Made available in DSpace on 2018-08-24T22:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_5985_.pdf: 3322214 bytes, checksum: 3d8e7bb7e84e804e27b3d164733aa92a (MD5) Previous issue date: 2012-04-23 / A região da Ilha das Caieiras, na cidade de Vitória (ES) está localizada no entorno do estuário da Baía de Vitória e próxima a uma extensa área de manguezal urbano. É habitada por uma população que diariamente extrai diversos frutos do mar dessa área para consumo próprio e comercialização. Estudos preliminares realizados recentemente na região já mostraram a contaminação da água e de moluscos bivalves por microrganismos patogênicos provenientes de contaminação fecal. O presente trabalho teve por objetivo ampliar o conhecimento da qualidade microbiológica dos bivalves (sururu de mangue: Mytella guyanensis, sururu de coroa: Mytella charruana e ostra: Crassostrea rhizophorae) procedentes de dois pontos do estuário desta área de manguezal, ao longo de 13 meses de monitoramento (Janeiro/2011 - Janeiro/2012). Foram avaliadas um total de 31 amostras para presença de coliformes termotolerantes (CT) e vírus entéricos (adenovírus AdV; rotavírus RV; e norovírus NoV GII), utilizando-se a nested-PCR e PCR quantitativa em tempo real (qPCR). Também foram avaliados parâmetros físico-químicos da água próxima ao ponto de coleta dos bivalves. Os resultados das análises microbiológicas do sururu de coroa (n=13), sururu de mangue (n=5) e ostra de mangue (n=13) demonstraram alta prevalência de CT, com médias geométricas de 1,47x105, 1,47x105 e 4,24x104 UFC/100g de tecido, respectivamente. Nas amostras de água a concentração de CT apresentou-se em conformidade com o padrão exigido para águas recreacionais. Vírus entéricos foram detectados pela nested e qPCR nos mesmos bivalves com frequências variando entre 31 54% para AdV, 54 70% para RV e 54 85% para NoV GII. A presença de AdV e RV esteve correlacionada positivamente à turbidez e aos sólidos dissolvidos totais (SDT). Nas amostras de água do estuário, os valores máximos quantificados foram 3,0x102, 3,2x104 e 1,6x101 CG/100 mL para AdV, RV e NoV, respectivamente. A elevada contaminação viral e bacteriológica das amostras indica que esta área continua sob impacto antropogênico resultante do despejo de esgoto sanitário na região, e que o consumo de diferentes espécies de bivalves procedentes do manguezal da Ilha das Caieiras apresenta um potencial risco de causar doenças gastrointestinais aos consumidores, especialmente se ingeridos crus.

Made available in DSpace on 2018-08-24T22:53:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6156_Dissertação - LOSS, S. M..pdf: 2048549 bytes, checksum: 513048e5fce5f4e978eef27e8ad4c1bd (MD5) Previous issue date: 2012-12-07 / A Ilha das Caieiras está localizada em uma das regiões mais carentes no município de Vitória/ES, a Grande São Pedro. Esta região é densamente povoada e é conhecida como um bolsão de pobreza da capital, com a população sobrevivendo, principalmente, da coleta e comercialização de frutos do mar do manguezal localizado em seu entorno. Estudos realizados anteriormente na região mostraram que a água deste estuário está contaminada com microrganismos patogênicos provenientes, principalmente, de esgotos domésticos lançados sem prévio tratamento. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de vírus entéricos (adenovírus AdV, rotavírus RV e norovírus GII NoV) e indicadores bacterianos de poluição fecal (coliformes termotolerantes e enterococos) em amostras de água de quatro pontos deste importante estuário da Ilha das Caieiras. O monitoramento ocorreu de janeiro de 2011 a julho de 2012 (19 meses) e utilizou-se as técnicas moleculares PCR Qualitativa e PCR em Tempo Real (qPCR), para detecção de vírus entéricos, e membrana filtrante, para análise de bactérias, além de avaliação de parâmetros físico-químicos da água. Os resultados das análises microbiológicas da água nos pontos estudados (P1, P2, P3 e P4) demonstraram a presença de coliformes termotolerantes, com médias geométricas de 1,66x102, 1,31x102, 2,29x103 e 3,13x102 UFC / 100 mL de água, respectivamente. Para enterococos, as médias encontradas foram 6,30x101 UFC / 100 mL em P1, 5,56x101 UFC / 100 mL em P2, 1,89x103 UFC / 100 mL em P3 e 1,62x103 UFC / 100 mL em P4. Os vírus entéricos foram detectados nos quatro pontos de monitoramento pelas duas técnicas moleculares utilizadas, com valores máximos de 2,00x103, 5,24x104 e 1,50x104 CG / 100 mL para AdV, RV e NoV, respectivamente, quantificados por qPCR. A frequências de detecção de vírus nas amostras de água do estuário variou de 21 27% para AdV, 42 53% para RV e 10 42% para NoV GII. Neste estudo foi possível verificar que o estuário da Ilha das Caieiras apresenta-se contaminado devido, possivelmente, aos lançamentos de esgoto in natura e/ou de lixiviados de áreas rurais. A ação antropogênica sobre este manguezal é evidente e preocupante, pois se reflete na qualidade ambiental deste meio, na saúde da população e na economia da região.

A diarréia em bezerros é comprovadamente uma das principais causas de perdas econômicas em rebanhos de corte, sendo os prejuízos diretamente derivados da redução do ganho de peso e custos com tratamento. Considerando-se que, para o delineamento de medidas profiláticas adequadas ao controle de uma doença é necessário o conhecimento de suas causas, o presente trabalho teve por objetivo estudar de modo longitudinal a freqüência de ocorrência de coronavírus bovino (BCoV), rotavírus do grupo A (RV-A), protozoários, helmintos e enterobactérias em uma propriedade com casos esporádicos e em outra com casos recorrentes de diarréia em bezerros. Investigou-se, ainda, a presença de genes codificadores de para as toxinas shiga-like 1 e 2 , para as adesinas K99 e F41 e para a intimina (eae) nas E. coli isoladas. Para a detecção de BCoV, utilizou-se uma nested-RT-PCR direcionada ao gene codificador da RNA polimerase RNA dependente, e para a detecção de RV-A utilizou-se ELISA direto duplo sanduíche. O isolamento e caracterização bioquímica das colônias de bactérias foram conduzidos de acordo com técnicas de bacteriologia clássica. A caracterização genotípica das colônias de E. coli isoladas foi realizada através de uma Multiplex-PCR, utilizando primers para os genes codificadores dos seguintes fatores de virulência: Stx1, Stx2, Sta, K99, F41 e eae. A detecção de parasitas foi realizada por centrífugo sedimentação em água-eter e centrífugo-flutuação em solução supersaturada de sacarose, considerando-se como resultado final do exame coproparasitológico todos os parasitas encontrados em ambas as técnicas em sua maior contagem. A freqüência de ocorrência de coronavírus bovino e rotavírus do grupo A foi baixa, restrita a animais com até quatro meses de idade, enquanto que protozoários, helmintos e enterobactérias apresentaram tendência crescente em freqüência relacionada à progressão da idade dos animais. Foram identificados os patotipos STEC, AEEC e um padrão atípico com os genes de K99 e eae. Além disso, encontrou-se associação entre baixo padrão sanitário e maior freqüência de ocorrência de Eimeria spp, Strongyloidea, Strongyloides spp, Trichuris spp e Escherichia coli portadora de fatores de virulência Stx1, Stx2, K99 e eae. O presente trabalho colabora para a caracterização da microbiota entérica de bezerros, mas mantém abertas as questões relativas às diferenças específicas entre as biotas entéricas de bezerros sadios e com diarréia, enfatizando a importância de se realizarem mais estudos que investiguem simultaneamente diversos enteropatógenos potenciais nestes animais / Diarrhea in calves is proved to be one of the main causes of economic loss in beef herds, which is direct originated by reduction of weight gain and increment of treatment costs. It is known that the determination of appropriate preventive measures to control a disease depends on the knowledge of its causes. In this manner, the present work aimed to study longitudinally the frequency of occurrence of bovine coronavirus (BCoV), group A rotavirus (RV-A), protozoa, helminths and enterobacteria in a beef farm presenting sporadic cases and other with recurrent cases of diarrhea. Moreover, the presence of genes that express the following virulence factors were investigated in the isolated E. coli: shiga-like toxins 1 and 2, adhesins K99 and F41 and intimin (eae). A nested-RT-PCR targeted to the RNA-dependent RNA polimerase gene was conducted to detect BCoV, and a double-sandwich direct ELISA was used to detect RV-A. Classical bacteriology techniques were used to isolate and indentify bacterial colonies. A Multiplex-PCR, with primers designed to previously described E. coli genes, was used to genotype these colonies. Centrifuge sedimentation in water-ether and centrifuge flotation in sucrose supersaturated solution were used to detect the presence of parasites. The final result was achieved by the highest count of all the parasites found. The observed frequency of occurrence of both BCoV and RV-A was low and restricted to animals up to 4 months of age whereas protozoa, helminths and enterobacteria showed an increasing tendency on its frequency related to progression of animals aging. STEC, AEEC and an atypical pathotype of E. coli, with K99 and eae genes were found. Moreover, an association between low sanitary pattern and a higher frequency of Eimeria spp, Strongyloidea, Strongyloides spp, Trichuris spp and Escherichia coli bearing Stx1, Stx2, K99 and eae genes was observed. The present study contributes to the characterization of calf enteric microbiota. However, the points related to the specific differences between healthy and diarrheic calves enteric microbiota remain unclear, emphasizing the importance of future studies to investigate different potential enteropathogens in beef calves simultaneously

Os ovos embrionados são estruturas complexas compostas pelo embrião e as membranas de suporte (corioalantóide, amniótica, gema). O desenvolvimento embrionário e suas membranas geram diversos tipos de células que são necessárias para a replicação bem sucedida de uma grande variedade de vírus. Dentre os vírus entéricos, os ovos embrionados foram usados como o principal hospedeiro para o isolamento, cultivo e propagação da grande maioria destes. O presente trabalho descreve o isolamento, cultivo e propagação em ovos embrionados livres de patógenos específicos (SPF), assim como a caracterização macroscópica do vírus relacionado com problemas entéricos em lotes de aves comerciais no Brasil. Amostras intestinais provenientes de galinhas ou frangos de corte sadias ou com problemas entéricos (diarreia) e que se apresentaram positivas, através da reação em cadeia pela polimerase (PCR) e da técnica da trancriptase reversa da reação em cadeia pela polimerase (RT-PCR), para Astrovírus de Galinha, Parvovírus de Galinha, Vírus da Nefrite Aviária, Rotavírus Aviário, Reovírus Aviário, Vírus da Bronquite Infecciosa das Galinhas e Adenovírus Aviário Tipo 1 foram selecionadas para a realização do isolamento, cultivo e propagação em ovos embrionados SPF. Mortalidade e lesões macroscópicas como hemorragias, edema, nanismo, enrolamento, aspecto gelatinoso e deformações foram encontradas nos embriões, porém as membranas de suporte do ovo não apresentaram alteração. A confirmação viral nas passagens nos ovos foi realizada mediante o uso da PCR ou RT-PCR. Houve a replicação de Astrovírus de galinha, Vírus da Nefrite Aviária, Adenovírus Aviário do Tipo 1, Vírus da Bronquite Infecciosa das Galinhas, Parvovírus de Galinha e Reovírus Aviário nos ovos embrionados SPF, inoculados via saco da gema, aos sete dias de idade. No entanto, estes vírus também foram isolados em ovos embrionados de 14 dias de idade. A inoculação pelo saco da gema se mostrou uma ótima via para o isolamento viral. Foram isoladas duas amostras de Parvovírus de Galinha, oito amostras de Astrovírus de Galinha, sete amostras do Vírus da Bronquite das Galinhas, dezesseis amostras de Vírus da Nefrite Aviária, onze amostras de Adenovírus Aviário do Tipo 1 e três amostras de Reovírus Aviário. Nenhuma amostra de Rotavírus Aviário foi isolada. As características macroscópicas apresentadas nos embriões foram similares em todos os vírus isolados. Várias amostras utilizadas não apresentaram lesões e foram negativas na detecção molecular, e foram consideradas amostras negativas no isolamento viral. A positividade nas provas moleculares (PCR e RT-PCR) e a presença de lesões nos embriões determinou o isolamento virale confirmou que os ovos embrionados de galinha são excelentes hospedeiros para o isolamento, cultivo, propagação e caracterização de vírus relacionados com problemas entéricos, no Brasil. As alterações encontradas no embrião sugerem a patogenicidade do vírus e o possível dano que causariam ao desenvolver a doença. Futuros trabalhos determinarão a relação existente entre os vírus isolados neste estudo e aqueles isolados em todo o mundo, estabelecendo homologia ou heterogeneidade entre eles. / The embryonated eggs are complex structures composed by embryo and support membranes (yolk sac, chorioallantoic membrane, amniotic sac). The embryo development and their membranes produced many kinds of cells that are necessary for successful replication of many viruses. Between the enteric viruses, the embryonated eggs have been used as the principal host for isolation, culture and propagation of many of these viruses. The present work describes the isolation, culture, propagation and macroscopic characterization of astrovírus, adenovirus, coronavirus, parvovirus, reovírus e rotavirus, related to enteric problems in commercial flows at Brazil in chicken embryonated eggs specific pathogens free (SPF). Intestinal samples from hens or chickens health or with enteric problems (diarrhea), but showed positive for chicken astrovírus, chicken parvovirus, avian nephritis vírus, avian rotavirus, avian reovirus, bronchitis infectious vírus and fowl adenovirus type 1, through PCR and RT-PRC reactions, were selected for making of isolation, culture and propagation in chicken embryonated eggs specific pathogens free (SPF). Mortality and macroscopic lesions presented in the embryos characterized by hemorrhages, edemas, stunting, enrollment, gelatin features and deformations, however the support membranes not presented any damaged. The viral confirmation in the eggs passages was carry out using the polymerase chain reaction and transcriptase reverse of the polymerase chain reaction. Chicken astrovírus, avian nephritis vírus, fowl adenovirus type 1, bronchitis infectious vírus, chicken parvovirus and avian reovírus grow well in chickens embryonated eggs specific pathogen free SPF, inoculated in the yolk sac on seven days-old, however these viruses were isolated in embryonated eggs of fourteen days-old, too. The inoculation by yolk sac resulted be a optimal route for viral isolation, getting isolate two samples of chicken parvovirus, eight samples of chicken astrovirus, seven samples of bronchitis infectious vírus, sixteen samples of avian nephritis vírus, eleven samples of fowl adenovirus type one and three samples of avian reovirus, but any samples was isolated for avian rotavirus. The macroscopic characteristics presented in the embryos were similar in all of isolated viruses. Many samples used not present lesions and were negative in the molecular detection, considering as negative samples to viral isolation. The positivity in the molecular tests (PCR and RT-PCR) and the presence of injuries in the embryo determinate the presence of enteric vírus and that chicken astrovírus, avian nephritis vírus, fowl adenovirus type 1, bronchitis infectious vírus, chicken parvovirus and avian reovírus were isolated, confirming that the chicken embryonated eggs are excellent host for isolation, culture, propagation and characterization of vírus related with enteric problems at Brazil. The patogenicity presented in the embryo determinate the harmful the vírus are and the possible damage that their will produce in the development of disease. Future works will establish the relation exist between the isolated vírus in this work and the other viruses around the world, and their roll in the enteric disease.

O Brasil é omaior exportador e o terceiro maior produtor de carne de aves, atrás apenas de Estados Unidos e China. Para que o país se mantenha neste patamar e continue a crescer como produtor de frango, é fundamental que o setor avícola brasileiro priorize as questões sanitárias. Dentre as doenças que acometem as aves, um dos grupos mais importantes são aquelas que afetam o trato digestivo. As infecções intestinais em aves podem ser determinadas por bactérias, protozoários, micotoxinas e vírus. Os vírus entéricos das galinhas, incluindo Adenovírus, Astrovírus, Reovírus e Rotavírus, têm sido descritos como possíveis causadores da síndrome da má absorção (runting stunting syndrome), caracterizada principalmente por deficiência no crescimento, desenvolvimento retardado das penase diarréia. Neste estudo foram avaliadas amostras provenientes de aves de produção de diferentes origens (frangos de corte, reprodutoras e poedeiras). O conteúdo intestinal de aves oriundas de lotes com sinais clínicos entéricos e também lotes com ausência destes sinais foi submetido ao diagnóstico diferencial por PCR para quatro agentes virais: Adenovírus, Astrovírus, Reovírus e Rotavírus. Das 162 amostras testadas, 65 amostras foram positivas (40,1%) para um ou mais vírus e 97 amostras foram negativas (59,9%),sendo 2 amostras (1,2%) positivas para Adenovírus, 50 (30,9%) amostras positivas para Astrovírus, 19 (11,7%) amostras positivas para Reovírus e 12 (7,4%) foram positivas para Rotavírus.Astrovírus, Reovírus e Rotavírus parecem desempenhar papel importante como agentes causadores de problemas entéricos em aves de produção, especialmente em frangos de corte. Entretanto, mais estudos direcionados à detecção, isolamento, inoculação experimental, possíveis interações e caracterização molecular relacionados aos vírus entéricos são fundamentais para melhor esclarecimento da participação destes como agentes causadores de doença em aves. / Brazil is the largest exporter and the world\'s third largest poultry produces, behind USA and China. It is essential that Brazil priorizes healthy issuesin order to maintain this position and keep growing as poultry producer. Diseases that affect the digestive system of chickens are one of the most important group of diseases in poultry flocks.There are different causes of Eenteric infections in chickens may be caused by, such as bacterias, protozoans, mycotoxins and viruses.Enteric viruses, like adenovirus, astrovirus, reovirus e rotavírus, have been described as possible cause of Runting Stunting Syndrome (RSS) in poultry, characterized by growth problems, poor feathering and diarrhea. In this study were evaluated samples from laying hens, breeders and broilers. The intestinal content from healthy and affected flocks were tested by PCR for four enteric viruses from chickens: adenovirus, astrovirus, reovirus e rotavirus. From the 162 samples tested, 65 (40,1%) were positive for one or more viruses and 97 (59,9%) were negative. Two samples (1,2%) were positive for adenovirus, 50 (30,9%) were positive for astrovirus, 19 (11,7%) were positive for reovirus and 12 (7,4%) were positive for rotavírus. Astrovirus, reovirus and rotavírusseem to play a important role as causative agent of enterical disorders in chickens, mainly in commercial broilers. However, more studies about detection, viral growth, molecular characterization, experimental inoculation and possible interaction with other agents related to enteric viruses in chickens are necessary to elucidate the participation of these viruses as causative agent of diseases in chickens.

O Brasil é omaior exportador e o terceiro maior produtor de carne de aves, atrás apenas de Estados Unidos e China. Para que o país se mantenha neste patamar e continue a crescer como produtor de frango, é fundamental que o setor avícola brasileiro priorize as questões sanitárias. Dentre as doenças que acometem as aves, um dos grupos mais importantes são aquelas que afetam o trato digestivo. As infecções intestinais em aves podem ser determinadas por bactérias, protozoários, micotoxinas e vírus. Os vírus entéricos das galinhas, incluindo Adenovírus, Astrovírus, Reovírus e Rotavírus, têm sido descritos como possíveis causadores da síndrome da má absorção (runting stunting syndrome), caracterizada principalmente por deficiência no crescimento, desenvolvimento retardado das penase diarréia. Neste estudo foram avaliadas amostras provenientes de aves de produção de diferentes origens (frangos de corte, reprodutoras e poedeiras). O conteúdo intestinal de aves oriundas de lotes com sinais clínicos entéricos e também lotes com ausência destes sinais foi submetido ao diagnóstico diferencial por PCR para quatro agentes virais: Adenovírus, Astrovírus, Reovírus e Rotavírus. Das 162 amostras testadas, 65 amostras foram positivas (40,1%) para um ou mais vírus e 97 amostras foram negativas (59,9%),sendo 2 amostras (1,2%) positivas para Adenovírus, 50 (30,9%) amostras positivas para Astrovírus, 19 (11,7%) amostras positivas para Reovírus e 12 (7,4%) foram positivas para Rotavírus.Astrovírus, Reovírus e Rotavírus parecem desempenhar papel importante como agentes causadores de problemas entéricos em aves de produção, especialmente em frangos de corte. Entretanto, mais estudos direcionados à detecção, isolamento, inoculação experimental, possíveis interações e caracterização molecular relacionados aos vírus entéricos são fundamentais para melhor esclarecimento da participação destes como agentes causadores de doença em aves. / Brazil is the largest exporter and the world\'s third largest poultry produces, behind USA and China. It is essential that Brazil priorizes healthy issuesin order to maintain this position and keep growing as poultry producer. Diseases that affect the digestive system of chickens are one of the most important group of diseases in poultry flocks.There are different causes of Eenteric infections in chickens may be caused by, such as bacterias, protozoans, mycotoxins and viruses.Enteric viruses, like adenovirus, astrovirus, reovirus e rotavírus, have been described as possible cause of Runting Stunting Syndrome (RSS) in poultry, characterized by growth problems, poor feathering and diarrhea. In this study were evaluated samples from laying hens, breeders and broilers. The intestinal content from healthy and affected flocks were tested by PCR for four enteric viruses from chickens: adenovirus, astrovirus, reovirus e rotavirus. From the 162 samples tested, 65 (40,1%) were positive for one or more viruses and 97 (59,9%) were negative. Two samples (1,2%) were positive for adenovirus, 50 (30,9%) were positive for astrovirus, 19 (11,7%) were positive for reovirus and 12 (7,4%) were positive for rotavírus. Astrovirus, reovirus and rotavírusseem to play a important role as causative agent of enterical disorders in chickens, mainly in commercial broilers. However, more studies about detection, viral growth, molecular characterization, experimental inoculation and possible interaction with other agents related to enteric viruses in chickens are necessary to elucidate the participation of these viruses as causative agent of diseases in chickens.

Os ovos embrionados são estruturas complexas compostas pelo embrião e as membranas de suporte (corioalantóide, amniótica, gema). O desenvolvimento embrionário e suas membranas geram diversos tipos de células que são necessárias para a replicação bem sucedida de uma grande variedade de vírus. Dentre os vírus entéricos, os ovos embrionados foram usados como o principal hospedeiro para o isolamento, cultivo e propagação da grande maioria destes. O presente trabalho descreve o isolamento, cultivo e propagação em ovos embrionados livres de patógenos específicos (SPF), assim como a caracterização macroscópica do vírus relacionado com problemas entéricos em lotes de aves comerciais no Brasil. Amostras intestinais provenientes de galinhas ou frangos de corte sadias ou com problemas entéricos (diarreia) e que se apresentaram positivas, através da reação em cadeia pela polimerase (PCR) e da técnica da trancriptase reversa da reação em cadeia pela polimerase (RT-PCR), para Astrovírus de Galinha, Parvovírus de Galinha, Vírus da Nefrite Aviária, Rotavírus Aviário, Reovírus Aviário, Vírus da Bronquite Infecciosa das Galinhas e Adenovírus Aviário Tipo 1 foram selecionadas para a realização do isolamento, cultivo e propagação em ovos embrionados SPF. Mortalidade e lesões macroscópicas como hemorragias, edema, nanismo, enrolamento, aspecto gelatinoso e deformações foram encontradas nos embriões, porém as membranas de suporte do ovo não apresentaram alteração. A confirmação viral nas passagens nos ovos foi realizada mediante o uso da PCR ou RT-PCR. Houve a replicação de Astrovírus de galinha, Vírus da Nefrite Aviária, Adenovírus Aviário do Tipo 1, Vírus da Bronquite Infecciosa das Galinhas, Parvovírus de Galinha e Reovírus Aviário nos ovos embrionados SPF, inoculados via saco da gema, aos sete dias de idade. No entanto, estes vírus também foram isolados em ovos embrionados de 14 dias de idade. A inoculação pelo saco da gema se mostrou uma ótima via para o isolamento viral. Foram isoladas duas amostras de Parvovírus de Galinha, oito amostras de Astrovírus de Galinha, sete amostras do Vírus da Bronquite das Galinhas, dezesseis amostras de Vírus da Nefrite Aviária, onze amostras de Adenovírus Aviário do Tipo 1 e três amostras de Reovírus Aviário. Nenhuma amostra de Rotavírus Aviário foi isolada. As características macroscópicas apresentadas nos embriões foram similares em todos os vírus isolados. Várias amostras utilizadas não apresentaram lesões e foram negativas na detecção molecular, e foram consideradas amostras negativas no isolamento viral. A positividade nas provas moleculares (PCR e RT-PCR) e a presença de lesões nos embriões determinou o isolamento virale confirmou que os ovos embrionados de galinha são excelentes hospedeiros para o isolamento, cultivo, propagação e caracterização de vírus relacionados com problemas entéricos, no Brasil. As alterações encontradas no embrião sugerem a patogenicidade do vírus e o possível dano que causariam ao desenvolver a doença. Futuros trabalhos determinarão a relação existente entre os vírus isolados neste estudo e aqueles isolados em todo o mundo, estabelecendo homologia ou heterogeneidade entre eles. / The embryonated eggs are complex structures composed by embryo and support membranes (yolk sac, chorioallantoic membrane, amniotic sac). The embryo development and their membranes produced many kinds of cells that are necessary for successful replication of many viruses. Between the enteric viruses, the embryonated eggs have been used as the principal host for isolation, culture and propagation of many of these viruses. The present work describes the isolation, culture, propagation and macroscopic characterization of astrovírus, adenovirus, coronavirus, parvovirus, reovírus e rotavirus, related to enteric problems in commercial flows at Brazil in chicken embryonated eggs specific pathogens free (SPF). Intestinal samples from hens or chickens health or with enteric problems (diarrhea), but showed positive for chicken astrovírus, chicken parvovirus, avian nephritis vírus, avian rotavirus, avian reovirus, bronchitis infectious vírus and fowl adenovirus type 1, through PCR and RT-PRC reactions, were selected for making of isolation, culture and propagation in chicken embryonated eggs specific pathogens free (SPF). Mortality and macroscopic lesions presented in the embryos characterized by hemorrhages, edemas, stunting, enrollment, gelatin features and deformations, however the support membranes not presented any damaged. The viral confirmation in the eggs passages was carry out using the polymerase chain reaction and transcriptase reverse of the polymerase chain reaction. Chicken astrovírus, avian nephritis vírus, fowl adenovirus type 1, bronchitis infectious vírus, chicken parvovirus and avian reovírus grow well in chickens embryonated eggs specific pathogen free SPF, inoculated in the yolk sac on seven days-old, however these viruses were isolated in embryonated eggs of fourteen days-old, too. The inoculation by yolk sac resulted be a optimal route for viral isolation, getting isolate two samples of chicken parvovirus, eight samples of chicken astrovirus, seven samples of bronchitis infectious vírus, sixteen samples of avian nephritis vírus, eleven samples of fowl adenovirus type one and three samples of avian reovirus, but any samples was isolated for avian rotavirus. The macroscopic characteristics presented in the embryos were similar in all of isolated viruses. Many samples used not present lesions and were negative in the molecular detection, considering as negative samples to viral isolation. The positivity in the molecular tests (PCR and RT-PCR) and the presence of injuries in the embryo determinate the presence of enteric vírus and that chicken astrovírus, avian nephritis vírus, fowl adenovirus type 1, bronchitis infectious vírus, chicken parvovirus and avian reovírus were isolated, confirming that the chicken embryonated eggs are excellent host for isolation, culture, propagation and characterization of vírus related with enteric problems at Brazil. The patogenicity presented in the embryo determinate the harmful the vírus are and the possible damage that their will produce in the development of disease. Future works will establish the relation exist between the isolated vírus in this work and the other viruses around the world, and their roll in the enteric disease.

As doenças entéricas apresentam uma grande importância na saúde das aves. Astrovírus de galinha (CAstV), vírus da nefrite aviária (ANV) e parvovírus de galinha (ChPV) são vírus que foram relacionados com problemas entéricos em lotes comerciais de galinhas, sendo identificados em galinhas com sintomas de doença entérica. Existem poucas informações relacionadas a estes três vírus que estão sendo investigados como causadores de problemas entéricos, especialmente de diarreia, sintoma relacionado com a síndrome do nanismo e perda de ganho de peso nas granjas avícolas. Os objetivos do presente trabalho foram: a) realizar a caracterização molecular destes vírus; b) determinar a patogenicidade do ChPV, CAstV e ANV isolados de galinhas com doença entérica. As técnicas moleculares para a caracterização molecular dos vírus, para a detecção e quantificação das partículas virais foram utilizadas, e a análise histopatológica foi utilizada para a avaliação das lesões. Pintinhos SPF de um dia de idade foram divididos em quatro (04) grupos, cada grupo recebeu um dos três vírus isolados e o grupo restante foi usado como controle negativo. Os animais foram mantidos por 42 dias com água e ração ad libitum em isoladores individuais para cada grupo, a cada sete (07) diasforam obtidas amostras de intestino. Os três grupos infectados apresentaram após 12 horas da infecção, sinais de doença entérica, como: depressão, sonolência, penas eriçadas e principalmente diarreia. Após 10 dias da inoculação era evidente a desuniformidade no tamanho dos animais, com a presença de animais com nanismo. A avaliação macroscópica das aves mostrou a presença de intestinos distendidos, cheios de gás e liquido. O exame microscópico diferenciou o grupo infectado com ChPV dos demais, ocorrendo microabscessos de cripta, células em necrose com distribuição multifocal, e enterite linfoplasmocítica discreta. Os dois grupos restantes mostraram uma discreta hiperplasia de cripta e enterite linfoplasmocítica. Para cada um dos grupos de aves infectados foram estabelecidos ensaios de PCR em tempo real (qPCR), que detectaram que os três grupos de aves experimentais eram positivos (100%) para seu correspondente vírus com a maior carga viral aos sete dia de idade, diminuindo drasticamente após 21 dias de idade, no entanto, continuando presente até o 42° dia de idade. O grupo controle negativo não apresentou a presença de vírus, nenhum dos sintomas ou lesões. O peso dos animais em cada grupo infectado diminuiu levemente em comparação ao grupo controle negativo, mas sem diferença estatística significativa (p>0,05). A caracterização molecular e a análise filogenética dos vírus estudados determinou que a cepa de CAstV pertencia ao grupo I dos CAstV e se relaciona com as cepas que estão circulando nos USA. A cepa de ANV pertence ao grupo ANV-1 e apresentou maior porcentagem de similaridade com a cepa do Japão. A cepa do ChPV foi classificada no grupo do isolado da Hungria. Os resultados do presente trabalho caracterizaram o CAstV como parte do Grupo I, o ANV como um ANV-1 e o ChPV como parte do grupo do isolado da Hungria e mostraram que as cepas de ChPV, ANV e CAstV estudadas produzem doença entérica / Enteric diseases are of great importance in the health of birds. Chicken astrovirus (CAstV), avian nephritis virus (ANV) and chicken parvovirus (ChPV) are viruses that have been associated with enteric problems in chickens commercial flocks, being identified in chickens with symptoms of enteric disease. There is little information regarding these three viruses that are being investigated as the cause of enteric problems, especially diarrhea, symptoms related to runting stunting syndrome in poultry. This work aims to perform molecular characterization and determine the pathogenicity of ChPV, CAstV and ANV isolated from chickens with enteric disease. A multidisciplinary approach was used as molecular techniques for the molecular characterization of the viruses for the detection and quantification of the viral particles, histopathological analysis was used for evaluation of the lesions. Chicks SPF one day of age were divided into four (04) groups and each group received one of the three virus isolates and the remaining group was used as negative control, the animals were maintained for 42 days with water and food ad libitum in individual isolators for each group, every seven (07) days intestine samples were obtained. The three infected groups showed after 12 hours of infection, signs of enteric diseases, such as depression, drowsiness, ruffled feathers and mainly diarrhea. After 10 days of inoculation was evident non-uniformity in size of the animals, and the presence of animals with dwarfism. Macroscopic evaluation of the animals showed the presence of distended intestines filled with gas and liquid. Microscopic examination differentiated the group infected with ChPV the other two groups, showing abscess crypt cells in necrosis with multifocal distribution, and discreet linfoplasmocitic enteritis. The remaining two groups showed slight crypt hyperplasia and a discrete linfoplasmocít enteritis. For each of the infected groups real time PCR (qPCR) assays were established, showing the three experimental groups positive (100%) to its corresponding virus and most viral load to seven day old decreasing sharply after 21 days age, however this continuing until 42 days of age. The negative control group showed no viruses, no symptoms or injuries. The weight of the animals in each infected group dropped slightly compared to the negative control group, but without significant difference (p> 0.05). Molecular characterization and phylogenetic analysis of the studied viruses determined that the CAstV strain studied belong to group I of CAstV and is related to the strains that are circulating in the USA. The ANV strain belongs to ANV-1 group and showed a higher percentage of similarity with the Japanese strain. The ChPV strain belongs to group of isolated of Hungary. The results of this study characterized the CAstV as part of Group I, ANV as a ANV-1 and ChPV as a part of group of isolated of Hungary, showed that the strains of ChPV, ANV and CAstV studied produce enteric disease

Doenças infecciosas entéricas das aves comerciais apresentam uma etiologia complexa e são distribuídas mundialmente, acarretando elevadas perdas econômicas. Aliadas à possibilidade de infecções únicas ou concomitantes entre diversos patógenos, as gastroenterites podem se refletir em outros sistemas, contribuindo ainda mais para a queda da performance dos lotes. Recentemente, foi detectado um coronavírus no conteúdo intestinal de aves apresentando despigmentação e diarréia. Este vírus, denominado de CECoV (chicken enteric coronavírus) é sugestivo de pertencer ao grupo 2, divergente dos demais coronavírus comuns em aves, pertencentes ao grupo 3 do gênero Coronavirus. No Brasil, há uma grande necessidade no conhecimento acerca da participação dos agentes virais nas diarréias de aves, sendo este um passo fundamental para o estabelecimento de medidas profiláticas específicas e para a exportação de produtos avícolas. Este estudo teve por objetivos detectar este coronavírus do grupo 2 em aves de corte, poedeiras comerciais e matrizes com e sem diarréia pela técnica de PCR dirigida ao gene codificador da RNA-polimerase RNA-dependente (gene RdRp) dos coronavírus do grupo 2, estabelecer a relação genealógica entre diversas amostras detectadas deste vírus com base em seqüências dos genes RdRp, gene codificador da proteína de espícula (S), gene codificador da proteína hemaglutinina-esterase (HE), gene 5, gene 3 e região 3\'UTR e realizar o diagnóstico diferencial com reovírus, rotavírus, variedades enterotrópicas do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBIG), astrovírus e adenovírus. O coronavírus CECoV foi detectado em 25 de 119 amostras de conteúdo entérico de aves de corte, matrizes e poedeiras com e sem diarréia, em diversas granjas produtoras no Brasil, pela técnica da reação em cadeia pela polimerase dirigida ao gene RdRp. O CECoV tem papel como agente primário e secundário em processos patológicos do trato digestório de aves e, ao serem analisadas filogeneticamente, diferentes amostras de CECoV formaram um grupo único com base no gene RdRp dentro do grupo 2 do gênero Coronavirus, possuindo homologia com coronavírus do grupo 3 na região 3\'UTR, sendo sua origem sugerida como um evento de recombinação entre coronavírus dos grupos 2 e 3. Através do estabelecimento de uma rotina de diagnóstico diferencial, as freqüências de ocorrência de vírus entéricos em aves de produção criadas nas 119 granjas no Brasil foram: rotavírus=48,74%, reovírus=2,52%, VBIG=65,54%, CECoV=21% e astrovírus=3,36%. / Infectious enteric diseases in poultry have a complex etiology and a worldwide distribution, causing large economic losses. Along with the possibility of single or multiple infections by different pathogens, enteric diseases may also be reflected in other systems, contributing even more to the fall of performance in the affected flocks. Recently, a coronavirus was detected in the intestinal contents of chickens with depigmentation and diarrhea. This virus, named CECoV (chicken enteric coronavirus), has been suggested as belonging to group 2, divergent of the common avian coronaviruses, which belongs to the group 3 of the genus Coronavirus. In Brazil, there is a great need for the knowledge on the role of viral agents in diarrhea of poultry, what is a fundamental step for the establishment of specific prophylactic measures and for the exportation of poultry-derived products. The present study aimed the detection of this group 2 coronavirus in broilers, laying hens and breeders with and without diarrhea using a PCR targeted to the gene coding for the RNA-dependent RNA-polymerase (RdRp) of group 2 coronaviruses, the establishment of the genealogical relationship among the different strains detected based on sequences of the RdRp, the genes coding for the spike protein (S gene), hemagglutinin-esterase protein (HE gene), gene 5, gene 3 and the 3\' UTR and the differential diagnosis with reovirus, rotavirus, enterotropic strains of infectious bronchitis virus (IBV), astrovirus and adenovirus. CECoV was found in 25 out of 119 samples of enteric contents of broilers, breeders and laying hens in different farms in Brazil using the PCR to the RdRp. CECoV has a role as a primary and secondary pathogen in pathological processes of the enteric tract of poultry and the phylogenetic analysis showed that different strains of CECoV formed an unique cluster based on the RdRp inside the group 2 of coronaviruses, harboring homology with group 3 coronaviruses in the 3\'UTR, being its origin suggested as a recombination event between coronaviruses of groups 2 and 3. By the establishment of a routine of diagnosis, the frequencies of enteric viruses in the 119 poultry farms surveyed were: rotavirus = 48.74%, reovirus = 2.52%, IBV = 65.54%, CECoV = 21% and astrovirus = 3.36%.

As doenças entéricas apresentam uma grande importância na saúde das aves. Astrovírus de galinha (CAstV), vírus da nefrite aviária (ANV) e parvovírus de galinha (ChPV) são vírus que foram relacionados com problemas entéricos em lotes comerciais de galinhas, sendo identificados em galinhas com sintomas de doença entérica. Existem poucas informações relacionadas a estes três vírus que estão sendo investigados como causadores de problemas entéricos, especialmente de diarreia, sintoma relacionado com a síndrome do nanismo e perda de ganho de peso nas granjas avícolas. Os objetivos do presente trabalho foram: a) realizar a caracterização molecular destes vírus; b) determinar a patogenicidade do ChPV, CAstV e ANV isolados de galinhas com doença entérica. As técnicas moleculares para a caracterização molecular dos vírus, para a detecção e quantificação das partículas virais foram utilizadas, e a análise histopatológica foi utilizada para a avaliação das lesões. Pintinhos SPF de um dia de idade foram divididos em quatro (04) grupos, cada grupo recebeu um dos três vírus isolados e o grupo restante foi usado como controle negativo. Os animais foram mantidos por 42 dias com água e ração ad libitum em isoladores individuais para cada grupo, a cada sete (07) diasforam obtidas amostras de intestino. Os três grupos infectados apresentaram após 12 horas da infecção, sinais de doença entérica, como: depressão, sonolência, penas eriçadas e principalmente diarreia. Após 10 dias da inoculação era evidente a desuniformidade no tamanho dos animais, com a presença de animais com nanismo. A avaliação macroscópica das aves mostrou a presença de intestinos distendidos, cheios de gás e liquido. O exame microscópico diferenciou o grupo infectado com ChPV dos demais, ocorrendo microabscessos de cripta, células em necrose com distribuição multifocal, e enterite linfoplasmocítica discreta. Os dois grupos restantes mostraram uma discreta hiperplasia de cripta e enterite linfoplasmocítica. Para cada um dos grupos de aves infectados foram estabelecidos ensaios de PCR em tempo real (qPCR), que detectaram que os três grupos de aves experimentais eram positivos (100%) para seu correspondente vírus com a maior carga viral aos sete dia de idade, diminuindo drasticamente após 21 dias de idade, no entanto, continuando presente até o 42° dia de idade. O grupo controle negativo não apresentou a presença de vírus, nenhum dos sintomas ou lesões. O peso dos animais em cada grupo infectado diminuiu levemente em comparação ao grupo controle negativo, mas sem diferença estatística significativa (p>0,05). A caracterização molecular e a análise filogenética dos vírus estudados determinou que a cepa de CAstV pertencia ao grupo I dos CAstV e se relaciona com as cepas que estão circulando nos USA. A cepa de ANV pertence ao grupo ANV-1 e apresentou maior porcentagem de similaridade com a cepa do Japão. A cepa do ChPV foi classificada no grupo do isolado da Hungria. Os resultados do presente trabalho caracterizaram o CAstV como parte do Grupo I, o ANV como um ANV-1 e o ChPV como parte do grupo do isolado da Hungria e mostraram que as cepas de ChPV, ANV e CAstV estudadas produzem doença entérica / Enteric diseases are of great importance in the health of birds. Chicken astrovirus (CAstV), avian nephritis virus (ANV) and chicken parvovirus (ChPV) are viruses that have been associated with enteric problems in chickens commercial flocks, being identified in chickens with symptoms of enteric disease. There is little information regarding these three viruses that are being investigated as the cause of enteric problems, especially diarrhea, symptoms related to runting stunting syndrome in poultry. This work aims to perform molecular characterization and determine the pathogenicity of ChPV, CAstV and ANV isolated from chickens with enteric disease. A multidisciplinary approach was used as molecular techniques for the molecular characterization of the viruses for the detection and quantification of the viral particles, histopathological analysis was used for evaluation of the lesions. Chicks SPF one day of age were divided into four (04) groups and each group received one of the three virus isolates and the remaining group was used as negative control, the animals were maintained for 42 days with water and food ad libitum in individual isolators for each group, every seven (07) days intestine samples were obtained. The three infected groups showed after 12 hours of infection, signs of enteric diseases, such as depression, drowsiness, ruffled feathers and mainly diarrhea. After 10 days of inoculation was evident non-uniformity in size of the animals, and the presence of animals with dwarfism. Macroscopic evaluation of the animals showed the presence of distended intestines filled with gas and liquid. Microscopic examination differentiated the group infected with ChPV the other two groups, showing abscess crypt cells in necrosis with multifocal distribution, and discreet linfoplasmocitic enteritis. The remaining two groups showed slight crypt hyperplasia and a discrete linfoplasmocít enteritis. For each of the infected groups real time PCR (qPCR) assays were established, showing the three experimental groups positive (100%) to its corresponding virus and most viral load to seven day old decreasing sharply after 21 days age, however this continuing until 42 days of age. The negative control group showed no viruses, no symptoms or injuries. The weight of the animals in each infected group dropped slightly compared to the negative control group, but without significant difference (p> 0.05). Molecular characterization and phylogenetic analysis of the studied viruses determined that the CAstV strain studied belong to group I of CAstV and is related to the strains that are circulating in the USA. The ANV strain belongs to ANV-1 group and showed a higher percentage of similarity with the Japanese strain. The ChPV strain belongs to group of isolated of Hungary. The results of this study characterized the CAstV as part of Group I, ANV as a ANV-1 and ChPV as a part of group of isolated of Hungary, showed that the strains of ChPV, ANV and CAstV studied produce enteric disease