP3; e que é capaz de secretar PGE2. Os inibidores de COX-2 inibiram a secreção de PGE2 em baixas concentrações, mas não foram capazes de inibir a proliferação. A COX-2 e os receptores EP1-3 foram amplamente expressos nos tissue microarrays. Foi observada correlação entre EP1 e EP2; EP1 e EP3; e EP2 e EP3 (p<0,05). Somente o EP1 mostrou correlação com a COX-2 (p<0,05). A PGE2 induziu a proliferação por meio da indução da síntese de DNA nas linhagens celulares de CECP. O agonista de EP3 também induziu a síntese de DNA, sugerindo sua participação na proliferação dos CECPs. Os efeitos do siRNA para EP2 sobre a síntese de DNA não foram conclusivos. As proteínas ativadas por segundos mensageiros do EP2 também não foram afetadas pelo bloqueio do mesmo. Este estudo indica três importantes achados: 1. a PGE2 é secretada por linhagens de CECP; 2. a COX-2 é superexpressa nos CECPs; 3. os receptores de PGE2 são constitutivamente expressos nos CECPs. No entanto, esse trabalho mostra que esta via inflamatória parece ser independente aos mecanismos indutores da proliferação nos CECPs. / Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is the 6th most common malignant lesion worldwide. To better understand the mechanisms of tumor initiation, progression, and metastasis a better understanding of the molecular networks that guides these process is needed. Towards this goal, it is important to investigate the interaction and modulation of cancer cells over its surrounding microenvironment. The involvement of inflammatory agents in HNSCC development and maintenance can be resumed in the overexpression of cycloxygenase 2 (COX-2) and secretion of prostaglandin E2 (PGE2) by tumor cells. Prostaglandin E2 activates its receptors EP1-4 which are coupled to G proteins. G protein activates other pathways responsible for cellular processes such as proliferation and angiogenesis. The participation of EP2 in colon cancer is well established however the role of PGE2 receptors in HNSCC is still poorly understood. This work aims to investigate the role of PGE2 and its receptors in cellular proliferation in HNSCC cell lines and the clinical relevant expression pattern in HNSCC tissue microarrays. HNSCC cell lines were initially used to access the expression pattern of COX-2 and EP1-4 by using western blotting technique. The ability of selective COX-2 inhibition to block PGE2 secretion was measured by ELISA antibody specific assay. Also, EP1, EP2, EP3 and COX-2 expression were evaluated by immuno-histochemistry in two different sets of HNSCC tissue microarrays. To address the question about PGE2 inducted cell proliferation and which PGE2 receptor are involved in the process, two synthetic PGE2, an EP2 agonist and an EP3 agonist were used to stimulate cell proliferation. Finally, the knockdown of EP2 receptor was performed by siRNA transfection assay and its effect was evaluated in cell proliferation by radioactive thymidine incorporation assay. The results presented here shows that HNSCC constitutively express COX-2, EP1, EP2 and EP3 and that they are able to secret PGE2. COX-2 selective inhibitors are able to suppress PGE2 secretion in lower concentrations but not to inhibit cell proliferation. Also, COX-2, EP1, E2 and EP3 are widely expressed in HNSCC tissue microarrays. A correlation between EP1 and EP2; EP1 and EP3; and EP2 and EP3 (p<0.05) was observed. Only EP1 showed correlation with COX-2 in tissue microarrays (p<0,05). PGE2 was able to induce cell proliferation as it induces DNA synthesis in HNSCC cell lines. EP3 agonist also induced DNA synthesis addressing its role in cell proliferation induction in HNSCC. The siRNA for EP2 effects in DNA synthesis was not conclusive and the downstream proteins activated by EP2 second messenger were not affected following its expression knockdown. This study indicates three important findings. First, PGE2 is secreted by HNSCC. Second, COX-2 is found to be overexpressed in HNSCC; and third, PGE2 receptors are found to be constitutively expressed in HNSCC. Most interesting, we show here that this inflammatory pathway seems to be independent of the mechanisms that induce HNSCC proliferation.

A doença de Parkinson (DP) é a segunda doença neurodegenerativa que mais atinge a população mundial. O desenvolvimento dos prejuízos motores decorrentes da doença está relacionado a sua fisiopatologia, que promove principalmente a neurodegeneração dos neurônios dopaminérgicos da substância negra pars compacta. Estudos sugerem o envolvimento de vias inflamatórias exacerbando a morte celular na fisiopatologia da DP. O fenômeno neuroinflamatório é caracterizado pela ativação de diversas células do sistema nervoso central, como neurônios, micróglia e astrócitos, além dos principais mediadores pró- inflamatórios, que são a enzima ciclooxigenase-2 (COX-2), o fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?), a interleucina 1? (IL-1?) e a interleucina 6 (IL-6), entre outros. Estes fatores estão presentes em estruturas neuroanatômicas como o estriado e substância negra pars compacta de indivíduos com a DP. O tratamento crônico com L-DOPA, o precursor do neurotransmissor dopamina, inicialmente gera uma redução da manifestação dos sintomas motores na maioria dos pacientes. Porém, após certo tempo de tratamento, ocorre o surgimento de complicações motoras, como a discinesia induzida por L-DOPA (LID - LDOPA-induced dyskinesia). O desenvolvimento e a manifestação da LID também podem acompanhar uma resposta inflamatória anormal. Dados do grupo sugerem a enzima COX-2 e as células gliais como mediadores da LID. Estudos apontam que fármacos que reduzem a LID modulam a expressão de COX-2. Nosso objetivo, portanto, foi caracterizar a presença de fatores/mecanismos pró-inflamatórios no estriado lesionado de camundongos tratados com LDOPA. Nossos resultados serão apresentados em três capítulos. No primeiro capítulo, empregamos o modelo de camundongos hemiparkinsonianos (lesionados com 6- hidroxidopamina) e tratamos com L-DOPA por diferentes períodos de tempo (1, 7, 14 e 21 dias) para analisarmos o surgimento de fatores inflamatórios no estriado, como a enzima COX-2, o fator nuclear kappa-B (NF-?B) e a expressão e atividade dos astrócitos e micróglia. No segundo capítulo, demonstramos o potencial destas células gliais em produzir citocinas e/ou glutamato após estímulo com os principais neurotransmissores envolvidos com a LID, a DA (ou seu precursor L-DOPA) e glutamato. No terceiro capítulo, demonstramos o potencial terapêutico de drogas usadas na clínica - com propriedades anti-inflamatórias - de reduzirem a LID previamente estabelecida. Para tal, utilizamos o canabidiol (princípio ativo da Cannabis, usado no tratamento para epilepsia, entre outros) e o celecoxibe (inibidor específico da atividade enzimática da COX-2). Este estudo corrobora a existência de um processo inflamatório no estriado lesionado de camundongos parkinsonianos, exacerbado pelo tratamento com L-DOPA. A enzima COX-2 pode ter um papel fundamental no desenvolvimento da LID. Adicionalmente, este trabalho sugere que drogas utilizadas clinicamente com ação anti-inflamatória podem se tornar possíveis ferramentas terapêuticas para a redução desta desordem. Desta forma, relacionamos a produção de fatores inflamatórios e a ativação de células gliais à perpetuação de uma atividade pós-sináptica estriatal anormal que ocasionam a \"má plasticidade\" típica da LID. / Parkinson\'s disease (PD) is the second most common neurodegenerative disease in world population. The development of motor impairments related to this disease occurs due to its pathophysiology, which mainly promotes the neurodegeneration of the dopaminergic neurons in the substantia nigra pars compacta. Studies suggest the involvement of inflammatory pathways that exacerbate cell death in the pathophysiology of PD. The neuroinflammatory phenomenon is characterized by the activation of central nervous system cells, such as neurons, microglia and astrocytes, in addition to proinflammatory mediators that are elevated in patients with PD, such as the enzyme cyclooxygenase-2 (COX-2), tumor necrosis factoralpha (TNF-?), interleukin 1? (IL-1?) and interleukin-6 (IL-6), among others. These factors are present in neuroanatomic structures such as striatum and substantia nigra pars compacta. Chronic treatment with L-DOPA, the precursor of the neurotransmitter dopamine, initially generates a reduction in the manifestation of motor symptoms in the vast majority of patients, but after a certain time of treatment, motor complications begin to appear, such as L-DOPAinduced dyskinesia (LID). The development and manifestation of LID may also accompany an abnormal inflammatory response. Data from our group suggest the enzyme COX-2 as one of the mediators of LID. Studies also point out that drugs that reduce LID are able to modulate COX-2 expression. Our objective, therefore, was to characterize the presence of proinflammatory factors/mechanisms in the injured striatum of mice treated with L-DOPA. For this purpose, the present study will be divided into three chapters. In the first chapter, we used the hemiparkinsonian mice model (lesioned with 6-hydroxydopamine) treated with LDOPA for different time periods (1, 7, 14 and 21 days) to observe the appearance of inflammatory factors in the striatum, such as the COX-2 enzyme, nuclear factor kappa-B (NF- ?B) and the expression and activity of glial cells, represented by astrocytes and microglia. In the second chapter, we demonstrated the potential of glial cells to produce cytokines and/or glutamate after stimulation with the major neurotransmitters involved with LID, dopamine (or its precursor L-DOPA) and glutamate. Finally, in the third chapter, we demonstrate the therapeutic potential of drugs used in the clinic with anti-inflammatory properties to reduce previously established LID. For this, we used cannabidiol (the active constituent of Cannabis, used for the treatment of epilepsy, among others) and celecoxib (a specific COX-2 activity inhibitor). The present study corroborates the existence of an inflammatory process in the injured striatum of parkinsonian mice, exacerbated by treatment with L-DOPA. The COX-2 enzyme may play a key role in the development of LID. Additionally, this work suggests that drugs clinically used with anti-inflammatory action may become possible therapeutic tools for the reduction of this disorder. In this way, we relate the production of inflammatory factors and the activation of glial cells to the perpetuation of an abnormal striatal postsynaptic activity that causes the \"maladaptative plasticity\" typical of LID.

A doença de Parkinson (DP) é a segunda doença neurodegenerativa que mais atinge a população mundial. O desenvolvimento dos prejuízos motores decorrentes da doença está relacionado a sua fisiopatologia, que promove principalmente a neurodegeneração dos neurônios dopaminérgicos da substância negra pars compacta. Estudos sugerem o envolvimento de vias inflamatórias exacerbando a morte celular na fisiopatologia da DP. O fenômeno neuroinflamatório é caracterizado pela ativação de diversas células do sistema nervoso central, como neurônios, micróglia e astrócitos, além dos principais mediadores pró- inflamatórios, que são a enzima ciclooxigenase-2 (COX-2), o fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?), a interleucina 1? (IL-1?) e a interleucina 6 (IL-6), entre outros. Estes fatores estão presentes em estruturas neuroanatômicas como o estriado e substância negra pars compacta de indivíduos com a DP. O tratamento crônico com L-DOPA, o precursor do neurotransmissor dopamina, inicialmente gera uma redução da manifestação dos sintomas motores na maioria dos pacientes. Porém, após certo tempo de tratamento, ocorre o surgimento de complicações motoras, como a discinesia induzida por L-DOPA (LID - LDOPA-induced dyskinesia). O desenvolvimento e a manifestação da LID também podem acompanhar uma resposta inflamatória anormal. Dados do grupo sugerem a enzima COX-2 e as células gliais como mediadores da LID. Estudos apontam que fármacos que reduzem a LID modulam a expressão de COX-2. Nosso objetivo, portanto, foi caracterizar a presença de fatores/mecanismos pró-inflamatórios no estriado lesionado de camundongos tratados com LDOPA. Nossos resultados serão apresentados em três capítulos. No primeiro capítulo, empregamos o modelo de camundongos hemiparkinsonianos (lesionados com 6- hidroxidopamina) e tratamos com L-DOPA por diferentes períodos de tempo (1, 7, 14 e 21 dias) para analisarmos o surgimento de fatores inflamatórios no estriado, como a enzima COX-2, o fator nuclear kappa-B (NF-?B) e a expressão e atividade dos astrócitos e micróglia. No segundo capítulo, demonstramos o potencial destas células gliais em produzir citocinas e/ou glutamato após estímulo com os principais neurotransmissores envolvidos com a LID, a DA (ou seu precursor L-DOPA) e glutamato. No terceiro capítulo, demonstramos o potencial terapêutico de drogas usadas na clínica - com propriedades anti-inflamatórias - de reduzirem a LID previamente estabelecida. Para tal, utilizamos o canabidiol (princípio ativo da Cannabis, usado no tratamento para epilepsia, entre outros) e o celecoxibe (inibidor específico da atividade enzimática da COX-2). Este estudo corrobora a existência de um processo inflamatório no estriado lesionado de camundongos parkinsonianos, exacerbado pelo tratamento com L-DOPA. A enzima COX-2 pode ter um papel fundamental no desenvolvimento da LID. Adicionalmente, este trabalho sugere que drogas utilizadas clinicamente com ação anti-inflamatória podem se tornar possíveis ferramentas terapêuticas para a redução desta desordem. Desta forma, relacionamos a produção de fatores inflamatórios e a ativação de células gliais à perpetuação de uma atividade pós-sináptica estriatal anormal que ocasionam a \"má plasticidade\" típica da LID. / Parkinson\'s disease (PD) is the second most common neurodegenerative disease in world population. The development of motor impairments related to this disease occurs due to its pathophysiology, which mainly promotes the neurodegeneration of the dopaminergic neurons in the substantia nigra pars compacta. Studies suggest the involvement of inflammatory pathways that exacerbate cell death in the pathophysiology of PD. The neuroinflammatory phenomenon is characterized by the activation of central nervous system cells, such as neurons, microglia and astrocytes, in addition to proinflammatory mediators that are elevated in patients with PD, such as the enzyme cyclooxygenase-2 (COX-2), tumor necrosis factoralpha (TNF-?), interleukin 1? (IL-1?) and interleukin-6 (IL-6), among others. These factors are present in neuroanatomic structures such as striatum and substantia nigra pars compacta. Chronic treatment with L-DOPA, the precursor of the neurotransmitter dopamine, initially generates a reduction in the manifestation of motor symptoms in the vast majority of patients, but after a certain time of treatment, motor complications begin to appear, such as L-DOPAinduced dyskinesia (LID). The development and manifestation of LID may also accompany an abnormal inflammatory response. Data from our group suggest the enzyme COX-2 as one of the mediators of LID. Studies also point out that drugs that reduce LID are able to modulate COX-2 expression. Our objective, therefore, was to characterize the presence of proinflammatory factors/mechanisms in the injured striatum of mice treated with L-DOPA. For this purpose, the present study will be divided into three chapters. In the first chapter, we used the hemiparkinsonian mice model (lesioned with 6-hydroxydopamine) treated with LDOPA for different time periods (1, 7, 14 and 21 days) to observe the appearance of inflammatory factors in the striatum, such as the COX-2 enzyme, nuclear factor kappa-B (NF- ?B) and the expression and activity of glial cells, represented by astrocytes and microglia. In the second chapter, we demonstrated the potential of glial cells to produce cytokines and/or glutamate after stimulation with the major neurotransmitters involved with LID, dopamine (or its precursor L-DOPA) and glutamate. Finally, in the third chapter, we demonstrate the therapeutic potential of drugs used in the clinic with anti-inflammatory properties to reduce previously established LID. For this, we used cannabidiol (the active constituent of Cannabis, used for the treatment of epilepsy, among others) and celecoxib (a specific COX-2 activity inhibitor). The present study corroborates the existence of an inflammatory process in the injured striatum of parkinsonian mice, exacerbated by treatment with L-DOPA. The COX-2 enzyme may play a key role in the development of LID. Additionally, this work suggests that drugs clinically used with anti-inflammatory action may become possible therapeutic tools for the reduction of this disorder. In this way, we relate the production of inflammatory factors and the activation of glial cells to the perpetuation of an abnormal striatal postsynaptic activity that causes the \"maladaptative plasticity\" typical of LID.