Results of this study suggest that laboratory growth of full-sib families of five month old Pacific oyster spat can be predictive of growth to market size at different grow-out sites. Seven to ten millimeter spat were selected from each of fifteen full-sib families and commercially available polyploids. Each family was split into two groups and exposed to either variable salinity (V.S., 3-30 ppt) or constant salinity (C.S., 30 ppt) laboratory conditions for five months, then planted at either an upriver or downriver subtidal site in the Yaquina estuary, Oregon. After six months of growth in the estuary, the rankings of the families based on average individual weights, specific growth rates (SGR), survival and yields were compared between laboratory and estuary sites. There was a significant effect of family, laboratory treatment and site upon final individual live weights of oysters in the estuary (P=0.0001). The rankings of families based on average individual laboratory weights were correlated with average individual estuary weights at the downriver site (C.S. oysters, P=0.010, V.S. oysters, P=0.005). Tetraploid oysters grew to heavier final estuary weights than either triploids or diploids, with individual C.S. tetraploids averaging 79.4 g live weight by fifteen months of age. Laboratory family rankings based on SGRs were negatively correlated with estuary rankings of family SGRs for all treatments (P<0.0001, Rho=-0.668). Rankings of families based on laboratory yields on day 60 were correlated with standardized estuary yield rankings for all treatments, except V.S. oysters planted downriver. Laboratory yields of families were also found to be predictive of estuary yields at an intertidally planted site in Sequim Bay, Washington, indicating the potential for predicting yields across a wide range of sites and culture methods (subtidal vs. intertidal). Oyster breeding programs may realize more efficient progress from the results of this study. If family yields at grow-out sites can be predicted from spat yields in the laboratory, poor and average families could be identified early at the spat stage, eliminating the need to expend resources to plant them out at test sites. / Graduation date: 2000

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Crassostrea (Sacco, 1897) é o gênero mais importante do mundo de ostras de cultivo e consiste de 34 espécies distribuídas pelas regiões tropicais e temperadas do globo. C. gasar e C. rhizophorae são as duas espécies nativas que estão distribuídas ao longo de toda a costa do Brasil até o Caribe. C. gasar também ocorre na costa da Africa. Ainda que sua distribuição seja extensa e com disponibilidade abundante, o cultivo de ostras nativas no Brasil ainda é incipiente e a delimitação correta dos estoques mantém-se incerta. O sucesso do desenvolvimento da malacocultura, que é recomendada internacionalmente como forma sustentável de aquicultura, depende da resolução desses problemas. Assim, com o objetivo de determinar geneticamente seus estoques no Atlântico como também estimar sua história demográfica, dois diferentes marcadores moleculares foram empregados: sequências de DNA da região controle mitocondrial e loci de microssatélites espécie-especifícos, desenvolvidos no presente estudo. Foram sequenciados fragmentos da região controle de um total de 930 indivíduos de C. gasar e C. rhizophorae coletados em 32 localidades que incluíram o Caribe, a Guiana Francesa, a costa brasileira e a África. Também foram realizadas genotipagens de 1178 indivíduos, e ambas as espécies, com 9 e 11 loci de microssatélites para C. gasar e C. rhizophorae, respectivamente. Os dados genéticos foram analisados através de diferentes abordagens (índices de estruturação (FST) e de (Jost D), análise molecular de variância (AMOVA), análise espacial molecular de variância (SAMOVA), Bayesian Skyline Plots (BSP), análise fatorial de correspondência (AFC) e análise de atribuição Bayesiana (STRUCTURE)). Os resultados indicaram um padrão geral de estruturação, onde dois diferentes estoques foram detectados para ambas as espécies: grupos do norte e do sul, onde o Rio de Janeiro seria a região limitante entre os dois estoques. Os maiores valores dos índices de estruturação foram encontrados para C. gasar, indicando que esta espécie estaria mais estruturada do que C. rhizophorae. As análises demográficas indicaram uma provável expansão das populações durante o ultimo período glacial e uma possível origem americana das populações africanas. Todos os resultados sugeriram a existência de uma barreira geográfica próxima ao Rio de Janeiro, que poderia ser a cadeia de Vitória-Trindade e o fenômeno de ressurgência que ocorre em Cabo Frio (RJ). Esses resultados serão de grande utilidade para estabelecer critérios para seleção de sementes para cultivo ao longo da costa do Brasil que permitirá o manejo adequado dos estoques ostreícolas, prevenindo seu desaparecimento como já ocorrido em outros recifes no mundo. / Crassostrea (Sacco, 1897) is the most important genus of cultivated oysters in the world and consisting of 34 species distributed by tropical and temperate regions of the globe. C. gasar and C. rhizophorae are the two native species which have wide distribution along the entire Brazilian coast up to the Caribbean. C. gasar also occurs on coast of Africa. Despite its extensive distribution and abundant availability, cultivation of those oysters in Brazil is incipient, and the correct delimitation of the existing stocks is still uncertain. The successful development of malacoculture which is recommended internationally as an environmentally sustainable form of aquaculture depends on the resolution of these issues. Thus, in order to genetically determinate their stocks in the Atlantic and to estimate their demographic history, two different molecular markers were employed: sequences of the mitochondrial DNA control region and species-specific microsatellite loci, developed in the present study. We have sequenced a fragment of the mitochondrial control region from a total of 930 individuals of C. gasar and C. rhizophorae collected in 32 localities including the Caribbean, French Guyana, Brazilian coast and Africa. We have also genotyped 1178 individuals of both species with 9 and 11 loci of microsatellites for C. gasar and C. rhizophorae, respectively. Genetic data were analyzed with different approaches (fixation (FST) and differentiation (Jost D) indices, analysis of molecular variance (AMOVA), spatial analysis of molecular variance (SAMOVA), Bayesian Skyline Plots (BSP), factorial correspondence analysis (AFC) and Bayesian attribution analysis (STRUCTURE)). The results indicated a general structure pattern, where two different stocks were detected for both species: north and south groups, where Rio de Janeiro would be the limited region between them. Higher values of fixation indices were found for C. gasar, indicating that this species would be more structured than C. rhizophorae. Demographic analyses showed a probable expansion of populations during the last glacial period and a probable American origin of African populations. All results suggested the existence of a barrier next to Rio de Janeiro, which could be Vitoria-Trindade chain and the upwelling in the region of Cabo Frio (RJ). These results will be useful to establish criteria for the selection of seeds for cultivation along the Brazilian coast which will allow proper management of stocks of oysters preventing its disappearance as in other reefs around the world.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / ClassificaÃÃes taxonÃmicas de ostras sÃo problemÃticas, pois estes organismos possuem caracterÃsticas morfolÃgicas pouco informativas. A variabilidade da regiÃo ITS do cluster ibossÃmico tem sido bastante utilizada em estudos filogenÃticos e taxonÃmicos, visto que esta regiÃo apresenta uma variabilidade relativamente elevada e fÃcil amplificaÃÃo por termociclagem. A ostra Crassostrea brasiliana foi, por dÃcadas, confundida com C. rhizophorae, entretanto, estudos recentes indicam que sÃo duas espÃcies biologicamente distintas. Esta pesquisa objetivou analisar a variabilidade da regiÃo ITS-1 de populaÃÃes de ostras C. rhizophorae em trÃs estuÃrios da costa do Estado do Cearà e investigar a presenÃa de uma segunda espÃcie de ostra pertencente ao gÃnero Crassostrea. Exemplares da ostra nativa C. cf. rhizophorae foram coletados nos estuÃrios da costa cearense para anÃlise de variabilidade populacional. Foram coletados tambÃm espÃcimes de C. cf. brasiliana para estudo de filogenia e comparaÃÃo com o primeiro grupo de ostras. ApÃs extraÃÃo de DNA e amplificaÃÃo por PCR da regiÃo ITS-1, seqÃÃncias desta regiÃo foram obtidas para anÃlise filogenÃtica realizada atravÃs dos mÃtodos de neighbour-joining e mÃxima parcimÃnia. SequÃncias de ITS-1 descritas no GenBank para 35 indivÃduos, representando 12 espÃcies de ostras do gÃnero Crassostrea, e mais duas seqÃÃncias de Saccostrea glomerata (grupo externo), foram utilizadas para os alinhamentos com as sequÃncias obtidas na presente pesquisa. A variabilidade intraespecÃfica de C.cf.rhizophorae foi estudada pelo mÃtodo da mÃxima parcimÃnia. SeqÃÃncias inÃditas de ITS-1 completo foram obtidas para C.brasiliana e C.rhizophorae, com 427 e 439 pb, respectivamente. A Ãrvore de neighbour-joining evidenciou a clara separaÃÃo de C.cf.brasiliana e C.cf.rhizophorae em ramos distintos (100%), confirmando a ocorrÃncia de, pelo menos, duas espÃcies de Crassostrea no local de estudo. O estudo sugere a ocorrÃncia de C.brasiliana no Estado do CearÃ. Embora alguns autores tenham considerado C.brasiliana sinÃnimo de C.virginica, em nosso estudo, C.virginica mostrou-se muito mais prÃxima de C.rhizophorae, com forte agrupamento (100%). A Ãrvore de mÃxima parcimÃnia mostrou que as seqÃÃncias de C.cf.brasiliana e C.cf.rhizophorae formaram um grupo monofilÃtico com as demais espÃcies de Crassostrea em 100% das repetiÃÃes. C.cf.brasiliana apresentou-se na base do ramo monofilÃtico de Crassostrea e, portanto, foi o grupo mais prÃximo de S.glomerata. Esta Ãrvore tambÃm mostrou a separaÃÃo dos exemplares de C.cf.brasiliana e C.cf.rhizophorae em ramos distintos (100%), evidenciando o forte sinal filogenÃtico observado na anÃlise. Novamente, C.cf.rhizophorae mostrou-se prÃxima de C.virginica. A anÃlise de mÃxima parcimÃnia para variabilidade intraespecÃfica de C.cf.rhizophorae nos trÃs estuÃrios estudados mostrou a formaÃÃo de 7 diferentes sequÃncias para C.cf.rhizophorae. A ligaÃÃo entre as sequÃncias encontradas sugere a presenÃa de fluxo gÃnico entre as populaÃÃes estudadas e a ocorrÃncia de sequÃncias exclusivas pode indicar a formaÃÃo de populaÃÃes residentes em cada um dos estuÃrios analisados. A regiÃo ITS-1 mostrou-se ideal para estudos de filogenia de ostras e estudos de variabilidade gÃnica populacional. A confirmaÃÃo de uma segunda espÃcie de ostra pertencente ao gÃnero Crassostrea na costa cearense à relevante para uma melhor gestÃo destes recursos, que possuem grande importÃncia ecolÃgica, econÃmica e social para nosso Estado. / Taxonomic classifications of oysters are problematic, because these bodies have little morphological information. The variability of the ITS region of the cluster ibossÃmico has been used in phylogenetic and taxonomic studies, since this region presents a relatively high variability and easy amplification by thermocycling. The oyster Crassostrea brasiliana was, by decades, confused with C. rhizophorae However, recent studies indicate that two biologically distinct species. This study aimed to analyze the variability of ITS-1 region of oyster populations of C. rhizophorae in three estuaries on the coast of Cearà State and investigate the presence of a second species of oysters belonging to the genus Crassostrea. Copies of the native oyster C. cf. rhizophorae were collected in the estuaries of the coast of Cearà for the analysis population ariability. Were also collected specimens of C. cf. brasiliana for study of phylogeny and compared with the first group of oysters. After extraction of DNA and amplification by PCR of the ITS-1 region, this region sequences were obtained for phylogenetic analysis performed by the methods of neighbor-joining and maximum parsimony. ITS-1 sequences described in GenBank for 35 individuals representing 12 species of oysters of the genus Crassostrea and two sequences of Saccostrea glomerata (external group) were used for the alignments with the sequences obtained in this study. The intraspecific variability of C.cf.rhizophorae was studied by the method of maximum parsimony. Unpublished sequences of ITS-1 were obtained for full C.brasiliana and C.rhizophorae with 427 and 439 bp, respectively. The neighbor-joining tree, showed the clear separation of C.cf.brasiliana and C.cf.rhizophorae in separate branches (100%), confirming the occurrence of at least two species of Crassostrea place of study. The study suggests the occurrence of C.brasiliana in the state of CearÃ. Although some authors have considered C.brasiliana synonymous with C.virginica in our study, C.virginica was very close to C.rhizophorae, with a strong group (100%). The tree of maximum parsimony showed that the sequences of C.cf.brasiliana and C.cf.rhizophorae formed a monophyletic group with other species of Crassostrea in 100% of replicates. C.cf.brasiliana presented on the basis of branch of Crassostrea monophyletic and, therefore, was the group nearest S.glomerata. This tree also showed the separation of the copies of C.cf.brasiliana and C.cf.rhizophorae in different branches (100%), showing the strong signal observed in the phylogenetic analysis. Again, C.cf.rhizophorae showed up near C.virginica. The maximum parsimony analysis of intraspecific variability of C.cf.rhizophorae for the three estuaries studied showed the formation of 7 different sequences for C.cf.rhizophorae. The connection between the sequences found suggests the presence of gene flow between populations and the occurrence of unique sequences may indicate the formation of resident populations in each of the estuaries examined. The region ITS-1 proved to be ideal for studies of phylogeny of oysters and studies of population genetic variability. Confirmation of a second species of oysters belonging to the genus Crassostrea in Cearà coast is important for better management of these resources, which have important ecological, economic and social to our state.

Foram aplicadas técnicas de análise e comparação de anatomia detalhada, através de dissecções e por análises moleculares em um grupo altamente variável como os Ostreidae com objetivo de comprovar o monofiletismo de Crassostreinae. Por ser economicamente importante em todo o mundo, a diferenciação entre as espécies é fundamental, com aplicações até na produção. Através de um estudo comparativo de morfologia detalhada, representantes de quase todos os gêneros de Ostreoidea foram analisados. Inicialmente, os representantes da subfamília Crassostreinae foram estudados isoladamente. Em cada uma foi realizada uma análise filogenética na procura de sua monofilia e de sua identidade básica. Os representantes de Ostreinae e Gryphaeidae foram utilizados como grupo-externo. Em seguida, alguns representantes de Pteriomorphia foram incorporados ao grupo-externo (Limidae, Spondylidae, Plicatulidae, Isognomonidae, Anomiidae) com enraizamento em Arcidae. Foram estudados 73 caracteres, presentemente comentados e discutidos. Uma única árvore mais parcimoniosa foi obtida: (((((((Cryptostrea permolis (Teskeyostrea weberi ((Hyotissa hyotis (Parahyotissa mcgintyi - P. numisma)) ((Eostrea puelchana - E. lurida) (Ostrea edulis (Ostreola equestris (\"Dendostrea\" sp1 ((Lopha cristagalli - Alectryonella plicatula) ((Dendostrea folium - D. sp 2) (\"Dendostrea\" frons (\"Saccostrea\" echinata (\"Saccostrea\" palmula (((Saccostrea mordax - \"Striostrea\" prismatica) (Saccostrea cucullata - S. glomerata)) ((Crassostrea virginica (C. gigas - C. bilineata)) (C. mangle (C. brasiliana - C. rhizophorae)))))))))))))))) Plicatulostrea onca) Plicatula gibbosa) Spondylus americanus) Lima sp.) (Anomia simplex - Isognomon alatus)) Barbatia cândida) tendo como índices: passos = 372, IC = 27 e IR = 58. Nota-se que a monofilia de Crassostreinae foi comprovada e é suportada por 6 sinapomorfias, Crassostrea também é monofilético, suportado por 4 sinapomorfias. Saccostrea, considerando a espécie tipo S. cucullata, é monofilético junto com S. glomerata. Dados obtidos por análises moleculares, realizadas neste e dados do GenBank&reg;, corrobora, em parte, com os dados anatômicos; Crassostrea é considerado monofilético em ambas análises. As diferenças e semelhanças morfo-anatômicas encontradas em quase todas as estruturas foram suficientes para a separação e agrupamento entre os gêneros e respectivas espécies / Techniques of analysis and comparison of detailed anatomy through dissections and molecular analysis were applied in a highly variable group as Ostreidae in order to prove the monophyly of Crassostreinae. Being economically important worldwide, differentiation between species is essential in applications to production. Through a detailed comparative study of morphology, representatives of almost all genres of Ostreoidea were analyzed. Initially, the representatives of the subfamily Crassostreinae were studied in isolation. A phylogenetic analysis was performed in the search for your monophyly and their basic identity in each one. Representatives of Ostreinae Gryphaeidae and were used as-external. Then, some representatives of Pteriomorphia were incorporated into the group-external (Limidae, Spondylidae, Plicatulidae, Isognomonidae, Anomiidae) with rooting Arcidae. 73 characters presently commented and discussed were studied. A single most parsimonious tree was obtained: (((((((Cryptostrea permolis (Teskeyostrea weberi ((Hyotissa hyotis (Parahyotissa mcgintyi - P. numisma)) ((Eostrea puelchana - E. lurida) (Ostrea edulis (Ostreola equestris (\"Dendostrea\" sp.1 ((Lopha cristagalli - Alectryonella plicatula) ((Dendostrea folium - D. sp.2) (\"Dendostrea\" frons (\"Saccostrea\" echinata (\"Saccostrea\" palmula (((Saccostrea mordax - \"Striostrea\" prismatica) (Saccostrea cucullata - S. glomerata)) ((Crassostrea virginica (C. gigas - C. bilineata)) (C. mangle (C. brasiliana - C. rhizophorae)))))))))))))))) Plicatulostrea onca) Plicatula gibbosa) Spondylus americanus) Lima sp.) (Anomia simplex - Isognomon alatus)) Barbatia candida) while indices: = 372 steps, CI = 27 and IR = 58. We note that the monophyly of Crassostreinae been established and is supported by six synapomorphies, Crassostrea is also monophyletic, supported by four synapomorphies. Saccostrea, considering the type species S. cucullata, is monophyletic with S. glomerata. Data obtained by molecular analyzes, performed and this data GenBank&reg; corroborates, in part, with the anatomical data; Crassostrea is considered to be monophyletic in both analyzes. Differences and morphological, anatomical similarities found in almost all structures were sufficient for separating and grouping among genera and their species

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Oyster farming is a fishing activity that has been showing growth among the years to supply Brazil´s commercial demand. In Brazilian estuaries, two native oysters represent most of this type of mollusk population: Crassostra rhizophorae and Crassostrea brasiliana. Due to their great resemblance and also for sharing the same ecological traits, the lack of morphological distinction in between the two species do complicate the visual identification. Hence, genetic analysis is mandatory to distinguish them. Owing to fishing industry, it is crucial to identify accurately cultivated oysters aiming productivity growth, also providing sustainable and responsible use of natural resources. The transference of one organism to another habitat, under economic purposes, may trigger several hazards to the ecosystem; therefore it must be ensured that there is gene flow between the two locations to avoid such ecological damages. To do this, an analysis of DNA haplotypes may be used among the samples to estimate genetic structure. This research used DNA samples extracted from the adductor muscle of the shell of 180 oysters gathered at three estuaries of Sergipe: São Francisco, Vaza Barris and Piauí-Real. Levels of genetic variability were determined through amplification of two mitochondrial genes: 16S, for the species identification, and cytochrome oxidase subunit I (COI), for genetic identity and population diversity. Of the 156 analyzed oysters, 49 were identified as C. rhizophorae and 107 as C. brasiliana. The two species co-occurred in all three examined estuaries. C. brasiliana is more frequent in lower salinity waters and next to oyster farming sites. Molecular marker COI delivered the same polymorphism levels for both species, and 14 haplotypes for C. rhizophorae, 12 haplotypes for C. brasiliana. AMOVA analysis detects the absence of geographical structuring in both species´ populations due to the low FST value. According to the acquired data, it can be stated that there is gene flow in high levels between populations of the two native oyster species at the analyzed estuaries. The higher genetic diversity for C. brasiliana is situated on Piauí-Real estuary. It may be related to the North-South direction of ocean currents in this region, which favors the migration of larvae to South estuaries, on the other hand it hinders the flow of unique haplotypes of Piauí-Real estuary to others located to the North. Moreover, the higher diversity for C. rhizophorae was detected in Vaza Barris river, due to the absence of any oyster farming sites in this estuary, whereas the choice of C. brasiliana for cultivation because it has better performance for commercial purposes. Thus, it can be concluded that, from a genetically speaking, the translocation of native oysters among the researched estuaries for cultivation would not affect local populations. / O cultivo de ostras ostreicultura é uma atividade pesqueira que vem crescendo no Brasil ao longo dos anos para suprir a demanda comercial local. Nos estuários brasileiros, duas ostras nativas apresentam a maior abundância populacional: Crassostrea rhizophorae e Crassostrea brasiliana e, por consequência, são as principais espécies exploradas. Devido à grande semelhança e por também apresentarem hábitos ecologicamente similares, as pequenas variações morfológicas entre as duas espécies prejudicam a identificação visual, tornando-se necessárias análises genéticas que possibilitem sua diferenciação. Tendo em vista o setor pesqueiro, a identificação das ostras cultivadas é essencial para o aumento da produtividade, além de possibilitar o uso sustentável e responsável dos recursos naturais. O transporte de um organismo para outro habitat, com finalidade econômica, pode desencadear diversos prejuízos para o ecossistema, portanto é preciso certificar que há fluxo gênico entre os locais para evitar tais danos ecológicos. O presente trabalho teve por objetivo diferenciar as espécies de Crassostrea por meio de amostras de DNA extraídas do músculo adutor da concha de 180 ostras coletadas em três estuários de Sergipe: São Francisco, Vaza Barris e Piauí-Real. Os níveis de variabilidade foram determinados através da amplificação de dois genes mitocondriais: DNA ribossomal 16S, para a identificação das espécies e citocromo oxidase I (COI), utilizado para identidade genética e diversidade populacional. Dos 156 indivíduos utilizados para a análise genética, 49 foram identificados como C. rizophorae e 107 como C. brasiliana, sendo que as duas espécies coocorreram nos três estuários analisados. C. brasiliana é mais frequente em locais de salinidade mais baixa e também junto aos sítios de ostreicultura. O marcador COI apresentou o mesmo nível de polimorfismo para as duas espécies e 14 haplótipos para C. rhizophorae, 12 haplótipos para C. brasiliana. O teste AMOVA detectou a inexistência de estruturação geográfica nas populações das duas espécies, devido ao baixo valor de fixação FST. De acordo com os dados obtidos, é possível afirmar que há grande fluxo gênico entre as populações das duas espécies de ostras nativas dos estuários analisados. A maior diversidade genética para C. brasiliana encontra-se no estuário do complexo fluvial Piauí-Real, podendo estar relacionada ao sentido Norte-Sul das correntes marinhas nessa região, que favorece a migração de larvas para estuários do Sul, entretanto dificulta o fluxo de haplótipos exclusivos do complexo Piauí-Real para estuários localizados ao Norte. Por outro lado, a maior diversidade para C. rhizophorae foi encontrada no rio Vaza Barris, devido a ausência de criatórios comerciais de ostras nativas neste estuário, sabendo que nos viveiros são cultivadas ostras da espécie C. brasiliana, por possuir melhor desempenho para fins comerciais. Dessa forma, podese concluir que, do ponto de vista genético, a translocação de ostras nativas entre os estuários analisados para cultivo, não afetaria as populações locais.

Thesis (MSc)--Stellenbosch University, 2013. / No abstract available.

Dissertação (mestrado) - Univesidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T20:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 270064.pdf: 1678063 bytes, checksum: de89498cbd9fdaf3dc0f4c547d9752f1 (MD5) / Nas últimas décadas, a contaminação dos ecossistemas marinhos tem aumentado como consequência da atividade humana, expondo os organismos a uma variedade de contaminantes oriundos da atividade industrial, agricultura e efluentes urbanos. O despejo de esgoto doméstico é a principal fonte de contaminação em ambientes costeiros e é considerado como uma das principais causas da diminuição da qualidade destes ecossistemas. Estudos que vêm sendo desenvolvidos no Laboratório de Biomarcadores de Contaminação Aquática e Imunoquímica visam a identificação e validação de novos biomarcadores de exposição ao esgoto doméstico em ostras para que possam ser futuramente utilizadas em programas de avaliação e biomonitoramento dos efeitos tóxicos causados por estes contaminantes. Este trabalho está dividido em dois capítulos. No primeiro capítulo são apresentados os resultados de experimentos realizados com ostras Crassostrea gigas expostas em um ambiente contaminado por esgoto doméstico. Foram analisadas a expressão de alguns genes previamente identificados em uma biblioteca subtrativa supressiva de cDNA em brânquias de C. gigas expostas a esgoto doméstico em condições de laboratório. A expressão do gene FABP apresentou uma indução significativa (28x) após 24 h de exposição, enquanto o gene GSTO obteve um aumento significativo na expressão após 1, 2 e 7 dias de exposição (8, 3.5 e 3.3x respectivamente). No segundo capítulo estão apresentados os resultados e uma discussão sobre os genes ativados e identificados em uma biblioteca subtrativa supressiva de cDNA em glândula digestiva de ostras C. gigas expostas por 24h no ambiente, sob condições de exposição real ao esgoto doméstico não tratado. Genes de diferentes categorias de função biológica foram encontrados após buscas no GenBank, incluindo alguns relacionados a resposta ao estresse, classe tipicamente utilizada em programas de biomonitoramento como biomarcadores moleculares de exposição. Também foram identificados genes relacionados com a o citoesqueleto, cadeia respiratória, desenvolvimento e diferenciação, divisão celular, metabolismo básico, maquinaria transcricional e traducional, transporte e armazenamento. Ambos trabalhos complementam os estudos em andamento no laboratório, ajudando na viabilização de metodologias práticas para o monitoramento de recursos marinhos utilizando organismos sentinela.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T04:45:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 293478.pdf: 4302778 bytes, checksum: 611d76a72761188aacb1fd93c9c65820 (MD5) / A ecotoxicologia é um dos ramos da ciência que cada vez mais ganha relevância internacional por ter como objeto de estudo intoxicação ambiental em todas as suas nuances e consequências. A utilização de biomarcadores moleculares se destaca como uma das principais ferramentas ecotoxicológicas, por serem extremamente sensíveis e anteciparem efeitos gerados pela poluição. A ostra do Pacífico, Crassostrea gigas, é um invertebrado marinho que habita os ecossistemas costeiros (estuários), onde se encontra alta densidade demográfica e alta contaminação por efluentes domésticos. Esse bivalve representa um bioindicador de poluição ao responder à presença de xenobióticos pela variação de diversos biomarcadores. Um destes parâmetros são as enzimas citocromo P450 (P450), as quais podem participar tanto da via de biotransformação quanto na desregulação endócrina. Recentemente, foi identificada em C. gigas uma isoforma de P450, CYP356A1, grandemente induzida por esgoto doméstico não tratado. A sequência codificante para este gene foi determinada e clonada, e neste trabalho, utilizada para realização de expressão heteróloga, visando a produção de anticorpos policlonais. Estes seriam importantes no desenvolvimento de uma nova estratégia de avaliação de contaminação ambiental e contribuiriam para investigação da provável função biológica de CgCYP356A1, através de detecção imumológica. Imunodetecção é proposta como alternativa para estudos de proteínas com função desconhecida. Ensaios imunoquímicos com anticorpo anti- CgCYP356A1 mostraram um padrão com banda única, sem ocorrência de reações inespecíficas, corroborando a idéia de que esta metodologia poderá permitir avanços em estudos ecotoxicológicos com C. gigas e na caracterização bioquímica de CgCYP356A1. Nas análises de contaminação ambiental por imunodetecção, glândula digestiva teve uma quantidade de proteína significativamente maior depois de prolongada exposição in situ de C. gigas ao esgoto. O RNAm de CYP356A1 também foi avaliado, visando remontar o que poderia estar ocorrendo na célula, no que diz respeito a expressão desse gene, em resposta a xenobióticos, mas os resultados não foram muito conclusivos. Contudo, o método de análise aqui apresentado ampliam as perspectivas de estudo referentes a novos genes P450 identificados, especialmente CgCYP356A1, bem como o estabelecimento de novos biomarcadores.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T16:22:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 300044.pdf: 23492206 bytes, checksum: 0b25fca5761fa0cdf014232e94b99791 (MD5) / A maturação de reprodutores é uma das etapas mais importantes no processo de produção de bivalves em laboratório. Dentre os fatores que influenciam este processo em ostras, destacam-se a temperatura e a alimentação. Com o objetivo de avaliar a maturação do tecido gonádico da ostra nativa Crassostrea gasar (= Crassostrea brasiliana) em laboratório, foram realizados dois experimentos, a fim de analisar a influência da temperatura e da dieta sobre o acondicionamento de reprodutores. Foram acondicionadas 720 ostras em três temperaturas da água: 18, 22 e 26°C em laboratório e 250 ostras foram mantidas no ambiente natural por 92 dias. Em relação às dietas, um total de 96 ostras foram submetidas a três tratamentos de alimentação composto pelas microalgas Isochrysis galbana e Chaetoceros müelleri, sendo uma dieta de cada microalga e uma dieta mista das duas espécies (1:1) durante 45 dias. O sexo e o estágio de desenvolvimento do tecido gonádico foram determinados através de análises histológicas e estereológicas e o índice de condição foi avaliado. No experimento de temperatura, a proporção sexual média foi de 1,68 fêmeas para cada macho, 2,7% das ostras foram consideradas indeterminadas e 1,1% hermafrodita simultâneo. O tratamento a 18°C foi o único que não apresentou melhora na maturação das ostras. Nos tratamentos 22, 26°C e no campo ocorreu maturação do tecido gonádico das ostras, entretanto sem diferença significativa entre estes tratamentos. No experimento de alimentação, a proporção sexual foi de 1,2 machos para cada fêmea e 11,5% das ostras encontravam-se em estágio indeterminado. Não ocorreu diferença significativa na maturação do tecido gonádico das ostras entre as diferentes dietas fornecidas. Através dos resultados obtidos sugere-se que, nestas condições, em 18°C ocorre acúmulo de reservas energéticas e em temperaturas acima de 22°C ocorre a maturação dos gametas e que as dietas fornecidas não influenciaram na maturação das ostras, demonstrando, portanto que os reprodutores podem ser mantidos em ambiente natural para maturação até a indução à desova.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal Rural de Pernambuco, Programa de Pós-graduação em Recursos Pesqueiros e Aquicultura / Made available in DSpace on 2012-10-23T11:23:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0