Orientador: João Batista Alcântara Oliveira / Banca: Anice Maria Vieira de Camargo Martins / Banca: Claudia Guilhermino Petersen / Resumo: Apesar do conhecimento de que os processos de desenvolvimento e implantação embrionários de mamíferos não ocorrem em concentração atmosférica in vivo, é prática comum em laboratórios de fertilização in vitro (FIV) a cultura de embriões em concentração próxima a 20% de oxigênio. A discrepância entre as concentrações de oxigênio leva a importantes discussões sobre seus efeitos no desenvolviemento embrionário in vitro. Acredita-se que o cultivo de embriões em ambientes com concentração atmosférica de oxigênio pode ser prejudicial à qualidade dos mesmos por predispô-los à interferência negativa de radicais livres de oxigênio (RLO), resultantes do estresse oxidativo, levando a ação deletéria sobre o metabolismo embrionário e a expressão gênica de blastocitos cultivados naquelas condições. Frente aos argumentos favoráveis e contrários a cultura de embriões in vitro em concentrações de oxigênio semelhantes às encontradas in vivo, este artigo de revisão pretende condensar e debater os dados da literatura acerca da influência da concentração de oxigênio sobre a qualidade de embriões cultivados in vitro / Abstract: Despite the fact that the processes of embryonic development and deployment of mammals do not occur in atmospheric concentration in vivo, it is common practice in laboratories for in vitro fertilization (IVF) the culture of embryos in a concentration close to 20% of oxygen. The discrepancy between the concentrations of oxygen leads to important discussions about their effects on in vitro embryonic development. It is believed that the cultivation of embryos in atmospheric concentration of oxygen can be detrimental to the quality of the data for predisposing them to the negative interference of reactive oxygen species (ROS), resulting in oxidative stress, leading to deleterious effects on metabolism embryonic gene expression and blastocysts grown in those conditions. Faced with arguments for and against the culture of embryos in vitro oxygen concentrations similar to those found in vivo, this review article aims to condense and discuss the literature concerning the influence of oxygen concentration on the quality of embryos cultured in vitro / Mestre

Orientador: Fernanda da Cruz Landim-Alvarenga / Banca: Alício Martins Junior / Banca: Yeda Fumie Watanabe / Resumo: As técnicas de produção in vitro de embriões bovinos ainda precisam ser melhoradas em relação às taxas de embriões produzidos e sua qualidade. A adição de fatores de crescimento aos meios de cultivo de embriões bovinos tem sido estudada, com o intuito de melhorar a produção e a qualidade embrionária. O objetivo deste experimento foi testar a adição de GH, IGF-1 e Insulina em duas etapas do processo de produção in vitro: na maturação dos ovócitos e no cultivo dos embriões, visando aumentar as taxas de produção de blastocistos e a qualidade dos embriões produzidos, além de verificar a viabilidade de uma coloração com acridina orange e iodeto de propídeo para avaliação da qualidade dos embriões. No experimento 1, avaliou-se as taxas de clivagem e formação de blastocistos após maturação ovocitária em meio 199 (sais de Earle e L-glutamina e 2,2 mg/ml de bicarbonato de sódio, médium 199, Sigma, Saint Louis, EUA, # M-4530 ), na presença de 10% de SFB, de sódio, 1 mg/ml de 17 estradiol (E2 - Sigma, Saint Louis, EUA, # E-2758), 50 g/ml de hCG (Profasi® 5.000UI), 5 g/ml de FSH (Folltropin-V®, Vetrepharm, Ontário, Canadá), e 75æg/ml de sulfato de gentamicina, suplementado com IGF-1 , GH, Insulina, adicionados separadamente ou em conjunto. No experimento 2 foram avaliadas as taxas de clivagem e formação de blastocistos em meio composto por HTF (Human Tubal Fluid, HTF , Irvane) e BME (Basal Medium Eagle, BME , Sigma, Saint Louis, EUA), na proporção de 1:1 (HTF:BME) acrescido de 0,6% de BSA, 0,01% de Mioinositol e 75 g/ml de gentamicina, incubados em estufa a 38, 5oC, a 5% de CO2 e umidade absoluta, com suplementação de 10% de SFB no dia 3 de cultivo. O meio foi suplementado com IGF-1, GH, Insulina,adicionados separadamente ou em conjunto. No experimento 3, a coloração com acridina orange e iodeto de propídeo foi testada para avaliar a qualidade das estruturas produzidas. / Abstract: In vitro embryo production techniques in bovines still need to be improved due to the embryo production rate and the quality. The addition of growth factors to the bovine embryo culture medium has been studied due to their effects on the production and embryo quality. The objective of this experiment was to study the addition of GH, IGF-1 and Insulin at two steps of the in vitro embryo production such as oocyte maturation and embryo culture, aiming at to increase the blastocysts rates as well their quality, as evidenced by the viability after staining with acridine orange and propideium iodete. In experiment 1, the cleavage rate and blastocyst production were evaluated after oocyte maturation in medium 199 with Earle's salt, L-glutamine and 2.2 mg/ml sodium bicarbonate, medium 199, Sigma, Saint Louis, USA, # M-4530) plus 10% BFS, 50 æg /ml sodium piruvate, 1 mg/ml estradiol 17 ß (E2 - Sigma, Saint Louis, USA., # E-2758), 50æg/ml hCG (Profasi® 5.000UI), 5 æg/ml FSH (Foltropin-V®, Vetrepharm, Ontário, Canada), and 75æg/ml gentamicin sulfate, supplemented either with IGF-1, GH, Insulin alone or in combination. In experiment 2, the cleavage rate and blastocyst formation were evaluated after in vitro embryo culture in HTF (Human Tubal Fluid, HTF ®, Irvane) and BME (Basal Medium Eagle, BME ®, Sigma), in 1:1 proportion (HTF: BME) plus 0.6% of BSA, 0.01% of Mioynositol and 75 æg/ml of gentamicin sulfate, at 38, 5ºC, 5% of CO2 and absolute humidity atmosphere, supplemented with 10% FCS at day 3 of culture. The medium was supplemented with IGF-1, GH, Insulin alone or in combination. In experiment 3, the acridine orange and propideium iodete stain was used to evaluate the quality of produced morulae produced as in experiment 1 or 2. The number and percentage of cells with DNA fragmentation was used to determine marulae quality. / Mestre