Des facteurs génétiques, un régime riche en gras et en sucre, l'obésité additionnée d'une sédentarité accrue sont des facteurs de risque majeurs pour l'installation progressive du diabète de type IL Ce dernier est caractérisé par une résistance à l'insuline au niveau des tissus cibles (hépatiques, musculaires et adipeux) et un défaut dans la sécrétion d'insuline par les cellules bêta du pancréas. En plus des combinaisons de médicaments augmentant la sensibilité et la sécrétion de l'insuline, les patients diabétiques vont être traités pour leurs nombreuses et diverses complications. La polypharmacie, soit la thérapie médicamenteuse multiple, observée chez les patients souffrant de maladies chroniques, tel le diabète de type II, est donc une pratique commune et une fraction importante de ces médicaments peut être biotransformée par le CYP3 A4 aux niveaux intestinal et hépatique. Des études suggèrent que la variabilité au niveau de la biotransformation des médicaments peut entre autres être causée par certains états pathologiques comme le diabète de type IL Toutefois, les altérations de la biotransformation induites par le diabète de type II sont encore mal connues. Ce projet vise donc à évaluer l'hypothèse selon laquelle le diabète de type II perturbe la biotransformation des médicaments modulant ainsi à la fois leurs effets thérapeutiques et toxiques. L'objectif est de démontrer que cet état pathologique peut influencer l'expression ainsi que l'activité de la sous-famille CYP3a aux niveaux hépatique et intestinal chez un modèle de souris diabétiques de type II (C51BLKSI}-db/db). Des études fonctionnelles ont été réalisées grâce à des incubations de microsomes hépatiques et intestinaux avec un substrat spécifique au CYP3a. Suite aux incubations hépatiques, il y eut la formation de 5 metabolites (Ml, M2, M3, M4 et M5) et seulement 4 au niveau intestinal, M5 étant indétectable. Les résultats d'analyses fonctionnelles suggèrent une diminution de l'activité hépatique et une augmentation de l'activité intestinale du CYP3a. La technique de PCR en temps réel a été utilisée afin de quantifier l'expression de CYP3a et de facteurs de transcription nucléaires chez la souris. Au niveau hépatique, la transcription de CYP3all, CYP3al3, PXR et CAR a été augmentée significativement chez les souris db/db. Au niveau intestinal, seule la transcription de PXR a été augmentée chez les souris db/db. Dépendant de l'activité pharmacologique de la molécule mère et de ses metabolites, une variation de l'activité du CYP3A4 aux niveaux hépatique et intestinal chez les diabétiques de type II pourrait donc mener au niveau clinique à une efficacité thérapeutique diminuée et/ou à l'apparition d'effets toxiques.

Nous avons récemment découvert et étudié une nouvelle classe d'agents antimicrotubules appelés phényl 4-(2-oxo-3-alkylimidazolidin-1-yl)benzènesulfonates (PAIB-SOs) hautement actifs et sélectifs pour les cellules cancéreuses du sein. Leur mécanisme de sélectivité est basé sur la métabolisation des PAIB-SOs par le CYP1A1 en agents antimitotiques puissants appelés phényl 4-(2-oxo-3-imidazolidin-1-yl)benzènesulfonates (PIB-SOs). L'objectif principal de ma recherche était d'évaluer la période nécessaire à l’induction d’une activité cytotoxique significative de quelques-uns de ces PAIB-SOs prometteurs sur les cellules cancéreuses du sein. Dans un second volet, nous désirions étudier la stabilité métabolique et la cinétique de bioactivation par le CYP1A1 de 8 PAIB-SOs phare en vue d’en sélectionner 4 pour des essais sur des animaux. Premièrement, nos études ont montré que l'activité antiproliférative des PAIB-SOs est concentration et temps dépendante. Un temps de contact des PAIB-SOs étudiés avec les cellules cancéreuses du sein variant de 24 à 36 h est nécessaire pour observer une activité antiproliférative significative. Deuxièmement, nous avons confirmé que tous les PAIB-SOs évalués sont rapidement biotransformés en présence de CYP1A1 en PIB-SOs. Troisièmement, les expériences de stabilité hépatique des PAIB-SOs incubés avec des microsomes soit humains, de souris ou de rats ont montré que leur demi-vie et leur clairance intrinsèque varient selon la structure du PAIB-SO et l’espèce animale étudiée. La stabilité des PAIB-SOs incubés avec des microsomes de souris est plus faible que lorsqu’incubé avec des microsomes humains ou de rats. De plus, la stabilité métabolique de ces PAIB-SOs avec les microsomes humains ou de rats est similaire. Le criblage de notre chimiothèque a permis d’identifier les CEU-829, -938, -934 et -913 comme étant les PAIB-SOs métaboliquement les plus stables et générant les plus basses concentrations de PIB-SOs avec des demi-vies respectives de 22, 55, 31 et 41 minutes dans les microsomes humains, de 43, 52, 23 et 44 minutes dans les microsomes de rat et de 3,7, 20, 12 et 1,6 minutes dans les microsomes de souris. Nos études ont également mis en évidence les CEU-934 et -938 comme des molécules candidates prometteuses pour des études de pharmacocinétique et de pharmacodynamie chez la souris et les CEU-829 et -913 chez les rats. / We recently found and studied a new class of antimicrotubule agents named phenyl 4-(2-oxo-3- alkylimidazolidin-1-yl)benzenesulfonates (PAIB-SOs) that are highly active and selective to breast cancer cells. PAIB-SOs are the first antimicrotuble CYP1A1-dependent prodrugs and their mechanism of selectivity is based on the metabolization in human breast cancer cells of PAIB-SOs by CYP1A1 into potent antimitotics named phenyl 4-(2-oxoimidazolidin-1-yl)benzenesulfonates (PIB-SOs). The main objective of my research was to evaluate the period necessary to trigger an efficient antiproliferative activity on breast cancer cells and to study the metabolic stability and the kinetics of activation by CYP1A1 of 8 promising PAIB-SOs exhibiting high antiproliferative activity and selectivity toward breast cancer cells aiming to select 4 PAIB-SOs for animal studies. We first found that the antiproliferative activities of PAIB-SOs are concentration and timedependent. A contact time of the selected PAIB-SOs with breast cancer cells varying from 24 to 36 h is required to observe a significant antiproliferative activity. We also found that all PAIBSOs are rapidly metabolized in the presence of CYP1A1 into PIB-SOs. Finally, the hepatic stability experiments of PAIB-SOs using human, mouse or rat microsomes showed that the halflife and the intrinsic clearance depend on the structure of the PAIB-SO and the animal species studied. The stability of PAIB-SOs in mouse microsomes was weaker than in rat or human microsomes which were equivalent. Our screening program identified CEU-829, -938, -934 and - 913 as our most stable PAIB-SOs and generating the lowest quantity of PIB-SOs when incubated with human and rodent microsomes. In addition, they respectively exhibited half-lives of 22, 55, 31 and 41 minutes in human microsomes, 43, 52, 23 and 44 minutes in rat microsomes and 3.7, 20, 12 and 1.6 minutes in mouse microsomes. Altogether, our studies identified CEU-934 and - 938 as suitable candidates for further pharmacokinetic and pharmacodynamic evaluation in a mouse model and CEU-829 and -913 in a rat model.

STAT5 est impliqué dans le développement d'une multitude de cellules et de tissus, et potentiellement dans les cellules de Leydig où son rôle demeure inconnu. STAT5B est un effecteur de l 'hormone de croissance, hormone dont le rôle est mal connu au niveau des cellules de Leydig. Ce projet consistait à comprendre le mécanisme d'activation de la transcription des gènes Star et Cyp11a1 au sein des cellules de Leydig par STAT5B et l 'hormone de croissance. Dans un premier temps, j'ai caractérisé l'expression de Stat5a et Stat5b au niveau de l'ARNm dans différentes lignées immortalisées de cellules de Leydig. Par la suite, j'ai étudié l'effet de l'hormone de croissance sur les niveaux d' ARNm de Stat5 et sur les niveaux de la protéine STAT5 dans le noyau. Un parallèle a également été fait avec l'expression cytoplasmique de STAR. Ensuite, j'ai utilisé des constructions sauvages et mutantes (site STAT muté), d'environ lkb, des promoteurs proximaux murins Star et Cyp11a1 et analysé leur activité par des essais de transfections transitoires et/ou de stimulation à l 'hormone de croissance dans la lignée cellulaire de cellules de de cellules de Leydig MA-10. Par des analyses de retardement sur gel (EMSA), j'ai pu confirmer la liaison d'une protéine aux éléments GAS présents dans les promoteurs murins sauvages Star et Cyp11a1. Par des analyses de super-retardement sur gel, j'ai pu confirmer que la protéine se liant aux sites GAS identifiés est une protéine STAT5. Enfin, j'ai pu caractériser les niveaux d'expressions endogènes de Star et Cyp11a1, en réponse à une surexpression de STAT5B constitutivement actif, en quantifiant leur niveau d' ARNm.

La résistance en chimiothérapie est principalement associée au gène de résistance multiple aux médicaments (MDR) qui régule l'expression de la glycoprotéine-P (P-gp). Le rôle de cette protéine est d'expulser hors de la cellule des agents xénobiotiques. L'objectif principal de nos travaux était de développer des inhibiteurs de la P-gp afin de restaurer l'efficacité des traitements de chimiothérapie. Quinze nouveaux dérivés d'anthranilamides ont été préparés en modifiant la structure de l'espaceur entre N1 et N2 . L'activité inhibitrice de ces composés (EC5o(VLB)) variait de 59 à 1345 nM. Nos résultats montrent que : 1) une chaîne alkyle de 2 carbones entre N1 et N2 permet d'obtenir la meilleure activité inhibitrice, 2) un centre chiral R ou S influence peu l'activité inhibitrice; 3) la présence d'un cyclohexyle entre N1 et N2 n'augmente pas l'activité inhibitrice; 4) un groupement arylpipérazinyle entre N1 et N2 augmente de 200 % l'activité inhibitrice; et 5) un groupement méthoxyle sur la partie anthranilique augmente de 200 % l'activité inhibitrice. L'anthranilamide P24 est le composé le plus efficace et possède un EC5o(VLB) de 59±35 nM. Des études in vivo sur des souris porteuses de tumeurs surexprimant la P-gp montrent que P24 augmente l'espérance de vie de 32 % (p<0,01) lorsque comparé au groupe de souris non traitées et de 20 % (p<0,05) lorsque comparé au groupe de souris traitées avec la vincristine seulement. Des études sur l'inhibition des CYP450 avec les composés P03, PI7 et P24 révèle un profile d'inhibition différent de celui de l'anthranilamide XR9576 principalement au niveau du CYP3A4. Les études de modélisation moléculaire COMFA et COMSIA ont permis d'établir le modèle suivant comme essentiel à l'activité des dérivés d'anthranilamides: 1) un groupement accepteur d'hydrogène en position 3 d'un système biaromatique encombré à la région A de XR9576; 2) un groupement accepteur d'hydrogène ou un atome chargé négativement et un groupement aromatique chargé positivement à la région B de XR9576; 4) un groupement hydrophobe au niveau de l'espaceur; 5) deux groupements accepteurs d'hydrogène et un groupement encombré aromatique à la région D de XR9576; et 6 ) la présence des deux amides de la partie anthranilique.

Wang Huan. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2003. / Includes bibliographical references (leaves 148-158). / Abstracts in English and Chinese. / TABLE OF CONTENTS --- p.I / LIST OF FIGURES AND TABLES --- p.VIII / ABSTRACT --- p.1 / 摘要 --- p.3 / Chapter CHAPTER 1 --- GENERAL INTRODUCTION / Chapter I. --- The essential factors related to cancer --- p.5 / Chapter a. --- Carcinogens --- p.5 / Chapter b. --- Carcinogenesis pathways --- p.7 / Chapter c. --- DNA adducts formation and breast cancer --- p.7 / Chapter II. --- Cytochrome P450 I enzyme family --- p.8 / Chapter a. --- CYP450 superfamily --- p.8 / Chapter b. --- CYP1A1 --- p.10 / Chapter c. --- CYP1B1 --- p.11 / Chapter III. --- Transactivation of CYP1 enzymes by aryl hydrocarbon receptor (AhR) --- p.12 / Chapter IV. --- Phase II enzyme UGT and cancer prevention --- p.13 / Chapter V. --- Estrogen metabolism and the hormone-dependent breast cancer --- p.15 / Chapter a. --- Estrogen and breast cancer initiation --- p.15 / Chapter b. --- Estrogen Receptor (ER) --- p.15 / Chapter c. --- Estradiol hydroxylation pathways --- p.15 / Chapter VI. --- Phytochemicals and cancer prevention --- p.18 / Chapter VII. --- Outline of this study --- p.20 / Chapter CHAPTER 2 --- MATERIALS AND METHODS / Chapter I. --- Chemicals --- p.21 / Chapter II. --- Cell culture and treatments --- p.21 / Chapter 1. --- Maintenance of cells --- p.21 / Chapter 2. --- Preparation of cell stock --- p.22 / Chapter 3. --- Cell recovery from liquid nitrogen stock --- p.22 / Chapter 4. --- Measurement of cell viability --- p.22 / Chapter 5. --- Preparation of cell lysates --- p.23 / Chapter 6. --- XRE-luciferase gene reporter assay --- p.23 / Chapter a. --- Transient transfection of cell using lipofectamine PLUS reagent --- p.23 / Chapter b. --- Dual Luciferase Assay --- p.24 / Chapter III. --- Enzyme Activities --- p.24 / Chapter 1. --- Isolation of microsomes --- p.24 / Chapter 2. --- EROD activities in intact cells --- p.24 / Chapter 3. --- EROD inhibition assay --- p.25 / Chapter IV. --- Manipulation of Nuclear Acid --- p.26 / Chapter 1. --- Preparation of transfected DNA --- p.26 / Chapter a. --- Separation and purification of DNA from agarose gel --- p.26 / Chapter b. --- Restriction digestion --- p.26 / Chapter c. --- Ligation of DNA fragments --- p.27 / Chapter d. --- Transformation of DH5a --- p.27 / Chapter e. --- Small scale plasmid purification from DH5a (mini prep) --- p.28 / Chapter f. --- Large scale plasmid isolation from DH5a (maxi-prep) --- p.28 / Chapter g. --- Construction of XRE activated luciferase reporter gene --- p.29 / Chapter 2. --- Measurement of DMBA-DNA adduct formation --- p.29 / Chapter 3. --- Semi-quantitative RT-PCR Assay --- p.30 / Chapter a. --- Isolation of RNA using TRIzol® Reagent --- p.30 / Chapter b. --- RT-PCR --- p.31 / Chapter V. --- Phase II enzyme-UGT activity assay --- p.32 / Chapter VI. --- HPLC for estradiol-hydroxylation analysis --- p.33 / Chapter 1. --- HPLC condition for hydroxyestradiol separation and measurement --- p.33 / Chapter 2. --- Determination of microsomal estradiol hydroxylase activity --- p.34 / Chapter 3. --- Assay of estradiol metabolism in MCF-7 cells --- p.34 / Chapter VII. --- Statistical Analysis --- p.35 / Chapter CHAPTER 3 --- CHALCONES ANTAGONIZE DMBA-INDUCED CARCINOGENESIS BY MODULATION OF CYP1A1/1B1 AND UGT ACTIVITIES / Chapter Part One --- Introduction --- p.36 / Chapter Part Two --- Results --- p.40 / Chapter Section One --- Chalcones antagonize DMBA carcinogenesis by inhibiting CYP1A1 and CYP1B1 activities --- p.40 / Chapter I. --- Chalcones inhibited DMBA-induced EROD activities in MCF-7 cells --- p.40 / Chapter II. --- Inhibition of chalcones on microsomal CYP1A1 & 1B1 enzyme activities --- p.43 / Chapter III. --- Reduction of DMBA-induced DNA adduct by chalcones --- p.52 / Chapter IV. --- Chalcones antagonized CYP1A1 XRE transactivation --- p.54 / Chapter V. --- Chalcones suppressed DMBA-induced CYP1 gene expression --- p.56 / Chapter Section Two --- Chalcones modulate DMBA carcinogenesis by regulating UGT activities --- p.63 / Chapter I . --- Chalcones regulated UGT1A1 gene expression in MCF-7 cells --- p.63 / Chapter II. --- Chalcones affected UGT enzyme activity in HepG2 cells --- p.70 / Chapter III. --- Chalcones regulated UGT1A1 gene expression in HepG2 cells --- p.73 / Chapter Part Three --- Discussion --- p.80 / Chapter I . --- Chalcones are potential chemopreventive agents --- p.80 / Chapter II. --- Chalcones modulated Phase I enzyme activities --- p.80 / Chapter III. --- Chalcones regulated Phase II enzyme activities --- p.82 / Chapter IV. --- Chalcones suppressed DMBA-induced DNA-adduct formation in MCF-7 cells --- p.82 / Chapter V. --- The anti-carcinogenic properties of chalcones and their structures --- p.83 / Chapter CHAPTER 4 --- EFFECTS OF PERILLYL ALCOHOL AND LIMONENE ON CYP1 AND UGT ENZYMES / Chapter Part One --- Introduction --- p.85 / Chapter Part Two --- Results --- p.87 / Chapter I. --- Perillyl alcohol and limonene modulated DMBA-induced CYP1A1/1B1 activities in MCF-7 cells --- p.87 / Chapter II. --- Perillyl alcohol and limonene regulated microsomal CYP1A1/1B1 activities --- p.89 / Chapter III. --- Perillyl alcohol and limonene regulated DMBA-induced DNA adduct formation in MCF-7 cells --- p.93 / Chapter IV. --- Perillyl alcohol and limonene regulated CYP1A1 & CYP1B1 gene expressions in MCF-7 cells --- p.95 / Chapter V. --- Effect of perillyl alcohol on CYP1A1 XRE transactivation --- p.97 / Chapter VI. --- Cytotoxic effect of perillyl alcohol and limonene on MCF-7 cells --- p.98 / Chapter VII. --- Perillyl alcohol and limonene modulated UGT1A1 gene expression in MCF-7 cells --- p.99 / Chapter VIII. --- Perillyl alcohol and limonene modulated UGT enzyme in HepG2 cells --- p.101 / Chapter Part Three --- Discussion --- p.106 / Chapter CHAPTER 5 --- LYCOPENE MEDIATED DMBA-INDUCED PHASE I & PHASE II ENZYME ACTIVITIES AND GENE EXPRESSIONS / Chapter Part Three --- Introduction --- p.109 / Chapter I. --- Biochemical properties of lycopene --- p.109 / Chapter II. --- Bioavailability of lycopene --- p.110 / Chapter III. --- Lycopene and cancers in hormonal sensitive tissues --- p.110 / Chapter Part Two --- Results --- p.111 / Chapter I . --- Lycopene modulated DMBA-induced CYP1A1/1B1 activities in MCF-7 cells --- p.111 / Chapter II. --- Lycopene competitively inhibited microsomal CYP1A1 & CYP1B1 activities --- p.113 / Chapter III. --- Lycopene suppressed DMBA-induced DNA adduct formation in MCF-7 cells --- p.115 / Chapter IV. --- Lycopene regulated CYP1A1 & CYP1B1 gene expression in MCF-7 cells --- p.116 / Chapter V. --- Effect of lycopene on CYP1A1 XRE trasactivation --- p.117 / Chapter VI. --- Cytotoxic effect of lycopene on MCF-7 cells --- p.118 / Chapter VII. --- Lycopene modulated UGT enzyme in MCF-7 cells --- p.119 / Chapter VIII. --- Lycopene modulated UGT enzyme in HepG2 cells --- p.121 / Chapter Part Three --- Discussion --- p.123 / Chapter CHAPTER 6 --- CHALCONES AND PERILLYL ALCOHOL REGULATEDCYP1A1 & CYP1B1 MEDIATED ESTRADIOL METABOLIZING PATHWAYS / Chapter Part One --- Introduction --- p.125 / Chapter I . --- Estrogen hydroxylation and human breast cancer risk --- p.125 / Chapter II. --- CYP1 enzymes catalyze estradiol-hydroxylation in human breast cancer cells --- p.126 / Chapter III. --- Phytochemicals mediate estrogen-hydroxylation pathways --- p.126 / Chapter Part Two --- Estrogen metabolite detection and separation by HPLC --- p.127 / Chapter Part Three --- Results --- p.129 / Chapter I . --- Perillyl alcohol modulated CYP1A1 & CYP1B1-mediated Estradiol hydroxylation --- p.129 / Chapter II. --- Kinetics assays of chalcones on CYP1A1 & CYP1B1 microsomes induced estradiol hydroxylation --- p.131 / Chapter III. --- Chalcones suppressed Estradiol-hydroxylase activities in MCF-7 cells --- p.137 / Chapter Part Four --- Discussion --- p.140 / Chapter CHAPTER 7 --- SUMMARY / Chapter I . --- Chalcones displayed inhibitory effects on DMBA-induced carcinogenesis --- p.142 / Chapter II. --- Perillyl alcohol and limonene modulated DMBA-induced carcinogenesis --- p.143 / Chapter III. --- Lycopene also possessed chemoproventive properties --- p.143 / APPENDIX 1 ABBREVIATIONS --- p.144 / APPENDIX 2 REAGENTS --- p.145 / APPENDIX 3 PRIMER LISTS --- p.147 / REFERENCE --- p.148

Danshen, the dried root of Salvia miltiorrhiza Bunge, is a herb listed in the Chinese Pharmacopoeia for the treatment of cardiovascular and cerebrovascular diseases. Danshen has been reported to have antiplatelet, cardioprotective, anti-inflammatory, hepatoprotective, and anti-HIV effects in preclinical studies. However, exaggerated anticoagulation and bleeding complications have also been observed during concurrent use of Danshen and warfarin in patients, although the mechanism(s) of the herb-drug interaction, pharmacodynamic and/or pharmacokinetic interactions, remained uncertain. Characterization of the cytochrome P450 isoforms responsible for the metabolism(s) of drugs and herbal constituents is important for the identification of potential drug-drug or drug-herb interactions. The present study investigated the effects of Danshen on the metabolism of probe substrates of specific CYP isoforms including CYP1A2, CYP3A and CYP2C9, the isoforms that are responsible for the metabolism of warfarin to assess the potential interactions of Danshen with drugs that utilize these isoforms for their biotransformation. / Firstly, the effects of Danshen and its tanshinone components on CYP1A2 activity were investigated in vitro and in vivo in the rat. Formulated Danshen extract, the ethanolic extract and the aqueous extract from Danshen root, and individual tanshinones inhibited phenacetin O-deethylation (CYP1A2) activity in vitro. Enzyme kinetic studies showed that tanshinone I, tanshinone IIA, cryptotanshinone, and dihydrotanshinone were competitive CYP1A2 inhibitors. Acute, sub-chronic and chronic pretreatments of formulated Danshen extract decreased the clearance (CL) of caffeine, with a concomitant increase in the area under concentration-time curve (AUC), and prolongation of the plasma half-life (T 1/2). These results suggested that Danshen inhibited rat CYP1A2 activity and altered the pharmacokinetics of the CYP1A2 probe substrates in vivo. / In conclusion, these results confirmed that Danshen-inhibited CYP activity, especially CYP1A2, then CYP2C9/11 (CYP2C9 in human, CYP2C11 in rats) in vitro. In vivo studies confirmed the clearance of the probe substrates was also decreased when co-administered with Danshen. Given that CYP1A2, CYP2C9 and CYP3A4 are responsible for the metabolism and disposition of a large number of drugs currently used in man, the concomitant use of Danshen with drugs which are substrates of CYP1A2, 2C9 and 3A4, especially CYP1A2, must be met with great caution. / Secondly, the effects of Danshen and its tanshinone components on CYP3A activity were investigated in vitro and in vivo in the rat. Formulated Danshen extract, the ethanolic extract from Danshen root, and tanshinones inhibited testosterone 6beta-hydroxylation (CYP3A) activity in vitro. Enzyme kinetic studies showed that tanshinone I, tanshinone IIA, and cryptotanshinone were competitive CYP3A inhibitors, whereas dihydrotanshinone was a noncompetitive CYP3A inhibitor. In vivo studies showed the pretreatments of formulated Danshen extract did not significantly change the pharmacokinetics of midazolam. / The effects of Danshen and its tanshinones on human CYP1A2 (phenacetin O-deethylation), CYP3A4 (testosterone 6beta-hydroxylation), and CYP2C9 (tolbutamide 4-hydroxylation) activities were also investigated in vitro using pooled human liver microsomes and human CYP isoforms. The ethanolic fraction of Danshen root was more effective than water-soluble fraction in inhibiting human CYP1A2, CYP3A4 and CYP2C9 activities. Enzyme kinetic studies showed that tanshinone I, tanshinone IIA, and cryptotanshinone were competitive inhibitors of CYP1A2, CYP3A4 and CYP2C9 with varying effectiveness. Dihydrotanshinone was not a competitive inhibitor of CYP1A2 and CYP2C9, but a noncompetitive CYP3A4 inhibitor. CYP1A2 was most affected and CYP3A4 was least affected by Danshen and tanshinones. Compared with the results obtained from rat and human, rat is a good animal model for predicting Danshen-drug interactions in humans, especially drugs which are substrates of CYP1A2. / Thirdly, the effects of Danshen and its tanshinone components on CYP2C11 activity were investigated in vitro and in vivo in the rat. Formulated Danshen extract, the ethanolic extract from Danshen root, and tanshinones inhibited testosterone 2alpha-hydroxylation (CYP2C11) activity in vitro. Enzyme kinetic studies showed that tanshinone I, tanshinone IIA, cryptotanshinone, and dihydrotanshinone were competitive CYP2C11 inhibitors. Sub-chronic pretreatment of formulated Danshen extract increased the AUC, T1/2 but decreased CL of tolbutamide. These results suggested that Danshen inhibited the CYP2C activity in the rat. In conclusion, these results confirmed the possible mechanism is enzyme inhibition, involved in the interaction of Danshen and warfarin previously observed in rats. / Wang, Xin. / "September 2007." / Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 69-08, Section: B, page: 4699. / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2007. / Includes bibliographical references (p. 284-302). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. [Ann Arbor, MI] : ProQuest Information and Learning, [200-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract in English and Chinese. / School code: 1307.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2002. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 207-232).

Afin de s'adapter à son environnement chimique, l'organisme a développé au cours de l'évolution des systèmes enzymatiques capables de transformer de nombreuses molécules étrangères ou xénobiotiques (médicaments, composés toxiques, carcinogènes...), le plus souvent de nature hydrophobe, en métabolites suffisamment hydrophiles pour être plus facilement excrétés par voie urinaire et/ou biliaire. Certaines de ces enzymes sont également impliquées dans des processus cataboliques ou de biosynthèses de composés endogènes (acides gras, rétinoïdes, stéroïdes, prostaglandines...). Ces enzymes jouent ainsi un rôle fondamental à la fois dans la défense de l'organisme face à son environnement chimique et dans des processus physiologiques essentiels. On comprend dès lors que s'il existe, chez certains individus, des anomalies de séquence ou de structure des gènes codant pour ces enzymes, une partie de la population présentera une susceptibilité particulière à certaines molécules de l'environnement, voire des dysfonctionnements de certaines réactions biologiques indispensables. Les travaux de cette thèse s'inscrivent dans cette démarche. Dans un premier temps, ils ont consisté à évaluer la nature et l'étendue de la variabilité de la séquence nucléotidique de trois gènes codants pour les enzymes CYP4A11, CYP4A22 et la Glycine N-acyltransférase (GLYAT). Dans un deuxième temps, les analyses fonctionnelles des variations de séquence identifiées ont été abordées par des approches in silico et in vitro. Les cytochromes P450 CYP4A11 et CYP4A22, participent à la biotransformation de composés endogènes et sont impliqués plus particulièrement dans la voie d'activation de l'acide arachidonique. Des travaux récents suggèrent que des anomalies génétiques de ces enzymes constituent des facteurs de susceptibilité à l'hypertension artérielle chez l'homme. Nous avons ainsi analysé les variations de séquence du gène CYP4A11 et CYP4A22 dans des échantillons d'ADN provenant de volontaires sains. Au total, 26 polymorphismes ont été identifiés et 5 nouveaux CYP4A* allèles ont été caractérisés pour chaque isoforme CYP4A. Les structures 3D des protéines CYP4A ont été construites et validées pour l'analyse de l'impact des mutations identifiées. Bien que des travaux supplémentaires soient nécessaires pour confirmer le lien entre le polymorphisme génétique du CYP4A11 et du CYP4A22 et l'hypertension artérielle, ce travail représente la première description et caractérisation du polymorphisme génétique des isoformes CYP4A dans une population Française. De plus, nous avons mise en évidence une variabilité interethnique de ce polymorphisme génétique dans différentes populations testées. La glycine N-acyltransférase ou GLYAT est une enzyme impliquée dans la détoxication de xénobiotiques contenant un groupement carboxylique par conjugaison d'un résidu de glycine. Sept variations de séquence de la GLYAT ont été identifiées et quatre nouveaux GLYAT* allèles ont été caractérisés. La localisation des certaines mutations dans des structures secondaires très conservées de la protéine suggère un impact sur l'activité catalytique de cette enzyme. Bien que les conséquences cliniques potentielles de ces variations restent encore à étudier, ces résultats seront utiles pour de futures études d'association de ce polymorphisme génétique de la GLYAT avec les altérations de détoxications de xénobiotiques contenant un groupement carboxylique comme l'aspirine, certains pesticides ou le toluène.

Thesis (Ph. D.)--West Virginia University, 2010. / Title from document title page. Document formatted into pages; contains xiv, 180 p. : ill. (some col.). Includes abstract. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2005. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 200-205).